CN101321872A - 高γ-亚麻酸红花 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及从红花植物中特别是红花种子中制备γ－亚麻酸的合成方法。编码一个或多个脂肪酸去饱和酶序列的核苷酸序列和构建序列用来产生含有表达一个或多个这种序列的转基因红花植物，在红花种子中产生高含量的γ－亚麻酸。本发明提供了高含量γ－亚麻酸的转基因红花植物和种子，还提供了和本发明的红花种子产生的油。本发明还涉及采用此本发明产生的油来治疗包括神经系统疾病，炎症，癌症，心血管病症等许多疾病的方法。

Description

高γ-亚麻酸红花
相关申请
本申请参考2005年5月23日递交的60/684,134号和2005年11月10日递交的60/735,984号美国临时专利申请，这些临时申请并入本文作为参考。
背景技术
γ-亚麻酸(GLA)是ω-6族的一种必须脂肪酸，主要存在于基础植物油中。GLA是亚油酸(LA)在Δ6去饱和酶作用下合成的。GLA的作用就在于它能作为许多其它必须脂肪酸的前体，如精氨琥珀酸，精氨琥珀酸是前列腺素和其它一些生理上重要分子的前体。
不饱和脂肪酸，如LA(C18Δ9，12)，α-亚麻酸(C18Δ9，12，15)是基本的食物组成成分，脊椎动物本身并不能合成这些脂肪酸，这是因为，当脊椎动物细胞将双键引入脂肪酸Δ9时，它不能额外在脂肪酸链的Δ9和甲基末端之再引入一个双键。因为它们需要合成其它产物，亚油酸和α-亚麻酸是必须脂肪酸，通常从植物中获得。哺乳动物可将LA转化成GLA(C18Δ6，9，12)，GLA又可转化为精氨琥珀酸(20:4)，精氨琥珀酸是一种重要的脂肪酸，因为它是大多数前列腺素的基础前体物质。
由于LA要经由酶转化形成GLA然后再转化为精氨琥珀酸，通过食物供应的LA可以满足对GLA和精氨琥珀酸的需要。然而，这些非高不饱和的脂肪酸如LA的消耗与健康风险相互关联，如血胆固醇过多，动脉硬化等其它可增加冠心病冠状动脉硬化性心脏病患病可能性的临床疾病都与这些非高不饱和脂肪酸有关。相比之下，大多数高不饱和脂肪酸的消耗，与降低血胆固醇浓度和降低患动脉硬化的风险有关。不饱和脂肪酸GLA的消耗已显示出特别的益处。因此，更多的不饱和GLA的消耗比起LA的消耗更有益处。所以，产生另外的GLA的来源供人们的GLA消耗是我们所希望的。
GLA是形成包括前列腺素等类花生酸类物质的一种前体物质。前列腺素是一种非常重要的类激素化合物，可以加固细胞膜，并作为一种细胞信号分子。已经发现GLA对人类和动物有益。GLA可以调节血压，退烧，调节免疫。GLA的补充给药法对于治疗许多疾病，包括狼疮，癌症，过敏，关节炎溃疡性结肠炎都是很有作用的。GLA可以改善治疗癌症的药物的功效。GLA可以帮助减少月经前期综合征和更年期的症状；改善皮肤健康，可以治疗湿疹，痤疮，红斑痤疮，牛皮癣，皮屑；改善治疗精神病和神经障碍等疾病，包括阿耳茨海默氏病，杭廷顿氏舞蹈病，多发性硬化症，注意缺陷障碍，抑郁症，雷诺氏现象疾病；可以防止糖尿病性神经病变，治疗肝硬化，改善治疗干眼病，包括口腔干燥-风湿性关节炎综合征等疾病，治疗心血管疾病，骨质疏松症，高脂血症等其它由衰老引起的症状。此外，GLA还作为一种刺激剂来消耗人体内的褐色脂肪。褐色脂肪是人体内包围在重要器官周围的一种脂肪，充当一个脂肪燃烧的工厂，利用卡路里产热，而不是把它们作为白色脂肪储存起来。褐色脂肪的消耗对于维持理想体重是非常重要的。GLA的消耗因此可以帮助加快褐色脂肪的代谢过程。
目前GLA的补给一般来源于天然含有高GLA植物，如报春花油，黑加仑油，琉璃苣油。然而，GLA只占这些天然来源中总脂肪酸中相对很小的一部分。这些来源中只有7-10％(报春花油)，14-19％(黑加仑油)，20-26％(琉璃苣油)的脂肪酸可用作GLA。尽管GLA的用途广泛，但由于它的价格昂贵，而且目前的GLA浓度较低，所以，它的应用目前还有一定局限性。一个成人需要消耗10个以上的GLA胶囊补给物来获得最佳的健康效益。所以，获得一种价格不高，容易获得，且比起天然含有GLA的油，含有更高含量GLA的油的来源是非常有用的。这种来源使得消费者花很少的钱在补充物上，摄取少量的油和卡路里，就可以获得GLA带来的最佳健康益处。
红花是一种商业上重要的农业作物。红花第一次种植是在数千年以前的近东，是作为染料和从植物衍生出的一些其它产物的一种来源。本世纪，红花油被用作一种食用油的来源。20世纪30年代的美国，红花作为一种食用油的来源首次用于农业生产。从那以后，多种多样改进这种油成分的研究开始发展起来。红花油最初由棕榈酸(C16:0)，硬脂酸(C18:0)，油酸(C18:1)，亚油酸(C18:2)组成。棕榈酸，硬脂酸是饱和脂肪酸，油酸，亚油酸是不饱和脂肪酸。然而，红花植物天然产生的GLA含量很小可忽略不计。
这样来说，转基因红花植物种子将有非常大的用处，比天然产生的红花种子，转基因红花植物种子含有更高含量GLA。
发明内容
本发明提供了产生GLA的红花植物。第一方面提供了一种红花植物，该植物能产生重量百分含量至少1％的GLA的红花植物，以及其的种子和油。在一个较佳实施例中，这种油将含有重量百分含量约1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～-45，45～50，50～55，55～60％或更高含量的GLA。
本发明的第二个方面，提供了一种红花植物，该植物含有能直接表达一个或多个去饱和酶核苷酸序列的遗传构建序列。本发明的第三个方面，Δ6去饱和酶是唯一能在产生原始LA的植物中产生GLA的酶。本发明的第四个方面，Δ6去饱和酶和Δ12去饱和酶共同作用产生油酸(OA)而不是LA。这个构建序列包括这些酶的编码序列，启动子和终止序列。在一个优选实施例中，启动子是一个种子特异启动子。
在一个实施例中，提供了一种转基因红花植物，该植物含有作用于红花植物的重组启动子，可连接编码Δ6去饱和酶重组体DNA序列，该植物产生的种子含有重量百分含量至少1％的GLA。Δ6去饱和酶编码序列可以从任何植物和真菌中获得。这些植物和真菌包括白霉，水霉，异枝水霉，被孢霉属，高山被孢霉，耳霉，腐霉，疫酶，青霉菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛霉，镰孢菌霉，曲霉，念珠菌，红酵母，虫霉，破囊壶菌，水霉，琉璃苣，樱草属，樱草属，芸苔，稻，苔藓等等。这个启动子可以是一个种子特异启动子，如油质蛋白启动子或核丝启动子。这个实施例还提供了来源于这些转基因植物的种子，种子中含有重量百分含量至少占总脂肪酸含量1％的GLA。还提供了由这些转基因植物种子制备的油。这种油含有重量百分含量1-60％或更高含量的GLA。
在另一个实施例中，提供了一种转基因红花植物，包含第一个编码Δ6去饱和酶重组体DNA序列和第二个编码Δ12去饱和酶DNA重组体序列，这序列可连接至少一个启动子，该植物产生的种子含有重量百分含量至少1％的GLA。在一些实施例中，第一个和第二个DNA序列只能连接到唯一的启动子。在另外的一些实施例中，第一个和第二个DNA序列可连接不同的启动子。Δ6和Δ12去饱和酶编码序列可来源于任何植物和真菌。这些植物和真菌包括白霉，水霉，异枝水霉，被孢霉属，高山被孢霉，耳霉，腐霉，疫酶，青霉菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛霉，镰孢菌霉，曲霉，念珠菌，红酵母，虫霉，破囊壶菌，水霉，琉璃苣，樱草属，樱草属，芸苔，稻，苔藓等等。这个启动子可以是一个种子特异启动子，如油质蛋白启动子或核丝启动子。这个实施例还提供了来源于这些转基因植物的种子，种子中含有重量百分含量至少占总脂肪酸含量1％的GLA。还提供了由这些转基因植物种子制备的油。这种油含有重量百分含量1-60％或更高含量的GLA。
