JP2009516733A - アポトーシスの阻害のための化合物 - Google Patents

Abstract

本発明は、アポトーシス阻害剤として作用する、式（Ｉ）の化合物、並びに式（Ｉ）の化合物をベースとする薬物コンジュゲート、それらの調製のためのプロセス、それらを含有する医薬組成物、及び医学におけるそれらの使用に関する。

Description

本発明は、アポトーシス阻害剤として作用する化合物並びにそれらの調製のためのプロセス、それらを含有する医薬組成物、及び医学におけるそれらの使用に関する。

アポトーシスは、正常な細胞交替、免疫系、及び胚発生を含む、広く多様な生物系におけるその重要性、及びその様々な疾患との関連性の故に、興味深い生物学的プロセスである。不適切なアポトーシスは、アルツハイマー病及びハンチントン病のような神経変性疾患、虚血、自己免疫障害、及びいくつかの型の癌を含む、多くのヒトの病理に関与している（リード（Ｒｅｅｄ，Ｊ．Ｃ．）著、「トレンズ・イン・モレキュラー・メディスン（Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．）」、２００１年、第７巻、ｐ．３１４−３１９）。

細胞表面の死受容体、抗癌剤、照射、生存因子の欠如、及び虚血を含む、様々なアポトーシス刺激（ストラッサー（Ｓｔｒａｓｓｅｒ，Ａ．）ら著、「アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）」、２０００年、第６９巻、ｐ．２１７−２４５に総説）は、その全てが、カスパーゼと呼ばれるシステイン・アスパルチル・プロテアーゼファミリーを活性化するシグナリングカスケードを誘導する。これらのプロテアーゼが、アポトーシスプロセスを実行する。

いくつかのアポトーシスシグナルは、カスパーゼ−９をイニシエーターとして利用する、ミトコンドリア仲介性又は内在性の経路を活性化する。アポトソームと呼ばれる高分子複合体の形成は、この経路における重要事象である。

アポトソームは、チトクロムｃ−活性化Ａｐａｆ−１（アポトーシスプロテアーゼ活性化因子）、ｄＡＴＰ、及びプロカスパーゼ−９により形成される、ホロ酵素マルチタンパク質複合体である（リー（Ｌｉ Ｐ．）ら著、「セル（Ｃｅｌｌ）」、１９９７年、第９１巻、ｐ．４７９−４８９；アセハン（Ａｃｅｈａｎ Ｄ）ら著、「モレキュラー・セル（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ）」、２００２年、第９巻、ｐ．４２３−４３２；ロドリゲス（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ Ｊ．）ら著、「ジーンズ・アンド・ディベロップメント（Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．）」、１９９９年、第１３巻、ｐ．３１７９−３１８４；スリニバスラ（Ｓｒｉｎｉｖａｓｕｌａ Ｓ．Ｍ．）ら著、「モレキュラー・セル」、１９９８年、第１巻、ｐ．９４９−９５７）。この高分子複合体において、アポトソームに結合したカスパーゼ−９は活性化され、次に、今度はエフェクターカスパーゼを活性化する。疾病関連アポトーシスを改善することが可能な分子を同定するべく、創薬努力は最初、カスパーゼ活性を標的としたものであり、したがって、上流の活性化カスケード／経路よりもむしろ、特異的な酵素活性化剤又は阻害剤が探し求められた（スコット（Ｓｃｏｔｔ Ｃ．Ｗ．）ら著、「ザ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・エクスメリメンタル・セラピューティクス（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．）」、２００３年、第３０４巻、ｐ．４３３−４４０；ガルシア・カルボ（Ｇａｒｃｉａ−Ｃａｌｖｏ Ｍ）ら著、「ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）」、１９９８年、第２７３巻、ｐ．３２６０８−３２６１３）。

それでもやはり、カスパーゼ活性化の上流の、タンパク質−タンパク質相互作用もまた、アポトーシス経路のモジュレータの開発のための、適切な介入ポイントであることが可能である。特に、最近のデータは、アポトソームの形成を、アポトーシスモジュレータの開発のための興味深い標的として提案している。

それ故、アポトソーム媒介性のアポトーシス活性化を阻害する分子を発見することに興味がもたれている。

本発明の１つの観点は、一般式Ｉ：

［式中、
Ｒ１は、（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキル、（Ｃ_２−Ｃ_５）アルケニル、−（ＣＨ_２）_１−３−ＮＨＣＯ−（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、−（ＣＨ_２）_１−３−ＣＯＮＲａＲｂ、−（ＣＨ_２）_０−３（３−６）Ｃｙ、−（ＣＨ_２）_０−３−（５−６）Ｈｅｔｃｙ、−（ＣＨ_２）_１−３−フェニル、−（ＣＨ_２）_１−３−（１−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（２−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（５−１０）Ｈｅｔａｒ、−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ（フェニル）_２、−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ（フェニル）［（５−６）Ｈｅｔａｒ］、又は−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ［（５−６）Ｈｅｔａｒ］_２を表し；
Ｒ２は、−（ＣＨ_２）_０−３−（３−６）Ｃｙ、−（ＣＨ_２）_０−３−（５−６）Ｈｅｔｃｙ、−（ＣＨ_２）_１−３−フェニル、−（ＣＨ_２）_１−３−（１−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（２−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（５−１０）Ｈｅｔａｒ、−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ（フェニル）_２、−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ（フェニル）［（５−６）Ｈｅｔａｒ］、又は−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ［（５−６）Ｈｅｔａｒ］_２を表し；
Ｒ３は、−（ＣＨ_２）_１−３−フェニル、−（ＣＨ_２）_１−３−（１−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（２−ナフチル）、又は−（ＣＨ_２）_１−３−（５−６）Ｈｅｔａｒを表し；
（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキル及び−（Ｃ_２−Ｃ_５）アルケニルは、−Ｏ−（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、−Ｓ−（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ−（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、及び−Ｎ［（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル］_２から選択される、１以上の置換基で置換されてもよく；
（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルは、１以上のハロゲン原子で置換されてもよく；
Ｒａ及びＲｂは、独立して、−Ｈ又は−（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルを表し；
（３−６）Ｃｙは、３−６員の、部分的に不飽和か、又は飽和された炭素環式環の基を表し；
（５−６）Ｈｅｔｃｙは、独立してＯ、Ｓ、及びＮから選択される１又は２個のヘテロ原子を含有する、５又は６員の、部分的に不飽和か、又は飽和された炭素環式環の、Ｃ−又はＮ−基を表し；
Ｃｙ及びＨｅｔｃｙは、ハロゲン、−ＣＦ_３、及び−ＯＨから選択される１以上の置換基で置換されてもよく；
（５−６）Ｈｅｔａｒ及び（５−１０）Ｈｅｔａｒは、独立してＯ、Ｓ、及びＮから選択される１から４個までのヘテロ原子を含有する、各々５又は６員の、及び５−１０員の芳香環の、Ｃ−又はＮ−基を表し；
フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、（５−６）Ｈｅｔａｒ、及び（５−１０）Ｈｅｔａｒは、ハロゲン、−ＣＦ_３、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、−ＣＯ−（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、−（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキル−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、及び−ＳＯ_２ＮＨ_２から選択される１以上の置換基で置換されてもよく；
Ｒ２は、２−（４−フルオロフェニル）エチルを表さないという条件付きである］の新規な化合物、その立体異性体及びそれらの混合物、その多形体及びそれらの混合物、及び、医薬的に許容されるそれらの溶媒和化合物及び付加塩の供給に関する。

本発明のもう１つの観点は、式ＩＩ：

［式中、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、式Ｉの化合物について定義されたものと、Ｒ２の条件なしで同様の意味を有しており；各Ｒ４は、独立して、任意の２０の天然産アミノ酸からの側鎖を表し、ｎは０、１、２、又は３である］の基を含んでなる薬物コンジュゲートである化合物、その立体異性体及びそれらの混合物、及び、ポリグルタミン酸ポリマーへコンジュゲートされた医薬的に許容されるそれらの溶媒和化合物及び付加塩に関する。

