CN105395527A - 一种海洋生物护伤喷膜剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种海洋生物护伤喷膜剂的制备方法，属于中医药技术领域。其包括如下工艺步骤1）称取原料：壳聚糖、壳寡糖、乳酸、芦荟水提物、黄芪、白芷、儿茶、金银花；2）制备中药浓缩液；3）制备芦荟水提物；4）将壳聚糖、壳寡糖、乳酸及芦荟水提物加入中药浓缩液中，搅拌至壳聚糖、壳寡糖以及芦荟水提物完全溶解，得混合液；5）将混合液浓缩后装在喷射瓶中，安好瓶盖，经钴-60照射杀菌，得喷膜剂。本发明方法制得的喷膜剂与现有技术相比具有更强的杀菌、抗感染能力，其促进创面生长修复，缩短愈合时间，消除创面周围色素沉着，抑制疤痕形成的能力更强。

Description

一种海洋生物护伤喷膜剂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种用于皮肤创口愈合的中药组合物，具体涉及一种海洋生物护伤喷膜剂的制备方法，属于中医药技术领域。

背景技术

皮肤是人体最大的器官，他包裹在人体整个表面，并与消化、呼吸、泌尿、生殖系统外口的粘膜上皮相连接，从而构成人体最理想的外衣，保护内脏和预防外界各种因素的侵袭。

但由于它处于人体的最外层，所以日常生活会受到撕咬、挤压、摩擦、摔碰等情况是很难避免的。通常会出现割伤、抓伤、瘀血、砸伤、挤伤、擦伤、裂伤、刺伤、蚊虫咬伤、烧烫等伤情，在医院中还有褥疮、手术伤口等外伤，出现这些伤情后，必须及时处理，否则会由于病原细菌的侵入发生化脓性感染，也会造成局部出现红、肿、热、痛和功能障碍，严重时由于细菌及毒素进入血液循环可引起毒血症、败血症及破伤风等病症，会造成十分严重的后果。

中国发明专利，专利号201210178375.8，本发明公开了一种用于外伤愈合的组合物及其喷膜剂，该喷膜剂由质量体积百分比为：壳聚糖0.5%-4%、壳寡糖0.5%-3%、乳酸0.5%-5%、芦荟水提物3%-10%，其余为水的原料制成。该组合物具有止血并止痛，同时具有活化细胞、修复受损细胞的功效，促进组织的修复与再生，促进伤口快速愈合，又不产生疤痕，与皮肤有良好的相容性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是在上述现有技术的基础上开发一种新的中药组合物，并适合制备成喷膜剂，使其对皮肤的各种创口的治愈率更高，治愈后瘢痕轻微，适用范围更广。

为解决该技术问题，发明人以现有技术为基础，结合祖国传统医学经验和理论，进行反复的动物学实验，提供了一种新的中药组合物。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

一种海洋生物护伤喷膜剂，由以下原料制备而成：壳聚糖、壳寡糖、乳酸、芦荟水提物、黄芪、白芷、儿茶、金银花。

作为优选，所述的海洋生物护伤喷膜剂由以下重量份的原料制备而成：壳聚糖1-12份、壳寡糖1-12份、乳酸1-12份、芦荟水提物1-16份、黄芪1-12份、白芷1-12份、儿茶1-12份、金银花1-12份。

作为优选，所述的海洋生物护伤喷膜剂由以下重量份的原料制备而成：壳聚糖3-8份、壳寡糖2-6份、乳酸2-8份、芦荟水提物2-6份、黄芪3-6份、白芷3-6份、儿茶6-12份、金银花2-8份。

作为优选，所述的海洋生物护伤喷膜剂由以下重量份的原料制备而成：壳聚糖6份、壳寡糖4份、乳酸4份、芦荟水提物4份、黄芪4份、白芷4份、儿茶8份、金银花4份。

作为优选，所述的海洋生物护伤喷膜剂由以下重量份的原料制备而成：壳聚糖8份、壳寡糖4份、乳酸8份、芦荟水提物6份、黄芪6份、白芷6份、儿茶8份、金银花8份。

作为优选，所述的海洋生物护伤喷膜剂由以下重量份的原料制备而成：壳聚糖6份、壳寡糖6份、乳酸3份、芦荟水提物3份、黄芪3份、白芷3份、儿茶6份、金银花3份。

一种制备所述的海洋生物护伤喷膜剂的方法，包括以下步骤：

1）按重量份配比分别称取壳聚糖、壳寡糖、乳酸、芦荟水提物、黄芪、白芷、儿茶、金银花；

2）将黄芪、白芷、儿茶、金银花粉碎后混匀，加入6-12倍重量的纯化水，浸泡6-24小时，回流煎煮1-2小时，过滤，得滤液；再加入4-8倍重量的纯化水，回流煎煮1-2小时，过滤，合并两次滤液，浓缩至原体积的1/3-1/2，得中药浓缩液，备用；

