JPS61271300A - 新規ペプチド - Google Patents
新規ペプチドInfo
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- JPS61271300A JPS61271300A JP60114461A JP11446185A JPS61271300A JP S61271300 A JPS61271300 A JP S61271300A JP 60114461 A JP60114461 A JP 60114461A JP 11446185 A JP11446185 A JP 11446185A JP S61271300 A JPS61271300 A JP S61271300A
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- JP
- Japan
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- resin
- peptide
- pro
- leu
- Prior art date
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- Granted
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-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、オビオイドレセゾターに結合性を石し、故に
鎮痛麻酔剤や温和な催眠剤、温和な覚惺剤、抗麻酔剤ま
たは抗ショック剤として期待される新規ペプチドに関す
る。
鎮痛麻酔剤や温和な催眠剤、温和な覚惺剤、抗麻酔剤ま
たは抗ショック剤として期待される新規ペプチドに関す
る。
従来技術
モルヒネ等の鎮痛麻酔薬（オピエート）の作用機構の研
究から脳はじめ各稲臓器には、これらの物質が特異的に
結合するオピオイドレセグターの存在することが見出さ
れた。さらに動物体内にはこのレセプターに結合し鎮痛
作用を示すペプチド類が存在することが見出され内因性
オピオイドペプチドと総称されている。これらペプチド
は鎮痛作用のみならず各種ホルモンの分泌調節や摂食の
調節にも関与することが示されている。
究から脳はじめ各稲臓器には、これらの物質が特異的に
結合するオピオイドレセグターの存在することが見出さ
れた。さらに動物体内にはこのレセプターに結合し鎮痛
作用を示すペプチド類が存在することが見出され内因性
オピオイドペプチドと総称されている。これらペプチド
は鎮痛作用のみならず各種ホルモンの分泌調節や摂食の
調節にも関与することが示されている。
一方、オビ二一トレセグターに親和性を有するがそれ自
身鎮痛作用を示さず、モルヒネ等鎮痛麻酔薬の作用を妨
げる物質はオピエートアンタゴニストと呼ばれており、
このような物質としてはナロクンンなどの合成化合物が
ある。ナロクンンやナトレクンンは各種の原因によるシ
ョック症状を改善する効果や脳の発育を促進する効果を
肩することが知られている。最近コーヒー中に天然界で
初めてオピエートアンタゴニストの存在することが見出
され、この物質はカフェインと共にコーヒーのもつ覚惺
作用に関する可能性が指摘されている。即ち、オピエー
トレセゾターに結合性を肩する物質はオピオイドまたは
オピエートアンタゴニストであシ、それらは上記の如き
生理作用を示す有用物質である。
身鎮痛作用を示さず、モルヒネ等鎮痛麻酔薬の作用を妨
げる物質はオピエートアンタゴニストと呼ばれており、
このような物質としてはナロクンンなどの合成化合物が
ある。ナロクンンやナトレクンンは各種の原因によるシ
ョック症状を改善する効果や脳の発育を促進する効果を
肩することが知られている。最近コーヒー中に天然界で
初めてオピエートアンタゴニストの存在することが見出
され、この物質はカフェインと共にコーヒーのもつ覚惺
作用に関する可能性が指摘されている。即ち、オピエー
トレセゾターに結合性を肩する物質はオピオイドまたは
オピエートアンタゴニストであシ、それらは上記の如き
生理作用を示す有用物質である。
１９７９年にテシュマッヘル（Ｔｅａｅｈｍａｃｈ＊ｒ
）らはモルモット回腸縦走筋神経叢収縮抑制試験にょシ
、乳製品を検索したところ、牛乳カゼインペグトンから
オピオイド活性のあるβ−カシモルフイン７（ヘグタペ
プテド）を単離した（ＨＯＰＰ＠ −８＠ｙｌ＠ｒ ａ
、、 Ｚ、 Ｐｈｙｓｉｏｌ、 Ｃｈ＠ｎｎ、、 ３６
０．１２１１及び１２１７（１９７９）参照）。その後
、このβ−カシモルフイン７（ヘグタペプチド）の構造
を基に研究され、β−カ！モルフイン６、β−カシモル
フイン５及びβ−カシモルフイン４アミド（β−カシモ
ルフイン７の約１００倍の活性を有する。）が合成され
るに至った（ Ｃｈａｎｇ、 Ｋ、 Ｊ、 ａｔ ｍｌ
、、 ５ｅｌｅｎｃｓ２１２、 ７５ （１９８１）
：同 Ｌｉｆ＠ Ｓｅ１＊ｎｃ＊＊、 ３０ １５４
７（１９８２）） 、また、ジオドロウ（Ｚｌｏｕｄｒ
ｏｕ）らは、牛乳α−カゼインのペグシン分解物中にオ
ピオイド活性を有するものの存在を認めた。これはα−
カゼイ／エクン／Ｌ／フィンと呼ばれる。（Ｊ、 Ｂｌ
ｏｌ。
）らはモルモット回腸縦走筋神経叢収縮抑制試験にょシ
、乳製品を検索したところ、牛乳カゼインペグトンから
オピオイド活性のあるβ−カシモルフイン７（ヘグタペ
プテド）を単離した（ＨＯＰＰ＠ −８＠ｙｌ＠ｒ ａ
、、 Ｚ、 Ｐｈｙｓｉｏｌ、 Ｃｈ＠ｎｎ、、 ３６
０．１２１１及び１２１７（１９７９）参照）。その後
、このβ−カシモルフイン７（ヘグタペプチド）の構造
を基に研究され、β−カ！モルフイン６、β−カシモル
フイン５及びβ−カシモルフイン４アミド（β−カシモ
ルフイン７の約１００倍の活性を有する。）が合成され
るに至った（ Ｃｈａｎｇ、 Ｋ、 Ｊ、 ａｔ ｍｌ
、、 ５ｅｌｅｎｃｓ２１２、 ７５ （１９８１）
：同 Ｌｉｆ＠ Ｓｅ１＊ｎｃ＊＊、 ３０ １５４
７（１９８２）） 、また、ジオドロウ（Ｚｌｏｕｄｒ
ｏｕ）らは、牛乳α−カゼインのペグシン分解物中にオ
ピオイド活性を有するものの存在を認めた。これはα−
カゼイ／エクン／Ｌ／フィンと呼ばれる。（Ｊ、 Ｂｌ
ｏｌ。
Ｃｈ＠ｔｎ、、２５４ ．２４４６（１９７９））。
人乳カゼインからも同様のペプチドが生成すれば、これ
を摂取することがヒト、特に乳児にとって望ましいこと
であろう。
を摂取することがヒト、特に乳児にとって望ましいこと
であろう。
又、他の食品タンｚ４り質１例えば小麦グルテン、大豆
タンパク中にも外在性のオピオイド活性を示すペプチド
が存在する可能性のあることが示されている。
タンパク中にも外在性のオピオイド活性を示すペプチド
が存在する可能性のあることが示されている。
本発明者らは、人乳タンノ９り質、牛乳タンパク質、大
豆タンノ母り質中に存在するチロシン残基を含むフラグ
メントペプチドを分離又は合成的に得、オピオイド活性
