CN101343297A - 一种利用活性炭提取纯化栀子苷的方法 - Google Patents

Abstract

一种利用活性炭提取纯化栀子苷的方法，采用活性炭对栀子苷进行吸附，由于吸附的栀子苷较色素和杂质更易洗脱，因此可以起到很好的脱色和除杂效果，并且脱色、除杂一步完成。本发明包括栀子药材的浸提，活性炭吸附除色素和除杂，硅胶柱分离，结晶等工艺步骤，具有试剂成本低，操作简便，生产过程对环境无污染等优点，本发明工艺稳定，重现性好，制得栀子苷纯度高，适宜进行大规模提取和纯化。

Description

一种利用活性炭提取纯化栀子苷的方法

技术领域：

本发明属天然药物化学提纯制备技术领域，具体涉及一种从中药材栀子中提取纯化栀子苷的方法。

背景技术

我国栀子资源丰富，分布广泛，遍及十几个省市。栀子果实中含有5％左右的栀子苷。栀子苷药用功效较多，具有解热、保肝利胆的作用，并且其降压作用和抗炎镇痛作用也非常显著。动物实验显示栀子苷还具有导泻作用。最新研究表明，栀子苷可阻抑脑缺血损伤后致炎因子的表达，这对缺血性脑神经损伤具有一定的保护作用。同时栀子苷也可作为治疗肝、胆、肾疾病的新药和治疗心脑血管疾病的新药。因此利用栀子苷开发新药具有广阔的市场前景。

从栀子中直接提取分离栀子苷最大的困难是除色素，因为栀子药材中含有大量的栀子黄色素，对栀子苷的提取及纯化影响非常大，因此解决栀子苷与栀子黄色素的有效分离，是获得较纯净的栀子苷的关键。

根据目前国内的相关文献及专利报道，栀子苷的纯化，多采用大孔吸附树脂、硅胶柱层析、聚酰胺柱层析等方法，根据二者吸附力差异实现栀子苷及栀子黄色素的分离。这些方法存在着操作流程长，获得的栀子苷纯度较低的缺点，不适宜进行规模化生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简便、高效的从栀子中提取纯化栀子苷的方法。该方法不仅能够直接从栀子药材中提取栀子苷，还可以从提取栀子黄色素后的废液中提取栀子苷。该方法具有较大的应用价值。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：

1)栀子药材的浸提

取0.5Kg栀子果实为原料，进行粉碎，过10～20目筛，用体积浓度为60％～80％的乙醇常温浸提栀子药材2～3次，其中料液比为1∶10～1∶15(g/ml)，过滤，合并滤液，减压浓缩合并后的滤液；

2)活性炭吸附

在合并的滤液中加入活性炭并不断搅拌，每100ml溶液加活性炭25～45g，煮沸10～15分钟后用布氏漏斗抽滤，滤得活性炭用体积浓度为70％～90％的乙醇洗脱，其中洗脱用乙醇的量与浸提时加入乙醇的量相同；

3)硅胶柱分离

将洗脱活性炭所得的溶液浓缩成浸膏，用20～30ml甲醇溶解后与70～100g硅胶吸附拌样，再加入150～300g的硅胶干法装柱，用氯仿∶甲醇体积比3∶1～5∶1进行洗脱，收集相应的含栀子苷的流份；

4)结晶

将所收集的含栀子苷的流份蒸干，加入甲醇至完全溶解，再缓慢加入氯仿使溶液出现结晶，静置使其结晶完全，重结晶多次，可得纯度97％以上的栀子苷晶体。

本发明省略了传统工艺中利用大孔吸附树脂进行梯度洗脱，及用硅藻土等来进行脱色，用萃取来除杂等复杂操作步骤。采用了活性炭，由于活性炭对于色素及杂质的吸附力远远大于对栀子苷的吸附力，所以栀子苷较色素和杂质更易被洗脱，因此可以起到很好的脱色和除杂的效果，并且脱色、除杂可以一步完成。本发明的操作方法可以有效的减少色素等杂质对提取工艺的影响，极大地简化了操作，降低了成本，可制得纯度达到97％以上的栀子苷晶体，并且生产过程对环境无污染，具有工艺稳定性及重现性好等优点，适宜进行规模化生产。

