CN105193876B - 一种马齿苋提取物及其制备方法 - Google Patents
一种马齿苋提取物及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于中医药或化妆品技术领域,具体涉及一种马齿苋提取物及其制备方法,本发明提取物由下述方法制备:取马齿苋干燥,采用95%乙醇作为挟带剂,CO2超临界萃取,萃取物加入1,3‑丁二醇,有机层回收试剂至尽,干燥得到提取物A;超临界萃取后残渣,进行酶水解,加水提取,过滤,提取液加入活性炭和白土,离心,浓缩干燥,得到提取物B;将提取物A和提取物B混合均匀。本发明制备方法中提取物A中富含α‑亚麻酸,本发明得到提取物B中多糖含量高。本发明提取方法获得的马齿苋提取物,比现有技术中的马齿苋提取物,具有更好的抗菌、抗炎和抗刺激作用。
Description
技术领域
本发明属于中医药或化妆品技术领域,具体涉及一种马齿苋提取物及其制备方法。
背景技术
马齿苋为马齿苋科一年生草本植物。肥厚多汁,无毛,高10~30cm,生于田野路边及庭园废墟等向阳处。国内各地均有分布。该种为药食两用植物。全草供药用,有清热利湿、解毒消肿、消炎、止渴、利尿作用;种子明目。现代研究,马齿苋还含有丰富的SL3脂肪酸及维生素A样物质。SL3脂肪酸是形成细胞膜,尤其是脑细胞膜与眼细胞膜所必需的物质;维生素A样物质能维持上皮组织如皮肤、角膜及结合膜的正常机能,参与视紫质的合成,增强视网膜感光性能,也参与体内许多氧化过程。
马齿苋中富含有大量的黄酮类、肾上腺素类、多糖类和各种维生素、氨基酸等化合物。马齿苋提取液作用:抗皮肤过敏,刺激,抗炎和祛痘;1、在化妆品中:主要用于抗过敏、抗炎消炎和抗外界对皮肤的各种刺激作用,还有祛痘功能。特别对长期使用激素类化妆品产生的皮肤过敏有明显的抗过敏作用。2、在外用方面:可治疗皮肤疮疖及化脓性疾病,对湿疹、漆疮、皮炎、皮肤瘙痒和疼痛有非常好的疗效。3、在内服方面:消炎、治痢,治疗糖尿病、降血糖和各种疼痛。因此,马齿苋提取物可以用于各种化妆品中,可添加到洗面奶、沐浴露、膏霜、乳液和者喱等中,也可添加到各种护肤品、护发品中(在护发品中有抗头皮屑功能)。
因此,研究开发一种新的马齿苋提取物,提高中药材的利用价值,对于产业发展与布局具有重要意义。
发明内容
基于上述原因,申请人经过多年的研究,获得一种新的马齿苋提取物,该提取物中富含亚麻酸和多糖,本发明马齿苋提取物是采用95%乙醇作为挟带剂,CO2超临界萃取,萃取物加入1,3-丁二醇,有机层回收试剂至尽,干燥得到提取物A;超临界萃取后残渣,进行酶水解,加水提取,过滤,提取液加入活性炭和白土,离心,浓缩干燥,得到提取物B;将提取物A和提取物B混合均匀,得到马齿苋提取物。本发明制备方法中提取物A中富含α-亚麻酸,本发明得到提取物B,该提取物中多糖含量高。本发明提取方法获得的马齿苋提取物,比现有技术中的马齿苋提取物,具有更好的抗菌、抗炎和抗刺激作用。
本发明通过下述技术方案实现的。
一种马齿苋提取物,取马齿苋干燥,采用95%乙醇作为挟带剂,CO2超临界萃取,萃取物加入1,3-丁二醇,有机层回收试剂至尽,干燥得到提取物A;超临界萃取后残渣,进行酶水解,加水提取,过滤,提取液加入活性炭和白土,离心,浓缩干燥,得到提取物B;将提取物A和提取物B混合均匀,得到马齿苋提取物。
所述的提取物A的制备方法为:
称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量10%-20%的马齿苋,粉碎至40目,进行CO2超临界萃取,按照料液比1:1加入95%乙醇作为挟带剂,提取压力40MPa,提取温度50℃,分离釜I压力:8MPa,分离釜釜I温度:40℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量2-4倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A。
所述提取物B的制备方法为:
取提取釜中备用马齿苋残渣,加入残渣重量2%-4%的纤维素酶,加入残渣重量8-10倍的注射用水,50℃-60℃下搅拌1.5-2.5小时,过滤,滤液加入滤液重量2.5%的活性炭和滤液重量2.5%的白土,加热至100℃,保温25-35分钟,离心,过滤,滤液,滤液浓缩干燥,得到提取物B。