したがって、式ＩＩの化合物は、種々の成分：ｎ個のＬ−アミノ酸のペプチド鎖に対しアミド結合を形成している式Ｉの基、及びアミドＬ−リジン誘導体、を含んでなり、その側鎖のＮは、ポリグルタミン酸ポリマーへ結合されている。

先の定義では、用語（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル及び（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキルは、それぞれ１から３個まで、及び１から５個までの炭素原子を含有する、直鎖又は分枝鎖の飽和炭化水素鎖を表す。（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルの実例は、制限されることなく、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルを包含する。（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキルの実例は、付加的にかつ制限されることなく、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−フェニル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、及び２，２−ジメチルプロピルを包含する。

用語（Ｃ_２−Ｃ_５）アルケニルは、２から５個までの炭素原子と、１以上の二重結合とを含有する、直鎖又は分枝鎖の炭化水素鎖、例えば、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル及び１，３−ブタジエニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−メチル−２−ブテニル、２−メチル−３−ブテニル、３−メチル−１−ブテニル、１，１−ジメチル−２−プロペニル、及び１，２−ジメチル−１−プロペニルを表す。

基（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキル、及び（Ｃ_２−Ｃ_５）アルケニルは、化学的観点から適正であればいつでも、記述に従って置換されてよい。

用語（３−６）Ｃｙは、３−６員の、部分的に不飽和か又は飽和された炭素環式環の基を表する。それは、先に言及したように、該環の任意の利用可能な位置に配置されることが可能な１以上の置換基で置換されてもよい。（３−６）Ｃｙの実例は、制限されることなく、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、１−シクロブテン、２−シクロブテン、１−シクロペンテン、２−シクロペンテン、１−シクロヘキセン、２−シクロヘキセン、及び３−シクロヘキセンの基を包含する。

用語（５−６）Ｈｅｔｃｙは、独立してＯ、Ｓ、及びＮから選択される１又は２個のヘテロ原子を含有する、部分的に不飽和か又は飽和された、５−６員の炭素環式環の、Ｃ−又はＮ−ラジカル基を表し、任意の利用可能な環位置において、記述に従って置換されてもよい。（５−６）Ｈｅｔｃｙの実例は、制限なく、ジヒドロフラン、ピロリン、ピラゾリン、イミダゾリジン、イソチオアゾリジン、イソオキサゾリジン、オキサゾリジン、ピラゾリジン、ピロリジン、チアゾリジン、ジオキサン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピラン、テトラヒドロピラン、オキサジン、オキサゾリン、ピロリン、チアゾリン、ピラゾリン、イミダゾリン、イソオキサゾリン、及びイソチアゾリンの基を包含する。

用語（５−６）Ｈｅｔａｒ及び（５−１０）Ｈｅｔａｒは、独立してＯ、Ｓ、及びＮから選択される１から４個までのヘテロ原子を含有する、それぞれ５又は６員の、及び５−１０員の環の、Ｃ−又はＮ−基を表し、任意の利用可能な環位置において、記述に従って置換されてもよい。（５−６）Ｈｅｔａｒの実例は、制限なく、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、イソオキサゾール、イソチアゾール、オキサゾール、１，２，４−オキサジアゾール、１，２，４−チアジアゾール、１，３，４−オキサジアゾール、１，３，４−チアジアゾール、１，２，３−トリアゾール、１，２，４−トリアゾール、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、及びピラジンの基を包含する。（５−１０）Ｈｅｔａｒの実例はさらに、制限なく、ベンズイミダゾール、ベンゾフラン、ベンゾチアゾール、ベンゾチオフェン、イミダゾピラジン、イミダゾピリダジン、イミダゾピリジン、イミダゾピリミジン、インダゾール、インドール、イソインドール、イソキノリン、ピラゾロピラジン、ピラゾロピリジン、ピラゾロピリミジン、プリン、キナゾリン、キノリン、及びキノキサリンの基を包含する。

表現「１以上で置換されてもよい」は、基が未置換であるか、或いは、該基が、置換される余地のある１、２、３、又は４つの位置を有する場合には、１以上の、好ましくは１、２、３、又は４個の置換基で、置換可能であることを意味する。

本明細書及びクレームを通し、単語「含んでなる」及び該単語の変形、例えば「含んでなること」は、他の添加物、成分、要素、又は段階を排除することを意図しない。

本文において用いたように、用語「治療」は、先に述べた症状の治療、予防、及び管理を包含する。本文において使用される用語「医薬的に許容される」は、医学的判断の範囲内にあって、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、又は他の問題又は合併症なく、ヒト及び動物の組織との接触使用に適しており、適度な便益／リスク比に釣り合っている化合物、組成物、及び／又は剤形を指す。

本発明の特定の実施態様においては、Ｒ１は、（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキル、−（ＣＨ_２）_１−３−ＣＯＮＲａＲｂ、−（ＣＨ_２）_０−３（３−６）Ｃｙ；−（ＣＨ_２）_０−３−（５−６）Ｈｅｔｃｙ；−（ＣＨ_２）_１−３−（５−１０）Ｈｅｔａｒ、−（ＣＨ_２）_１−３−フェニル、−（ＣＨ_２）_１−３−（１−ナフチル）、又は−（ＣＨ_２）_１−３−（２−ナフチル）を表し、それらの全ては置換されてもよい。

本発明の特定の実施態様においては、Ｒ１は、−（ＣＨ_２）_０−３−（５−６）Ｈｅｔｃｙ；−（ＣＨ_２）_１−３−（５−１０）Ｈｅｔａｒ、−（ＣＨ_２）_１−３−フェニル、−（ＣＨ_２）_１−３−（１−ナフチル）、又は−（ＣＨ_２）_１−３−（２−ナフチル）を表し、それらの全ては置換されてもよい。

もう１つの実施態様においては、Ｒ１は、ハロゲンから選択される１以上の置換基で置換されてもよい−（ＣＨ_２）_２−フェニルを表す。もう１つの実施態様においては、Ｒ１は２，４−ジクロロフェニルを表す。

もう１つの実施態様においては、Ｒ２は、置換されてもよい−（ＣＨ_２）_１−３−アリールか、又は置換されてもよい−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ（Ｐｈ）_２であって、Ｒ２は２−（４−フルオロフェニル）エチル−を表さないという条件付きである。もう１つの実施態様においては、Ｒ２は、３，３−ジフェニルプロピルを表し、Ｒ２は２−（４−フルオロフェニル）エチル−を表さないという条件付きである。

もう１つの実施態様においては、Ｒ３は、−（ＣＨ_２）_１−３−（５−６）Ｈｅｔａｒ又は−（ＣＨ_２）_２−フェニルを表し、双方は置換されてもよい。もう１つの実施態様においては、Ｒ３は、ハロゲンから選択される１以上の置換基で置換されてもよい−（ＣＨ_２）_２−フェニルを表す。もう１つの実施態様においては、Ｒ３は、２，４−ジクロロフェニルを表す。

もう１つの実施態様においては、Ｒ２は、３，３−ジフェニルプロピルを表し、Ｒ１及びＲ３の双方は、２，４−ジクロロフェニルを表す。

本発明のもう１つの実施態様は、先に定義されたポリグルタミン酸ポリマーへコンジュゲートされた、式ＩＩの化合物を含んでなる薬物コンジュゲートである化合物であって、前記ポリマーが２０から６０ｋＤａまでの分子量を有している化合物に関する。

本発明のもう１つの実施態様は、ＩＩＩ：

［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、一般式ＩＩに記述された意味を有しており、ｘに対するｙの比率は、重量で２５−３０％から７５−７０％までである］の、ポリマー−薬物コンジュゲートである化合物に関する。

式ＩＩＩの化合物のもう１つの実施態様においては、ｎは０を表す。もう１つの実施態様においては、ｎは２を表し、Ｒ４はグリシン側鎖を表す。もう１つの実施態様においては、ｎは３を表し、Ｒ４はグリシン側鎖、アルギニン側鎖、及びフェニルアラニン側鎖を表す。もう１つの実施態様においては、ｎは３を表し、Ｒ４はバリン側鎖、アルギニン側鎖、及びフェニルアラニン側鎖を表す。

