CN101342243B - 治疗奶牛乳腺炎中药透皮软膏及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及兽药技术领域，公开了一种治疗奶牛乳腺炎的中药外用透皮软膏及其制备方法，其主要由蒲公英、黄芩、连翘的提取物(25-40％)、透皮促渗剂(1-6％)及药物基质(74-54％)组成，制成分散均匀的油/水(O/W)型乳膏剂。采用涂抹外用透皮吸收的给药方式治疗奶牛乳腺炎，该制剂能透过皮肤在乳腺中产生局部治疗作用，具有给药方便、抗菌消炎效果好、无毒、无刺激性和过敏反应等优点，既可避免口服、肌注及乳池灌注给药的弊端，又可克服应用抗生素治疗引起的残留、细菌耐药等不良反应。临床治疗实验的结果表明，透皮乳膏制剂对临床型乳腺炎和隐性乳腺炎均有良好的治疗效果，不影响乳的质量。

Description

治疗奶牛乳腺炎中药透皮软膏及其制备方法

(一)技术领域

本发明涉及的是一种兽用药品，具体地说是一种治疗奶牛乳腺炎的中药透皮软膏。

(二)背景技术

奶牛乳腺炎是奶牛最常发.治愈最困难.危害最严重的疾病之一。造成治疗费用增加、产奶量下降、母牛过早淘汰等，已严重阻碍了奶业的顺畅发展。世界各地均把抗生素列入治疗乳腺炎的首选药物，由于长期反复使用，细菌耐药性增多而降低疗效，且药物残留造成废弃奶增加。随着社会的发展与进步，要求“无抗生素奶”的呼声日见高涨。因此研制开发高效低毒.低残留的防治奶牛乳腺炎的有效药物是提高牛奶质量，增强国际竞争力、保障人民身心健康的重要技术基础。

中药是我国独特的药源，药效确实，价廉易得，其对动物的作用是原药材的药用与营养价值的有机统一。目前用于防治奶牛乳房炎的中药多通过口服、肌注或乳池灌注给药。口服给药起效慢，且存在肝脏的首过效应；乳池灌注对乳房有刺激，对动物会有应激反应，操作也不方便；肌肉注射也会产生应激反应，而应用中药透皮吸收制剂防治奶牛乳腺炎国内外尚未见报道。采用涂抹外用透皮吸收的给药方式，可避免口服、肌注及乳池灌注给药的弊端，且不影响乳的品质，特别适合集约化饲养条件下的疫病防治。具有高效低毒、细菌不易产生耐药性、无残留、无应激和使用方便等优点；具有极广阔的市场前景。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种具有无毒、无残留、无刺激性、无过敏反应等优点，还不影响乳的质量的治疗奶牛乳腺炎中药透皮软膏。本发明的目的还在于提供一种治疗奶牛乳腺炎中药透皮软膏的制备方法。

本发明的目的是这样实现的：

本发明的治疗奶牛乳腺炎中药透皮软膏是由重量比为蒲公英、连翘和黄芩的提取物25-45％、透皮促渗剂1—6％及药物基质54-74％组成，所述的蒲公英、连翘、黄芩的比例为1-3：1：1。患病乳区用温水清洗干净后，每个乳区涂抹中药透皮软膏10—15g，一天2次，5天为一个疗程。

本发明的中药透皮软膏是采用这样的方法来制作的：

首先提取蒲公英、黄芩和连翘的有效成分，蒲公英、黄芩采用水提醇沉法提取，连翘采用蒸馏法和水提醇沉法相结合的方法提取，制成各自溶液含生药量均为1g·mL^-1，然后按蒲公英、连翘、黄芩1-3：1：1的比例混合蒲公英、黄芩与连翘的提取物；

按比例称取油相各药物基{由硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、白凡士林、液体石蜡按(4-6)：(2-3)：2：5比例组成}和透皮促渗剂置水浴上加热熔化，70-80℃水浴保温；另取水相各药物基质[油相药物基质；水相药物基质由乙醇胺、尼泊尔金乙酯、蒸馏水按(20-25)：1：200比例组成]及蒲公英、连翘、黄芩提取液混溶后水浴加热至70-80℃，将上述水相缓缓加入油相溶液中，边加边向一个方向搅拌，3000r·min^-1搅拌乳化5min，冷凝即得。

经实验证明本发明的透皮软膏具有如下特点：

1.本发明的产品是由中药提取物制成中药制剂，具有抗生素、化学合成抗菌剂等药物无法比拟的优点，细菌不易产生耐药性，乳中不易产生药物残留。

2.本发明产品采用涂抹外用，药物可以透皮吸收到达乳腺实现局部的治疗作用，避免了其他给药途径的弊端，无应激，操作简单，开辟了中药透皮制剂治疗乳牛临床型乳腺炎的先河。

