CN101347490A

CN101347490A - 一种油菜破壁花粉提取物及其提纯方法和应用

Info

Publication number: CN101347490A
Application number: CNA2007100438567A
Authority: CN
Inventors: 杨义芳; 李坤; 李永辉
Original assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Current assignee: Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry; Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2007-07-17
Filing date: 2007-07-17
Publication date: 2009-01-21
Anticipated expiration: 2027-07-17
Also published as: CN101347490B

Abstract

本发明公开了一种油菜破壁花粉的提纯方法及制得的提取物，该提纯方法包括将油菜破壁花粉采用超临界二氧化碳萃取的萃取物用大孔树脂富集，采用乙醇进行洗脱，收集洗脱液。本发明方法简单，易于操作，所提取的有效成分具有较佳的抗炎活性以及抗前列腺增生、抗前列腺纤维化等前列腺疾病的功效。

Description

一种油菜破壁花粉提取物及其提纯方法和应用

技术领域

本发明涉及一种油菜破壁花粉提取物及其提纯方法和应用。

背景技术

油菜花粉为十字花科植物油菜(Bassica Campestros L.)的雄性生殖细胞，其营养、药用成分非常丰富，富含多种蛋白质及多肽、游离氨基酸、碳水化合物、脂类、各种维生素、常量和微量元素及其他活性物质，在国际上被誉为“浓缩微型天然药剂”。

大量的药理及临床数据表明，油菜花粉及其粗提物对前列腺相关疾病具有良好的预防及治疗效果。据浙江医科院老年病研究所的临床数据报道，使用油菜花粉治疗前列腺增生100例，症状有效率达93％，残尿有效率为73.2％，总有效率达95％。然而，由于油菜花粉富含多种成分，导致花粉及其粗提物中有效成分含量偏低，少量服用效果不明显。目前，许多学者对此进行了有益的探索，并基本解决了花粉的破壁问题。但对破壁后的油菜花粉抗良性前列腺增生的有效成分的提取、富集并未见相关专利和报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题即是提供一种油菜破壁花粉的有效成分，即具有更佳药效的油菜破壁花粉提取物及其提纯方法。

本发明人经过诸多试验，惊奇地发现将油菜破壁花粉经超临界萃取(SFE)后获得的超临界萃取物再经过大孔树脂富集，采用乙醇进行洗脱，收集洗脱液获得的产物具有较佳的抗炎和抗前列腺增生和纤维化的作用。

因此，本发明通过下列技术方案来解决上述问题。一种油菜破壁花粉的提纯方法，其包括将油菜破壁花粉采用超临界二氧化碳萃取的萃取物用大孔树脂富集，采用乙醇进行洗脱，收集洗脱液。

其中，油菜破壁花粉采用超临界二氧化碳萃取的提取工艺及获得的提取物已在本发明人申请号为CN200710043270.0的专利申请中公开，其说明书全文为本说明书所引用。

其中，所述的超临界二氧化碳萃取的温度优选在35～50℃范围，压力25～40MPa。

为了提高萃取物的收率，所述的超临界二氧化碳萃取中还采用萃取夹带剂。本发明优选甲醇、乙醇等C_1～4的低级醇，所述夹带剂的用量优选为破壁花粉重量的5～10％。

为了更好地提高萃取物的收率，本发明优选二级分离，其中分离釜I的温度为35～45℃、压力8～12MPa，分离釜II的温度为25～35℃、压力4～6Mpa。

在收率相同情况下，随着超临界二氧化碳萃取中CO₂每小时循环用量增大，萃取时间可缩短，反之，超临界二氧化碳萃取中CO₂每小时循环用量越小，萃取时间越长。本发明综合收率、工艺时间、成本等因素，优选采用25～45L/小时循环用量的CO₂萃取1～3小时左右。

本发明所说的油菜破壁花粉是指现有固体的破壁花粉，其可以市售得到，也可以采用现有花粉破壁技术(如可以参考：张星海等.油菜花粉的微生物破壁技术研究，食品科学，2003，24(3)：92～95；以及公开号为CN1452888A的专利申请文件公开的酶发酵破壁方法)自制得到。按常规，将油菜破壁花粉进行超临界二氧化碳萃取之前，尽量将破壁花粉，特别是市售产品去除水分，干燥完全。