在另一个实施例中，提供了一种在红花种子中产生GLA的方法。这个方法包括的步骤有，含有作用于转基因红花植物的重组体启动子的红花植物的生长，它可以连接到一个编码Δ6去饱和酶重组体DNA序列；以及在Δ6去饱和酶序列表达条件下红花植物的生长。Δ6去饱和酶编码序列可以从任何植物和真菌中获得。这些植物和真菌包括白霉，水霉，异枝水霉，被孢霉属，高山被孢霉，耳霉，腐霉，疫酶，青霉菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛霉，镰孢菌霉，曲霉，念珠菌，红酵母，虫霉，破囊壶菌，水霉，琉璃苣，樱草属，樱草属，芸苔，稻，苔藓等等。这个启动子可以是一个种子特异启动子，如油质蛋白启动子或核丝启动子。这个实施例还提供了来源于这些转基因植物的种子，种子中含有重量百分含量至少占总脂肪酸含量1％的GLA。还提供了由这些转基因植物种子制备的油。这种油含有重量百分含量1-60％或更高含量的GLA。
在另外一个实施例中，提供了一种在红花种子中产生GLA的方法。这个方法包括的步骤有，含有第一个编码Δ6去饱和酶重组体DNA序列和第二个编码Δ12去饱和酶重组体DNA序列红花植物的生长，这序列可连接到至少一个启动子；以及在Δ6和Δ12去饱和酶序列表达条件下红花植物的生长。在这个实施例中，Δ6和Δ12去饱和酶编码序列可来源于任何植物和真菌。这些植物和真菌包括白霉，水霉，异枝水霉，被孢霉属，高山被孢霉，耳霉，腐霉，疫酶，青霉菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛霉，镰孢菌霉，曲霉，念珠菌，红酵母，虫霉，破囊壶菌，水霉，琉璃苣，樱草属，樱草属，芸苔，稻，苔藓等等。这个启动子可以是一个种子特异启动子，如油质蛋白启动子或核丝启动子。这个实施例还提供了来源于这些转基因植物的种子，种子中含有重量百分含量至少占总脂肪酸含量1％的GLA。还提供了由这些转基因植物种子制备的油。这种油含有重量百分含量1-60％或更高含量的GLA。
在另一些实施例中，来源于转基因红花植物的红花油含有重量百分含量1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～5，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或更高含量的GLA。
在另一些实施例中，提供了一些含有红花油的营养品和个人调理产品，这些产品含有重量百分含量1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～5，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或更高含量的GLA。
在另一些实施例中，提供了一种通过给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些状况和疾病折磨的病人，治疗和预防精神病，神经病，或其它中枢或末梢神经系统状况或疾病的方法。
在另一些实施例中，提供了一种通过给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些状况和疾病折磨的病人，治疗和预防免疫性状况或疾病的方法。
在另一些实施例中，提供了一种通过给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些状况和疾病折磨的病人，治疗和预防炎症性状况或疾病的方法。
在另一些实施例中，提供了一种通过给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些状况和疾病折磨的病人，治疗和预防癌症状况或疾病的方法。
在另一些实施例中，提供了一种通过给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些状况和疾病折磨的病人，治疗和预防皮肤状况或疾病的方法。
在另一些实施例中，提供了一种通过给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些状况和疾病折磨的病人，治疗和预防心血管的状况或疾病的方法。
在另一些实施例中，提供了一种通过给药有效量的红花油给婴儿提供营养的方法。
附图说明
图1显示的是GLA生物合成的途径，在Δ6和Δ12去饱和酶的连续作用下，OA转化为LA，然后再转化为GLA，GLA可转化为精氨琥珀酸，精氨琥珀酸是许多前列腺素，白细胞三烯和其它生理有效分子的前体物质；
图2显示的是含有一致序列的不同植物Δ6去饱和酶的序列对比(SEQ ID NO：4-6)；
图3显示的是含有一致序列的不同真菌的Δ6去饱和酶的序列对比(SEQ ID NO：4-11)；
图4显示的是Δ6去饱和酶保守区域的线性表示；
图5显示的是包含有共有序列的不同植物Δ12去饱和酶的序列对比(SEQ ID NO：12-15)；
图6显示的是含有一致序列的不同真菌的Δ12去饱和酶的序列对比，(SEQ ID NO：16-19)；
图7显示的是Δ12去饱和酶的保守区域线性表示；
图8显示的是来源于M.alpina生物体中表达Δ6，Δ12去饱和酶的pSBS4766质粒。如图所示了表达构建序列的几个特征，包括启动子，终止序列，抗性基因和标记基因，植物质粒的可选标记是pat，pat来源于绿色产色链霉菌。细菌标记是SpecR；
图9显示的是来源于S.diclina生物体中表达Δ6去饱和酶的pSBS4119质粒，如图所示了表达构建序列的几个特征，包括启动子，终止序列，抗性基因和标记基因，植物质粒的可选标记是pat，pat来源于绿色产色链霉菌，细菌标记是SpecR；
图10显示的是从M.alpina生物体中表达Δ6去饱和酶的pSBS4763质粒，如图所示了表达构建序列的几个特征，包括启动子，终止序列，抗性基因和标记基因，植物质粒的可选标记是pat，pat来源于绿色产色链霉菌，细菌标记是SpecR；
为了确保能完整的理解本发明，提供下列非限制性定义。
Δ6去饱和酶是在脂肪酸分子羧基末端的碳6和碳7之间引入一个双键的酶。
Δ12去饱和酶是在脂肪酸分子羧基末端的碳12和碳13之间引入一个双键的酶。
此处，缩写″GLA″指的是γ-亚麻酸。
重量百分数就是种子或是种子里的油中一特定脂肪酸基于重量的含量。因此，“GLA的重量百分数”或“GLA按重量计算”是以总脂肪酸重量含量为100％，根据GLA的重量所占比例来计算的。例如，″按重量计算的5％的GLA″或″5％按重量计算的GLA″指的是种子或种子中的油100克的总脂肪酸含有5克的GLA。
如图1所示，GLA是由生物化学途径产生的，在这个过程中OA转化为LA，由能在脂肪酸碳链的特定位置引入一个双键的脂肪酸去饱和酶的连续作用下，LA依次转化为GLA。当这些酶转移到产生OA或LA的细胞中来时，GLA就产生了。
红花是一种商业上重要的农作物，也是植物油的一种有价值的来源。因为红花植物不能天然产生一定量的GLA，所以，它显然不是制备这种脂肪酸的候选植物。由于红花植物不能天然产生GLA，有人就会认为这种高含量非内源性脂肪酸的表达也许会对植物有害，因为引入外源性GLA将会干扰内源性脂肪酸的功能。令人惊讶的发现，GLA在红花种子中是可以表达的，而且比起其它表达转基因的植物(免于上述相关讨论)，这种表达产生了令人意想不到的高浓度。
去饱和酶的特性：
去饱和酶的催化反应
R1-CH2-CH2-R2+O2+2e-+2H+→R1-CH＝CH-R2+2H2O.