のスクリーニングを行なりたところ、新規な活性ペプチ
ドを発見し、本発明を完成するに至りた。
豆タンノ母り質中に存在するチロシン残基を含むフラグ
メントペプチドを分離又は合成的に得、オピオイド活性
のスクリーニングを行なりたところ、新規な活性ペプチ
ドを発見し、本発明を完成するに至りた。
鎮痛剤、催眠剤、覚惺剤、抗麻酔剤または抗シ冒ツク剤
等の医薬として使用可能な新規ペプチドの開発およびそ
の製造が期待されている。
等の医薬として使用可能な新規ペプチドの開発およびそ
の製造が期待されている。
問題点を解決するための手段
本発明者らは、一般式Ｒ，−Ｔｙｒ−Ｘ、−Ｘ２−Ｘ、
−Ｒ２で示されるペプチド、及びその誘導体を新規に製
造することに成功し、かつこれら新規ペプチドがオピオ
イド活性を有し、前記医薬への使用が期待できることを
見出し、この発見に基づいて本発明を完成するに至った
。
−Ｒ２で示されるペプチド、及びその誘導体を新規に製
造することに成功し、かつこれら新規ペプチドがオピオ
イド活性を有し、前記医薬への使用が期待できることを
見出し、この発見に基づいて本発明を完成するに至った
。
式中、ＲはＨｐ ＡｒｇおよびＳｉｒ −＊ｒｇ−のい
ずれかを、Ｘ、はＰｒｏ 、 Ｇｌｙ 、 Ｌｅｕおよ
びＶａｔのいずれかを、Ｘ２はＳ壺ｒ 、 Ｐｈ＠およ
びＬｅｕのいずれかを。
ずれかを、Ｘ、はＰｒｏ 、 Ｇｌｙ 、 Ｌｅｕおよ
びＶａｔのいずれかを、Ｘ２はＳ壺ｒ 、 Ｐｈ＠およ
びＬｅｕのいずれかを。
Ｘ３はＴｙｒ 、 Ｌ・Ｕおよびｐｈ・のいずれかを、
Ｒ２はＧｌｙ 、 Ｐｒｏ 、 Ｇｉｎ 、 Ｌｙｓ
、 ＯＨｋよびＮＨ２のいずれかを、それぞれ表わす。
Ｒ２はＧｌｙ 、 Ｐｒｏ 、 Ｇｉｎ 、 Ｌｙｓ
、 ＯＨｋよびＮＨ２のいずれかを、それぞれ表わす。
本発明の新規ペプチドは、例えばタンパク質の酵素分解
物よシレセグターアッセイ法による活性試験によりラッ
ト脳オピオイドレセグターに結合性を有するペプチドを
後述されるような液体クロマトグラフィー操作で抽出分
離すればよい。あるいは、これらに基づき、従来慣用さ
れるペプチド合成法を利用し構成アミノ酸を順次結合さ
せて化学合成することもできる。
物よシレセグターアッセイ法による活性試験によりラッ
ト脳オピオイドレセグターに結合性を有するペプチドを
後述されるような液体クロマトグラフィー操作で抽出分
離すればよい。あるいは、これらに基づき、従来慣用さ
れるペプチド合成法を利用し構成アミノ酸を順次結合さ
せて化学合成することもできる。
本発明の新規ペプチドは、Ｎ末端％Ｃ末端および側鎖官
能基はペプチド合成に一般に使用されている保護基で保
護されていてもよい、また、構成するアミノ酸はＬ一体
、Ｄ一体のいずれであってもよい。
能基はペプチド合成に一般に使用されている保護基で保
護されていてもよい、また、構成するアミノ酸はＬ一体
、Ｄ一体のいずれであってもよい。
本発明の新規ペプチドは後述の実施例に基づき、さらに
慣用のペプチド合成法を利用して（例えば東屋ら著、合
成化学シリーズ「ペプチド合成」丸善■発行、昭和５０
年参照。）製造することができる。保護基による保護方
法あるいはその脱離方法についても同様である。
慣用のペプチド合成法を利用して（例えば東屋ら著、合
成化学シリーズ「ペプチド合成」丸善■発行、昭和５０
年参照。）製造することができる。保護基による保護方
法あるいはその脱離方法についても同様である。
本発明の新規ペプチドのうちアミド誘導体は慣用法、例
えばＣ末端となるアミノ酸の代わりにそのアミドを使用
して同様にペプチド合成を行う方法するいは対応するペ
プチドエステルをアンモニアで処理してアミド化する方
法によって製造することができる。
えばＣ末端となるアミノ酸の代わりにそのアミドを使用
して同様にペプチド合成を行う方法するいは対応するペ
プチドエステルをアンモニアで処理してアミド化する方
法によって製造することができる。
本発明の新規ペプチドを有効成分として鎮痛剤催眠剤あ
るいは覚惺剤、抗麻酔剤、抗シ冒ツク剤として使用する
ときには、遊離形または製薬上容認される無毒性の塩お
よび酸付加塩とすることができる。
るいは覚惺剤、抗麻酔剤、抗シ冒ツク剤として使用する
ときには、遊離形または製薬上容認される無毒性の塩お
よび酸付加塩とすることができる。
本発明において、製薬上容認しうる無毒性塩には、一般
に使用されている有機および無機の酸付加塩、例えば塩
酸、硫酸、スルホン酸、クエン酸、リン酸、安息香酸に
よる付加塩を採用すればよい。
に使用されている有機および無機の酸付加塩、例えば塩
酸、硫酸、スルホン酸、クエン酸、リン酸、安息香酸に
よる付加塩を採用すればよい。
また、一方、 Ｎａ 、 Ｋなどのアルカリ金属塩やア
ンモニウム塩が含まれる。
ンモニウム塩が含まれる。
本発明の新規ペプチドはヒトを包含する哺乳動物に対す
る鎮痛剤あるいは催眠剤として有効であシ、例えば胆石
筋痛、腎石仙痛、癌などの痛み、術後期における痛みな
ど種々の苦痛の除去のみならず、その惰眠作用によシ偏
眠薬などとしても有効である。一方、オビエートアンタ
ゴニストハ麻酔解除や各種のシ１ツク症状の改醤に使用
される薬剤として有効である。
る鎮痛剤あるいは催眠剤として有効であシ、例えば胆石
筋痛、腎石仙痛、癌などの痛み、術後期における痛みな
ど種々の苦痛の除去のみならず、その惰眠作用によシ偏
眠薬などとしても有効である。一方、オビエートアンタ
ゴニストハ麻酔解除や各種のシ１ツク症状の改醤に使用
される薬剤として有効である。
投与に際しては、
参寿寺寺寺経口投与として錠剤、カプセル剤またはエリ
キシル剤のような調剤でまたは非経口投与として無菌浴
剤液または懸濁液剤で処方することもできる。
キシル剤のような調剤でまたは非経口投与として無菌浴
剤液または懸濁液剤で処方することもできる。
また、生理学的に認められるベヒクル、担体、賦形剤、
結合剤、防腐剤、安定剤、香味剤などとともに一般に認
められた製剤実施に要求される単位用形態で混和、投与
することももちろんできる。
結合剤、防腐剤、安定剤、香味剤などとともに一般に認
められた製剤実施に要求される単位用形態で混和、投与
することももちろんできる。
これらの組成物または製造における活性物質の使用量は
指示された範囲の適当な用量が得られるようにするもの
である。
指示された範囲の適当な用量が得られるようにするもの
である。
有効成分の投与量は患者の病気の重さ、体重および年令
あるいはその他の要因を考慮して決められる。
あるいはその他の要因を考慮して決められる。
本明細書における略号は次の如くである。
Ｔｙｒ ：チロシン、Ｐｒｏ ニブロリン、Ｐｈｅ ：
７ エニルアラニン、 Ｖａｌ ：バリン、 Ｓ＠ｒ
：セリン、Ａｒｇ ：アルギニン、Ｇｕｙ ニゲリシ
ン、Ｂｏａ：ｔ−プチルオキシカルゴニル、 ＢＪ！１
：ベンジル、０Ｂｚｌ：ヘンシルオキシ、ＣｌメーＢ
メ１ ： ２．６−ジクロルベンジン、 ＴＦＡ ：