附图说明

图1是本发明收集栀子苷柱层析液的薄层色谱示意图；图中薄层板为硅胶GF254与CMC-Na制成，其中展开剂为氯仿∶甲醇体积比3∶1，显色剂为10％的硫酸乙醇；

图2是按照本发明的方法制得样品的高效液相色谱图，其纯度为99.89％，其中横坐标为保留时间，纵坐标为信号响应值。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明作进一步详细说明。

实施例1：

1)栀子药材的浸提

取0.5Kg栀子果实为原料，进行粉碎，过10～20目筛，用体积浓度为70％的乙醇常温浸提栀子药材2～3次，其中料液比为1∶10(g/ml)，过滤，合并滤液，减压浓缩合并后的滤液；

2)活性炭吸附

在合并的滤液中加入活性炭并不断搅拌，每100ml溶液加活性炭30g，煮沸15分钟后用布氏漏斗抽滤，滤得活性炭用体积浓度为80％的乙醇洗脱，洗脱用乙醇的量与浸提时加入乙醇的量相同。

3)硅胶柱分离

将洗脱活性炭所得的溶液浓缩成浸膏，用30ml甲醇溶解后与80g硅胶吸附拌样，再加入300g硅胶干法装柱，用氯仿∶甲醇体积比4∶1进行洗脱，收集相应的含栀子苷的流份；可用硅胶GF254与CMC-Na制薄层板快速定性检测，其中展开剂为氯仿∶甲醇体积比3∶1，显色剂为10％的硫酸乙醇；(参见图1，对栀子苷标准品及所收集的含栀子苷的流份进行薄层点样。在该展开系统下，薄层板上在与栀子苷标准品相应的位置，显色后有一个紫色的点，即表明收集的流份中主要含栀子苷)

4)结晶

将所收集的含栀子苷的流份蒸干，加入甲醇至完全溶解，再缓慢加入氯仿使溶液出现结晶，静置使其结晶完全，重结晶多次，可得纯度97％以上的栀子苷晶体。

实施例2：

1)栀子药材的浸提

取0.5Kg栀子果实为原料，进行粉碎，过10～20目筛，用体积浓度为60％的乙醇常温浸提栀子药材2～3次，其中料液比为1∶13(g/ml)，过滤，合并滤液，减压浓缩合并后的滤液；

2)活性炭吸附

在合并的滤液中加入活性炭并不断搅拌，每100ml溶液加活性炭40g，煮沸12分钟后用布氏漏斗抽滤，滤得活性炭用体积浓度为70％的乙醇洗脱，洗脱用乙醇的量与浸提时加入乙醇的量相同；

3)硅胶柱分离

将洗脱活性炭所得的溶液浓缩成浸膏，用28ml甲醇溶解后与100g硅胶吸附拌样，再加入150g硅胶干法装柱，用氯仿∶甲醇体积比4∶1进行洗脱，收集相应的含栀子苷的流份；

4)结晶

将所收集的含栀子苷的流份蒸干，加入甲醇至完全溶解，再缓慢加入氯仿使溶液出现结晶，静置使其结晶完全，重结晶多次，可得纯度97％以上的栀子苷晶体。(参见图2，由高效液相色谱图分析可知，制得样品出峰单一，峰形较好，证明其纯度较高，通过计算，栀子苷纯度可达99.89％)。

实施例3：

1)栀子药材的浸提

取0.5Kg栀子果实为原料，进行粉碎，过10～20目筛，用体积浓度为65％的乙醇常温浸提栀子药材2～3次，其中料液比为1∶15(g/ml)，过滤，合并滤液，减压浓缩合并后的滤液；

2)活性炭吸附

在合并的滤液中加入活性炭并不断搅拌，每100ml溶液加活性炭25g，煮沸10分钟后用布氏漏斗抽滤，滤得活性炭用体积浓度为85％的乙醇洗脱，洗脱用乙醇的量与浸提时加入乙醇的量相同；