许多脂肪酸去饱和酶都是膜相连金属酶。大多数酶在它们的活性位点都含有两个铁原子。如图2，3，5，6所示，Δ6，Δ12去饱和酶在其各自种类酶中有一定程度的序列相同或相似。如图4和7所示，在去饱和酶的保守区域内，有三个含丰富组氨酸的保守序列(组氨酸盒子)和一般序列HXXXJH，HXXHH，HXXHH，QXXHH，这些盒子对于酶的活力是必需的，它们由跨膜域分隔开，跨膜域对于它们在活性位点的正确定向是必需的。许多酶包括Δ5，Δ6去饱和酶都含有一种类似细胞色素b5的氨基末端。这通常会伴随着第三个组氨酸盒子转变为QXXHH。从NADH细胞色素B5还原酶中获得的电子转移到去饱和酶的细胞色素b5或细胞色素b5区域中，再转移到去饱和酶的活性位点上。氧化还原反应由通过保守的组氨酸盒子相互作用来维持稳定的两个铁原子开始进行。正如下面所述，这些结构特征，特别是填补金属结合部位的保守残基是保守的交叉作用的，主要负责这种酶的酶功能。
去饱和酶的来源：
对于GLA的制备，一种或多种去饱和酶对于宿主细胞和底物的利用是必需的。例如，在天然含有丰富LA的植物中，Δ6去饱和酶对于催化LA转化为GLA是必需的。
选择一种特异的去饱和酶多肽需要考虑的因素包括正确的定位和细胞微粒体/内质网隔间中多肽的功能(这些酶受膜约束的，只有与细胞中生物合成的甘油酯结合才能发挥作用)，多肽是否是限速酶或是限速酶的组成部分，采用去饱和酶对于目标多不饱和脂肪酸的合成和多肽所需的辅助因子是否是必需的。表达的多肽与宿主细胞的特定区域内的生物化学环境有较好的相容性。例如，多肽和其它酶在宿主细胞中竞争底物。多肽的米氏常数和比活性的分析因此被考虑用于决定给定多肽是否适合来修饰宿主细胞里GLA的制备。在特定情况下采用的多肽能在目标宿主细胞里发挥功能，但是，另外一些多肽具有去饱和酶的活性，能够修饰GLA的相关产物。
许多Δ6，Δ12去饱和酶都是已知的，包括下面文献中描述的：U.S.Patent No.6,635,451，WO02/081668，U.S.Patent No.6,635,451，U.S.Patent App.No.2003/0167525，U.S.Patent No.6,459,018，U.S.Patent No.5,972,644，U.S，Patent No.6,432,684，U.S.Patent No.5,968,809，U.S.Patent No.5,972,664，U.S.Patent No.6,051,754，U.S.Patent No.6,075,183，U，S，Patent No.6,136,574，U.S.Patent No.5,552,306，U.S.Patent No.5,614,393，5,663,068，U.S.Patent No.5,689,050，U.S.Patent No.5,789,220，U.S.Patent No.6,355,861 andU.S.Patent No.6,492,108。这些文献通过引用而被合并于此来说明这种特异序列。本发明实践所用的Δ6，Δ12去饱和酶来源于植物和真菌。例如，来源于白霉，异枝水霉，高山被孢霉，Conidiolus，腐霉，疫酶，青霉，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛霉菌，镰孢菌霉，曲霉，念珠菌，大戟，Dimorphoteca，红酵母，虫霉，破囊壶菌，水霉，玻璃苣，樱草的Δ6，Δ12去饱和酶对于这个发明的实践是有用的，来源于向日葵，芸苔，稻，苔藓，C.elegans的去饱和酶对于本发明的实践也是有用的。这个序列包括含有丰富组氨酸的盒子，这些序列也可用作已知技术中基于不同排列方法的至少80％，85％，90％或95％一致的序列来应用。在高度或中度严格性条件下，也可将以上序列杂交。允许与去饱和酶序列相应的附加序列一致的杂化洗涤条件在技术中也是已知的，其中一部分下面会有讨论。
序列比对方法中的编程和排列算法在技术中已知的，在下面的文献中有描述：Smith and Waterman，J Mol Biol147：195，1981；Needleman and Wunsch，J Mol Biol 48：443，1970；Pearson and Lipman，PNAS 85：2444，1988；Higgins and Sharp，Gene 73：237，1988；Higginsand Sharp，Comput Appl Biosci 5：151，1989；Corpet，Nucl Acids Res格性计算的条件可以参考下列文献。Sambrook et al.(MolecularCloning--A Laboratory Manual 2nd Edition，Cold SpringHarbor Laboratory Press，New York，1989)and Tijssen(Hybridizationwith Nucleic Acid Probes，Elsevier Science Ltd.，Amsterdam，1993)。影响核酸杂交的因素包括：温度，盐的条件，杂交混合物中有机溶剂的量，杂交序列的长度和基本组成，碱基错配的程度。例如，将探针和滤波DNA杂交的高严格条件为：5X SSC，2％十二烷基硫酸钠(SDS)，100μg/ml单链DNA在55-65℃条件下放置20分钟，60-65℃在含0.1％SDS的0.1X SSC中洗涤20分钟。
另外，如果去饱和酶cDNA的序列是已知的，可以设计PCR引物来放大特定的去饱和酶。此外，PCR引物还可设计成去饱和酶的保守区域，来分离另外的序列。进行PCR反应的实验设计在技术中是已知的，在一些手册有详细描述，如PCR Protocols：A Guide toMethods and Applications by M.Innes et al.，Academic Press，1989。
一旦序列经由序列鉴定，杂交，保守组氨酸盒子鉴定，或其它适合方法的鉴定后，去饱和酶的活性就可采用一些不同测定方法来测试。例如酵母的应用，在U.S.Pat.No.5,968,809中5到7的例子中和Knutzon，et al.J.Biol.Chem.273(45)：29360-29366(1998)的例子中有所描述。这些文献通过引用而被合并于此。这里的酵母可以是酒酿酵母或产油酵母。目的序列被克隆到酵母表达载体中并转化为酵母。这个重组酵母菌株在含有不同底物介质中生长，油脂成分的脂肪酸含量用来分析估算去饱和酶的活性。Δ6去饱和酶活性可采用由亚油酸作为底物探测γ-亚麻酸来监测。Δ12去饱和酶可采用通过探测内源性油酸到亚油酸的转化来监测。