3）将芦荟粉加入纯化水中，升温至60±2℃搅拌提取2-3小时，过滤，滤液经浓缩、干燥，得芦荟水提物；

4）将壳聚糖、壳寡糖、乳酸及步骤3）所得芦荟水提物加入步骤2）所得的中药浓缩液中，搅拌至壳聚糖、壳寡糖以及芦荟水提物完全溶解，得混合液；

5）将步骤4）所述混合液浓缩后装在喷射瓶中，安好瓶盖，经钴-60照射杀菌，得喷膜剂。

本发明中：壳聚糖和壳寡糖是甲壳素的衍生物，尤其是大分子壳聚糖成膜性能明显，这种膜有良好的透气和防水渗透作用，并可吸收创伤面分泌的液体。具有能杀死导致感染的葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌等病原菌的功能，所以能预防感染、抗感染；具有止血止痛的作用；具有活化细胞、修复受损细胞，促进组织的修复与再生；能促进伤口快速愈合，又不产生疤痕，与皮肤有良好的相容性。

芦荟活性物质：是从芦荟中提取来的，安全无毒，芦荟活性物质是皮肤天然保护剂，可给皮肤提供营养物质；具有杀菌、消炎作用；有止痛作用；有保湿作用；能激活细胞，修复受损的细胞促进伤口愈合。

乳酸：是一种有机酸，人体在代谢和运动的过程中会不断地产生乳酸，所以乳酸是安全无毒的。乳酸最大作用是壳聚糖的溶解剂，它能溶解壳聚糖并使壳聚糖带有正电荷，是皮肤固有的天然保湿因子，能与皮肤很好的结合，提高伤口愈合速度，对皮肤有保护作用。

黄芪：味甘，性温。归肺、脾经。补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌。黄芪体外抑菌试验：对志贺氏痢疾杆菌、炭疽杆菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、白喉杆菌、假白喉杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、枯草杆菌等均有抑制作用。

白芷：味辛，性温。归胃、大肠、肺经。散风除湿，通窍止痛，消肿排脓。现代药理学实验证实，黄芪具有：1.抗炎作用：小鼠灌胃白芷或杭白芷煎剂（lg相当生药lg）4g/kg，可明显抑制二甲苯所致小鼠耳部的炎症（P＜0.01）。2.解热镇痛作用：用蛋白胨皮下注射于大白兔背部造成的高热动物模型，1g白芷或杭白芷煎剂15g/kg，有明显的解热作用。小鼠灌胃白芷或杭白芷煎剂8g/kg，对腹腔注射1%醋酸（0.l/kg）所致的小鼠扭体次数明显减少，作用与氨基比林8mg/kg类似，P＜0.001。小白鼠热板法试验，给药前痛阈在30分钟以内者，灌胃给于白芷或杭白芷8g/kg，给药后60分钟，白芷及抗白芷对痛阈值明显提高，与生理盐水组比较P＜0.001和0.01。3.解痉作用：本品所含的佛手柑内酯、花椒毒素、异欧前胡素乙对兔回肠具有明显的解痉作用。异欧前胡素还能增加兔子宫的收缩力和蚯蚓肌的紧张性。东莨菪素对雌激素或氯化钡所致在体或离体大鼠子宫痉挛有解痉作用，其ED50为0.09mg/kg。4.抗菌作用：白芷煎剂对大肠杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、绿脓杆菌、霍乱弧菌、人型结核杆菌等均有抑制作用。本品所含的氧前胡素体外试验对11种菌株有抗菌作用；欧前胡素亦有抗菌作用花椒毒素；对人型结核杆菌H37RV的MIC为100mc/ml。水浸剂对奥杜盎氏小芽胞癣菌等致病真菌也有一定抑制作用。