上述所述的马齿苋提取物在制备治疗抗菌化妆品中的应用。
上述所述的马齿苋提取物在制备治疗抗炎化妆品中的应用。
上述所述的马齿苋在制备治疗抗刺激化妆品中的应用。
上述所述的马齿苋在制备化妆品中的应用。
一种马齿苋提取物的制备方法:
(1)称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量10%-20%的马齿苋,粉碎至40目,进行CO2超临界萃取,按照料液比1:1加入95%乙醇作为挟带剂,提取压力40MPa,提取温度50℃,分离釜I压力:8MPa,分离釜釜I温度:40℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量2-4倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A;
(2)取提取釜中备用马齿苋残渣,加入残渣重量2%-4%的纤维素酶,加入残渣重量8-10倍的注射用水,50℃-60℃下搅拌1.5-2.5小时,过滤,滤液加入滤液重量2.5%的活性炭和滤液重量2.5%的白土,加热至100℃,保温25-35分钟,离心,过滤,滤液,滤液浓缩干燥,得到提取物B;
(3)将提取物A和提取物B混合均匀,得到马齿苋提取物。
本发明具有下述有益的技术效果:
(1)本发明制备方法中提取物A中富含α-亚麻酸,100g马齿苋可以提取得到超过40mg的α-亚麻酸。
(2)本发明得到提取物B,该提取物中多糖含量高。
(3)本发明CO2超临界提取方法萃取压力、温度以及分离压力、温度等工艺参数是通过若干次创造性试验获得的。
(4)本发明酶解提取马齿苋残渣中纤维素酶是通过优选获得纤维素酶系中C1_酶。
(5)本发明提取方法获得的马齿苋提取物,比现有技术中的马齿苋提取物,具有更好的抗菌、抗炎和抗刺激作用。
具体实施方式
下面结合实例对本发明作详细说明。以下实施例并不限定对本发明的保护范围。
一、工艺研究试验
1、提取物A工艺研究
试验方法1:称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量8%的马齿苋,粉碎至40目,取干燥后的马齿苋100g,进行CO2超临界萃取,按照料液比1:1加入乙醇作为挟带剂,提取压力25MPa,提取温度40℃,分离釜I压力:8MP,分离釜釜I温度:30℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量3倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A。
试验方法2:称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量9%的马齿苋,粉碎至40目,取干燥后的马齿苋100g,进行CO2超临界萃取,按照料液比1:1加入95%乙醇作为挟带剂,提取压力30MPa,提取温度40℃,分离釜I压力:8MP,分离釜釜I温度:30℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量3倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A。
试验方法3:称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量10%的马齿苋,粉碎至40目,取干燥后的马齿苋100g,进行CO2超临界萃取,按照料液比1:1加入95%乙醇作为挟带剂,提取压力40MPa,提取温度50℃,分离釜I压力:8MPa,分离釜釜I温度:40℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量3倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A;
试验方法4:称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量15%的马齿苋,粉碎至40目,取干燥后的马齿苋100g,进行CO2超临界萃取,按照料液比1:1加入95%乙醇作为挟带剂,提取压力40MPa,提取温度50℃,分离釜I压力:8MPa,分离釜釜I温度:40℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量3倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A;