去饱和酶还可利用Arabidopsis来测试。目的序列克隆到适合载体中，移入Arabidopsis，通过估算转基因植物的表现型来检测活性。16：10881，1988；Huang，Genomics 14：I8，1992；and Pearson，MethodsMol Biol24：307，1994.Altschul et al.，(Nature Genetics 6：119，1994)，这些文献在序列比对和同源性计算方面，均有细节上的考虑。
NCBI(美国国立生物技术信息中心)BLAST(一套在蛋白质数据库或DNA数据库中进行相似性比较的分析工具)分析工具对于一些包括国家生物技术中心(NCBI，Bethesda，MD)，互联网的序列分析是很有用的，它是与序列分析程序blastp，blastn，blastx，tblastnand tblastx联合起来应用。可以进入NCBI主页，在主页上有如何运用这个程序来确定序列相似性的说明。
Vector NTI(序列综合分析软件)软件中AlignX程序如图2，3，5，6所示。图2显示的是来源于不同植物种类的Δ6去饱和酶的序列比对。图3显示的是来源于不同真菌种类的去饱和酶的序列比对。图5和图6分别显示的是来源于不同植物和真菌种类的Δ6，Δ12去饱和酶的序列比对。这些图显示的是在它们各自种类酶中，不同Δ6，Δ12去饱和酶结构和功能的关系。任何在这些图中显示的Δ6，Δ12去饱和酶都可用于发明的实践中，和其它酶一样，这些酶也可采用本发明的方法或技术中其它与Δ6，Δ12去饱和酶相应的有效的方法来鉴定。本发明还包括仍然保留活性或通过随机或定向变异能提高强酶活的去饱和酶的修饰，。
熟练的技工都知道，此处显示的任何序列以及技术中的其它已知序列，和未知的去饱和酶序列都能采用传统克隆方法来分离，如用于本发明的核酸杂交或PCR技术。
用于分离去饱和酶序列的杂交条件的例子如下。序列依靠的严格条件根据采用的实验参数的不同而不同。一般来说，对于在确定离子强度和PH条件下的特定序列来说，选择的严格条件为低于热溶解点(Tm)的5～20℃。Tm(在确定离子强度和PH条件下)是指50％的靶序列杂化与探针完全配对杂交时的温度。核酸杂交和严另外，含有假去饱和酶序列的载体可在叶子中表达或使转基因植物中产生冠瘿生长。
采用如上所述方法鉴定和分离产生的去饱和酶序列再被克隆到植物载体中表达，采用的分子生物学上的已知方法，如以下文献所述：Sambrook，Fritsch and Maniatis，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，2nd edition(1989)，Current Protocols in MolecularBiology，F.M.Ausubel et al.，eds.(1987)。
去饱和酶基因的表达：
对于去饱和酶多肽的表达来说，功能的转录和翻译的起始和终止区域可连接编码去饱和酶多肽的DNA。转录和翻译的起始和终止区域有许多种来源，包括要表达的DNA，已知基因，目的体系下可能表达的基因，表达型载体，化学合成或来自宿主细胞的内源基因。在植物组织和器官中的表达具有一定优势，特别是在容易获得组织和器官的地方，如种子，叶子，果实，花朵，根等等。利用特异调节序列，可在植物中定向表达，可参考下列文献：U.S.Patent No.5,463,174，U.S.Patent No.4,943,674，U.S.Patent No.5,I06,739，U.S.Patent No.5,175,095，U.S.Patent No.5,420,034，U.S.Patent No.5,188,958and U.S.Patent No.5,589,379。这些文献通过整体上引用而被合并于此，针对此特异序列展示于此。本发明产生的GLA的一个特别有用的区域是在宿主植物细胞的种子组织中。为了在种子中直接表达，种子特异启动子可用于适和去饱和酶的直接表达。这种种子特异启动子包括如下文献所述，U.S.Patent No.5,623,067，U.S.Patent No.6,342,657，U.S.Patent No.6,642,437。这些文献通过整体上引用而被合并于此，为此特异序列作参考。
宿主细胞的表达可以是瞬时表达或稳定表达。瞬时表达可由引入构建序列实现，该序列含有在宿主细胞内作用的表达信号，这里的构建序列在宿主细胞中不能复制，也不能和宿主细胞整合到一起或者说宿主细胞在这里是不增殖的。瞬时表达也可通过诱导连接到目的基因调节启动子的活性来实现，但这种可诱导的系统经常会出现低水平的表达。稳定表达可由整合到宿主基因或在宿主细胞可自主复制的构建序列的引入来实现。在技术的其它已知基因中，适合的选择标记包括由pat(phosphothricin acetyl transferase)基因提供的除草剂抗性和由nptII(neomycin phosphotransferase)基因提供的卡那霉素抗性。目的基因的稳定表达可通过利用位于或转染表达构建序列的选择标记来选择，之后表达标记细胞的选择。当稳定表达由整合引起时，构建序列的整合就在宿主细胞基因中随机产生，还可以通过采用含有和宿主基因具有同源性区域的构建序列来定向产生，其中，构建序列是定位于内源性基因，全部或一部分转录和翻译调节区域可由内源性基因提供。
对于种子中去饱和酶多肽的表达，需要一个种子特异启动子。例如，这个启动子包括油质蛋白或核丝启动子。油质蛋白启动子在U.S.Patent No.5,792,922中有描述，核丝启动子U.S.Patent No.6,777,591中有描述。
当要表达超过一个以上的不同基因时，基因必需包含在一个单独构建序列或基因必需在分离的载体上。例如，技术中的一个技能就是练习选调节区域，选择方法，引入构建序列的增殖方法的正确选择，来获得目标产物合成所需所有酶的最佳的表达水平。
包含目的基因的构建序列可由标准技术操作引入宿主细胞。这些技术包括转染，传染，基因枪，电穿孔术，微注射，刮术和其它一些向宿主细胞中引入目的基因的方法。(参见U.S.Patent No.4,743,548，U.S.Patent No.4,795,855，U.S.Patent No.5,068,193，U.S.Patent No.5,188,958，U.S.Patent No.5,463,174，U.S.Patent No.5,565,346，U.S.Patent No.5,565,347)。简而言之，宿主细胞经由任何方法处理接受一个DNA序列或构建序列都涉及到此处的“转化”或“重组”。目的宿主需至少有一个表达构建序列的拷贝，或有两个以上，取决于基因是否能整合到基因中一个以上位点上，且在一个位点上有多个的拷贝，是否被放大或出现在有多个拷贝数的染色体外因子中。