3.体内外药效学试验的结果证明，本发明的透皮软膏对引起奶牛乳腺炎的主要致病菌如大肠杆菌、葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌等具有较好的体外抗菌活性；对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和棉球诱发小鼠肉芽组织增生有较好的抑制作用；对临床型乳腺炎和隐性乳腺炎的疗效确实。

4.急性毒性试验的结果表明，本发明的透皮软膏为实际无毒物质；安全性试验结果证明，本发明的中药透皮软膏无致敏性、无刺激性，为较理想的外用制剂。

5.以高效液相色谱法研究了本发明产品在奶牛血及乳中的药动学特征，试验结果证明：经患病乳区局部涂擦本发明产品后，血浆中未能检测到软膏中的主要成分黄芩苷和连翘苷，黄芩苷和连翘苷两种有效成分在牛乳中的代谢过程均属于一级吸收一室开放模型，经药动学参数分析表明两种效成分在乳房局部有缓释作用，吸收速率缓慢，吸收程度高，消除较慢，说明中药透皮制剂可以充分发挥局部治疗作用。

中药透皮软膏的上述特点是通过下列试验得出的：

1.中药复方提取液的体外抑菌试验

采用试管二倍稀释法研究了复方提取液对四种主要病原菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌、停乳链球菌)临床分离株的体外抑菌活性，结果表明：中药复方提取液对四种主要病原菌的最低抑菌浓度(MIC)值分别为7.82mg·mL^-1、62.5mg·mL^-1、7.82mg·mL^-1、31.25mg·mL^-1，具有较好的体外抗菌活性。

2.中药复方提取液的抗炎作用试验

研究了高、中、低三个剂量中药透皮软膏对急、慢性炎症的抑制作用。结果表明，中药透皮软膏对棉球诱发小鼠肉芽组织增生的抑制率，高、中、低三个剂量组分别为37.71％、27.41％、19.63％。对小鼠耳廓的肿胀抑制率，高、中、低三个剂量组分别为27.62％、17.33％、12.95％。具有良好的抗炎作用。

3.中药透皮软膏的透皮作用研究

首先制备离体鼠皮，药物的透皮试验采用RYJ-6A药物透皮扩散仪进行，内径为1.8cm，接受池为6mL，试验温度为(35±1)℃，电磁搅拌速度为100r·min^-1。释放池一端用离体鼠皮覆盖，用缝合线扎紧，使皮肤角质层朝向管内，在管内加中药制剂3g；接受池内加6mL生理盐水，使鼠皮与接受液面接触，在(35±1)℃条件下，连续搅拌，分别于加样后0.5h、1h、2h、4h取样0.5mL，用于主要成分黄芩苷、连翘苷和咖啡酸透皮量的测定。每次取样后补加生理盐水0.5mL，采用高效液相色谱(HPLC)法测定加样后不同时间接受液中咖啡酸、黄芩苷和连翘苷的含量，然后计算累计透皮量，并确定药物透皮量与透皮促渗剂的相关性。

HPLC法测定咖啡酸的体外透皮量结果表明：中药软膏在促渗剂含量为4％时，三种主要成分的渗透效果最好，咖啡酸、黄芩苷和连翘苷4小时的累计透皮量分别达到了375.21μg、308.48μg和60.12μg。三种主要成分渗透量不随着透皮促渗剂含量增加而增加。

4.中药透皮软膏对临床型乳腺炎的治疗试验

实验动物选自阎家岗农场和哈尔滨市综合牧场两个奶牛场的临床型乳腺炎患病奶牛，症状为乳腺患病区红、肿，表面温度升高，触之敏感，体积增大，泌乳量显著减少或停止，乳汁质量异常，呈浅黄或浅红色，乳汁稀薄或粘稠，或出现絮状物。出现此类症状的牛可作为本试验治疗对象，但伴有严重全身感染症状的病牛除外。符合上述标准的共有62例病牛，108个乳区。随机分为两组，中药软膏治疗组为43头72个乳区，恩诺沙星对照组为19头牛36个乳区。

中药软膏治疗组在用药前用温水清洗病牛乳区，用干毛巾擦干后，每个乳区涂抹中药复方软膏10—15g，一天2次，5天为一个疗程。5％恩诺沙星组在挤奶后，用0.5％恩诺沙星50mL灌注乳区，上、下午各1次，5天为一个疗程。病情严重的病例可连续用药2个疗程观察治疗效果。根据临床症状和乳汁质量的改变综合判断药物的疗效，并计算治愈率、有效率和无效率。