试验方法5:称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量12%的马齿苋,粉碎至40目,取干燥后的马齿苋100g,进行CO2超临界萃取,按照料液比1:1加入95%乙醇作为挟带剂,提取压力40MPa,提取温度50℃,分离釜I压力:8MPa,分离釜釜I温度:40℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量3倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A;
提取物A中α-亚麻酸检测方法:
标准品:98%α-亚麻酸,上海百灵威科技有限公司。
色谱条件:色谱柱:安捷伦C18250*4.6mm;流动相:乙腈:水=20:80;流速:1ml/min;进样量:20μL;检测波长:210nm;
检测方法:将116mgα-亚麻酸标准品溶于1L无水乙醇中,漩涡震荡,过0.22μm的滤膜,上HPLC测试。另外,取提取物A100mg,,溶于1L无水乙醇中,漩涡震荡,过0.22μm的滤膜,上HPLC测试;按照外标法计算提取物A中α-亚麻酸的重量。
试验结果:见表1。
表1不同试验方法中α-亚麻酸比较
试验结论:上述试验表明,同样采用CO2超临界萃取的方法,试验方法1和试验方法得到提取物中2α-亚麻酸重量低于25mg,而采用本发明工艺方法(试验方法3-试验方法5)得到提取物中2α-亚麻酸重量高于40mg,充分说明本发明工艺方法具有科学意义。
2、提取物B工艺研究
试验方法1:取提取釜中备用马齿苋残渣200g,加入残渣重量3%的纤维素酶,加入残渣重量9倍的注射用水,55℃下搅拌3小时,过滤,滤液加入滤液重量2.5%的活性炭和滤液重量2.5%的白土,加热至100℃,保温30分钟,离心,过滤,滤液,滤液浓缩干燥,得到提取物B;
试验方法2:取提取釜中备用马齿苋残渣200g,加入残渣重量3%的纤维素酶系C1_酶,加入残渣重量9倍的注射用水,55℃下搅拌3小时,过滤,滤液加入滤液重量2.5%的活性炭和滤液重量2.5%的白土,加热至100℃,保温30分钟,离心,过滤,滤液,滤液浓缩干燥,得到提取物B;
试验方法3:取提取釜中备用马齿苋残渣200g,加入残渣重量3%的纤维素酶系Cx酶,加入残渣重量9倍的注射用水,55℃下搅拌3小时,过滤,滤液加入滤液重量2.5%的活性炭和滤液重量2.5%的白土,加热至100℃,保温30分钟,离心,过滤,滤液,滤液浓缩干燥,得到提取物B;
提取物B中多糖检测方法:采用苯酚—硫酸分光光度法测定多糖含量【高秋萍,阮红。紫心甘薯多糖提取工艺研究[J]。食品科学,2009,30(20):113-117。张惟杰。糖复合物生化研究技术(第2版)[M].杭州:浙江大学出版社,1999:105-108.】
试验结果:见表2。
表2不同工艺方法得到的提取物中多糖含量比较
试验结论:采用纤维素酶系C1_酶进行提取分离,得到多糖量最多,充分说明本发明工艺方法具有科学意义。
二、抗菌试验
试验组别:本发明马齿苋提取物(按照实施例3得到)。
试验方法:马齿苋提取物抑菌效果,以接种细菌浓度为105cfu/ml为例;
(1)抑菌片的制备
取马齿苋提取物1g,加入1,3丁二醇100mL,溶解完全备用。取干燥备用的滤纸片,置37℃温箱或室温干燥备用。(溶出性抗抑菌产品,可直接制成直径为8mm,厚不超过4mm圆片)
(2)阴性对照样片的制备
取干燥备用的滤纸片,每片滴加1,3-丁二醇20μl,干燥备用。
(3)试验菌的接种
取0.5ml浓度为5×105cfu/ml~5×106cfu/ml试验菌悬液与无菌培养皿,倒营养琼脂培养基于平板并摇匀。盖好平板,置室温干燥5min。
(4)抑菌剂样片贴放
用无菌镊子取样片贴放于平板表面,立即滴加20μl抑菌剂。每次试验贴放3个染菌平板,其中2个平板每个贴放1片试验样片,另外一个平板贴放1片阴性对照样片,贴放好后,盖好平皿,置37℃培养箱培养16~18h观察结果。用卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录。(测量抑菌环时,应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。测量其直径应以抑菌环外沿为界)。