许多种植物转化方法都是已知的。Δ6，Δ12去饱和酶基因可通过叶盘转化再生过程Agrobacterium共培养引入植物。如文献Horsch et al，Science 227：1229，1985中所描述的。Agrobacterium介导转化的其它方法还有如原生物的共培养(Horsch et al.，Science223：496，1984；DeB iock et al，EMBO J.2：2143，1984)，变异细胞的悬浮培养(Barton et al.，Cell 32：1033，1983)，花卉的真空侵入(Bechtoldet al.，CR Aead Scie III，Sci Vie 316：1194，1993；Wang et al.，Plant CeilRep 22：274，2003)，这些方法在本发明的范围中也可采用。首先来说，植物是由衍生Agrobacterium或固定化Agrobacterium载体转化而来，如文献Klee et al.，Annu Rev Plant Physio138：467，1987中所描述的。然而，在植物细胞中插入本发明的Δ6，Δ12去饱和酶基因的其它方法也是有用的。这些可选的方法包括，基因枪法(Klein et al.，Nature327：70，1987)，原生质体法(Shillito and Potrykus，Recombinant DNAMethodology 687，1989；Davey et al.，Plant Mol Biol 13：273，I989)，化学诱导DNA摄取法(ToSpfer et al.，Plant Cell 1：133，1989)，采用病毒或花粉(Ohta，PNAS 83：715，1986)作为载体的方法等。
当需要采用转化方法时，本发明的Δ6，Δ12去饱和酶基因就可被插入植物转化载体中，如双元载体，在文献Bevan(1984)NucleicAcids Res.12，8111中有描述。植物转化载体可由Agrobacteriumtumefacians固有的基因转化系的修饰得到。这个固有的系统包含有大片段T-DNA的Ti(诱导肿瘤)质粒，这个T-DNA被转移到转化植物中。Ti质粒的另一个片段，Vir区，主要负责T-DNA的转运。T-DNA的边界含有末端重复序列。在修饰的双元载体中，Ti基因被删除，利用Vir区的功能转移以T-DNA边界序列为边界的外源DNA来。T区域还包括一个抗菌素抗性的可选标记和转移的插入序列的多克隆位点。这种工程菌被称为″disarmed″A.tumefaciens菌株，它允许以T-区域作为边界的序列有效转化进入植物核基因。
表面消毒的叶盘由含有A.tumefaciens的″disarmed″外源基因接种，培养两天，然后转移到含有抗生素的培养基中。在含有适量抗生素的培养基中植根后，选择转化的芽并转移到土壤中生长。
转化的宿主细胞可由含有引入构建序列的可选标记来鉴别。另外，正如许多转化技术将许多DNA分子引入宿主细胞，分离的标记构建序列可由目标构建序列引入。典型的，具有在选择培养基生长能力的宿主被选择出来。选择培养基可加入一种抗生素或缺乏一种不转化宿主生长所需的必需因素，例如，营养因子和生长因子。当其在转化的宿主细胞中表达时，引入的标记基因可以产生抗菌素抗性或编码必需生长因子或酶，使其能在选择培养基中生长。卡那徽素抗性和氨基糖苷G418的抗性是我们期望获得的(参见U.S.Patent No.5,034,322)。当表达的蛋白质标记直接或间接的被检测出时，也可对转化的宿主进行选择。这个标记蛋白可以单独表达或和其它蛋白结合起来表达。标记蛋白可通过它的酶活性来检测。例如，1，3-半乳糖苷酶可将底物X-gal转化为颜色产物，荧光酶可将萤光转化为发光产物。标记蛋白可由它的发光产物或修饰特性检测出来，例如当有蓝光照射时，Aequorea victoria绿色荧光蛋白会发荧光。抗体可用于检测标记蛋白或分子标记蛋白，例如，目的蛋白。可通过视觉上或采用如FACS，抗体淘洗等技术来选择表达标记蛋白或分子标记蛋白的细胞。
红花的转化：
至少有两种红花植物转化的基本方法：(1)：由共培养的子叶诱导，愈伤组织中芽的再生，(2)由离体分生组织共培养直接产生的多芽再生。
方法1包括接下来由Agrobacterium共培养的子叶外植体的愈伤组织的诱导(Ying el al.，Plant Ceil Rep 11：581，1992)；Orlikowska etal.，PCTOC 40：85，1995)。这方法包括将离体子叶在愈伤诱导培养基(MS盐B5维他命)中共培养3天。外植体转移到芽形成培养基中(MS盐，B5维他命，羧苄青霉素)培养两天，然后转移到含有卡那霉素的相同培养基中。2到3周后，再生的叶结构和下面的外植体组织一起转移到含有Geneticin的芽伸长培养基中。(1/2MS盐和MS维他命)。再过2到3周，延长的芽从原来的外植体组织中分离，转移到相同的培养基中，此处未转化芽或嵌合芽的切割末端迅速变成褐色，而转基因芽仍然是健康的。健康的芽被转移到生根的培养基中(MS盐类和MS维他命)，长度至少为10mm。一个外植体平均能再生2到3个芽。
方法2中，多个芽在Agrobacterium的共培养之前，暂时由离体分生组织诱导(Rao and Rohini，PIant Bioteehnol 16：201，1999)；Rohini and Rao，Annals Bet 86：1043，2000)。这包括用针来刺穿发芽种子的胚轴，该发芽种子的子叶节中有一个子叶已被移除。在28-30℃下，将这个胚胎浸渍在Winans′AB培养基的Agrobacterium的混悬液中并轻轻搅拌10分钟。接下来在半固体MS基本培养基中共培养24小时，胚轴在含500μg/ml头孢噻肟液体的MS基本培养基中轻轻搅拌(80rpm)充分清洗1小时，放置在装有水的高压灭菌器Soilrite(vermioulite equivalent)(Chowgule Industries Ltd.Bangalore，India)中灭菌，使其在在生长室无菌条件下发芽生长。5到6天后，在幼体被转移到温室之前将其转移到植物盆罐的Soilrite中，使其在生长室条件下至少生长10天。植物盆罐开始由聚乙烯袋覆盖来维持湿度。生长室维持在26-28℃，荧光周期为14小时的条件下。与方法1对比，这个方法生长的大多数芽一般没有玻璃化现象。生长的植物可能是嵌合体的，在这点上，成功的转化基于T-DNA是否整合到产生生殖器官的分生细胞层中。这个方法大体上需要比方法1更多的原材料(成熟的种子)和生长室空间。