当該ポリマー薬物コンジュゲートにおいては、ポリグルタミン酸は、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）、ポリ（Ｄ−グルタミン酸）、又はポリ（ＤＬ−グルタミン酸）でよい。本発明の１つの実施態様においては、ポリグルタミン酸は、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）である。

さらに、上述の実施態様の全ての可能な組合せもまた、本発明の一部を構成する。

式Ｉの化合物は、少なくとも１つのキラル中心を含んでなる。本発明は、式Ｉの化合物のラセミ化合物及びエナンチオマー化合物の双方、すなわち、以下に示されるように、Ｒ１へ結合したキラル炭素の立体配置が（Ｓ）である化合物、及びＲ１へ結合したキラル炭素の立体配置が（Ｒ）である化合物を包含する。

式ＩＩの化合物は、少なくとも二つのキラル中心を含んでなる。本発明はまた、式ＩＩの立体異性体の混合物と、単離された立体異性体との双方を包含する。

本発明化合物は、１以上の塩基性窒素原子を含有してもよく、それ故、酸と共に塩を形成してもよく、それはまた本発明の一部を構成する。医薬的に許容される塩の実例は、なかんずく、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、過塩素酸、硫酸、及びリン酸との付加塩、並びに、有機酸、例えば酢酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、マンデル酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、及びマレイン酸の付加塩を包含する。同様に、本発明の化合物は、１以上の酸性プロトンを含有してよく、それ故、塩基と共に塩を形成してもよく、それもまた本発明の一部を構成する。これらの塩の実例は、金属カチオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、又はアルミニウムイオンとの塩を包含し；或いは、有機塩基又は無機塩基と配位されてもよい。許容される有機塩基は、なかんずく、ジエチルアミン及びトリエチルアミンを包含する。許容される無機塩基は、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、及び水酸化ナトリウムを包含する。電荷をもつ基の数と、カチオン及びアニオンの価数とに依存して、１以上のカチオン又はアニオンがあってよい。

医薬的に許容される有機非毒性塩基から誘導される塩は、一級、二級、及び三級アミンの塩、天然産置換アミンを含む置換アミンの塩、環状アミン、及び塩基性イオン交換樹脂、例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、及びトロメタミンなどの塩を包含する。

治療目的のために使用される場合医薬的に許容されるという条件付きで、使用可能な塩のタイプには何ら制限はない。塩は、塩基又は酸成分を含有する親化合物から、通常の化学的方法により合成可能である。一般にかかる塩は、好ましくは、遊離酸又は塩基型のこれらの化合物を、化学両論的な量の、適当な塩基又は酸と、水中か、又は有機溶媒、例えばエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリル中か、或いは双方の混合物中で、反応させることにより調製可能である。式Ｉ又は式ＩＩＩの化合物、及びそれらの塩は、いくつかの物理的性質が異なっているが、それらは本発明では同等である。

本発明の式Ｉ又は式ＩＩＩの化合物のいくつかは、未溶媒和型並びに溶媒和型、例えば水和物で存在してもよい。本発明は、医薬的に活性のある、かかる上記の全ての形状を包含する。

一般式Ｉの化合物のいくつかは、多形型を示してもよく、本発明の全ての可能な多形型及びそれらの混合物を包含する。様々な条件下での結晶化により、或いは、化合物の加熱又は融解、及びそれに続く徐冷却又は急冷却により、種々の多形が調製されてよい。多形の存在は、固体ＮＭＲ分光法、ＩＲ分光法、示差走査熱量測定、粉末Ｘ線回折、又は他の同様の技術により測定されてよい。

本発明の式Ｉの化合物は、少なくとも１つのキラル中心を含んでなる。加えて、それらはさらなるキラル中心を含んでなってもよい。本発明は、可能な各個の立体異性体、及びそれらの混合物、特にそれらのラセミ混合物を包含する。単一のエナンチオマーは、任意の一般的に使用されるプロセスにより調製されてよく、例えば、キラル固定相上でのラセミ混合物のクロマトグラフィー分離によるか、それらのジアステレオマー塩の分別結晶技術によるラセミ混合物の分割によるか、キラル合成によるか、酵素的分割によるか、又はバイオトランスフォーメーションにより調製されてもよい。この分割は、一般式Ｉの、任意のキラル合成中間体について、又は生成物について、行われることが可能である。別法として、一般式Ｉの化合物の任意のエナンチオマーは、光学的に純粋な出発物質か、又は既知の立体配置の試薬を用いた、エナンチオ特異的合成により取得されてもよい。

式Ｉ又は式ＩＩＩの化合物は、いくつかのジアステレオマーとして存在してもよく、通常の技術、例えばクロマトグラフィー又は分別結晶により、分離されてもよい。本発明のいくつかの化合物は、シス／トランス異性体を表してもよい。本発明は、各個の幾何異性体、及びそれらの混合物を包含する。本発明は、合成により、及びまた物理的にそれらを混合することにより、得られたか否かにかかわらず、全ての異性体及びそれらの混合物（例えばラセミ混合物）を含む。

本発明は、上記の前記新規化合物、それらの誘導体、それらの類似体、それらの互変異性体型、それらの立体異性体、それらの多形体、又は医薬的に許容されるそれらの塩及び溶媒和化合物の調製のためのプロセスに関する。

本発明化合物は、以下に記述される方法を用いて、並びに有機合成の分野において公知の他のプロセスにより合成されてよい。好ましい方法は、制限されることなく、添付のスキームに示された一般的なプロセスを包含する。他に述べない限り、基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｎ、ｘ、及びｙは、一般式Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩに記述された意味を有する。

式Ｉの化合物は、以下の方法を用いて取得可能である：
方法Ａ

方法Ａによれば、フルオレニルメトキシカルボニル基からの脱保護に際し、固体支持体アミンＩＶは、アシル化剤Ｖ［式中、Ｘは脱離基、例えばハロゲンを表し、Ｙは、ＯＨ又はハロゲンを表す］によりアシル化される。Ｙがハロゲン、例えばクロロアセチルクロリドを表す場合、反応はトリエチルアミンのような三級塩基の存在下に行われることが可能である。Ｙが−ＯＨ、例えばブロモ酢酸を表す場合、反応は適当なカップリング剤、例えばＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミドの存在下に行われることが可能である。双方の場合とも、反応は、樹脂を適正に膨潤させることが可能な、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド又はジクロロメタンのような不活性溶媒の存在下に、室温において、或いはマイクロ波照射を用いて反応時間を減少させることにより、行われることが可能である。次いで、アミンＶＩａが、三級アミンを塩基として用いてカップリングされる。反応は、加熱により、例えば６０℃において、或いはＭＷ照射により行われることが可能である。

カルボン酸ＶＩＩＩ［式中、ＰＧは保護基、例えばアリルを表す］は、カップリング剤、例えばＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの組合せを用いて、アミンＶＩＩと反応され、アミドＩＸを生じる。次に、アミンＶＩｂが、ミカエル反応により、塩基と、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドのような溶媒とを用いて導入され、中間体Ｘを得る。中間体ＶＩＩについて記述されたのと同じ方法での、アシル化及びアミノ化の反復の後、ＸＩが得られる。脱保護は、ＰｈＳｉＨ_３及びＰｄ（ＰＰｈ_３）_４を用いて、溶媒としてのジクロロメタン中で（「テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ）」、１９９９年、第４０巻、ｐ．２５０５−２５０８；「テトラヘドロン・レターズ」、１９９７年、第３８巻、ｐ．７２７５−７２７８）、或いはジオキンサン中のＫＯＨ水溶液を用いて行われ、ＸＩＩを生じる。環化は、アミド形成により、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの組合せのような、固相ペプチド結合法のための標準的なカップリング試薬を用いて、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンのような三級塩基の存在下に促進される。最終化合物Ｉは、トリフルオロ酢酸、ジクロロメタン、及び水の混合物を用いて、樹脂から遊離可能である。