试验结果见表3。
表3马齿苋提取物抑菌试验结果
试验结果:以上试验重复两次求平均值,同时设立空白对照。其抑菌能力大小通过抑菌圈直径来判断,由数据结果显示:本发明马齿苋提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有明显的抑制作用,但是对枯草芽孢杆菌的抑制能力最强。
本发明的马齿苋提取物单独可以作为抑菌剂或防腐剂使用,配合其他的防腐剂:如1,3-丙二醇、1,3-丁二醇、苯氧乙醇等,可以增加防腐效果。
三、刺激性试验
试验组别:同抗菌、抗炎试验。
1、人体斑贴测试;
2、抗刺激、抗过敏测试;
采用十二烷基硫酸钠,作为刺激源,来评价马齿苋提取物对十二烷基硫酸钠引发刺激的抵抗能力。
采用纯水、0.5%十二烷基硫酸钠(纯水)、0.5%十二烷基硫酸钠+5%马齿苋提取液(纯水),三组。采用斑贴试纸法。
表4封闭型斑贴试验皮肤反应评判标准
结果判定:28例受试者中出现1级皮肤不良反应的人数多于5例,或2级皮肤不良反应的人数多于2例,或出现任何1例3级或3级以上皮肤不良反应时,判定受试物对人体有皮肤不良反应。
表5封闭型斑贴皮肤反映实验测试结果
试验结论:受试物为纯水、0.5%十二烷基硫酸钠(纯水)、0.5%十二烷基硫酸钠+5%马齿苋提取液(纯水)人体斑贴试验结果显示:28例受试者皮肤28例呈阴性反应(评分等级0级),依据《化妆品卫生规范》(2007版)人体斑贴试验判断标准,受试物0.5%十二烷基硫酸钠+5%马齿苋提取液+纯水组有明显抗刺激作用。
四、抗炎实验
试验药物:
试验1组:Bioland公司制马齿苋提取物的冻结干燥粉,批号20150422。
试验2组:本发明实施例3制备得到的马齿苋提取物。
试验方法:把从老鼠身上由来的巨噬细胞RAW264(从Riken Cell Bank获取,RCB0535)为了调制成2×104cells/well在96well细胞板上进行播种,进行48小时培养。为了变成任意浓度,在溶解调制检体的培养基上交换检体,进行一晚的培养。接下来在PBS的缓冲液把调制1μg/mL的LPS(Lipopolysaccharides,大肠杆菌055:B5由来)溶液以10μL/well进行添加。6小时CO2恒温箱内静置之后,在恒温箱内产生的TNF-α量用ELISA法进行测定(eBioscience,88-7324-22)。各实验区的细胞数用Cell Counting kit(同仁化学,CK-01)进行测定,寻求每个细胞产生的TNFα产生量,评价检体及其影响。
试验结果:见表6。
表6不同马齿苋提取物抗炎试验结果
试验结论:Bioland公司制的马齿苋提取物对TNFα的产生抑制作用较弱,而本发明马齿苋提取对TNFα产生有很强抑制作用。
五、抗氧化活性测试(DPPH)
试验药物和试验材料:Bioland马齿苋提取物,实施例3马齿苋提取物,2,2-二(4-叔辛基苯基)-1-苦肼基自由基(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrical,DPPH),99.9%乙醇,5ml离心管,96孔板。
仪器设备:酶标仪。
试验方法:
DPPH测试液的配制:取DPPH0.0056g溶于40ml99.9%的乙醇中,超声5min,使其充分混匀。
样品配制:用99.9%乙醇稀释最终含马齿苋提取物分别为200μg/ml、400μg/ml l、600μg/ml、800μg/ml l、1000μg/ml。
设立样品管(T)、样品对照管(T0)、阳性对照管(C)、和阴性对照管(C0),用5ml离心管作为反应管。按照下表反应体系(表7)。
表7加样表
震荡混匀,室温下避光反应30min。将各反应液移取200ul到96孔板中,在520nm处测定光密度值(OD)。计算自由基清除率。
试验结果:见表8。
表8实验结果分析
试验结论:2个样品浓度200-1000ul的范围内对DPPH自由基均有清除能力,其中Bioland的DPPH自由基的清除能力在12%-29%间,本产品的DPPH自由基的清除能力在31%-52%间,明显高于Bioland的马齿苋提取物。
制备实施例
实施例1