儿茶：性味苦、涩，微寒。归肺经。收湿生肌敛疮。用于溃疡不敛，湿疹，口疮，跌扑伤痛，外伤出血。现代药理学实验证实：儿茶煎剂对金黄色葡萄球菌、白喉杆菌、变形杆菌、福氏痢疾杆菌及伤寒杆菌均有抑制作用；对于常见治病性皮肤真菌亦有抑制作用。其叶的提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑制作用。

金银花：味甘，寒性。归肺、心、胃经。清热解毒，凉散风热。现代药理学实验证实，金银花具有以下作用：1.抗病原微生物作用：体外实验表明，花和藤对多种致病菌如金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌等均有一定抑制作用，对肺炎球菌、脑膜炎双球菌、绿脓杆菌，结核杆菌亦有效。水浸剂比煎剂作用强，叶煎剂比花煎剂作用强。若和连翘合用，抗菌范围还可互补；与青霉素合用，能加强青霉素对耐药金黄色葡萄球菌的抗菌作用，这可能是在抑制细菌体内蛋白质合成上有协同的作用。有人认为绿原酸和异绿原酸是金银花主要的抗菌有效成分。另有实验证明木犀草素也有较强的抗菌作用。本品水浸剂在体外对铁锈色小芽胞癣菌、星形奴卡氏菌等皮肤真菌有不同程度的抑制作用。金银花水煎剂（1：20）在人胚肾原单层上皮细胞组织培养上，对流感病毒、孤儿病毒、疱疹病毒有抑制作用。藤的水溶液也有延缓孤儿病毒所致的细胞致病的作用。试管实验表明金银花及其藤的煎剂，对钩端螺旋体均有抑制作用。用忍冬藤和千里光配伍，作腹腔注射和皮下注射，据称有治疗兔和预防钩藤螺旋体病的效果。腹腔注射金银花注射液7.5g/kg，能使接受LD90的绿脓杆菌内毒素或绿脓杆菌的小鼠存活半数以上。静脉注射金银花蒸馏液6g/kg，对绿脓杆菌内毒素中毒的兔有治疗作用。未治疗的动物体温和白细胞总数明显下降，白细胞有核左移现象而给药组动物体温略有升高，白细胞虽有增加但分类没有明显变化，且静脉注射给予金黄注射液（金银花黄芩等量制成）7.5g/kg，对家兔绿脓杆菌内毒素中毒也有一定对抗作用，可减轻中毒症状和死亡数。2.抗炎和解热作用：腹腔注射金银花提取液0.25g/kg，能抑制大鼠角叉菜胶性脚肿。另有报道金银花注射液30-40g/kg能减轻蛋清性脚肿程度。腹腔注射金银花提取液8g/kg，2次/天，连续6天，对大鼠巴豆油性肉芽囊，也有明显抗渗出和抗增生的作用。早期报道金银花具有明显的解热作用，但用霍乱菌苗、马铃薯杆菌、枯草浸液等给家兔耳静脉注射，致热，未证实金银花煎剂5g/kg灌胃有退热作用，认为这可能和使用的金银花制剂、剂量或家兔的耐受性不同有关。3.加强防御机能作用：金银花煎剂稀释至1：1280的浓度，仍能促进白细胞的吞噬功能。小鼠腹腔注射金银花注射液，也有明显促进炎性细胞吞噬功能的作用。4.中枢兴奋作用：经电休克、转笼等多种实验方法证明口服绿原酸后，可引起大鼠、小鼠等动物中枢神经系统兴奋，其作用强度为咖啡因的1/6，二者合用无相加及增强作用。5.降血脂作用：大鼠灌胃金银花2.5g/kg能减少肠内胆固醇吸收，降低血浆中胆固醇含量。体外实验也发现金银花可和胆固醇相结合，但四妙勇安汤（金银花、玄参、当归、甘草）治疗家兔实验性动脉粥样硬化。未观察到有降血脂和主动脉壁胆固醇含量的作用。6.抗内毒素：用鲎试验法测定内毒素含量，300%金银花（忍冬）注射液以1：2-1：64稀释，体外试验无论用凹片法或试管法，均明显降低试液中的内毒素含量，其中1：2-1：8的稀释管与阴性对照管一样呈液态，阳性对照呈凝胶状。金银花（忍冬）蒸馏液6g/kg静脉注射，对绿脓杆菌内毒互2.8mg/kg静脉注射引起的兔体温下降及白细胞数下降有对抗作用，金银花（忍冬）蒸馏液7.5g/kg或注射液2.5g/kg腹腔注射，对绿脓杆菌内毒素65mg/kg腹腔注射的小鼠有保护作用，减少小鼠死亡率。7.其它作用：曾有体外筛选实验报告金银花的水及酒浸液对肉瘤180及艾氏腹水癌有明显的细胞毒作用。金银花提取物口服对大鼠实验性胃溃疡有轻度预防效果。口服大剂量绿原酸能增加胃肠蠕动，促进胃液及胆汁分泌。绿原酸及其分解产物对大鼠离体子宫有兴奋作用。此外，绿原酸还能轻微增强肾上腺素及其去甲肾上腺素对猫和大鼠的升压作用，但对猫的瞬膜反应无影响。