根据本发明，油菜破壁花粉采用超临界二氧化碳萃取的萃取物可以是每个分离釜单独收集的产物，也可以是将两个分离釜的产物合并后的混合物；换言之，各个分离釜收集的产物可以分别过柱，也可以合并后过柱。上柱时，通常将萃取物蒸至无醇味，采用类似传统硅胶柱干法拌样的方式进行拌样，即取一部分(一般为装柱量20～60％，v/v)的大孔树脂与萃取物一起搅拌均匀，使其充分吸附，将拌样后的大孔树脂装入大孔树脂的柱顶端。

所述的大孔树脂可以是各种性质的大孔树脂，包括不同极性类型与不同的骨架类型。通过研究分析表明，苯乙烯骨架的非极性大孔树脂如D101型采用70％～80％乙醇洗脱，甲基丙烯酸骨架的大孔树脂如HP2MG采用60％～70％乙醇洗脱，中极性大孔树脂如DM301采用60％～75％乙醇洗脱，极性大孔树脂如DA201型、NKA-II型等，采用50％～70％乙醇洗脱，所得到的化学成分相似，药效结果也类似。综合考虑成本、大孔树脂的再生、循环使用等情况，优选极性大孔树脂作为工业化生产的树脂。

而本发明要提供的一种油菜破壁花粉提取物，由上述提纯方法制得。

本发明制得的油菜破壁花粉提取物经动物试验显示，具有较强的抗炎及抗前列腺增生、抗前列腺纤维化的作用，可制备成抗炎，以及抗前列腺炎、前列腺增生和前列腺纤维化等前列腺疾病的药物或保健食品。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。特别是为了重点考察不同大孔树脂和不同浓度乙醇洗脱得到的不同产物的药效，下列实施例中选用同一种油菜破壁花粉超临界二氧化碳萃取物，即选用相同条件制备的超临界二氧化碳萃取物来进行说明，其它萃取物可按照上述本发明人专利申请CN200710043270.0中公开的方法制备。

实施例1油菜破壁花粉超临界二氧化碳萃取物的制备

将市售的油菜破壁花粉(安徽省宣城市百康蜂业生产)60℃减压干燥24小时，然后将干燥后的破壁花粉在40℃，萃取釜压力40MPa，分离釜I温度35℃、压力12MPa，分离釜II温度25℃、压力5MPa，以花粉重量8％重的浓度为95v/v％乙醇为夹带剂进行超临界二氧化碳(45L/小时的循环用量)萃取2.0小时，得到超临界萃取部分，收集超临界萃取物。

实施例2本发明油菜破壁花粉提取物的制备

将实施例1获得的萃取物蒸至无醇味，采用类似传统硅胶柱干法拌样的方式进行拌样，即取装柱量20～60％(v/v)的大孔树脂与萃取物一起搅拌均匀，使其充分吸附，将拌样后的大孔树脂装入大孔树脂柱顶端，其中大孔树脂选用极性大孔树脂DA201(生产厂商：天津市海光化工有限公司)，用50％(v/v)的乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥。

实施例3本发明油菜破壁花粉提取物的制备

将实施例1获得的萃取物，按照实施例2方法进行前处理，通过极性大孔树脂柱NKA-II(生产厂商：南开大学化工厂)，用65％(v/v)的乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥。

实施例4本发明油菜破壁花粉提取物的制备

将实施例1获得的萃取物，按照实施例2方法进行前处理，通过中极性大孔树脂柱DM301(生产厂商：天津市海光化工有限公司)，用70％(v/v)的乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥。

实施例5本发明油菜破壁花粉提取物的制备

将实施例1获得的萃取物，按照实施例2方法进行前处理，通过非极性大孔树脂柱D101(生产厂商：天津市海光化工有限公司)，用80％(v/v)的乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥。

实施例6本发明油菜破壁花粉提取物的制备

将实施例1获得的萃取物，按照实施例2方法进行前处理，通过丙烯酸骨架的HP2MG大孔树脂柱(生产厂商：三菱公司)，用75％(v/v)的乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥。

试验实施例1本发明油菜破壁花粉提取物的抗炎作用

本发明油菜破壁花粉提取物对大鼠足跖肿胀度的影响，试验方法：

SD大鼠按体重随机分组每组10只，空白组给予0.4％的吐温-80，试验组和原料对照组(实施例1)按表1的剂量给予相应供试品，阳性组给予阿司匹林0.12g/kg，并给予现有花粉药物：前列康(油菜破壁花粉制剂)0.5g/kg剂量和舍尼通(裸麦破壁花粉制剂)0.015g/kg剂量作为对照。灌胃容积均为10ml/kg体重，连续给药7天，末次给药前1h用外径千分尺测量大鼠左后足跖的厚度，给药后1h左后足跖注射鸡蛋清0.05ml/爪，然后于注射鸡蛋清后2、4、6小时用外径千分尺各测量一次左后足跖的厚度，测量时均在相同的部位，计算大鼠左后足跖在给药后不同时间点的肿胀度，将其左后足跖肿胀度进行组间比较，t检验。