本发明一个优先的方面是提供了能表达过量生产GLA的编码去饱和酶DNA的转基因植物或其后代。红花作为植物油的来源被广泛采用，是一种有优势的宿主植物。红花植物细胞可通过上述任何一种植物转化方法，由编码Δ6去饱和酶或编码Δ6去饱和酶和Δ12去饱和酶的分离DNA转化。通常在愈伤组织培养或叶盘中的转化红花植物细胞可通过已知方法再生到完整的转基因植物中(例，Horsch et al.，Science 227：1129，1985)。因为转化红花植物的子代遗传编码去饱和酶基因的DNA，所以种子或转化植物的剪枝被用来维持转基因植物系。
其中一个特别的方面，这个方法包括将编码Δ6去饱和酶的DNA引入无GLA或有少量GLA产生但有LA产生的红花植物的过程。另一方面，这方法还包括将一个或多个表达型载体引入到GLA和LA缺乏的红花植物中，该表达型载体是含有编码Δ12去饱和酶和Δ6去饱和酶DNA。相应的，缺乏GLA和LA的红花植物通过Δ12去饱和酶的表达诱导产生LA，然后由Δ6去饱和酶的表达产生GLA。包含编码Δ12去饱和酶或Δ12去饱和酶和Δ6去饱和酶DNA的表达载体可由所属技术领域的一般技术人士(Sambrook et al.，1989)已知的重组技术方法和公开的Δ12去饱和酶的序列(Wada etal.，Nature(London)347：200，1990)来构建。有关这个载体通过例子在此予以说明。
含有GLA的油：
红花植物中产生的GLA可利用如上所述的技术中已知方法从红花植物的不同器官特别是种子中获得。特别的是，可收获种子并且通过压榨种子的方法从种子中提取油，然后采用传统方法精炼。从红花植物种子中提取油的方法在技术领域中是已知的，可参考文献Smith，J，R.Safflower，AOCS Press，pp.I85-212(1996)。
采用本发明和文献中的方法制备的GLA可作为游离脂肪酸或酯化形式，如酰基甘油，磷脂，硫脂，糖脂的形式存在于宿主植物组织和植物器官中，并可通过技术中的多种已知方法从宿主细胞提取出来。这些方法包括有机溶剂提取法，超声法，利用二氧化碳或如压力以及它们相结合的物理方法的超临界流体提取法。可采用己烷，丙烷，丙酮或乙醇来提取。
此处的GLA作为营养和个人护理品组分。有关营养组分发明的例子包括婴儿配方奶粉，营养保健品，饮食替代品，补水成分等等。例如，这些组分可以添加到任何类型的食物中，包括人造奶油，改性黄油，乳酪，牛奶，酸奶，巧克力，糖果，点心，色拉油，烹调油，烹调用脂肪，肉，鱼和饮料等等。有关个人护理品组分的例子包括面霜，香水，保湿乳，防晒和晒后修复乳，洗发水，护发素和唇膏等等。本发明的GLA的应用实例在如下专利中有描述U.S.Patent Nos.6,635,451和5,709,888，这些例子通过整体上引用而被合并于此，针对于这些特殊的应用在此列举。
在此引用的专利通过整体上引用而被合并于此。通过图解提供下面的例子，目的不是限制发明的范围。
实施例1：质粒pSBS4766和表达这个质粒的转基因植物
图8显示的是高山被孢霉中Δ6，Δ12去饱和酶共同表达的构建序列图。这个构建序列的植物可选标记是pat，pat对应于绿色产色链霉菌中的pat基因。构建序列的细菌标记是SpecR。该构建这个载体的基本双元载体为pPZP200的衍生物。参见Hajduklewicz et al.Plant Mol Biol25：989，1994。含于pPZP200质粒边界序列中的插入序列如下所述。
质粒PSBS4766(带有pat标记的MalpinaΔ6，Δ12去饱和酶双表达盒子)(SEQ ID NO：1)
ctgcaggaattcgatctctattgattcaaattacgatctgatactgataacgtctagatttttagggt
taaagcaatcaatcacctgacgattcaaggtggttggatcatgacgattccagaaaacatcaagcaagc
tctcaaagctacactctttgggatcatactgaactctaacaacctcgttatgtcccgtagtgccagtacag
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cgatccatctgttaggttgcatgaggctttgggatacacagcccggggtacattgcgcgcagctggata
caagcatggtggatggcatgatgttggtttttggcaaagggattttgagttgccagctcctccaaggcca
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采用这个构建序列的红花的转化由SemBioSys Genetics Inc.(Calgary，Canada)公司完成。SemBioSys Genetics Inc.公司采用的技术可参考WO 2004/111244，这个专利因为整体被引用而被合并于此。转基因植物是生长的，是收获种子的。
脂肪酸浓度的测量是在转基因植物的种子中完成的。从转基因植物中收集种子，采用″Official Methods and Recommended Practicesofthe AOCS″，5th Ed.，Method Ce 1-62，American Oil Chemists Society：Champaign，Illinois(1997)中所描述方法的改进方法，由气相色谱法确定脂肪酸组分。在这个方法中，油是由正己烷从种子中提取出来的，再经盐酸水解，与甲醇反应形成甲酯。甲酯由气相色谱内标法来定量。
表达pSBS4766构建序列的转基因植物T1种子的10个种子库的脂肪酸组分由表1给出。Δ6去饱和酶基因的活性由转基因植物系中GLA的存在来表明。在表1S317对照系中GLA的浓度范围0.03％～0.04％时，在T1种子库中的浓度范围0.5％～30.8％。这里GLA的浓度增加了超过50倍。在GLA含量最高的系中，可以看到18:4有小的但是很显著的增加。我们希望，Δ6去饱和酶基因可作用于由18:2来产生GLA和作用于18:3(ALA)来产生18:3。Δ12去饱和酶的活性可由18:1中脂肪酸的减少来表明。在表1中S317对照系中，OA的浓度范围73.76％～75.8％，在转基因系的浓度范围3.68％～73.51％。总之，这个数据显示的是本发明获得的红花产生GLA的浓度的一个广泛的范围。
表1：S317中表达的pSBS4766构建序列的T1种子的10个种子库中的脂肪酸组成(百分数表示)。由棕榈酸(C16:0)，硬脂酸(C18:0)，油酸(C18:1)，亚油酸(C18:2)组成.