）リフルオロ酢酸、 ＯＤＳ ：オクタデシルシラン、
ＨＥＰＥＳ： Ｎ −２−ヒドロキシエチルビヘラシ
ン−Ｎ′−２−エタンスルフォン酸、ＨＯＢｔ：ｌ−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾール、Ｔｏｓ：）シル、ＤＣＣ
Ｄニジシクロへキシルカルデジイミド。
７ エニルアラニン、 Ｖａｌ ：バリン、 Ｓ＠ｒ
：セリン、Ａｒｇ ：アルギニン、Ｇｕｙ ニゲリシ
ン、Ｂｏａ：ｔ−プチルオキシカルゴニル、 ＢＪ！１
：ベンジル、０Ｂｚｌ：ヘンシルオキシ、ＣｌメーＢ
メ１ ： ２．６−ジクロルベンジン、 ＴＦＡ ：
）リフルオロ酢酸、 ＯＤＳ ：オクタデシルシラン、
ＨＥＰＥＳ： Ｎ −２−ヒドロキシエチルビヘラシ
ン−Ｎ′−２−エタンスルフォン酸、ＨＯＢｔ：ｌ−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾール、Ｔｏｓ：）シル、ＤＣＣ
Ｄニジシクロへキシルカルデジイミド。
実施例
以下、実施例によシ本発明の詳細な説明する。
実施例Ｉ Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８＠ｒ −Ｐｈｅ−ＮＨ
２の合成これはヒトβ−カゼインの４１番目から４４番
目の配列に相当するペプチドのアミド化物である。
２の合成これはヒトβ−カゼインの４１番目から４４番
目の配列に相当するペプチドのアミド化物である。
ジメチルフォルムアミドで洗浄し九５Ｉのベンズヒドリ
ルアミン樹脂（０，８９ｍｍｏｌｅ／、Ｆ ）に、樹脂
の７ミノ基の３当景に相当するＢｅｅ−Ｐｈｅ 、 Ｈ
ＯＢｔ。
ルアミン樹脂（０，８９ｍｍｏｌｅ／、Ｆ ）に、樹脂
の７ミノ基の３当景に相当するＢｅｅ−Ｐｈｅ 、 Ｈ
ＯＢｔ。
ＤＣＣＤを少量のジメチルアミドにそれぞれ溶解後、こ
の屓序で添加し、室温にて一夜反応せしめた。
の屓序で添加し、室温にて一夜反応せしめた。
反応後樹脂をジメチルホルムアミド、塩化メチレン、エ
タノールおよびメタノールにて各々３回洗浄した。樹脂
に含まれる未反応の７ミノ基は樹脂を５９ｍＪの１０％
無水酢酸を含むぎりジン中にて５分間の振盪を２回行う
ことによりてアセチル化し、反応後樹脂を５０−のエタ
ノールおよび５０Ｍのメタノールによって各々２回洗浄
しＢｏａ−Ｐｈ＠ベンズヒドリルアミン樹脂を得た。２
．３ｇのＢｏａ−Ｐｈｅ−ベンズヒドリルアミン樹脂（
２ｇのベンズヒドリルアミン樹脂に相当）を塩化メチレ
ンにて４回洗浄後、５５％ＴＦＡ、１０％アニソールを
含む塩化メチレン中にて２分間、および３０分間の振盪
を行うことによって脱Ｂｏｅ化を行った。樹脂Ｈ塩化’
チレン、３３チジオキサンを含む塩化メチレン、および
塩化メチレンにて各々３回洗浄を行った後、１０％トリ
エチルアミンを含む塩化メチレン中にて５分間振盪、中
和し、塩化メチレンにて３回の洗浄を行いＰｈｅ−ベン
ズヒドリルアミン樹脂とした。この樹脂をジメチルフォ
ルムアミドにて３回洗浄した後、少量のジメチルフォル
ムアミドに溶解した３当量のＢｏａ −Ｓ＠ｒ（Ｂｚｔ
）、ＨＯＢｔ。
タノールおよびメタノールにて各々３回洗浄した。樹脂
に含まれる未反応の７ミノ基は樹脂を５９ｍＪの１０％
無水酢酸を含むぎりジン中にて５分間の振盪を２回行う
ことによりてアセチル化し、反応後樹脂を５０−のエタ
ノールおよび５０Ｍのメタノールによって各々２回洗浄
しＢｏａ−Ｐｈ＠ベンズヒドリルアミン樹脂を得た。２
．３ｇのＢｏａ−Ｐｈｅ−ベンズヒドリルアミン樹脂（
２ｇのベンズヒドリルアミン樹脂に相当）を塩化メチレ
ンにて４回洗浄後、５５％ＴＦＡ、１０％アニソールを
含む塩化メチレン中にて２分間、および３０分間の振盪
を行うことによって脱Ｂｏｅ化を行った。樹脂Ｈ塩化’
チレン、３３チジオキサンを含む塩化メチレン、および
塩化メチレンにて各々３回洗浄を行った後、１０％トリ
エチルアミンを含む塩化メチレン中にて５分間振盪、中
和し、塩化メチレンにて３回の洗浄を行いＰｈｅ−ベン
ズヒドリルアミン樹脂とした。この樹脂をジメチルフォ
ルムアミドにて３回洗浄した後、少量のジメチルフォル
ムアミドに溶解した３当量のＢｏａ −Ｓ＠ｒ（Ｂｚｔ
）、ＨＯＢｔ。
ＤＣＣＤをこの順序で添加し、室温にて５時間振盪、カ
ッブリング反応を行った。反応後樹脂はジメチルフォル
ムアミド、塩化メチレン、エタノール、メタノールにて
各々３回洗浄し、Ｂｏａ −５ｅｒ（Ｂｚｔ）−Ｐｈｅ
−ベンズヒドリルアミン樹脂を得り。ニンヒドリン反応
にて未反応のアミン基がないことを確認した後、同様に
Ｂｏａ −ＰｒｏおよびＢｏＣ−Ｔｙｒ（Ｃ４２−Ｂｚ
ｔ）をこの順序でカッグルさせ、Ｂｏａ −Ｔｙｒ （
Ｃ２２−ＢｚＡ ） −Ｐｒｏ −５ａｒ（Ｂｚｔ）
−Ｐｈｅ−ベンズヒドリルアミン樹脂を得た。
ッブリング反応を行った。反応後樹脂はジメチルフォル
ムアミド、塩化メチレン、エタノール、メタノールにて
各々３回洗浄し、Ｂｏａ −５ｅｒ（Ｂｚｔ）−Ｐｈｅ
−ベンズヒドリルアミン樹脂を得り。ニンヒドリン反応
にて未反応のアミン基がないことを確認した後、同様に
Ｂｏａ −ＰｒｏおよびＢｏＣ−Ｔｙｒ（Ｃ４２−Ｂｚ
ｔ）をこの順序でカッグルさせ、Ｂｏａ −Ｔｙｒ （
Ｃ２２−ＢｚＡ ） −Ｐｒｏ −５ａｒ（Ｂｚｔ）
−Ｐｈｅ−ベンズヒドリルアミン樹脂を得た。
このようにして得たテトラペプチドアミド樹脂の半量を
分取し１−のアニソールを加えた後、２５ｄのフッ北本
素中、０℃にて１時間の攪拌を行いペプチドの樹脂から
の脱離と保護基の除去を行った。７ツ化水素を除去した
後、ペプチドおよび樹脂をエーテルにて洗浄し、５ｄの
ＴＦＡにてペプチドの抽出を行った。この抽出液に５９
ｍ／のエーテルを加えることによプペプチドを沈殿せし
め遠心にて回収、５ｄの水に溶解し、アンモニア水にて
−を８．０に調整し六後、室温にて１時間攪拌すること
によル、セリン残基で生じた可能性のあるＮ→０アシル
転位をペプチド結合に回復せしめた。
分取し１−のアニソールを加えた後、２５ｄのフッ北本
素中、０℃にて１時間の攪拌を行いペプチドの樹脂から
の脱離と保護基の除去を行った。７ツ化水素を除去した
後、ペプチドおよび樹脂をエーテルにて洗浄し、５ｄの
ＴＦＡにてペプチドの抽出を行った。この抽出液に５９
ｍ／のエーテルを加えることによプペプチドを沈殿せし
め遠心にて回収、５ｄの水に溶解し、アンモニア水にて
−を８．０に調整し六後、室温にて１時間攪拌すること
によル、セリン残基で生じた可能性のあるＮ→０アシル
転位をペプチド結合に回復せしめた。
このようにして得た粗テトラペグチトアミドをＯＤＳカ
ラＡ （’Ｃｏｓｍｏ＠ｉｌ ５Ｃ，６，、Ｉ Ｘ ２
５ ｃｍ 、牛丼化学製）による逆相液体クロマトグラ
フィーによりて精製を行い２８０ｎｍに吸収を持つＴｙ
ｒ −Ｐｒｏ −８＊ｒ −Ｐｈｅ −ＮＨ２（試料１
．収量１１０１９）を得九。
ラＡ （’Ｃｏｓｍｏ＠ｉｌ ５Ｃ，６，、Ｉ Ｘ ２
５ ｃｍ 、牛丼化学製）による逆相液体クロマトグラ