式Ｉの化合物を取得するための代替えの戦略は、アミンＩＶ及びＸの、それぞれ式ＸＩＩＩａ及びＸＩＩＩｂのアミノ酸を用いたアシル化（方法Ｂ）を包含する。
方法Ｂ

当業者に明らかなように、方法Ａのいくつかの段階を、方法Ｂのいくつかの段階と組合せて、式Ｉの化合物を得ることが可能である。

出発一級アミン、ＶＩａ、ＶＩｂ、及びＶＩｃは、市販されており、或いは公知の方法（マーチ（Ｍａｒｃｈ）著、「アドバンスド・オーガニック・ケミストリー（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ）、１９９１年）によるか、もしくは例えば以下に記述されたスキームを用いて取得されてもよい。
スキーム１

アミンは、アルコール及びフタルイミドカリウムから出発するミツノブ反応により、例えば、ジエチルアゾジカルボキシラート（ＤＥＡＤ）及びトリフェニルホスフィンの存在下に、溶媒としてのテトラヒドロフラン中で取得可能であり、さらに、ヒドラジン水和物により切断される（ミツノブ（Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ）著、「ジャーナル・オブ・ディ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）」、１９７２年、第９４巻、ｐ．６７９−６８０）。

Ｎ−置換グリシンＸＩＩＩａ及びＸＩＩＩｂは、以下に示す方法により、対応するグリシンの、適当なアルデヒドとの、ＮａＢＨ_４、ＮａＢＨ_３ＣＮ、ＮａＢＨ（ＡｃＯ）_３のような還元剤を用いた還元的アミノ化（スキーム２）によるか、又はエステルの、適当なアミンＥ−ＮＨ２による求核置換（スキーム３）により合成されてもよい。
スキーム２

スキーム３

式ＩＩの化合物は、上述のものに類似の反応を用いて取得可能である。

したがって、式Ｉの対応するカルボン酸、すなわち式Ｉａの化合物を取得するためには、出発固体支持体（ＩＶａ）がアミノ基の代わりに反応性のハロゲン原子を有することを除いて、式Ｉの化合物の合成と同じ順序が使用される（方法Ａ及び／又はＢを用いて）。

化合物Ｉａへ結合されるべきペプチドＸＶＩもまた、ペプチドの合成のための標準的な反応を用いて取得される。したがって、固体支持体アミンＩＶは、まず保護されたリジン（ＸＩＶａ）と反応され、続いてもう１つの保護されたアミノ酸（ＸＩＶｂ）と反応されてもよい。カップリングの後、保護基は除去される。この順序は、３回まで反復可能である。

カルボン酸Ｉａは、次にアミンＸＶＩと反応され、脱保護の後に化合物ＩＩａが取得される。ＩＩａとポリグルタミン酸ＸＶＩＩａ（対応する塩ＸＶＩＩから取得された）との間のアミドカップリングは、薬物コンジュゲートＩＩＩを生じる。

本発明の化合物は、ａｐａｆ−１阻害剤である。それゆえ、それらは過剰のアポトーシスに関連した症状の、治療又は予防のために有用である。

成体では、ニューロン及び心筋細胞のような分裂後細胞は、ほとんど再生されない。それ故、それらの喪失は、神経及び心臓の障害を引き起こし得る。これらの細胞は、多様な急性及び慢性の変性疾患において、アポトーシス性細胞死を受ける。同様に、敗血症性ショック、虚血、及び中毒は、多数の臓器において大量のアポトーシスを引き起こす。感染は、特定の細胞タイプ、例えばＡＩＤＳでは白血球、又はヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ Ｐｙｌｏｒｉ）感染では胃粘膜細胞の、高いアポトーシス性細胞交代を引き起す可能性がある。アポトーシス事象はまた、臓器移植における虚血及び保存−再潅流のためのプロセスにおいても重要である。これらの疾患は、それゆえ、治療的細胞死抑制のための候補である。

アポトーシスに関連した他の症状又は疾病は、制限されることなく、卒中、外傷性障害、脳損傷、脊髄損傷、髄膜炎、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ケネディー病、多発性硬化症、プリオン関連疾患、並びに他の急性又は慢性の心臓血管疾患、アルコール関連病理、及び脱毛症の治療を包含する。

したがって本発明は、これらの化合物の、上述の疾病又は症状の治療又は予防のための、医薬品調製のための使用に関連する。

本発明のもう１つの観点は、Ｒ２条件なしの式Ｉの化合物か、又は先に定義されたポリマー−薬物コンジュゲートである化合物の、アポトーシスに関連した疾病又は症状の治療又は予防のための、医薬品製造のための使用に関する。

本発明のもう１つの観点は、アポトーシスの阻害に関連した症状の治療又は予防のための方法であって、Ｒ２条件なしの式Ｉの化合物か、又は先に定義されたポリマー−薬物コンジュゲートである化合物と、１以上の医薬的に許容される賦形剤とを、投与することを含んでなる方法に関する。

本発明のもう１つの観点は、卒中、外傷性障害、脳損傷、脊髄損傷、髄膜炎、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ケネディー病、多発性硬化症、プリオン関連疾患、心筋虚血、並びに他の急性又は慢性の心臓血管疾患、臓器移植、アルコール関連病理、及び脱毛症の治療のための方法であって、Ｒ２条件なしの式Ｉの化合物か、又は先に定義されたポリマー−薬物コンジュゲートである化合物と、１以上の医薬的に許容される賦形剤とを、投与することを含んでなる方法に関する。

本発明はさらに、式Ｉの化合物か、又は先に定義されたポリマー−薬物コンジュゲートである化合物と、医薬的に許容されるそれらの塩又は溶媒和化合物とを、１以上の医薬的に許容される賦形剤と一緒に、単回又は複数回の用量で含んでなる医薬組成物を提供する。下文に言及される賦形剤の実例は、単なる例として示されているものであって、本発明の範囲を制限するものと解釈されるべきではない。

本発明化合物は、任意の医薬剤形の形状で投与可能である。医薬剤形は、活性化合物の性質と、その投与経路とに依存する。任意の投与経路、例えば、経口、口腔内、経肺、局所、非経口（皮下、筋肉内、及び静脈内を含む）、経皮、眼球（点眼）、吸入、鼻腔内、耳、経粘膜、移植、又は直腸内投与が使用されてよい。しかしながら、経口、局所、又は非経口投与が好ましい。

経口投与用の固形組成物は、なかんずく、共に即時放出又は調整放出製剤として製剤された、タブレット、顆粒、及び硬ゼラチンカプセルを包含する。

別法として、本発明化合物は、経口用の液体製剤、例えばエマルジョン、溶液、散剤、懸濁物、シロップ、エリキシル、又は軟ゼラチンカプセル内に取り込まれてもよい。それらは、一般に使用される不活性希釈剤、例えば純水、エタノール、ソルビトール、グリセロール、ポリエチレングリコール（マクロゴール）、及びプロピレングリコールを含有してもよい。補助組成物はまた、コアジュバント、例えば湿潤、懸濁、甘味、着香剤、保存料、緩衝剤、キレート剤、及び酸化防止剤を含有してもよい。

非経口投与用の注射可能な製剤は、無菌の溶液、懸濁液、又はエマルジョンを、油性又は水性ビヒクル中に含んでなり、コアジュバント、例えば懸濁、安定化、張度剤、又は分散剤を含有してもよい。

当該組成物は、その局所適用のために製剤されることも可能である。製剤は、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、シャンプー製剤、経口ペースト、マウスウォッシュ製剤、及びパッチを包含し、これにおいて化合物は適当な賦形剤中に分散又は溶解される。

本発明の１つの実施態様においては、医薬組成物は、ナノスフェア、マイクロ粒子、及びナノ粒子の形状にある。

活性成分の有効投与量は、他の因子の中でも、投与される特定の化合物、投与経路、治療されるべき疾病の性質及び厳しさ、並びに、患者の年齢、全身状態、及び体重に依存して異なってよい。好適な用量範囲の代表的な実例は、１日当たり約０．００１から約１００ｍｇ／Ｋｇ体重までであり、単回用量又は分割用量として投与可能である。しかしながら、投与される用量は、一般には医師の自由裁量にゆだねられる。