3)硅胶柱分离

将洗脱活性炭所得的溶液浓缩成浸膏，用25ml甲醇溶解后与70g硅胶吸附拌样，再加入200g硅胶干法装柱，用氯仿∶甲醇体积比5∶1进行洗脱，收集含栀子苷的流份；

4)结晶

将所收集的含栀子苷的流份蒸干，加入甲醇至完全溶解，再缓慢加入氯仿使溶液出现结晶，静置使其结晶完全，重结晶多次，可得纯度97％以上的栀子苷晶体。

实施例4：

1)栀子药材的浸提

取0.5Kg栀子果实为原料，进行粉碎，过10～20目筛，用体积浓度为80％的乙醇常温浸提栀子药材2～3次，其中料液比为1∶12(g/ml)，过滤，合并滤液，减压浓缩合并后的滤液；

2)活性炭吸附

在合并的滤液中加入活性炭并不断搅拌，每100ml溶液加活性炭35g，煮沸14分钟后用布氏漏斗抽滤，滤得活性炭用体积浓度为75％的乙醇洗脱，洗脱用乙醇的量与浸提时加入乙醇的量相同；

3)硅胶柱分离

将洗脱活性炭所得的溶液浓缩成浸膏，用20ml甲醇溶解后与90g硅胶吸附拌样，再加入180g硅胶干法装柱，用氯仿∶甲醇体积比4∶1进行洗脱，收集含栀子苷的流份；

4)结晶

将所收集的含栀子苷的流份蒸干，加入甲醇至完全溶解，再缓慢加入氯仿使溶液出现结晶，静置使其结晶完全，重结晶多次，可得纯度97％以上的栀子苷晶体。

实施例5：

1)栀子药材的浸提

取0.5Kg栀子果实为原料，进行粉碎，过10～20目筛，用体积浓度为75％的乙醇常温浸提栀子药材2～3次，其中料液比为1∶14(g/ml)，过滤，合并滤液，减压浓缩合并后的滤液；

2)活性炭吸附

在合并的滤液中加入活性炭并不断搅拌，每100ml溶液加活性炭45g，煮沸11分钟后用布氏漏斗抽滤，滤得活性炭用体积浓度为90％的乙醇洗脱，洗脱用乙醇的量与浸提时加入乙醇的量相同；

3)硅胶柱分离

将洗脱活性炭所得的溶液浓缩成浸膏，用23ml甲醇溶解后与85g硅胶吸附拌样，再加入260g硅胶干法装柱，用氯仿∶甲醇体积比3∶1进行洗脱，收集含栀子苷的流份；

4)结晶

将所收集的含栀子苷的流份蒸干，加入甲醇至完全溶解，再缓慢加入氯仿使溶液出现结晶，静置使其结晶完全，重结晶多次，可得纯度97％以上的栀子苷晶体。

Claims (1)

1、一种利用活性炭提取纯化栀子苷的方法，其特征在于：

1)栀子药材的浸提

取0.5Kg栀子果实为原料，进行粉碎，过10～20目筛，用体积浓度为60％～80％的乙醇常温浸提栀子药材2～3次，其中料液比为1∶10～1∶15(g/ml)，过滤，合并滤液，减压浓缩合并后的滤液；

2)活性炭吸附

在合并的滤液中加入活性炭并不断搅拌，每100ml溶液加活性炭25～45g，煮沸10～15分钟后用布氏漏斗抽滤，滤得活性炭用体积浓度为70％～90％的乙醇洗脱，其中洗脱用乙醇的量与浸提时加入乙醇的量相同；

3)硅胶柱分离

将洗脱活性炭所得的溶液浓缩成浸膏，用20～30ml甲醇溶解后与70～100g硅胶吸附拌样，再加入150～300g的硅胶干法装柱，用氯仿∶甲醇体积比3∶1～5∶1进行洗脱，收集相应的含栀子苷的流份；

4)结晶

将所收集的含栀子苷的流份蒸干，加入甲醇至完全溶解，再缓慢加入氯仿使溶液出现结晶，静置使其结晶完全，重结晶多次，可得纯度97％以上的栀子苷晶体。

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