治愈：乳区红、肿、热、痛消失，乳汁肉眼观察正常和产奶量恢复，精神、食欲正常。

有效：乳区红、热、痛明显减轻，乳汁絮状物基本消失或明显减少，产奶量回升。

无效：两个疗程后，乳腺红、肿、热、痛仍无明显减轻，乳汁仍清稀或发黄，絮片仍较明显，或在治疗过程中病程未减而改用其他方法治疗者。

中药软膏用于临床的治疗效果见下表，中药软膏的治愈率和有效率分别为90.3％和95.8％，达到了良好的治疗效果。中药软膏治疗组在1个疗程完全治愈的病例为40头58个乳区，占治愈数的89.2％，但未治愈病例临床症状明显减轻。而恩诺沙星组病例在1个疗程完全治愈的病例为16头26个乳区，占治愈数的83.9％。

中药软膏的临床疗效

5.中药透皮软膏的药动学特征研究

以4头患临床型乳腺炎的奶牛为试验动物，在患病乳区局部涂擦中药复方透皮制剂后，分别采集不同时间点的血浆和牛乳样品，采用反相高效液相色谱法测得不同时间点血浆与牛乳中的药物浓度，以MCPKP自动化药动学程序分析数据。试验结果表明，经患病乳区局部涂擦中药复方透皮制剂后，血浆中未能检测到两种有效成分。黄芩苷和连翘苷在牛乳中的药-时数据分析结果表明，两种有效成分在牛乳中的代谢过程属于一级吸收一室开放模型，黄芩苷的主要药动学参数为：T_max＝4.9392h、C_max＝2.8399μg·mL^-1、t_1/2ka＝1.803h、AUC＝27.32mg·L^-1·h^-1、t_1/2k＝3.0520h、T_CP＝28.319h；连翘苷的主要药动学参数为：T_max＝3.6799h、C_max＝0.4922μg·mL^-1、t_1/2ka＝2.1158h、AUC＝4.1015mg·L^-1·h^-1、t_1/2k＝2.0386h、TCP＝14.525h。

在患病乳区局部涂擦中药复方透皮制剂后，两种有效成分在乳房局部有缓释作用，吸收速率缓慢，吸收程度高，消除较慢，可以充分发挥在乳房局部的治疗作用。

6.中药透皮软膏的急性毒性试验

采用Karber法测得中药复方提取液对小鼠的LD₅₀为7332mg·kg^-1，中药复方提取液LD₅₀的95％可信限为6738-7980mg·kg^-1，远大于5000mg·kg^-1，为实际无毒物质。

7.中药透皮软膏的安全性试验

分别以白色家兔和豚鼠为试验动物研究了中药软膏对皮肤的刺激性和过敏性，试验结果可知：中药软膏外用时，对家兔完整皮肤、破损皮肤未发现明显红斑和水肿反应，刺激平均分值小于0.5，属于无刺激物质。中药软膏组豚鼠未出现红斑、水肿等过敏性症状，致敏率为0％，属于弱致敏物。

Claims (3)

1.一种治疗奶牛乳腺炎中药透皮软膏，其特征是：它是由重量比为蒲公英、连翘和黄芩的提取物25-40％、透皮促渗剂1-6％及药物基质54-74％组成；所述的蒲公英、连翘和黄芩的提取物是：蒲公英、黄芩采用水提醇沉法提取，连翘采用蒸馏法和水提醇沉法相结合的方法提取，制成各自溶液含生药量均为1g·mL^-1，然后按蒲公英、连翘、黄芩的比例为1-3∶1∶1的比例混合得到的蒲公英、黄芩与连翘的提取物。

2.根据权利要求1所述的治疗奶牛乳腺炎中药透皮软膏的制备方法，其特征是：

首先提取蒲公英、黄芩和连翘的有效成分，蒲公英、黄芩采用水提醇沉法提取，连翘采用蒸馏法和水提醇沉法相结合的方法提取，制成各自溶液含生药量均为1g·mL^-1，然后按蒲公英、连翘、黄芩的比例为1-3∶1∶1的比例混合蒲公英、黄芩与连翘的提取物；

将油相药物基质和透皮促渗剂置水浴上加热熔化，70-80℃水浴保温；另取水相各药物基质及蒲公英、连翘、黄芩提取液混溶后水浴加热至70-80℃，将上述水相缓缓加入油相溶液中，边加边向一个方向搅拌，3000r·min^-1搅拌乳化5min，冷凝即得。

3.根据权利2所述的治疗奶牛乳腺炎中药透皮软膏的制备方法，其特征是：所述的油相药物基质由硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、白凡士林、液体石蜡按4-6∶2-3∶2∶5的重量比例组成；所述的水相药物基质由乙醇胺、尼泊尔金乙酯、蒸馏水按20-25∶1∶200的重量比例组成。