S317对照系中单粒种子样品的脂肪酸组成由表2给出。其中有四个重复(S0-1，S0-2，S0-3，S0-4)。单粒种子数据与10个种子库数据相似。
  表1系号1 C16:0 C18:0 C18:1n9 C18:2 C18:2n6 C18:3n6 C18:3n3 C18:4n3
  4766-24   7.40   1.87   3.68   53.00   30.80   0.66   0.17
  4766-12   6.77   1.78   3.69   54.22   30.48   0.68   0.16
  4766-27   6.71   1.78   18.73   46.82   23.18   0.60   0.13
  4766-1   6.52   1.64   20.06   45.88   22.35   0.99   0.13
  4766-30   6.44   1.63   17.51   56.99   15.16   0.34   0.02
  4766-21   5.91   1.64   17.04   58.00   15.11   0.52   0.03
  4766-11   6.06   1.56   14.38   60.75   14.99   0.44   0.04
  4766-26   6.34   1.66   15.64   61.66   12.48   0.39
  4766-13   5.83   1.67   27.48   49.92   12.30   0.72   0.04
  4766-19   5.94   1.74   23.34   55.54   11.08   0.44   0.02
  4766-10   5.70   1.53   24.56   57.28   8.68   0.40   0.01
  4766-5   5.31   1.73   33.82   48.63   8.24   0.38   0.01
  4766-31   5.27   1.51   46.85   36.17   7.77   0.30   0.01
  4766-4   4.50   1.34   73.51   1.89   11.14   5.08   0.32   0.01
  4766-14   5.40   1.66   11.74   74.16   4.93   0.37   0.01
  4766-41   4.74   1.58   54.76   0.66   33.36   2.66   0.16
  4766-22   5.13   1.5   58.60   31.92   0.50   0.21
  Centennial   6.94   1.88   11.31   76.74   0.07   0.38
  S317   4.92   2.25   73.76   16.34   0.04   0.28
  S317   4.72   2.31   74.73   15.76   0.04   0.07
  S317   4.57   2.25   75.80   14.96   0.03   0.07
表2：对照系(S317，S0表示)中四个单粒种子样品中的脂肪酸组成。
  表2：脂肪酸   S0-1   S0-2   S0-3   S0-4
  C10:0   0.7％   0.3％   0.5％   0.5％
  C11:0   0.3％   0.1％   0.3％   0.2％
  C12:0   0.2％   0.1％   0.2％   0.1％
  C13:0   0.0％   0.0％   0.0％   0.0％
  C14:0   0.3％   0.2％   0.2％   0.2％
  C14:1w5   0.2％   0.0％   0.1％   0.1％
  C15:0   0.0％   0.0％   0.0％   0.0％
  C15:1w5cis   0.0％   0.0％   0.1％   0.0％
  C16:0   6.0％   6.2％   5.7％   5.7％
  C16:1w7c   0.2％   0.1％   0.1％   0.2％
  C17:0   0.1％   0.1％   0.1％   0.1％
  C17:1w7   0.0％   0.0％   0.0％   0.1％
  C18:0   3.2％   1.8％   3.4％   1.7％
  C18:1w9t   0.1％   0.1％   0.1％   0.1％
  C18:1w9c   73.0％   74.2％   74.3％   75.6％
  INTERNAL STANDARD
  C18:2w6t   0.1％   0.0％   0.1％   0.0％
  C18:2w6c   13.6％   14.8％   12.9％   13.5％
  C20:0   0.4％   0.5％   0.5％   0.5％
  C18:3w6   0.0％   0.0％   0.0％   0.0％
  C20:1w9   0.3％   0.3％   0.3％   0.3％
  C18:3w3   0.1％   0.1％   0.1％   0.1％
  C21:0   0.1％   0.1％   0.1％   0.1％
  C20:2w6   0.0％   0.0％   0.0％   0.0％
  C22:0   0.3％   0.3％   0.3％   0.3％
  C20:3w6   0.0％   0.0％   0.0％   0.0％
  C22:1w9   0.0％   0.0％   0.0％   0.0％
  C20:3w3   0.0％   0.0％   0.0％   0.0％
  C20:4w6(AA)   0.0％   0.0％   0.0％   0.0％
  C23:0   0.0％   0.0％   0.0％   0.0％
  C22:2w6   0.1％   0.0％   0.1％   0.1％
  C24:0   0.2％   0.2％   0.2％   0.2％
  C20:5w3(EPA)   0.1％   0.0％   0.0％   0.0％
  C24:1w9c   0.1％   0.2％   0.1％   0.1％
  C22:6w3(DHA)   0.3％   0.1％   0.1％   0.1％
  脂肪酸总计   100.0％   100.0％   100.0％   100.0％
  饱和脂肪酸   11.8％   9.8％   11.5％   9.6％
  W7和W5的总量   0.4％   0.3％   0.4％   0.4％
  W9的总量   73.4％   74.6％   74.6％   76.0％
  W6的总量   13.8％   14.9％   13.1％   13.7％
  表2：脂肪酸   S0-1   S0-2   S0-3   S0-4
  W3的总量   0.5％   0.2％   0.2％   0.2％
  单不饱和脂肪酸总量   73.7％   74.9％   75.0％   76.4％
  反式脂肪酸总量   0.2％   0.1％   0.2％   0.1％
  多不饱和脂肪酸总量   14.2％   15.1％   13.3％   13.9％
  比率：
  多不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸   1.2   1.5   1.2   1.5
  W6/W3   30.1   72.5   61.6   60.8
  AA/EPA   0.2   0.1   1.0   0.8
  AA/DHA   0.0   0.1   0.4   0.4
表达pSBS4766构建序列的转基因植物的5个系(S1，S4，S5，S24，S27)的单粒种子的脂肪酸组成由表3～7给出。提供了8～9个重复种子数据。若有需要，可提供每个转基因序列的NULL对照系的单粒种子来作对照。
Figure A20068002435900361
Figure A20068002435900371
Figure A20068002435900381
Figure A20068002435900391
Figure A20068002435900401
Figure A20068002435900411
Figure A20068002435900412
Figure A20068002435900421
Figure A20068002435900431
Figure A20068002435900432
Figure A20068002435900441
下面的单粒种子数据可在种子库数据中看到。因为T1系是分离的，所以由于无效的插入杂合型和插入纯合型，单粒种子样品中可出现一些差异。可以看出GLA的浓度范围是1.4％(表3：种子1，1系，S1-1)～50.8％(表7：种子2，27系，S27-2)。有种子油的系与从单粒种子数据或种子库数据获得的数据相似。这个系不能结实。能结实的系已被选择用于研究。
pSBS4766构建序列表达系的T1和T2代种子的脂肪酸组成由下面表8给出。
表8：S317中表达pSBS4766构建序列的T1和T2单系脂肪酸组成(百分数表示)。
  表8系号 代： C18:3n6 C16:0 C18:0 C18:1n9 C18:2n6
  4766-12-4   T1   25.60  6.78   1.90   5.38   59.12
  4766-12-4-6   T2   23.38  8.54   3.57   7.66   56.27
  4766-21-25   T1   26.10  7.83   1.91   5.36   58.53
  4766-21-25-2   T2   24.41  8.45   3.56   9.92   53.67
  4766-21-10   T1   15.35  7.15   1.71   9.37   65.53