フィーによりて精製を行い２８０ｎｍに吸収を持つＴｙ
ｒ −Ｐｒｏ −８＊ｒ −Ｐｈｅ −ＮＨ２（試料１
．収量１１０１９）を得九。
分析値
アミノ酸組成（６Ｎ−ＨＣＬ、 １１０℃、２４時間加
水分解）：Ｔｙｒ Ｏ，９５，Ｐｒｏ １．０．
Ｓｅｒ Ｏ，９４，Ｐｈｅ ０．９８゜ＮＨ，０
，８９゜ ＯＤ８カラム（ｒ Ｃｏｓｍｏ＊ｉｌ 、Ｃ１Ｂ Ｊ
、 ０．４６Ｘ１５ｍ半井化学社製）からの溶出条件： ０、１％ＴＦＡを含むアセトニトリルリニアグラジェン
ト（０〜４０％／ ４０ ｒｎｌ ／ ４０ ｍｉｎ
）にて２７％アセトニトリルで溶出した。
水分解）：Ｔｙｒ Ｏ，９５，Ｐｒｏ １．０．
Ｓｅｒ Ｏ，９４，Ｐｈｅ ０．９８゜ＮＨ，０
，８９゜ ＯＤ８カラム（ｒ Ｃｏｓｍｏ＊ｉｌ 、Ｃ１Ｂ Ｊ
、 ０．４６Ｘ１５ｍ半井化学社製）からの溶出条件： ０、１％ＴＦＡを含むアセトニトリルリニアグラジェン
ト（０〜４０％／ ４０ ｒｎｌ ／ ４０ ｍｉｎ
）にて２７％アセトニトリルで溶出した。
実施例２ Ｔｙｒ −Ｇｔｙ −Ｐｈｅ −Ｌｅｕ
−Ｐｒｏの合成これはヒトβ−カゼインの５９番目から
６３番目の配列に相当するペプチドである。
−Ｐｒｏの合成これはヒトβ−カゼインの５９番目から
６３番目の配列に相当するペプチドである。
２ｙのＢｏａ −Ｇｔｙに１２ゴのエタノール、４ゴの
水を加えて溶解した後、重炭酸セシウム水溶液で中和、
乾固しセシウム塩を得た。これに当量のＣｔを含む８．
９９のクロロメチル樹脂（１，２８ｍｍｏｔｅｃｔ７ｇ
）と６９ｍ１のジメチルフォルムアミドを加え、５０℃
にて一夜攪拌の後、樹脂をジメチル７オルムアミド、９
０％−／メチルフォルムアミド。
水を加えて溶解した後、重炭酸セシウム水溶液で中和、
乾固しセシウム塩を得た。これに当量のＣｔを含む８．
９９のクロロメチル樹脂（１，２８ｍｍｏｔｅｃｔ７ｇ
）と６９ｍ１のジメチルフォルムアミドを加え、５０℃
にて一夜攪拌の後、樹脂をジメチル７オルムアミド、９
０％−／メチルフォルムアミド。
３００ＷＡ’のりメチルフォルムアミド、エタノールに
て順序洗浄し、Ｂｏｃ −ＧＡｙ樹脂（０，６０ｍｍｏ
ｔｅ／、！ｉ’）を得た。この樹脂に実施例１と同様の
方法に従って順次ＢｏＣ−Ｌｅｕ 、 Ｂｏａ −Ｐｈ
ｅ 、 Ｂｏｏ −Ｇｔｙ 。
て順序洗浄し、Ｂｏｃ −ＧＡｙ樹脂（０，６０ｍｍｏ
ｔｅ／、！ｉ’）を得た。この樹脂に実施例１と同様の
方法に従って順次ＢｏＣ−Ｌｅｕ 、 Ｂｏａ −Ｐｈ
ｅ 、 Ｂｏｏ −Ｇｔｙ 。
Ｂｏａ −Ｔｙｒ（Ｃｔ２−ＢｚＡ）をカップルさせ該
当するペンタペプチド樹脂を得た。このペプチド樹脂に
ついて実施例１と同様に脱保護し、精製を行いＴｙｒ−
Ｇｔｙ −Ｐｈｅ −Ｌ＠ｕ −Ｐｒｏ （試料２．収
量１２０〜／ｇ樹脂）を得た。
当するペンタペプチド樹脂を得た。このペプチド樹脂に
ついて実施例１と同様に脱保護し、精製を行いＴｙｒ−
Ｇｔｙ −Ｐｈｅ −Ｌ＠ｕ −Ｐｒｏ （試料２．収
量１２０〜／ｇ樹脂）を得た。
分析値（加水分解および溶出条件は実施例１と同一）
アミノ酸組成：
Ｔｙｒ Ｏ，９５ｐ ｃｚ７０．９９ 、 Ｐｈｅ
Ｏ，９８、Ｌｅｕ Ｏ，９６゜Ｐｒｏ １．０ ０Ｄ８カラムからの溶出位置：３５％アセトントリル実
施例３ Ｔｙｒ −ＧＬｙ −Ｌ＠ｕ −Ｐｈｅ−Ｎ
Ｈ２の合成これはヒトあるいはウシのα−ラクトアルブ
ミンの５０番目から５３番目に相当するペプチドのアミ
ド化物である。
Ｏ，９８、Ｌｅｕ Ｏ，９６゜Ｐｒｏ １．０ ０Ｄ８カラムからの溶出位置：３５％アセトントリル実
施例３ Ｔｙｒ −ＧＬｙ −Ｌ＠ｕ −Ｐｈｅ−Ｎ
Ｈ２の合成これはヒトあるいはウシのα−ラクトアルブ
ミンの５０番目から５３番目に相当するペプチドのアミ
ド化物である。
実施例１の場合同様に、Ｂｏｏ −Ｐｈ・−ベンズヒド
リルアミン樹脂にＢｏａ −Ｌｅｕ 、 Ｂｏａ −Ｇ
ＬｙおよびＢｏａ −Ｔｙｒ（ＣＡ２−ＢｚＡ）をこの
順序でカップルさせ、該当するテトラベグチドアミド樹
脂を得た。さらに実施例１の場合同様にフッ北本素によ
る脱保護、逆相液体クロットグラフィーによる精製を行
いＴｙｒ −ＧＬｙ −Ｌｅｕ −Ｐｈｅ −ＮＨ３（
試料３．収量１２５ダ）を得た。
リルアミン樹脂にＢｏａ −Ｌｅｕ 、 Ｂｏａ −Ｇ
ＬｙおよびＢｏａ −Ｔｙｒ（ＣＡ２−ＢｚＡ）をこの
順序でカップルさせ、該当するテトラベグチドアミド樹
脂を得た。さらに実施例１の場合同様にフッ北本素によ
る脱保護、逆相液体クロットグラフィーによる精製を行
いＴｙｒ −ＧＬｙ −Ｌｅｕ −Ｐｈｅ −ＮＨ３（
試料３．収量１２５ダ）を得た。
分析値 （実施例１と同一条件）
アミノ酸組成：
Ｔｙｒ Ｏ，９６、ＧＬｙ １．０３ 、 Ｌｅｕ
Ｏ，９８＊ Ｐｈａ １．０゜皿、０．９４ ０ＤＳカラムからの溶出位置：３３．５俤アセトｔトリ
ル実施例４ Ｔｙｒ −Ｌｓｕ −Ｐｈａ −ＮＨ２
の合成これはウシのβ−ラクトグロブリンの１０２番目
から１０５番目の配列に相当するペプチドのアミド化物
である。
Ｏ，９８＊ Ｐｈａ １．０゜皿、０．９４ ０ＤＳカラムからの溶出位置：３３．５俤アセトｔトリ
ル実施例４ Ｔｙｒ −Ｌｓｕ −Ｐｈａ −ＮＨ２
の合成これはウシのβ−ラクトグロブリンの１０２番目
から１０５番目の配列に相当するペプチドのアミド化物
である。
実施例１の場合同様に、 Ｂｏｅ −Ｐｈ＠−ベンズヒ
ドリルアミン樹脂にＢｏａ −Ｌ＠ｕ 、 Ｂｏａ −
Ｌ＠ｕ ｐＢｏｏ −Ｔｙｒ（ＣＡ２−Ｂｚｔ）をこの
順序でカップルさせ。
ドリルアミン樹脂にＢｏａ −Ｌ＠ｕ 、 Ｂｏａ −
Ｌ＠ｕ ｐＢｏｏ −Ｔｙｒ（ＣＡ２−Ｂｚｔ）をこの
順序でカップルさせ。
該当するテトラペプチドアミド樹脂を得た。さらに実施
例１の場合同様に７フ化水素による脱保護、逆相液体ク
ロマトグラフィーによる精製を行いＴｙｒ −Ｌｅｕ
−Ｌ＠ｕ −Ｐｈ＠−ＮＨ３（試料４．収量１３０１１
９）を得比。
例１の場合同様に７フ化水素による脱保護、逆相液体ク
ロマトグラフィーによる精製を行いＴｙｒ −Ｌｅｕ
−Ｌ＠ｕ −Ｐｈ＠−ＮＨ３（試料４．収量１３０１１
９）を得比。
分析値 （実施例１と同一条件）
アミノ酸組成： Ｔｙｒ Ｏ，９７、Ｌ＠ｕ ２．０
、 Ｐｈｅ １．０１゜ＮＨ３０，９２ ０ＤＳカラムの溶出位置＝３５％アセトニトリル実施例
５ Ｔｙｒ −Ｖａｔ−Ｓｅｒ −Ｐｈｅ −ＮＨ２の
合成これは大豆グリシニンＢＩＩＬサブユニット１２１
番目から１２４番目の配列に相当するペプチドのアミド
化物である。
、 Ｐｈｅ １．０１゜ＮＨ３０，９２ ０ＤＳカラムの溶出位置＝３５％アセトニトリル実施例
５ Ｔｙｒ −Ｖａｔ−Ｓｅｒ −Ｐｈｅ −ＮＨ２の
合成これは大豆グリシニンＢＩＩＬサブユニット１２１
番目から１２４番目の配列に相当するペプチドのアミド
化物である。
実施例１の場合同様に、Ｂｏｅ −Ｐｈｅ−ベンズヒド
リルアミン樹脂にＢｅｅ −Ｓｅｒ（Ｂｚｔ） 、 Ｈ
ｏｅ −Ｖａｔ。
リルアミン樹脂にＢｅｅ −Ｓｅｒ（Ｂｚｔ） 、 Ｈ