本发明喷膜剂用途及使用方法：

本发明用途广泛，包含但不限于以下用途：

1.烧伤创面：清创并除去坏死组织，直接用本发明喷膜剂喷洒于创面及周围1-2cm，再用其他无菌敷料覆盖或不覆盖。每天观察伤口，若无积液，可2-3天换药一次；若伤口红肿或渗出物较多，需及时清创换药。换药时用生理盐水将创面和周围皮肤清洗干净，再重新喷洒本发明喷膜剂。创面上皮化后继续喷洒本发明喷膜剂，1-2次/日。小型创面可直接喷在伤口，2次/日。

2.剖宫产/经腹手术修复创面：切口缝合后，以生理盐水将切口清洗干净，直接喷洒本发明喷膜剂于切口及切口周围1-2cm，再用其他无菌敷料覆盖。创面如需换药时，用生理盐水清创，重新喷洒本发明喷膜剂后包扎。抑制疤痕：拆线后继续喷洒切口及切口周围，不必用敷料覆盖，1-2次/日。可消除切口周围色素沉着，抑制疤痕形成。

3.减轻妊娠纹：产褥期及产褥期后持续喷洒腹壁、大腿等部位，配合适当局部按摩，促进腹壁回缩，防止腹壁松弛，减轻妊娠纹。每天喷洒本发明喷膜剂1-2次，喷洒前用生理盐水或温水将喷洒部位皮肤清洗干净。

4.会阴侧切：切口缝合后，以生理盐水将切口清洗干净，喷洒本发明喷膜剂，可保护创面，防止尿液、粪液污染创面；抑菌杀菌抗感染，促进愈合，缩短愈合时间，使用方便。每次大小便后清洗外阴后喷洒1次，每晚临睡前清洗外阴后喷洒1次，喷洒时用生理盐水或温水将切口和切口周围皮肤清洗干净，再喷洒本发明喷膜剂。

5.新生儿脐部、臀部护理：用本发明喷膜剂喷洒在脐部、臀部，预防或治疗因腹泻、尿布等原因引起的局部皮肤红肿、渍烂、溃疡等皮肤问题。清洗后喷洒，1-2次/日。

6.手术切口和伤口：切口缝合后，以生理盐水清洗切口或伤口，用本发明喷膜剂喷洒切口及切口周围1-2cm，再用无菌敷料覆盖。如需换药时，用生理盐水清洗创面和口周围皮肤，再重新喷洒本发明喷膜剂后包扎。拆线后继续用本发明喷膜剂喷洒切口及切口周围，可消除切口周围色素沉着，抑制疤痕形成，1-2次/日。

7.造口护理：（回结肠造口，泌尿造口）清洗：用本发明喷膜剂由内向外喷洒造口及周围皮肤，每天1-2次。既杀菌消毒，又避免使用皂液或消毒液造成的造口干燥、损伤。护肤：用本发明喷膜剂喷洒在造口及周围皮肤，预防或治疗因粪液、尿液长时间浸渍引起的皮肤发红、肿痛，甚至溃疡等皮肤问题，每天1次。止痒：用本发明喷膜剂喷洒在造口及其周围皮肤，止痒。

8.褥疮的预防与治疗：预防褥疮，对病人实施褥疮护理时，将本发明喷膜剂喷洒在褥疮高发处，1-2次/日。不需用敷料覆盖。

与现有技术相比，本发明涉及的生物护伤喷膜剂具有如下优点和显著的进步：

（1）本发明喷膜剂具有更强的杀菌，抗感染能力，用途广泛，适用范围更广。

（2）本发明喷膜剂可促进创面生长修复，缩短愈合时间，消除创面周围色素沉着，抑制疤痕形成。

（3）本发明喷膜剂具有治愈率更高，止血止痛迅速的优点。

（4）本发明喷膜剂可促进组织的修复与再生，促进伤口快速愈合，愈合后瘢痕轻微，甚至不留瘢痕。

本发明的另一个目的是提供海洋生物护伤喷膜剂制备方法中所述组合物在制备治疗护伤药物中的应用。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

