CN101367881A - 一种灵芝多糖的高效制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种灵芝多糖的制备方法，属于生物医药领域。将灵芝子实体烘干、粉碎后得灵芝粉，将粉碎后的灵芝粉用28倍的纯水混匀，用超声波设备于680W破碎17min，抽滤弃滤渣，提取液旋转蒸发浓缩至原体积的1/4，缓缓加入4倍体积的95％乙醇，4℃下醇沉12h，4500rpm离心15min，弃去上清液，沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤三次后，在55℃烘箱中烘干即得灵芝粗多糖。采用超声波提取技术得率为20.79±0.11mg/g，纯度达到了47.88％，与传统的热水浸提相比，时间缩短了96％，得率提高了28％。所得的灵芝多糖可广泛用做药品和保健食品的基料。

Description

一种灵芝多糖的高效制备方法

一、技术领域

本发明涉及一种灵芝粗多糖的高效制备方法，属于生物医药领域，产品可广泛应用于保健品、功能食品、生物医药等领域。

二、背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum)是一种营养、保健价值极高的大型担子菌。自古以来，灵芝就被认为是吉祥、富贵、美好和长寿的象征，有“仙草”和“瑞草”之称，中华传统医学长期以来一直视之为滋补强身、固本扶正的珍贵中草药。迄今为止，我们已从灵芝中分离得到150多种化合物，可分为多糖类、三萜类、核苷类、呋喃类、生物碱类、氨基酸蛋白质类、甾醇类、无机离子、有机锗等十几类物质，其中多糖具有抗肿瘤生长，减少化疗毒副作用，镇静安神，提高机体免疫力，强心，降血脂血压，保护肝脏，降血糖，抗氧化及抗衰老等作用。大量研究报告显示：灵芝多糖是灵芝主要生物活性成分，灵芝的各种药效与灵芝多糖的活性和含量密切相关，而且灵芝多糖已经成为衡量灵芝产品质量的最重要指标之一。

灵芝多糖是由肽多糖、葡萄糖、杂多糖等多糖均一体组成的混合物，是灵芝中的主要有效成分。现代医学研究表明灵芝多糖有许多重要的生理功能：(1)免疫调节功能；(2)抗肿瘤作用；(3)防止衰老；(4)降低血糖、血脂作用；(6)抗血栓抗血凝作用；(5)消除自由基等，在医药保健品开发等许多领域都具有广阔的开发前景，而且灵芝多糖的保健功能已经成为目前保健食品及药品的研究焦点。

在灵芝多糖的开发应用中，分离提取是关键的步骤之一，它不仅影响着产品的得率，直接关系经济效益，还与产品的活性价值密切相关。灵芝多糖传统提取方法主要有热水浸提法、碱法和酸法。灵芝子实体的主要构成成分是纤维素、半纤维素和木质素，三者之间通过形成束状晶体结构或产生木质素的结合层，使灵芝子实体具有较强的硬度，而灵芝多糖存在于子实体的细胞壁中，传统的水、碱、酸浸提法灵芝多糖的提取时间长，能耗大，提取温度高，而且长时间高温有可能使灵芝多糖发生降解，使灵芝多糖的提取很难达到理想效果，这些都大大限制了灵芝多糖的开发和利用。研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，加强了胞内物质的释放、扩散及溶解，从而提高了提出率，缩短了提取时间；同时超声波破碎过程是一个物理过程，浸提过程中无化学反应，被浸提的生物活性物质在短时间内保持不变，生物活性不减，因此超声波提取技术在中药有效成分提取、分离与制备工艺中已得到广泛应用。利用超声波提取灵芝多糖，研究其适宜的提取条件，提高灵芝多糖得率，是提高灵芝附加值的重要途径。

三、发明内容

技术问题

本发明的目的是提供一种灵芝多糖的制备方法，该方法克服了传统提取技术生产周期长，多糖纯度低、提取得率低的缺点。同时该方法简便，易得，制得的灵芝多糖无毒、安全和高活性。所提取的灵芝多糖得率、纯度较高，可广泛应用于保健品、功能食品、生物医药等领域。

技术方案

灵芝多糖的制备方法，步骤如下：

①称取灵芝子实体粉，加入10-50倍重量纯水混匀，利用JY98-III超声波细胞粉碎机，功率为400-1040W提取5-25min，抽滤去除灵芝残渣；

②使用N-1001旋转蒸发仪将滤液浓缩至原体积的1/4；

③搅拌并缓缓向浓缩液中加入4倍体积的体积比95％乙醇，4℃下醇沉12h，4500r/min下离心15min，弃去上清液，沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤三次后，在55℃烘箱中烘干得灵芝粗多糖粉末，即为所获得的灵芝多糖产品。

多糖含量的测定方法：

采用硫酸苯酚法，精密称取灵芝子实体粉2g，分别采用热水浸提和超声波提取工艺，抽滤去除滤渣，将滤液定容到250ml容量瓶中，摇匀。精密吸取样液0.5ml，置15ml试管中，并用蒸馏水补至2ml，分别加入1ml6％苯酚和5ml浓硫酸，摇匀，30℃水浴20min，冷却后在490nm处测定吸光值A。以105℃下烘干至恒重的葡萄糖为标准品，制作标准曲线。