ｏｅ −Ｖａｔ。
Ｂｏａ−Ｔｙｒ（ＣＡ２−ＢｚＡ）をこの順序でカップ
ルサセ、該当するテトラペプチドアミド樹脂を得な。て
らに実施例１の場合同様にフッ北本素による脱保護、逆
相液体クロマトグラフィーによる精製を行いＴｙｒ −
Ｖａｔ−Ｓｅｒ −Ｐｈａ −ＮＨ２（試料５．収量１
０７■）を得た。
ルサセ、該当するテトラペプチドアミド樹脂を得な。て
らに実施例１の場合同様にフッ北本素による脱保護、逆
相液体クロマトグラフィーによる精製を行いＴｙｒ −
Ｖａｔ−Ｓｅｒ −Ｐｈａ −ＮＨ２（試料５．収量１
０７■）を得た。
分析値 （実施例１と同一条件）
アミノ酸組成：
Ｔｙｒ Ｏ，９４、Ｖａｔ Ｏ，９６、Ｓｅｒ Ｏ，９
５ｐ Ｐｈ＠１．０゜ＮＨ３０，９２ ００Ｓカラムからの溶出位置：３４．５＊アセトニトリ
ル実施例６ Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ａ
ｒ−Ｔｙｒの単離 これはウシに一カゼインの３３番目から３８番目の配列
に相当するペプチドである。
５ｐ Ｐｈ＠１．０゜ＮＨ３０，９２ ００Ｓカラムからの溶出位置：３４．５＊アセトニトリ
ル実施例６ Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ａ
ｒ−Ｔｙｒの単離 これはウシに一カゼインの３３番目から３８番目の配列
に相当するペプチドである。
１％のウシに一カゼイン水溶液を塩酸にてｐ）１１．４
に調整しブタ（プシン（Ｓｉｇｍａ社製）を０．２ Ｗ
／ｍｌとなるよう添加し、３７℃５時間の反応を行った
。
に調整しブタ（プシン（Ｓｉｇｍａ社製）を０．２ Ｗ
／ｍｌとなるよう添加し、３７℃５時間の反応を行った
。
反応液を凍結乾燥後クロロフォルム−メタノール混液（
６５：３５．マ／ｖ ）にて抽出、乾固しさらにＫＯＨ
にて中和抜水に可溶の画分を粗抽出物として得た。粗抽
出物をＯＤＳカラムによる逆相液体クロマトグラフィー
によって分画しラジオレセグターアツセイによジオビオ
イド活性の測定を行っりＯｏ、 ５ ％ ＴＦＡを含む
アセトニトリルのリニアグラジェント（０〜４０ ％／
１６０ｍｌ／ ４０ ｍｉｎ ）において２６％アセ
トニトリルにて溶出する画分にオピオイド活性が認めら
れた。この画分を集め乾固の後シアノプロビルシラン力
ラム（ｒ ＣｏｓｍｏｓｉｌｓＣＮ Ｊ ｅ Ｏ−４６
Ｘ １５ｏｎ半井牛丼社製）にかけ同様のアセトニトリ
ルのグラジェント（０〜３０％／３０ｍＪ／３０ｍ１ｎ
）にて展開したところ１５％にて溶出する画分にオピオ
イド活性が認められた。本物質は２８０ ｎｍに吸収を
持つ単一物質でありた。収量は３、２１１９／Ｉ ｇ
−ｅａｓｅ ｉｎであ）粗抽出液の約７倍の比活性を有
していた。
６５：３５．マ／ｖ ）にて抽出、乾固しさらにＫＯＨ
にて中和抜水に可溶の画分を粗抽出物として得た。粗抽
出物をＯＤＳカラムによる逆相液体クロマトグラフィー
によって分画しラジオレセグターアツセイによジオビオ
イド活性の測定を行っりＯｏ、 ５ ％ ＴＦＡを含む
アセトニトリルのリニアグラジェント（０〜４０ ％／
１６０ｍｌ／ ４０ ｍｉｎ ）において２６％アセ
トニトリルにて溶出する画分にオピオイド活性が認めら
れた。この画分を集め乾固の後シアノプロビルシラン力
ラム（ｒ ＣｏｓｍｏｓｉｌｓＣＮ Ｊ ｅ Ｏ−４６
Ｘ １５ｏｎ半井牛丼社製）にかけ同様のアセトニトリ
ルのグラジェント（０〜３０％／３０ｍＪ／３０ｍ１ｎ
）にて展開したところ１５％にて溶出する画分にオピオ
イド活性が認められた。本物質は２８０ ｎｍに吸収を
持つ単一物質でありた。収量は３、２１１９／Ｉ ｇ
−ｅａｓｅ ｉｎであ）粗抽出液の約７倍の比活性を有
していた。
本物質のアミノ酸組成はＴｒｙ １．９ 、 Ｐｒｏ
１．Ｏｅ８＠ｒ １．９４ 、 Ａｒｇ Ｏ，９９てあ
り、アプライドバイオシステムズ社製ガスフェーズプロ
テインシーケンサ−４７ＯＡによる解析からＳｅｒ−Ａ
ｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒという構造を持
ったウシに一カゼインの３３番目から３８番目の配列に
由来するペプチドであることが判明した。
１．Ｏｅ８＠ｒ １．９４ 、 Ａｒｇ Ｏ，９９てあ
り、アプライドバイオシステムズ社製ガスフェーズプロ
テインシーケンサ−４７ＯＡによる解析からＳｅｒ−Ａ
ｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒという構造を持
ったウシに一カゼインの３３番目から３８番目の配列に
由来するペプチドであることが判明した。
実施例７ Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｓｒ−Ｔｙｒ＋Ａｒｇ
−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−ＴｙｒおよびＳ＠ｒ−Ａｒ
ｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｏｒ−Ｔｙｒの合成 これらはそれぞれウシに一カゼインの３５〜３８番目、
３４〜３８番目および３３〜３８番目の配列に相当する
ペプチドであシ、このうちへキサペプチドは実施例６で
単離されたペプチドと同一物質である。
−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−ＴｙｒおよびＳ＠ｒ−Ａｒ
ｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｏｒ−Ｔｙｒの合成 これらはそれぞれウシに一カゼインの３５〜３８番目、
３４〜３８番目および３３〜３８番目の配列に相当する
ペプチドであシ、このうちへキサペプチドは実施例６で
単離されたペプチドと同一物質である。
実施例２と同様の方法によりてＢｏａ−Ｔｙｒ（ＣＡ２
−Ｂｚｊ）樹脂（０，５５ｍｍｏｔ＊ ７ｇ）を得た。
−Ｂｚｊ）樹脂（０，５５ｍｍｏｔ＊ ７ｇ）を得た。
との樹脂に実施例１と同様の方法によって順次Ｂｏａ−
８ｅｒ（Ｂｚｔ） 。
８ｅｒ（Ｂｚｔ） 。
Ｂｏａ−Ｐｒｏ ＊ Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃ４２−Ｂｚｔ
）をカップルさせ該当するテトラペプチド樹脂を得た。
）をカップルさせ該当するテトラペプチド樹脂を得た。
この樹脂の２／３を分取し、さらに同様の方法でＢｏａ
−Ａｒｇ（Ｔａｇ）をカップルさせ該当するペンタペプ
チド樹脂を得た。
−Ａｒｇ（Ｔａｇ）をカップルさせ該当するペンタペプ
チド樹脂を得た。
きらにこの樹脂の１７２を分取し、Ｂｏｃ−８ｅｒ（Ｂ
ｚｔ）をカッグルさせ該当するヘキサペプチド樹脂を得
た。
ｚｔ）をカッグルさせ該当するヘキサペプチド樹脂を得
た。
これら三種類のペプチド樹脂について、実施例１と同様
のフッ化水素処理による脱保護、逆相液体クロマトグラ