ＭＴＴアッセイによる毒性及び細胞回復
ＭＴＴアッセイは、代謝事象がアポトーシス又は壊死をもたらす場合の、細胞増殖並びに細胞生存率の減少を測定する。それはまた、所与の細胞系が、ゼノバイオティクス（生体異物）の存在下にインキュベートされた場合の生存率を査定するためにも使用可能である。テトラゾリウム塩の減少は、細胞増殖を分析するための信頼できる方法として受け入れられている。黄色のテトラゾリウムＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾリル−２）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）は、代謝活性のある細胞により還元され、ＤＭＳＯによる可溶化後に分光光度法により測定可能な、紫色のホルマザンの細胞内形成を生ずる結果となる。

ＭＴＴアッセイは、化合物の毒性を、異なる濃度において査定するべく、本発明において使用された。化合物は、細胞生存率におけるそれらの潜在的な損傷を分析するべく、Ｓａｏｓ−２及びＵ９３７細胞系に対し、異なる濃度で添加され、異なる時間にインキュベートされた。結果は、パーセント細胞生存率により表されている。

ＭＴＴアッセイはまた、アポトーシス誘導された細胞系における、化合物の添加による細胞回復を査定するべく使用された。Ｓａｏｓ−２細胞系については、アポトーシス誘導は２μＭのドキシサイクリンの添加により行われ；Ｕ９３７、ヒーラ、Ｕ２−ＯＳの場合は、アポトーシスは各々０．２５μＭ、１．５μＭ、２μＭのドキソルビシンにより誘導された。結果は、ドキシサイクリン及びドキソルビシンの添加が、Ｓａｏｓ−２、及び、Ｕ９３７、ヒーラ、又はＵ２−ＯＳにおいて、各々１００％の細胞死及び０％の細胞回復を誘導するものとみなすことにより、細胞生存率の％として表される。

カスパーゼ阻害アッセイ
本発明において記述された化合物により誘導される、カスパーゼの時間依存性の阻害が分析された。細胞系は、化合物（５０μＭ）の存在下又は不在下に、異なる時間で増殖された。カスパーゼ活性は、Ｓａｏｓ−２又はＵ９３７細胞抽出物と、Ａｃ−ＤＥＶＤ−ａｆｃ（Ｎ−アセチル−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−ａｆｃ（７−アミノ−４−トリフルオロメチルクマリン）を基質（２０μＭ）として用いて分析された。カスパーゼ活性は、サイトフルオール（Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ）４０００蛍光計（励起４００ｎｍ；放射５０８ｎｍ）を用いた、１時間にわたる蛍光性ａｆｃの遊離により、連続的にモニターされた。カスパーゼ活性に対する化合物の効果は、処理細胞対非処理細胞（対照）の、蛍光シグナルにおける阻害のパーセントとして表された。

Ａｐａｆ−１誘導アポトーシスの阻害
化合物の活性は、アポトーシス装置内のそれらの特異標的に関して査定された。Ａｐａｆ−１のオリゴマー化は、アポトソーム形成の活性化をもたらす分子事象であって、最終的にはアポトーシスの誘導に終わる。これらの実験は、無細胞で、及び細胞アッセイにおいて行われた。

無細胞アッセイ用には、Ｈｅｋ−２９３細胞質抽出物が、先に記述されたように調製され（マレ（Ｍａｌｅｔ）ら、２００５年）、完全な細胞抽出物の分配が行われた。同時に、組換えＡｐａｆ−１が、マレら（Ｍａｌｅｔ）ら、２００５年、に従って精製された。ＦＴ分画（カスパーゼ−３及び−９を含有するが、Ａｐａｆ−１を欠く）は、異なる濃度の化合物の存在下に、組換えＡｐａｆ−１と共にインキュベートされた（図１参照）。化合物の活性は、カスパーゼ活性の阻害により分析された（前文参照）。

細胞アッセイ用には、Ｓａｏｓ−２及びＵ９３７細胞は、Ａｐａｆ−１オリゴマー形成を特異的に誘導するアポトソーム活性化剤（グエン（Ｎｇｕｙｅｎ）及びウェルズ（Ｗｅｌｌｓ）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）」、２００３年、第１００巻、ｐ．７５３３−７５３８）で処理された。その後、化合物は細胞へ添加され（５０μＭ）、２４又は４８時間インキュベートされた。Ａｐａｆ−１誘導アポトーシスを阻害する化合物の能力は、カスパーゼ活性の阻害により分析された（上記参照）。

Ａｐａｆ−１ＣＡＲＤドメインに対するＩＩａ．１の結合：蛍光偏光アッセイ
蛍光偏光測定は、ビクター（Ｖｉｃｔｏｒ）２Ｖ １４２０マルチラベル（Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ）ＨＴＳカウンターにて行われた。緩衝液Ａ（全反応体積は２００μｌ）中の、５’−６’−カルボキシフルオレセイン標識ＩＩａ．１（ＣＦ−ＩＩＡ．１と命名；λｅｘｃ＝４８０ｎｍ；λｅｍ＝５３５ｎｍ）６０ｎＭの溶液は、濃縮されたタンパク質溶液で滴定された。データは、ウォラック（Ｗａｌｌａｃ）１４２０ワークステーション（Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ）ソフトウェアを用いることにより記録された。Ｋｄ値は、２相モデルを用いて計算された（図２参照）。

初めに、アポトソームに対するペプトイドの結合部位を特徴づけるべく、本発明者らはＩＩａ．１の蛍光性類似体（ＣＦ−ＩＩａ．１）を合成した。ＣＦ−ＩＩａ．１は、Ａｐａｆ−１ＣＡＲＤドメインに結合したが、チトクロームｃ及び他の対照タンパク質には結合せず（マレら（Ｍａｌｅｔ）ら、２００５年）、蛍光偏光アッセイにおいて測定された解離定数（Ｋｄ）は６０ｎＭであった（図２）。それにもかかわらず、結合定数の値は、本発明者らのアッセイにおいてカスパーゼ活性を５０％阻害するのに必要であったＩＩａ．１の濃度（ＩＣ_５０≒３０μＭ、図１）とは対照的であった。これらのデータを調和させるべく推定される説明は、インビトロでプロカスパーゼ−９を翻訳するべく使用された網状赤血球ライゼートが、ＩＩａ．１の有効濃度を減少させた成分を含有していた、ということである。

以下の略語が、実施例において使用されている：
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド
ｅｑ：モル当量
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
Ｆｍｏｃ：フルオレニルメトキシカルボニル
グリシン：Ｇ
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
ＨＯＢＴ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
リジン：Ｋ
ＰＧＡ：ポリ（Ｌ−グルタミン酸）
フェニルアラニン：Ｆ
ＰｙＢＯＰ：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオフルオロホスファート
Ｒ：アルギニン
ｒｔ：保持時間
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
バリン：Ｖ

本発明は、以下の実施例によりさらに説明される。実施例は単なる例として示されているものであって、本発明の範囲を制限するものと解釈されるべきではない。

ポリスチレンＡＭ ＲＡＭ樹脂（０．７５ｍｍｏｌ／ｇ）は、ラップ・ポリメレ（Ｒａｐｐ Ｐｏｌｙｍｅｒｅ）ＧｍｂＨ（ドイツ）から購入された。２−クロロトリチルクロリド樹脂（１．４ｍｍｏｌ／ｇ）は、ノババイオケム（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）から購入された。半調製用ＲＰ−ＨＰＬＣは、ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）（米国、マサチューセッツ州、ミルフォード）システムにより、Ｘ−ＴｅｒｒａＣ_１８（１９×２５ｃｍ、５μｍ）カラムを用いて行われた；溶出：Ａ＝水中０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ、勾配：０分、２０％Ｂ−２０分、８０％Ｂ。高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ−ＦＡＢ）は、サンチアゴ・デコンポステラ大学（スペイン）の質量分析サービス（Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｓｅｒｖｉｃｅ）において記録された。

本書類において使用された命名法は、ＩＵＰＡＣ系統的命名法生成のための、バイルシュタイン研究所（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）コンピューターシステム、ＡＵＴＯＮＯＭ（オートマチック・ノーメンクレイチャー（自動命名法））に基づいている。