有益效果

本发明与传统的热水浸提方法相比提取灵芝多糖得率高、时间短。

在灵芝多糖的开发应用中，分离提取是关键的步骤之一，它不仅影响着产品的得率，直接关系经济效益，还与产品的活性价值有着密切的相关性。灵芝子实体木栓质化、结构紧密，具有较好的维持力，存在于细胞壁内的灵芝多糖较难渗出，传统的水、碱、酸浸提法较难达到理想的效果。针对这种情况，本发明采用了超声波提取技术，在单因素试验的基础上以超声波功率、超声提取时间和水料比为考察因素，灵芝多糖得率为响应值，采用响应曲面设计方法(表1)，确定了灵芝多糖超声波提取的最佳工艺参数为超声时间17min，超声功率680W，水料比28/1。结果显示按照本发明工艺参数，灵芝多糖得率可达到20.79mg/g左右，纯度达到47.88％。本发明与传统的热水浸提相比，时间缩短了96％，得率提高了28％(表3)；与专利《一种灵芝多糖及制备方法和应用》(专利号：ZL03116403.X)中提供的方法相比，得率提高了114％，时间缩短了97％。

本发明采用超声波提取技术，利用超声波产生的空化效应，促进细胞中有效物质溶出，显著缩短灵芝多糖的提取时间，节省能耗，并大大提高提取得率，同时超声波提取技术具有设备简单、适用范围广、能量损失小、萃取速度快、节省试剂等优点。因此，该技术适合植物多糖的提取分离。

四、具体实施方式

(一)试验设计

1.热水浸提方法(对照)

选择水料比、浸提次数、浸提温度与浸提时间做单因素试验；正交实验选择浸提温度、水料比比和浸提时间为考查因素，以多糖得率为测定指标，L₉(3⁴)正交试验方法(表1)，确定灵芝多糖热水浸提的最佳工艺参数。

2.超声波提取方法(本发明方案)

选择超声波功率、超声作用时间与水料比做单因素试验；Box-Benhnken设计选择超声波功率、超声作用时间和水料比为考查因素，以多糖得率为测定指标，采用响应曲面设计方法(表2)，确定灵芝多糖超声波提取的最佳工艺参数。

(二)实施例

灵芝子实体粉：购于江苏南通安惠生物科技有限公司。品种为赤芝，原料经清洗，去菌柄，菌盖经热风循环干燥后粗碎，用FW100型高速万能粉碎机(天津市华鑫仪器厂)粉碎获得灵芝子实体粉备用。

1.热水浸提灵芝粗多糖(对照)

①称取20克灵芝子实体粉，加入400ML纯水混匀，在90℃水浴中浸提3.5h，抽滤，滤渣重复提取一次，合并滤液，去除灵芝残渣；

②使用N-1001旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)将滤液浓缩至100ML；

③边搅拌边缓缓向浓缩液中加入400ML的95％乙醇，4℃下醇沉12h，用4500rpm离心15min，弃去上清液，沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤三次后，在55℃烘箱中烘干即可获得热水浸提的灵芝粗多糖粉末。粗多糖得率为16.20±0.15mg/g，纯度为51.96％，所用时间为420min。

2.超声波提取灵芝粗多糖(本发明)

①称取20克灵芝子实体粉，加入560ML纯水混匀，用JY98-III超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司)680W提取17min，抽滤去除灵芝残渣；

②使用N-1001旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)将滤液浓缩至140ML；

③边搅拌边缓缓向浓缩液中加入560ML的95％乙醇，4℃下醇沉12h，用4500rpm离心15min，弃去上清液，沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤三次，在55℃烘箱中烘干即可获得超声波提取的灵芝粗多糖粉末。粗多糖得率为20.79±0.11mg/g，纯度为47.88％，所用时间为17min。

如表3所示，采用本发明与传统热水提取方法相比，灵芝多糖的得率提高28％，时间缩短96％；与专利《一种灵芝多糖及制备方法和应用》(专利号：ZL03116403.X)中提供的方法相比，得率提高了114％，时间缩短了97％。

                        表1 热水浸提正交实验结果

               表2 Bo×-Benhnken设计方案及灵芝多糖得率

              表3 本发明与对照提取条件和得率比较

Claims (2)

1.一种灵芝多糖的高效制备方法，包括：

①称取灵芝子实体粉，加入10-50倍重量纯水混匀，利用JY98-III超声波细胞粉碎机，功率为400-1040W提取5-25min，抽滤去除灵芝残渣；

②使用N-1001旋转蒸发仪将滤液浓缩至原体积的1/4；

③搅拌并缓缓向浓缩液中加入4倍体积的体积比95％乙醇，4℃下醇沉12h，4500r/min下离心15min，弃去上清液，沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤三次后，在55℃烘箱中烘干得灵芝粗多糖粉末，即为所获得的灵芝多糖产品。

2.权利要求1所述制备方法所获得的灵芝多糖产品。