フィーによる精製を行いＴｙｒ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｐｒ
ｏ（試料７−１、収量９５ ＩＱ ） 、Ａｒｇ−Ｔｙ
ｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒ（試料７−２、収量１１０
１９ ） ｓ Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔ）ｒｒ−Ｐｒ。
のフッ化水素処理による脱保護、逆相液体クロマトグラ
フィーによる精製を行いＴｙｒ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｐｒ
ｏ（試料７−１、収量９５ ＩＱ ） 、Ａｒｇ−Ｔｙ
ｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒ（試料７−２、収量１１０
１９ ） ｓ Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔ）ｒｒ−Ｐｒ。
−８Ｌ１１ｒ−Ｔｙｒ （試料７−３、収量ＸａＺ＊）
を得た。
を得た。
分析値（実施例１と同一条件）
アミノ酸組成：
試料７−１ ＋ Ｔｙｒ １．９５＋ Ｐｒｏ １．０
ｒ Ｓ＠ｒ Ｏ，９７試料７−２ ｒ Ｔｙｒｌ、９
３．Ｐｒｏｌ、Ｏ＋５ｅｒ０．９５ ｒ Ａ、ｒｇｏ、
９９試料７−３ ＊ Ｔｙｒｌ、９０＋Ｐｒｏ１．０
＊ ５ｅｒ１．９４ 、Ａｒｇ １．００ＤＳカラムか
らの溶出位置： 試料７−１．２１％アセトニトリル 試料７−２．’２３％アセトニトリル 試料７−３．２６チアセトニトリル 実施例８ Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８＠ｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２
＋ Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８＠ｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２
および８＠ｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８＠ｒ−Ｔｙ
ｒ−ＮＨ２の合成 これらはそれぞれクシに一カゼインの３５〜３８番目、
３４〜３８番目および３３〜３８番目の配列に相当する
ペプチドのアミド化物である。
ｒ Ｓ＠ｒ Ｏ，９７試料７−２ ｒ Ｔｙｒｌ、９
３．Ｐｒｏｌ、Ｏ＋５ｅｒ０．９５ ｒ Ａ、ｒｇｏ、
９９試料７−３ ＊ Ｔｙｒｌ、９０＋Ｐｒｏ１．０
＊ ５ｅｒ１．９４ 、Ａｒｇ １．００ＤＳカラムか
らの溶出位置： 試料７−１．２１％アセトニトリル 試料７−２．’２３％アセトニトリル 試料７−３．２６チアセトニトリル 実施例８ Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８＠ｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２
＋ Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８＠ｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２
および８＠ｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８＠ｒ−Ｔｙ
ｒ−ＮＨ２の合成 これらはそれぞれクシに一カゼインの３５〜３８番目、
３４〜３８番目および３３〜３８番目の配列に相当する
ペプチドのアミド化物である。
実施例１と同様の方法によりてベンズヒドリルアミン樹
脂にＢｏａ−Ｔｙｒ（（、ｔ２−Ｂｚｔ）をＨＯＢｔと
ＤＣＣＤの存在下でカップルさせた後、未反応のアミン
基をアセチル化し、Ｂｏａ−Ｔｙｒ（Ｃ２０−Ｂｚｔ）
ベンズヒドリルアミン樹脂を得た。この樹脂に実施例１
の場合同様に、Ｂｏａ−８ｅｒ（Ｂｚｔ） 、Ｂｏｅ−
Ｐｒｏ 、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃ２２−Ｂｚｔ）をこの順
序でカップルさせ該当のテトラペプチドアミド樹脂を得
た。この樹脂の２／３を分取し、さらに同様の方法でＢ
ｏａ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）をカップルさせ該当のペンタベ
グチドアミド樹脂を得た。さらにこの樹脂の１／２を分
堆しＢｏｅ−８ｓｒ（Ｂｚｔ）をカップルさせ該当のへ
キサペプチドアミド樹脂を得た。これら三種類のペプチ
ドアミド樹脂について、実施例１と同様、脱保護し、精
製を行い、Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（
試料８−１．１００１１ｉ ） 、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐ
ｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（試料８−２、収量１１
５１１９）およびＳｓｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８
ｅｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（試料８−３゜収量１５０ダ）を
得た。
脂にＢｏａ−Ｔｙｒ（（、ｔ２−Ｂｚｔ）をＨＯＢｔと
ＤＣＣＤの存在下でカップルさせた後、未反応のアミン
基をアセチル化し、Ｂｏａ−Ｔｙｒ（Ｃ２０−Ｂｚｔ）
ベンズヒドリルアミン樹脂を得た。この樹脂に実施例１
の場合同様に、Ｂｏａ−８ｅｒ（Ｂｚｔ） 、Ｂｏｅ−
Ｐｒｏ 、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃ２２−Ｂｚｔ）をこの順
序でカップルさせ該当のテトラペプチドアミド樹脂を得
た。この樹脂の２／３を分取し、さらに同様の方法でＢ
ｏａ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）をカップルさせ該当のペンタベ
グチドアミド樹脂を得た。さらにこの樹脂の１／２を分
堆しＢｏｅ−８ｓｒ（Ｂｚｔ）をカップルさせ該当のへ
キサペプチドアミド樹脂を得た。これら三種類のペプチ
ドアミド樹脂について、実施例１と同様、脱保護し、精
製を行い、Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（
試料８−１．１００１１ｉ ） 、Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐ
ｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（試料８−２、収量１１