中間体ＶＩＩＩ
ＶＩＩＩ：（Ｚ）−ブタ−２−エン二酸モノアリルエステル
クロロホルム中２ｇの無水マレイン酸（２０ｍｍｏｌ）の溶液に対し、１．８ｍｌのアリルアルコール（２６ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）が添加された。反応混合物は、マイクロ波照射下に、６０℃で５０分間攪拌された。結果として得られた溶液は、１Ｎ ＨＣｌで処理され、クロロホルムで抽出された。有機抽出物は食塩水で洗浄され、次いで無水硫酸マグネシウム上で脱水され、濾過された。溶媒は減圧下に蒸留され、得られた残渣はカラムクロマトグラフィーにより精製されて、中間体ＶＩＩＩを油として得た（純度９５％、収率８５％）。

式Ｉの化合物
Ｉ．１： １−［２−（２，４−ジクロロフェニル）エチル］−４−（３，３−ジフェニルプロピル）−３，７−ジオキソ［１，４］−ジアゼパン−５−カルボン酸カルバモイルメチル−［２−（２，４−ジクロロフェニル）エチル］アミド
リンク（Ｒｉｎｋ）アミド樹脂（５００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）は、ＤＭＦ中２０％のピペリジン３ｍＬで処理され、混合物はマイクロ波反応装置において、６０℃で２分間攪拌された。樹脂は濾過され、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。樹脂は、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、ブロモ酢酸（Ｖ、２７５ｍｇ、５ｅｑ）及びＤＩＣ（３０６μＬ、５ｅｑ）の溶液で処理された。反応混合物は、マイクロ波反応装置において、６０℃で２分間攪拌された。樹脂はドレインされ、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＭＦ（３×３ｍＬ）で洗浄された。３ｍＬのＤＭＦ中の、２，４−ジクロロフェネチルアミン（ＶＩａ、３００μＬ、５ｅｑ）及びトリエチルアミン（２７５μＬ、５ｅｑ）の溶液が樹脂へ添加され、懸濁液はマイクロ波での活性化のもとに、９０℃で２分間攪拌された。上清は除去され、樹脂はドレインされ、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。次に、樹脂は、ＤＣＭ：ＤＭＦ（２：１、３ｍＬ）中の、（Ｚ）−ブタ−２−エン二酸モノアリルエステル（ＶＩＩＩ、３１０ｍｇ、５ｅｑ）、ＨＯＢＴ（２６７ｍｇ、５ｅｑ）、及びＤＩＣ（３０６μＬ、５ｅｑ）の溶液で処理された。反応混合物は室温で３０分間攪拌され、濾過され、反応は同じ条件下に繰返された。樹脂はドレインされ、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＭＦ（３×３ｍＬ）で洗浄された。次いで、３ｍＬのＤＭＦ中の、３，３−ジフェニルプロピルアミン（ＶＩｂ、４１８ｍｇ、５ｅｑ）及びトリエチルアミン（２５７μＬ、５ｅｑ）の溶液が樹脂へ添加され、懸濁液は室温で３時間攪拌された。反応は、同じ温度において一晩繰返された。上清は除去され、残渣はドレインされ、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。次いで、樹脂はＤＭＦ（３ｍＬ）中の、ブロモ酢酸（Ｖ、２７５ｍｇ、５ｅｑ）及びＤＩＣ（３０６μＬ、５ｅｑ）の溶液で処理された。反応混合物は、マイクロ波反応装置内で、６０℃で２分間攪拌された。樹脂はドレインされ、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＭＦ（３×３ｍＬ）で洗浄された。３ｍＬのＤＭＦ中の、２，４−ジクロロフェネチルアミン（ＶＩｃ、２００μＬ、５ｅｑ）及びトリエチルアミン（２１０μＬ、５ｅｑ）の溶液が樹脂へ添加され、懸濁液はマイクロ波での活性化のもとに、９０℃で２分間攪拌された。上清は除去され、残渣はドレインされ、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。次いで樹脂は、無水ＤＣＭ中のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（４６ｍｇ、０．１ｅｑ）及びフェニルシラン（４９０μＬ、１０ｅｑ）により、アルゴン雰囲気下に室温で１５分間処理された。この手順は３回繰返された。上清は除去され、残渣はドレインされ、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。環化は、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、ＰｙＢＯＰ（３０８ｍｇ、１．５ｅｑ）、ＨＯＢＴ（８０ｍｇ、１．５ｅｑ）、及びＤＩＰＥＡ（２０３μＬ、３ｅｑ）を用いた処理により促進された。反応混合物は室温で１６時間攪拌され、濾過された。樹脂はドレインされ、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＭＦ（３×３ｍＬ）で洗浄された。最後に、６０：４０：２のＴＦＡ／ＤＣＭ／水混合物による樹脂の処理は、標題化合物Ｉ．１を含有する粗反応混合物を遊離し、それは濾過された。濾液からの溶媒は、減圧下の蒸発及びそれに続く凍結乾燥により除去された。得られた残渣は、半調製用ＲＰ−ＨＰＬＣにより、水性アセトニトリル勾配（４２％アセトニトリル→８０％アセトニトリル、３５分間）を用いて精製され、９１ｍｇの所望の生成物を与えた（収率３０％、純度≧９８％）。
ＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：Ｃ_３９Ｈ_３８Ｃｌ_４Ｎ_４Ｏ_４の理論値７６７．１６４７；測定値７６７．１７２０．

異なるアミンを使用することを除いて、実施例Ｉ．１について記述されたものと類似の手順の後、以下の生成物が得られた：

中間体Ｉａ
Ｉａ： ｛［２−（２，４−ジクロロフェニル）エチル］−［１−［２−（２，４−ジクロロフェニル）エチル］−４−（３，３−ジ−フェニルプロピル）−３，７−ジオキソ［１，４］ジアゼパン−５−カルボニル］アミノ｝酢酸
２−クロロトリチルクロリド樹脂（ＩＶａ、７００ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）は、ＤＣＭ（４ｍＬ）中の、クロロ酢酸（Ｖ、４６３ｍｇ、５ｅｑ）及びＤＩＰＥＡ（８４０μＬ、５ｅｑ）の溶液で処理された。混合物は室温で１時間攪拌され、反応はメタノール（５５０μＬ）でクエンチされ、攪拌は１０分間継続された。上清は除去され、残渣はドレインされ、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＭＦ（３×３ｍＬ）で洗浄された。４ｍＬのＤＭＦ中の、２，４−ジクロロフェネチルアミン（ＶＩａ、７４０μＬ、５ｅｑ）及びＤＩＰＥＡ（８４０μＬ、５ｅｑ）の溶液が樹脂へ添加され、懸濁液は室温で３時間攪拌された。上清は除去され、残渣はドレインされ、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。次いで樹脂は、２：１のＤＣＭ：ＤＭＦ（４ｍＬ）中の、（Ｚ）−ブタ−２−エン二酸モノアリルエステル（ＶＩＩＩ、７６５ｍｇ、５ｅｑ）、ＨＯＢＴ（６６２ｍｇ、５ｅｑ）、及びＤＩＣ（７６０μＬ、５ｅｑ）の溶液で処理された。反応混合物は室温で３０分間攪拌され、濾過され、同じ条件下に繰返された。次に、４ｍＬのＤＭＦ中の、３，３−ジフェニルプロピルアミン（ＶＩｂ、１．０ｇ、５ｅｑ）及びＤＩＰＥＡ（８４０μＬ、５ｅｑ）の溶液が樹脂へ添加され、懸濁液は室温で３時間攪拌された。反応は繰返され、攪拌は同じ温度において１６時間継続された。上清は除去され、残渣はドレインされ、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。次いで、樹脂は２：１のＤＣＭ：ＤＭＦ（４ｍＬ）中の、クロロ酢酸（Ｖ、４６３ｍｇ、５ｅｑ）及びＤＩＣ（７６０μＬ、５ｅｑ）の溶液で処理された。反応混合物は室温で３０分間攪拌された。樹脂はドレインされ、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＭＦ（３×３ｍＬ）で洗浄された。４ｍＬのＤＭＦ中の、２，４−ジクロロフェネチルアミン（ＶＩｃ、７４０μＬ、５ｅｑ）及びＤＩＰＥＡ（８４０μＬ、５ｅｑ）の溶液が樹脂へ添加され、懸濁液は室温で３時間攪拌された。上清は除去され、残渣はドレインされ、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。次いで樹脂は、無水ＤＣＭ中のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１１４ｍｇ、０．１ｅｑ）及びフェニルシラン（１．２ｍＬ、１０ｅｑ）により、アルゴン雰囲気下に室温で１５分間処理された。この合成段階は３回まで行われた。上清は除去され、残渣はドレインされ、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＭＦ（３×３ｍＬ）で洗浄された。環化は、ＤＭＦ（４ｍＬ）中の、ＰｙＢＯＰ（７６５ｍｇ、１．５ｅｑ）、ＨＯＢＴ（１９９ｍｇ、１．５ｅｑ）、及びＤＩＰＥＡ（５０５μＬ、３ｅｑ）を用いた処理により促進された。反応混合物は室温で４８時間攪拌され、濾過された。樹脂はドレインされ、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。最後に、５：９５のＴＦＡ／ＤＣＭ混合物による樹脂の処理は、粗反応混合物を遊離し、それは濾過された。濾液からの溶媒は、減圧下に除去され、続いて凍結乾燥され、化合物Ｉａ（４６０ｍｇ、収率６１％、純度≧５５％）を無色の固体として与えた。