(1)称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量20%的马齿苋,粉碎至40目,进行CO2超临界萃取,按照料液比1:1加入95%乙醇作为挟带剂,提取压力40MPa,提取温度50℃,分离釜I压力:8MPa,分离釜釜I温度:40℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量4倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A;
(2)取提取釜中备用马齿苋残渣,加入残渣重量4%的纤维素酶系中C_1酶,加入残渣重量10倍的注射用水,60℃下搅拌1.5小时,过滤,滤液加入滤液重量2.5%的活性炭和滤液重量2.5%的白土,加热至100℃,保温35分钟,离心,过滤,滤液,滤液浓缩干燥,得到提取物B;
(3)将提取物A和提取物B混合均匀,得到马齿苋提取物。
实施例2
(1)称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量10%的马齿苋,粉碎至40目,按照料液比1:1加入95%乙醇作为挟带剂,提取压力40MPa,提取温度50℃,分离釜I压力:8MPa,分离釜釜I温度:40℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量2倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A;
(2)取提取釜中备用马齿苋残渣,加入残渣重量2%的纤维素酶系中C_1酶,加入残渣重量8倍的注射用水,50℃℃下搅拌2.5小时,过滤,滤液加入滤液重量2.5%的活性炭和滤液重量2.5%的白土,加热至100℃,保温25分钟,离心,过滤,滤液,滤液浓缩干燥,得到提取物B;
(3)将提取物A和提取物B混合均匀,得到马齿苋提取物。
实施例3
(1)称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量15%的马齿苋,粉碎至40目,进行CO2超临界萃取,按照料液比1:1加入95%乙醇作为挟带剂,提取压力40MPa,提取温度50℃,分离釜I压力:8MPa,分离釜釜I温度:40℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量3倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A;
(2)取提取釜中备用马齿苋残渣,加入残渣重量3%的纤维素酶系中C_1酶,加入残渣重量9倍的注射用水,55℃下搅拌2小时,过滤,滤液加入滤液重量2.5%的活性炭和滤液重量2.5%的白土,加热至100℃,保温30分钟,离心,过滤,滤液,滤液浓缩干燥,得到提取物B;
(3)将提取物A和提取物B混合均匀,得到马齿苋提取物。
制备实施例包括但不限于上述。
Claims (5)
1.一种马齿苋提取物,其特征在于:其制备方法为:
称取新鲜马齿苋,放在烘箱中,在90℃条件烘烤,得到含水量10%-20%的马齿苋,粉碎至40目,进行CO2超临界萃取,按照料液比1:1加入95%乙醇作为挟带剂,提取压力40MPa,提取温度50℃,分离釜I压力:8MPa,分离釜釜I温度:40℃,分离釜II:常温常压,提取时间1h;提取釜中马齿苋残渣备用;收集分离釜I和分离釜II的萃取物,混合均匀,加入混合萃取物重量2-4倍的1,3-丁二醇,静置,取1,3-丁二醇层溶液,回收试剂至尽,干燥得到提取物A;
取提取釜中备用马齿苋残渣,加入残渣重量2%-4%的纤维素酶系中C_1酶,加入残渣重量8-10倍的注射用水,50℃-60℃下搅拌1.5-2.5小时,过滤,滤液加入滤液重量2.5%的活性炭和滤液重量2.5%的白土,加热至100℃,保温25-35分钟,离心,过滤,滤液,滤液浓缩干燥,得到提取物B;
将提取物A与提取物B合并得到马齿苋提取物。
2.根据权利要求1所述的一种马齿苋提取物在制备抗菌化妆品中的应用。
3.根据权利要求1所述的一种马齿苋提取物在制备抗炎化妆品中的应用。
4.根据权利要求1所述的一种马齿苋提取物在制备抗刺激化妆品中的应用。
5.根据权利要求1所述的一种马齿苋提取物在制备化妆品中的应用。
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