５１１９）およびＳｓｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８
ｅｒ−Ｔｙｒ−ＮＨ２（試料８−３゜収量１５０ダ）を
得た。
分析値（実施例１と同一条件）
アミノ酸組成：
試料８−１ ＊ Ｔｙ ｒ １．９０ ｒ Ｐ ｒｏ
１．０ ｒ Ｓｅ ｔｏ、９６− ’ＮＨ３０，９１試
料８ ２ 、 Ｔｙｒｌ、９３＋Ｐｒｏ１．０．５ｅｒ
１．９５ 、ＮＨ，０，８９試料８−３ 、Ｔｙｒ １
．９１ ＋ Ｐｒｏ １．０ ＊ Ｓｅｔ １．９０
、■３０．９３０ＤＳカラムからの溶出位置： 試料８−１．２８．５チアセトニトリル試料８−２．３
６．０チアセトニトリル試料８−３．３２．５チアセト
ニトリル実施例９ Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒ
−Ｇｔｙの合成これはウシに一カゼインの３５番目から
３９番目の配列に相当するペプチドである。
１．０ ｒ Ｓｅ ｔｏ、９６− ’ＮＨ３０，９１試
料８ ２ 、 Ｔｙｒｌ、９３＋Ｐｒｏ１．０．５ｅｒ
１．９５ 、ＮＨ，０，８９試料８−３ 、Ｔｙｒ １
．９１ ＋ Ｐｒｏ １．０ ＊ Ｓｅｔ １．９０
、■３０．９３０ＤＳカラムからの溶出位置： 試料８−１．２８．５チアセトニトリル試料８−２．３
６．０チアセトニトリル試料８−３．３２．５チアセト
ニトリル実施例９ Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒ
−Ｇｔｙの合成これはウシに一カゼインの３５番目から
３９番目の配列に相当するペプチドである。
実施例２と同様の方法によってＢｏａ−Ｇｔｙ樹脂（０
，５６ｍｍｏｔ＠／ｐ ）を得た。この樹脂に実施例１
と同様の方法にしたがって順次Ｂｏａ−Ｔｙｒ（Ｃ４２
−Ｂｚｔ） ＩＢｏａ−８＠ｒ（Ｂｚｔ） ｔ Ｂｏａ
−ＰｒｏおよびＢｏａ−Ｔｙｒ（Ｃ２０−Ｂｚｔ）をカ
ップルさせ該当するペンタペプチド樹脂を得た。
，５６ｍｍｏｔ＠／ｐ ）を得た。この樹脂に実施例１
と同様の方法にしたがって順次Ｂｏａ−Ｔｙｒ（Ｃ４２
−Ｂｚｔ） ＩＢｏａ−８＠ｒ（Ｂｚｔ） ｔ Ｂｏａ
−ＰｒｏおよびＢｏａ−Ｔｙｒ（Ｃ２０−Ｂｚｔ）をカ
ップルさせ該当するペンタペプチド樹脂を得た。
このペプチド樹脂を実施例１と同様の方法で脱保護、精
製を行い、Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｔｙ
（試料９、９８ ｍ９７Ｉ樹脂）を得た。
製を行い、Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｔｙ
（試料９、９８ ｍ９７Ｉ樹脂）を得た。
分析値（実施例１と同一条件）
アミノ酸組成：
Ｔｙｒｌ、９６ 、 Ｐｒｏｌ、Ｏ、５ｅｒ０．９５
、 Ｇｔｙｌ、０２ＯＤＳカラムからの溶出位置：２２
．５ｑ６アセトリトリル実施例１０ ラット脳オピオ
イドレセグターアッセイの測定（１）実験方法 前記実施例で製造したペプチドのオピオイド活性をスナ
イダー（５ｎｙｄｅｒ ）らの方法（Ｐｒｏｅ、Ｎａｔ
ｌ。
、 Ｇｔｙｌ、０２ＯＤＳカラムからの溶出位置：２２
．５ｑ６アセトリトリル実施例１０ ラット脳オピオ
イドレセグターアッセイの測定（１）実験方法 前記実施例で製造したペプチドのオピオイド活性をスナ
イダー（５ｎｙｄｅｒ ）らの方法（Ｐｒｏｅ、Ｎａｔ
ｌ。
Ａｅａｄ、Ｓｃ１．ＵＳＡ、、７０．２２４３（１９７
３）参照。）に準じて測定した。
３）参照。）に準じて測定した。
雄ウィスター系ラット（１００〜２００．！ｉｔ）の大
脳（１，１〜１．３１）を摘出し、これをＰｏｔｔｅｒ
ホモジナイデーを使用して、ＩＱｍｊの５０ ｍＭ ）
リス−塩酸緩衝液（ｐｉ−１７，４）Ｏ℃下ホモジナイ
ズした。これを同一緩衝液で層重量の１００倍に稀釈し
た後、遠心（１，ＯＯＯｒｐｍ、５分、０℃）して沈澱
を除去した。
脳（１，１〜１．３１）を摘出し、これをＰｏｔｔｅｒ
ホモジナイデーを使用して、ＩＱｍｊの５０ ｍＭ ）
リス−塩酸緩衝液（ｐｉ−１７，４）Ｏ℃下ホモジナイ
ズした。これを同一緩衝液で層重量の１００倍に稀釈し
た後、遠心（１，ＯＯＯｒｐｍ、５分、０℃）して沈澱
を除去した。
得られた溶液１．７ ａｔに試料あるいは塩酸モルヒネ
（式日薬品工業社製）を加えて、３５℃で５分間インキ
−ベートした。続いて、〔３Ｈ）−ナロクソン（ＮＥＮ
、 ３７．７ Ｃ１／ｍｍｏｔ）で最終濃度１ ｎＭ
（３４，Ｑ ＯＯｅ、ｐ、ｍ、 ）となるように加え、
再び３５℃で１５分間インキュベートした。
（式日薬品工業社製）を加えて、３５℃で５分間インキ
−ベートした。続いて、〔３Ｈ）−ナロクソン（ＮＥＮ
、 ３７．７ Ｃ１／ｍｍｏｔ）で最終濃度１ ｎＭ
（３４，Ｑ ＯＯｅ、ｐ、ｍ、 ）となるように加え、
再び３５℃で１５分間インキュベートした。
グラスフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ ＧＦ／Ｂ ＊ ２
．４ ａｎ ）を使用して減圧濾過を行い、レセプター
の存在する膜成分をフィルター上に保持し、フィルター
を４１１Ｌｉ！の緩衝液で４回手早く洗浄した（所有時
間３０秒）。
．４ ａｎ ）を使用して減圧濾過を行い、レセプター
の存在する膜成分をフィルター上に保持し、フィルター
を４１１Ｌｉ！の緩衝液で４回手早く洗浄した（所有時
間３０秒）。
このフィルターを計測ヴアイアルに入れ、ｌ ａｔの１
０％硫酸ドデシルナトリウム（ＳＤＳ ）加えて３０分
以上放置した。その後、１ｏＩｌｌｌ／のＰＳＣ（Ａｍ
ａｒｓｈａｍ社製）を加えてよく振とうし、液体シンチ
レーシ冒ンカウンターで計測した。ただし、大過剰の非
放射性ナロクソン存在下でもみられる結合量を差し引い
たものを特異的結合量とした。試料の活性は〔３Ｈ〕−
ナロクソンの特異的結合を５０％阻害するに必要な試料
の濃度（Ｉｃ５ｏ）で表示した。
０％硫酸ドデシルナトリウム（ＳＤＳ ）加えて３０分
以上放置した。その後、１ｏＩｌｌｌ／のＰＳＣ（Ａｍ
ａｒｓｈａｍ社製）を加えてよく振とうし、液体シンチ
レーシ冒ンカウンターで計測した。ただし、大過剰の非
放射性ナロクソン存在下でもみられる結合量を差し引い
たものを特異的結合量とした。試料の活性は〔３Ｈ〕−
ナロクソンの特異的結合を５０％阻害するに必要な試料
の濃度（Ｉｃ５ｏ）で表示した。
（２）結 果
実施例１１ モルモット回腸縦走筋神経叢収縮抑制試
験（１）実験方法 基本的にはＫｏｓｔｅｒｌｉｔｚらの方法（Ｂｒ、Ｊ。
験（１）実験方法 基本的にはＫｏｓｔｅｒｌｉｔｚらの方法（Ｂｒ、Ｊ。
３００〜３５０ｇのモルモットよシ摘出した回腸から縦
走筋神経叢標本をｉ！１ｌｌｌ製し九。標本の一端は糸
を経てアイソメトリックトランスジューサにつなぎ、他
方は内容積２ ｍｌのマグヌス管の底に固定した。栄養
液（１１８ｍＭ ＮａＣ１、４，７５ｒｒＭＫＣＬ 。