实施例1：

一种海洋生物护伤喷膜剂，由以下原料制备而成：壳聚糖6kg、壳寡糖4kg、乳酸4kg、芦荟水提物4kg、黄芪4kg、白芷4kg、儿茶8kg、金银花4kg。

制备工艺：

1）按上述重量准确称量壳聚糖、壳寡糖、乳酸、芦荟水提物、黄芪、白芷、儿茶和金银花。

2）将黄芪、白芷、儿茶、金银花粉碎后混匀，加入10倍重量的纯化水，浸泡12小时，回流煎煮1.5小时，过滤，得滤液；再加入5倍重量的纯化水，回流煎煮1小时，过滤，合并两次滤液，浓缩至原体积的1/2，得中药浓缩液，备用；

3）将芦荟粉加入纯化水中，升温至60±2℃搅拌提取2小时，过滤，滤液经浓缩、干燥，得芦荟水提物；

4）将壳聚糖、壳寡糖、乳酸及步骤3）所得芦荟水提物加入步骤2）所得的中药浓缩液中，搅拌至壳聚糖、壳寡糖以及芦荟水提物完全溶解，得混合液；

5）将步骤4）所述混合液浓缩后装在喷射瓶中，安好瓶盖，经钴-60照射杀菌，得喷膜剂。

实施例2：

一种海洋生物护伤喷膜剂，由以下原料制备而成：壳聚糖8kg、壳寡糖4kg、乳酸8kg、芦荟水提物6kg、黄芪6kg、白芷6kg、儿茶8kg、金银花8kg。

制备工艺：

1）按上述重量准确称量壳聚糖、壳寡糖、乳酸、芦荟水提物、黄芪、白芷、儿茶和金银花。

2）将黄芪、白芷、儿茶、金银花粉碎后混匀，加入8倍重量的纯化水，浸泡12小时，回流煎煮2小时，过滤，得滤液；再加入6倍重量的纯化水，回流煎煮1小时，过滤，合并两次滤液，浓缩至原体积的1/3，得中药浓缩液，备用；

3）将芦荟粉加入纯化水中，升温至60±2℃搅拌提取2小时，过滤，滤液经浓缩、干燥，得芦荟水提物；

4）将壳聚糖、壳寡糖、乳酸及步骤3）所得芦荟水提物加入步骤2）所得的中药浓缩液中，搅拌至壳聚糖、壳寡糖以及芦荟水提物完全溶解，得混合液；

5）将步骤4）所述混合液浓缩后装在喷射瓶中，安好瓶盖，经钴-60照射杀菌，得喷膜剂。

实施例3：

一种海洋生物护伤喷膜剂，由以下原料制备而成：壳聚糖6kg、壳寡糖6kg、乳酸3kg、芦荟水提物3kg、黄芪3kg、白芷3kg、儿茶6kg、金银花3kg。

制备工艺：

1）按上述重量准确称量壳聚糖、壳寡糖、乳酸、芦荟水提物、黄芪、白芷、儿茶和金银花。

2）将黄芪、白芷、儿茶、金银花粉碎后混匀，加入8倍重量的纯化水，浸泡12小时，回流煎煮1小时，过滤，得滤液；再加入4倍重量的纯化水，回流煎煮1.5小时，过滤，合并两次滤液，浓缩至原体积的1/3，得中药浓缩液，备用；

3）将芦荟粉加入纯化水中，升温至60±2℃搅拌提取2小时，过滤，滤液经浓缩、干燥，得芦荟水提物；

4）将壳聚糖、壳寡糖、乳酸及步骤3）所得芦荟水提物加入步骤2）所得的中药浓缩液中，搅拌至壳聚糖、壳寡糖以及芦荟水提物完全溶解，浓缩，得混合液；

5）将步骤4）所述混合液浓缩后装在喷射瓶中，安好瓶盖，经钴-60照射杀菌，得喷膜剂。

实验例1：本发明喷膜剂的皮肤刺激实验

1、实验方法

将豚鼠背部脊柱两侧将脱毛剂均匀涂上，使去毛范围约20cm²。洗净脱毛剂，归笼观察24小时，一组豚鼠在脱毛区分别喷涂抹本发明实施例1生产的喷膜剂，分别含原料0.3g、0.6g和1.2g，另一组涂溶媒0.8ml每日二次，连续一周，实验结束后，将豚鼠处死，心，肝，肾及脱毛皮肤做病理检验。