肿胀度(mm)＝左后足跖厚度(注射鸡蛋清后)-左后足跖厚度(注射鸡蛋清前)，结果如下表1所示。

表1本发明提取物对蛋清致大鼠足肿胀度的影响(X±s)

与模型组比较，^*P＜0.05 ^**P＜0.01

可见，本发明经大孔树脂富集后的油菜破壁花粉提取物，抗炎作用较好，抗前列腺炎的疗效较现常用的消炎药阿司匹林更佳，也优于破壁花粉的超临界提取物，且剂量要低于超临界提取物及现有制剂。

试验实施例2本发明油菜破壁花粉提取物的抗前列腺增生作用

取大鼠，随机取10只做伪手术空白组，其他大鼠在无菌条件下，用2％的戊巴比妥钠麻醉，摘除双侧睾丸，缝合皮肤。手术1周后，将去睾丸大鼠按体重随机分组。除空白组外，其余大鼠每日按0.1ml/200g体重皮下注射丙酸睾酮，剂量为3mg/kg，共30d，试验组和原料对照组(实施例1)按表2的剂量给予相应实施例或原料供试品，阳性组分别给予前列康0.5g/kg剂量和舍尼通0.015g/kg剂量，空白组和模型组给予等容积的蒸馏水，均灌胃给予，给药容积为1.0ml/100g体重，1次/d，连续给药30d。于末次给药后2h处死动物，剖取前列腺各叶(腹、背+侧叶)，用滤纸吸除表面液体，电子天平称其湿重，计算前列腺各叶重量指数；

结果如下表2所示。

表2、本发明提取物对丙酸睾酮诱导前列腺增生大鼠模型前列腺指数的影响(X±s)

与模型组比较，^*P＜0.05 ^**P＜0.01

可见，本发明油菜破壁花粉提取物的抗前列腺增生疗效优于油菜破壁花粉超临界提取物及现有制剂，且剂量明显低于超临界提取物及现有制剂。

试验实施例3 本发明油菜破壁花粉提取物对前列腺增生病理改变作用

取上述试验实施例2中试验后的大鼠的前列腺腹叶，固定于10％福尔马林液中作常规石蜡切片，HE染色，做病理组织学检查，观察间质炎症、水肿、充血和纤维组织增生等情况。

前列腺组织学评判标准：正常为“-”，病变范围占全视野1/4以下为“+”；病变改变明显，范围占1/3左右为“++”；病变严重，范围占全视野1/2左右为“+++”。结果如表3所示。

表3、本发明油菜破壁花粉提取物对丙酸睾酮诱导大鼠前列腺增生病理改变的影响

与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

可见，本发明油菜破壁花粉提取物的抗前列腺增生病理改变，尤其是抗前列腺纤维化方面，疗效优于现有破壁花粉制剂，且剂量要低于现有制剂。

Claims

1、一种油菜破壁花粉的提纯方法，其包括将油菜破壁花粉采用超临界二氧化碳萃取的萃取物用大孔树脂富集，采用乙醇进行洗脱，收集洗脱液。

2、如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述的乙醇为50％～80％体积浓度的乙醇水溶液。

3、如权利要求2所述的提纯方法，其特征在于所述的大孔树脂为极性大孔树脂，采用50～70％的乙醇水溶液洗脱。

4、如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述的超临界二氧化碳萃取的温度为35～50℃，压力25～40Mpa；并采用二级分离，其中分离釜I的温度为35～45℃、压力8～12MPa，分离釜II的温度为25～35℃、压力4～6Mpa。

5、如权利要求4所述的提纯方法，其特征在于所述的超临界二氧化碳萃取中还采用萃取夹带剂甲醇和/或乙醇，其用量为破壁花粉重量的5～10％。

6、如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述的洗脱液还进一步进行干燥。

7、如权利要求1～6任一项所述的提纯方法制得的油菜破壁花粉提取物。

8、如权利要求7所述的油菜破壁花粉提取物在制备消炎药物或保健食品中的应用。

9、如权利要求7所述的油菜破壁花粉提取物在制备防治前列腺炎或前列腺增生的药物或保健食品中的应用。