走筋神経叢標本をｉ！１ｌｌｌ製し九。標本の一端は糸
を経てアイソメトリックトランスジューサにつなぎ、他
方は内容積２ ｍｌのマグヌス管の底に固定した。栄養
液（１１８ｍＭ ＮａＣ１、４，７５ｒｒＭＫＣＬ 。
１、１９ ｍＰｉ！ ＫＨ２ＰＯ４，２，５４ｍＭ Ｃ
ａＣ２２，１，２ｍＭＭｇＳＯ４、２５ｍＭ ＮａＨＣ
Ｏ３、１１ｍＭ Ｇｔｕｅｏｓ＠）をマグヌス管にみた
し、３７℃に保ち、９５ ％ ０２−５％Ｃ０２混合ガ
スを通気した。マグヌス管内の電極に１゜秒に１回の割
合で電気刺激（５０Ｖ、 ０．１ ｍ５ｅｃ）を与え得
られた収縮の強さを電気的に記録した。
ａＣ２２，１，２ｍＭＭｇＳＯ４、２５ｍＭ ＮａＨＣ
Ｏ３、１１ｍＭ Ｇｔｕｅｏｓ＠）をマグヌス管にみた
し、３７℃に保ち、９５ ％ ０２−５％Ｃ０２混合ガ
スを通気した。マグヌス管内の電極に１゜秒に１回の割
合で電気刺激（５０Ｖ、 ０．１ ｍ５ｅｃ）を与え得
られた収縮の強さを電気的に記録した。
した。またオビ二−トアンタゴニスト作用は回腸標本の
モルヒネによる収縮抑制を解除する効果によって判定し
た。
モルヒネによる収縮抑制を解除する効果によって判定し
た。
（２）結 果
発明の効果
以上の説明から明らかな如く、本発明の新規ペプチドは
温和なモルヒネ様鎮痛活性またはオピエートアンタゴニ
スト活性を有し、医薬品として期待できる。
温和なモルヒネ様鎮痛活性またはオピエートアンタゴニ
スト活性を有し、医薬品として期待できる。
手続補正書
昭和６１年３月１ｑ日
Claims (1)
- （１）一般式：Ｒ＿１−Ｔｙｒ−Ｘ＿１−Ｘ＿２−Ｘ＿
３−Ｒ＿２で示されるペプチド。 ただし、式中、Ｒ＿１はＨ、ＡｒｇおよびＳｅｒ−Ａｒ
ｇ−のいずれかを、Ｘ＿１はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕお
よびＶａｌのいずれかを、Ｘ＿２はＳｅｒ、Ｐｈｅおよ
びＬｅｕのいずれかを、Ｘ＿３はＴｙｒ、Ｌｅｕおよび
Ｐｈｅのいずれかを、Ｒ＿２はＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ
、Ｌｙｓ、ＯＨおよびＮＨ＿２のいずれかを、それぞれ
表わす。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60114461A JPH0735398B2 (ja) | 1985-05-28 | 1985-05-28 | 新規ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60114461A JPH0735398B2 (ja) | 1985-05-28 | 1985-05-28 | 新規ペプチド |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6211216A Division JP2513439B2 (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | 新規ペプチド |
| JP6211217A Division JP2513440B2 (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | 新規ペプチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61271300A true JPS61271300A (ja) | 1986-12-01 |
| JPH0735398B2 JPH0735398B2 (ja) | 1995-04-19 |
Family
ID=14638315
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60114461A Expired - Lifetime JPH0735398B2 (ja) | 1985-05-28 | 1985-05-28 | 新規ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0735398B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009040087A3 (en) * | 2007-09-11 | 2009-05-22 | Mondobiotech Lab Ag | Therapeutic use of peptide yglf and combination with kvlpvpq |
| WO2014020209A1 (es) * | 2012-07-30 | 2014-02-06 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Uso de hidrolizados de proteínas lácteas como protectores a nivel gastrointestinal |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57150650A (en) * | 1980-11-24 | 1982-09-17 | Peninsura Lab Inc | Peptide, medicinal composition and use |
-
1985
- 1985-05-28 JP JP60114461A patent/JPH0735398B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57150650A (en) * | 1980-11-24 | 1982-09-17 | Peninsura Lab Inc | Peptide, medicinal composition and use |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009040087A3 (en) * | 2007-09-11 | 2009-05-22 | Mondobiotech Lab Ag | Therapeutic use of peptide yglf and combination with kvlpvpq |
| WO2014020209A1 (es) * | 2012-07-30 | 2014-02-06 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Uso de hidrolizados de proteínas lácteas como protectores a nivel gastrointestinal |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0735398B2 (ja) | 1995-04-19 |
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