2、结果

上述三组用药豚鼠躯干脱毛区，未见局部皮肤有水肿、充血、红斑、出血点及溃疡。用药组豚鼠毛发色泽、摄食、四肢活动等与对照组无明显差异，病理组织学检查，给药组心、肝、肾及脱毛皮与对照字比较也无明显差异。结果提示，本发明喷膜剂无局部刺激作用，也未见全身毒性表现。

表明本发明喷膜剂使用安全。

实验例2：本发明的喷膜剂促进肛周脓肿术后大鼠模型创面愈合的实验研究

1、实验用药

对照药：中国发明专利专利号201210178375.8中优选技术方案制备的喷膜剂，规格为0.11g原料/g喷膜剂（壳聚糖2%、壳寡糖1%、乳酸1.1%、芦荟水提物6%，其余为水）。

实验药：本发明实施例1所生产的喷膜剂，规格为0.10g原料/g喷膜剂。

2、造模

清洁级Wistar大鼠110只，雌雄各半，体质量220±20g，用1%盐酸氯胺酮（3ml/kg）腹腔注射麻醉。局部备皮，常规消毒，大鼠背部取直径为1cm的圆形切口1个，剪开皮肤全层、皮下浅筋膜直至肌层，止血后在创面上加粪液1ml（正常人新鲜粪便5g，加生理盐水5ml，混匀，离心，取上清液，现配现用），以油纱、敷料、胶带固定，48h后去除覆盖物，见伤口有脓性分泌物、有粪臭味者为造模成功。

3、实验分组及实验方法

随机选取造模成功的96只大鼠随机分为三组：模型对照组、对照药对照组、实验组，每组32只大鼠。各组大鼠采用生理盐水清洗伤口，采用碘伏消毒，包扎敷料。其中，模型对照组按青霉素钠14万单位/kg腹腔注射给药，同时于每天早中晚分别用生理盐水清洗伤口。对照药对照组除按青霉素钠14万单位/kg腹腔注射给药外，同时分别用对照药的喷膜剂治疗，每天早中晚各一次。试验组除按青霉素钠14万单位/kg腹腔注射给药外，同时分别喷洒实施例1制备的喷膜剂治疗，每天早中晚各一次。

在造模后第3、7、10、14d，分4批（每批每组8只大鼠）处死大鼠，在创缘切取0.5cm×0.5cm肉芽组织，置卡诺液中固定45min，石蜡包埋、切片，行常规HE染色，采用光镜及MPIAS-500彩色病理图文分析系统进行观察。

4、实验结果

创面闭合指数的计算公式：创面闭合指数=（1－治疗后创面面积/原始创面面积）×100%，结果以±SD表示，统计学处理方法采用组间t检验，结果参见表1。另外，每个标本观察5个视野，计数肉芽组织中成纤维细胞数，并求均值（成纤维细胞数/每个视野），结果以±SD表示，统计学处理方法采用组间t检验，结果参见表2。

表1各组创面闭合指数比较（±SD，n=8）

与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01；与对照药组相比：#P＜0.05。

表2各组创面肉芽组织中成纤维细胞数的比较（±SD，n=8）

与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01；与对照药组相比：#P＜0.05。

5、实验结论

表1和表2的实验结果显示，随着时间的推移，对照药组和实验组与模型对照组相比，在大鼠创面闭合指数或成纤维细胞数方面分别具有显著性差异（P＜0.05）或极显著差异（P＜0.01），这说明对照药和本发明的组合物均可提高创面肉芽组织成纤维细胞的含量，从而有效地快速促进创面愈合；将实验组与对照药组相比较，在大鼠创面闭合指数或成纤维细胞数方面，本发明组合物具有显著性差异（P＜0.05），这说明本发明组合物在有效地快速促进创面愈合方面显著优于对照药，取得了意料不到的技术效果。