中間体ＩＩａ
リンク（Ｒｉｎｋ）アミド樹脂（ＩＶ、５０５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）は、ＤＭＦ中２０％のピペリジン３ｍＬで脱保護された。混合物はマイクロ波反応装置において、６０℃で２分間攪拌された。樹脂は濾過され、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（ＸＩＶａ、２ｅｑ）は、ＨＯＢＴ（１０８ｍｇ、２ｅｑ）及びＤＩＣ（１２５μＬ、２ｅｑ）を用いて樹脂へ結合された。混合物は室温で１時間攪拌された。樹脂はドレインされ、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。３ｍＬの、ＤＭＦ中２０％のピペリジン（３０分間）によるＦｍｏｃ基の除去に際し、樹脂はＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。必要であれば、上述と同じ条件下に、別のアミノ酸（ＸＩＶｂ）がカップリングされ、中間体ＸＶＩを生じた。

ＤＭＦ中で膨潤された中間体ＸＶＩに対し、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、ＨＡＴＵ（２２８ｍｇ、１．５ｅｑ）及びＤＩＰＥＡ（２０５μＬ、３ｅｑ）の存在下に、酸Ｉａ（４６０ｍｇ、１．５ｅｑ）が添加された。反応混合物は室温で１６時間攪拌され、濾過された。樹脂はドレインされ、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、イソプロピルアルコール（３×３ｍＬ）、及びＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄された。８０：２０：２．５：２．５のＴＦＡ／ＤＣＭ／水／トリイソプロピルシラン混合物による樹脂の処理は、化合物ＩＩａを含有する粗反応混合物の遊離をもたらし、それは濾過された。濾液からの溶媒は、減圧下に除去され、続いて凍結乾燥された。得られた残渣は、半調製用ＲＰ−ＨＰＬＣにより、水性−アセトニトリル勾配を用いて精製された。

式ＩＩＩの化合物
ＩＩＩ．１：ＰＧＡ−ＩＩａ．１
水中の、分子量（Ｍ_Ｗ）範囲１７０００−４３０００ＤａをもつＰＧＡナトリウム塩（ＸＶＩＩ、０．１ｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液に対し、０．２Ｍ ＨＣｌが、溶液のｐＨが２．０に調整されるまで添加された。沈澱は収集され、水に対し透析され、凍結乾燥された。次いで、そのプロチン型のＰＧＡ（ＸＶＩＩａ）は、無水ＤＭＦ（７．５ｍＬ）中に溶解され、ＤＩＣ（３ｅｑ）及びＨＯＢｔ（３ｅｑ）が添加され、１５分間攪拌された。次に、中間体ＩＩａ．１（０．０５２ｍｍｏｌ（１２ｍｏｌ％）、１ｅｑ）が添加され、ＤＩＰＥＡ（１．５ｍＬ）によりｐＨは８に調整された。反応は室温で３６時間進行された。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ、シリカ）は、ＩＩａ．１（Ｒ_ｆ＝０．５）の、ポリマーコンジュゲート（Ｒ_ｆ＝０、ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ：ＡｃＯＨ＝８５：１０：５）への完全な転換を示した。反応を停止するべく、混合物はＣＨＣｌ_３へ注入された。結果として得られた沈澱は収集され、真空中で乾燥された。ＰＧＡ−ペプトイドコンジュゲートＩＩＩ．１のナトリウム塩は、生成物を１．０Ｍ ＮａＨＣＯ_３中に溶解することにより得られた。この水溶液は蒸留水に対し透析された（Ｍ_ＷＣＯ ６，０００−８０００Ｄａ）。透析物の凍結乾燥は、生成物を白色の粉末として生じた。ＵＶ（λ＝２８２ｎｍ）により測定された、ポリマー中の全ペプトイド含有率は、２５−３０％（ｗ／ｗ）（１０−１２ｍｏｌ％官能基化）の範囲であり、遊離薬物含有率＜全薬物の１重量％であった。

溶液中のＩＩＩ．１及び対照ＸＶＩＩの、平均分子量（Ｍｗ）、多分散性（Ｍｗ／Ｍ
ｎ）、及び挙動は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）及び分析用超遠心（ＡＵＣ）により分析された。双方の技術ともＩＩＩ．１を、ＸＶＩＩよりも小さい流体力学的体積及び大きい沈降係数（Ｓ）をもつ（ＩＩＩ．１及びＸＶＩＩについて、各々、ｔｒ＝１２．５分及びＳ＝３．５±０．４秒 対 ｔｒ＝１１．６分及びＳ＝１．９±０．１秒）、よりコンパクトな立体配座構造として示した。沈降平衡により、ＭｗはＸＶＩＩについて２６７００Ｄａ、ＩＩＩ．１について５８６００Ｄａと測定されたが、ＰＥＧ標準を用いたＧＰＣにより、３６０００Ｄａ（Ｍｗ／Ｍｎ＝１．８）及び３８０００Ｄａ（Ｍｗ／Ｍｎ＝１．５）の分子量が、ＸＶＩＩ及びＩＩＩ．１について、各々ＰＥＧ標準を用いたＧＰＣにより測定された。

ＵＶ分光法による全薬物含有率の測定
ＭｅＯＨ中のＩＩａストック溶液が調製された（１ｍｇ／ｍＬ）。標準曲線を得るべく、試料はＭｅＯＨを用いて希釈され、０−１ｍｇ／ｍＬの濃度範囲を与えた。コンジュゲートの全薬物負荷は、Ｈ_２Ｏ中での２７２ｎｍ及び２８１ｎｍの光学密度を測定することにより決定された。Ｈ_２Ｏ中で分析された、ＩＩＩコンジュゲートと同じ濃度範囲（０−５ｍｇ／ｍＬ）のＰＧＡが、ブランクとして使用された。ＩＩａについて、ＲＴで、ＭｅＯＨ中、２８１ｎｍで検出された吸光係数は、７１３Ｌｍｏｌ^−１ｃｍ^−１であった。

ＨＰＬＣによる遊離薬物含有率の測定
ＩＩＩ．１の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）が調製され、アリコート（１００μＬ）がポリエチレンチューブへ添加され、水で１ｍＬとされた。試料のｐＨは、ギ酸アンモニウム緩衝液（１００μＬ、１Ｍ、ｐＨ８．５）により８に調整され、次いでＣＨＣｌ_３（５ｍＬ）が添加された。試料は次に、ボルテックスすることにより完全に抽出された（３×１０秒間）。上部の水性層は慎重に除去され、溶媒はＮ_２下に蒸発された。乾燥残渣は、２００μＬのＨＰＬＣグレードのアセトニトリル中に溶解された。平行して、同じ手順が親化合物ＩＩａ．１（２００μＬの１ｍｇ／ｍＬストック水溶液使用）について行われた。生成物を再溶解するための１ｍＬのアセトニトリルの添加は、２００μｇ／ｍＬのストックを与え、そこから濃度の範囲が調製された（２−１００μｇ／ｍＬ）。コンジュゲート中の薬物の遊離量は、ＨＰＬＣにより、リクロスフェア（Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ（登録商標））Ｃ１８カラム（１５０×３．９ｍｍ）を用いて測定された。流速１ｍＬ／分、０．１％ＴＦＡ水溶液中のアセトニトリル勾配使用（２０分間で、２０−１００％のアセトニトリル）。保持時間は、ＩＩａ．１についてｔｒ＝１４．３分（λ＝２２０ｎｍ）であった。