实验例3：临床试验

1、一般资料

本次临床试验共征集到烧烫伤患者100例，手术切口患者100例，需要预防褥疮的患者100例；将患者按病种分别平均分成对照组和试验组，使两个组在年龄、性别、病程等方面具备统计学意义上的可比性。

2、试验药品

对照药：中国发明专利专利号201210178375.8中优选技术方案制备的喷膜剂，规格为0.11g原料/g喷膜剂（壳聚糖2%、壳寡糖1%、乳酸1.1%、芦荟水提物6%，其余为水）。

实验药：本发明实施例1所生产的喷膜剂，规格为0.10g原料/g喷膜剂。

3、试验方法

两组患者在对创口经过常规处理后，分别均匀喷涂对照药和实验药，以均匀覆盖并略大于创口范围1-2cm为准，每日2次，连续治疗20天；治疗结束后统计患者治疗情况，并进行统计分析。

4、评价标准

治愈：创口完全愈合，不再需要用药；

显效：创口基本愈合或结痂；

有效：创口明显缩小，炎症等表现减轻；

无效：创口没有明显的改善甚至更加严重。

5、试验结果

试验全部结束以后，将试验结果统计分析如表3所示。

表3试验结果统计分析表

表3数据显示，本发明喷膜剂无论是针对烧烫伤患者还是手术切口患者均有很好的治愈率（均在90.0%、80.0%以上）和总有效率（均为100%）；其治疗效果显著优于对照药组。此外治愈后的实验组患者普遍瘢痕轻微或无任何瘢痕，而对照组普遍留有轻微或严重瘢痕。

因此，与现有技术相比，本发明组合物获得了突破性的技术进步，在皮肤创口的愈合方面获得了意想不到的技术成果。

采用喷洒本发明喷膜剂预防褥疮的患者，无一例发生褥疮，而采用对照药预防褥疮的患者中有13例发生褥疮。可见本发明喷膜剂预防褥疮的作用显著优于对照药。

Claims (5)

1.一种海洋生物护伤喷膜剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）称取原料：壳聚糖1-12份、壳寡糖1-12份、乳酸1-12份、芦荟水提物1-16份、黄芪1-12份、白芷1-12份、儿茶1-12份、金银花1-12份；

2）将黄芪、白芷、儿茶、金银花粉碎后混匀，加入6-12倍重量的纯化水，浸泡6-24小时，回流煎煮1-2小时，过滤，得滤液；再加入4-8倍重量的纯化水，回流煎煮1-2小时，过滤，合并两次滤液，浓缩至原体积的1/3-1/2，得中药浓缩液，备用；

3）将芦荟粉加入纯化水中，升温至60±2℃搅拌提取2-3小时，过滤，滤液经浓缩、干燥，得芦荟水提物；

4）将壳聚糖、壳寡糖、乳酸及步骤3）所得芦荟水提物加入步骤2）所得的中药浓缩液中，搅拌至壳聚糖、壳寡糖以及芦荟水提物完全溶解，得混合液；

5）将步骤4）所述混合液浓缩后装在喷射瓶中，安好瓶盖，经钴-60照射杀菌，得喷膜剂。

2.如权利要求1所述海洋生物护伤喷膜剂的制备方法，其特征在于所述海洋生物护伤喷膜剂由以下重量份的原料制备而成：壳聚糖3-8份、壳寡糖2-6份、乳酸2-8份、芦荟水提物2-6份、黄芪3-6份、白芷3-6份、儿茶6-12份、金银花2-8份。

3.如权利要求1所述海洋生物护伤喷膜剂的制备方法，其特征在于所述海洋生物护伤喷膜剂由以下重量份的原料制备而成：壳聚糖6份、壳寡糖4份、乳酸4份、芦荟水提物4份、黄芪4份、白芷4份、儿茶8份、金银花4份。

4.如权利要求1所述海洋生物护伤喷膜剂的制备方法，其特征在于所述海洋生物护伤喷膜剂由以下重量份的原料制备而成：壳聚糖8份、壳寡糖4份、乳酸8份、芦荟水提物6份、黄芪6份、白芷6份、儿茶8份、金银花8份。

5.如权利要求1所述海洋生物护伤喷膜剂的制备方法，其特征在于所述海洋生物护伤喷膜剂由以下重量份的原料制备而成：壳聚糖6份、壳寡糖6份、乳酸3份、芦荟水提物3份、黄芪3份、白芷3份、儿茶6份、金银花3份。