これらの、ＩＩＩ．１と同様の手順の結果、以下の実施例が得られた：

異なる濃度の化合物ＩＩａ．１の存在下に、組換えＡｐａｆ−１とインキュベートされたＨｅｋ−２９３ＦＴ細胞質分画を用いた、無細胞カスパーゼ阻害アッセイを示した図である。 ＣＡＲＤ／ＩＩａ．１相互作用の分析を示した図である。ＰＢＳ緩衝液中の、ＣＦ−ＩＩａ．１の２４０ｎＭ溶液は、濃度の増していくＣＡＲＤ−Ａｐａｆにより滴定され、蛍光偏光は３０℃で測定された。データ（平均ｓ．ｄ．；ｎ＝３）は、ミリポラリゼーション単位（ｍｐ）で記録された。

Claims (13)

1. 一般式Ｉ：
   

   

   ［式中、
   Ｒ１は、（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキル、（Ｃ_２−Ｃ_５）アルケニル、−（ＣＨ_２）_１−３−ＮＨＣＯ−（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、−（ＣＨ_２）_１−３−ＣＯＮＲａＲｂ、−（ＣＨ_２）_０−３（３−６）Ｃｙ、−（ＣＨ_２）_０−３−（５−６）Ｈｅｔｃｙ、−（ＣＨ_２）_１−３−フェニル、−（ＣＨ_２）_１−３−（１−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（２−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（５−１０）Ｈｅｔａｒ、−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ（フェニル）_２、−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ（フェニル）［（５−６）Ｈｅｔａｒ］、又は−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ［（５−６）Ｈｅｔａｒ］_２を表し；
   Ｒ２は、−（ＣＨ_２）_０−３−（３−６）Ｃｙ、−（ＣＨ_２）_０−３−（５−６）Ｈｅｔｃｙ、−（ＣＨ_２）_１−３−フェニル、−（ＣＨ_２）_１−３−（１−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（２−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（５−１０）Ｈｅｔａｒ、−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ（フェニル）_２、−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ（フェニル）［（５−６）Ｈｅｔａｒ］、又は−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ［（５−６）Ｈｅｔａｒ］_２を表し；
   Ｒ３は、−（ＣＨ_２）_１−３−フェニル、−（ＣＨ_２）_１−３−（１−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（２−ナフチル）、又は−（ＣＨ_２）_１−３−（５−６）Ｈｅｔａｒを表し；
   （Ｃ_１−Ｃ_５）アルキル及び−（Ｃ_２−Ｃ_５）アルケニルは、−Ｏ−（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、−Ｓ−（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、−ＮＨ_２、−ＮＨ−（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、及び−Ｎ［（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル］_２から選択される、１以上の置換基で置換されてもよく；
   （Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルは、１以上のハロゲン原子で置換されてもよく；
   Ｒａ及びＲｂは、独立して、−Ｈ又は−（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルを表し；
   （３−６）Ｃｙは、３−６員の、部分的に不飽和か、又は飽和された炭素環式環の基を表し；
   （５−６）Ｈｅｔｃｙは、独立してＯ、Ｓ、及びＮから選択される１又は２個のヘテロ原子を含有する、５又は６員の、部分的に不飽和か、又は飽和された炭素環式環の、Ｃ−又はＮ−基を表し；
   Ｃｙ及びＨｅｔｃｙは、ハロゲン、−ＣＦ_３、及び−ＯＨから選択される１以上の置換基で置換されてもよく；
   （５−６）Ｈｅｔａｒ及び（５−１０）Ｈｅｔａｒは、独立してＯ、Ｓ、及びＮから選択される１から４個までのヘテロ原子を含有する、各々５又は６員、及び５−１０員の芳香環の、Ｃ−又はＮ−基を表し；
   フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、（５−６）Ｈｅｔａｒ、及び（５−１０）Ｈｅｔａｒは、ハロゲン、−ＣＦ_３、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、−ＣＯ−（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、−（Ｃ_１−Ｃ_５）アルキル−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、及び−ＳＯ_２ＮＨ_２から選択される１以上の置換基で置換されてもよく；
   Ｒ２は、２−（４−フルオロフェニル）エチルを表さないという条件付きである］の化合物、その立体異性体及びそれらの混合物、その多形体及びそれらの混合物、及び、医薬的に許容されるそれらの溶媒和化合物及び付加塩。
2. Ｒ１が、−（ＣＨ_２）_０−３−（５−６）Ｈｅｔｃｙ、−（ＣＨ_２）_１−３−（５−１０）Ｈｅｔａｒ、−（ＣＨ_２）_１−３−フェニル、−（ＣＨ_２）_１−３−（１−ナフチル）、又は−（ＣＨ_２）_１−３−（２−ナフチル）を表し、それらの全てが置換されてもよい、請求項１の化合物。
3. Ｒ２が、−（ＣＨ_２）_１−３−フェニル、−（ＣＨ_２）_１−３−（１−ナフチル）、−（ＣＨ_２）_１−３−（２−ナフチル）、又は−（ＣＨ_２）_２−ＣＨ（フェニル）_２を表し、それらの全てが置換されてもよく、Ｒ２が２−（４−フルオロフェニル）エチル−を表さないという条件付きである、請求項１又は２の化合物。
4. Ｒ３が、−（ＣＨ_２）_１−３−（５−６）Ｈｅｔａｒ又は−（ＣＨ_２）_２−フェニルを表し、双方が置換されてもよい、請求項１−３のいずれかによる化合物。
5. 式ＩＩ：
   

   

   ［式中、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、Ｒ２の条件なしで請求項１において定義されたものと同様の意味を有しており；各Ｒ４は、独立して、任意の２０の天然産アミノ酸からの側鎖を表し、ｎは０、１、２、又は３である］の基を含んでなる薬物コンジュゲートである化合物、その立体異性体及びそれらの混合物、及び、ポリグルタミン酸ポリマーへコンジュゲートされた医薬的に許容されるそれらの溶媒和化合物及び付加塩。
6. 式ＩＩＩ：
   

   

   ［式中、ｘに対するｙの比率は、重量で２５−３０％から７５−７０％までである］の、請求項２の薬物コンジュゲートである化合物。
7. 前記ポリグルタミン酸がポリ（Ｌ−グルタミン酸）であり；ｎが２を表し、Ｒ４がグリシン側鎖を表す、請求項５又は６の化合物。
8. Ｒ２の条件なしで請求項１に定義された式Ｉの化合物、又は請求項５に定義された化合物の、アポトーシスの阻害に関連した症状の治療又は予防のための、医薬品製造のための使用。
9. 前記症状が、卒中、外傷性障害、脳損傷、脊髄損傷、髄膜炎、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ケネディー病、多発性硬化症、プリオン関連疾患、心筋虚血、並びに他の急性又は慢性の心臓血管疾患、臓器移植、アルコール関連病理、又は脱毛症の治療から選択される、請求項８の使用。
10. アポトーシスの阻害に関連した症状の治療又は予防のための方法であって、Ｒ２条件なしで請求項１に定義された式Ｉの化合物か、又は請求項５に定義された化合物と、１以上の医薬的に許容される賦形剤とを、投与することを含んでなる方法。
11. 前記症状が、卒中、外傷性障害、脳損傷、脊髄損傷、髄膜炎、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ケネディー病、多発性硬化症、プリオン関連疾患、心筋虚血、並びに他の急性又は慢性の心臓血管疾患、臓器移植 アルコール関連病理、又は脱毛症の治療から選択される、請求項１０の方法。
12. 有効量の、請求項１に定義された式Ｉの化合物又は請求項５に定義された化合物、医薬的に許容されるそれらの塩又は溶媒和化合物、及び、１以上の医薬的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物。
13. ナノスフェア、マイクロ粒子、及びナノ粒子の形状にある、請求項１２の医薬組成物。

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