  4766-21-10-7   T2   25.31  7.00   2.73   7.94   55.17
  4766-70-43   T1   17.68  4.87   2.05   10.88   64.52
  4766-70-43-9   T2   16.75  4.80   2.33   10.58   64.80
  4766-110-10   T1   23.37  6.65   2.00   5.77   61.26
  4766-110-10-25   T2   29.84  8.27   3.66   6.51   50.59
  4766-110-11   T1   19.65  6.66   2.06   7.48   63.85
  4766-110-11-32   T2   29.89  8.43   2.25   5.11   52.26
  4766-95-4   T1   10.22  6.20   2.00   15.52   65.06
  4766-95-4-1   T2   18.05  6.72   2.24   11.13   61.12
  S317   VAR   0.00  5.29   2.72   74.81   16.10
  S317   VAR   0.00  5.44   1.64   74.61   17.82
T2种子与测定的T1种子的脂肪酸组成一致。这些数据说明，转基因是稳定的，可遗传的，在GLA代际中GLA浓度产生了相同程度的提高。
例2：质粒pSBS4119和表达这个质粒的转基因植物
图9显示的是Saprolegnia diclina中表达Δ6去饱和酶的构建序列图。这个构建序列的植物可选标记是pat，pat对应于绿色产色链霉菌中的pat基因。构建序列的细菌标记是SpecR。该构建这个载体的基本双元载体为pPZP200的衍生物。参见Hajduklewicz et al.PlantMol Biol25：989，1994。含于pPZP200质粒边界序列中的插入序列如下所述。
质粒PSBS4119(带有pat标记的S.diclinaΔ6去饱和酶表达盒子)(SEQ ID NO：2)
ctgcaggaattcgatctctattgattcaaattacgatctgatactgataacgtctagatttttagggt
taaagcaatcaatcacctgacgattcaaggtggttggatcatgacgattccagaaaacatcaagcaagc
tctcaaagctacactctttgggatcatactgaactctaacaacctcgttatgtcccgtagtgccagtacag
acatcctcgtaactcggattgtgcacgatgccatgactatacccaacctcggtcttggtcacaccagga
actctctggtaagctagctccactccccagaaacaaccggcgccaaattgcgcgaattgctgacctga
agacggaacatcatcgtcgggtccttgggcgattgcggcggaagatgggtcagcttgggcttgagga
cgagacccgaatccgagtctgttgaaaaggttgttcattggggatttgtatacggagattggtcgtcgag
aggtttgagggaaaggacaaatgggtttggctctggagaaagagagtgcggctttagagagagaatt
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cactcacttggagatgccgtctccactgatatttgaacaaa
采用这个构建序列的红花的转化由SemBioSys Genetics Inc.(Calgary，Canada)公司完成。SemBioSys Genetics Inc.公司采用的技术可参考WO 2004/111244，这个专利因为整体被引用而被合并于此。转基因植物是生长的，是收获种子的。
从转基因植物中收集种子，采用″Official Methods andRecommended Practices of the AOC S″，5th Ed.，Method Ce 1-62，American Oil Chemists Society：Champaign，Illinois(1997)中所描述方法的改进方法，由气相色谱法确定脂肪酸组分。
如表9所示，S.diclina中表达Δ6去饱和酶的pSBS4119转基因系的T1种子中GLA  浓度范围是11.41％(4119-23-1)～72.89％(4119-21-3)。在转基因系中可获得60％以上浓度的GLA。因为T1系是分离的，由于无效的插入杂合型和插入纯合型，单粒种子样品的测量可出现一些差异。在Centennialcontrols和零控系中不存在GLA。Centennial中天然含有高浓度的LA，Centennial中的GLA浓度只能通过Δ6去饱和酶的表达来提高
表9：Centennial中表达pSBS4119构建序列的T1种子的单粒种子脂肪酸组成(百分数表示)。
  表9系号   类型   C18:3n6   C16:0   C18:0   C18:1n9   C18:2n6
  4119-13-1   转基因   46.47   7.11   1.55   7.98   35.87
  4119-13-11   转基因   51.73   7.07   1.57   6.66   32.00
  4119-15-10   转基因   61.93   8.02   1.69   6.38   19.68
  4119-15-7   转基因   69.59   8.03   1.43   5.70   13.33
  4119-17-1   转基因   69.13   9.58   1.35   5.37   12.06
  4119-17-3   转基因   67.13   9.33   1.54   6.76   12.29
  4119-19-1   NULL   0.00   6.54   1.35   10.23   80.86
  4119-19-10   转基因   69.85   8.13   1.35   5.42   13.70
  4119-20-10   转基因   63.22   7.69   1.53   5.88   20.24
  4119-21-1   转基因   71.06   8.94   1.43   5.02   11.44
  4119-21-3   转基因   72.89   9.68   1.21   4.12   8.59
  4119-2-29   转基因   52.33   7.46   1.59   7.00   30.46
  4119-2-31   转基因   61.23   8.52   1.48   7.38   19.40
  4119-23-1   转基因   11.41   6.34   1.41   9.28   71.57
  4119-23-2   转基因   11.99   6.51   1.48   9.07   70.95
  4119-24-1   NULL   0.00   6.62   1.35   10.12   80.69
  4119-24-2   转基因   65.39   8.04   1.46   6.47   16.90
  4119-29-2   转基因   62.91   7.68   1.30   6.82   19.44
  4119-29-4   转基因   62.72   7.42   1.31   6.95   19.74
  4119-30-1   转基因   66.46   7.75   1.41   6.53   16.16
  4119-30-10   转基因   28.28   5.97   1.59   6.46   56.93
  4119-33-15   转基因   72.85   8.33   1.32   4.92   10.17
  4119-33-18   转基因   69.73   7.53   1.33   5.90   13.29
  4119-35-1   转基因   59.55   7.63   1.56   10.82   17.91
  4119-35-3   转基因   63.11   7.27   1.29   5.93   20.63
  4119-36-14   转基因   64.90   8.19   1.41   5.85   17.98
  4119-36-15   转基因   61.10   8.30   1.39   8.22   19.07
  4119-39-17   转基因   63.54   7.72   1.65   5.79   19.38
  表9系号   类型  C18:3n6   C16:0   C18:0   C18:1n9  C18:2n6
  4119-39-18   转基因  64.79   7.66   1.57   5.11  18.68
  Centennial-4   Control  0.00   6.63   2.22   25.36  65.80
  Centennial-6   Control  0.00   6.59   2.03   13.53  76.87
实施例3：质粒pSBS4763和表达这个质粒的转基因植物
图10显示的是Mortierella alpina中用于表达Δ6去饱和酶的构建序列图。这个构建序列的植物可选标记是pat，pat对应于绿色产色链霉菌中的pat基因。构建序列的细菌标记是SpecR。该构建这个载体的基本双元载体为pPZP200的衍生物。参见Hajduklewicz et al.Plant Mol Biol25：989，1994。含于pPZP200质粒边界序列中的插入序列如下所述。
质粒PSBS4763(带有pat标记的M.diclinaΔ6去饱和酶表达盒子)(SEQ ID NO：3)
ctgcaggaattcgatctctattgattcaaattacgatctgatactgataacgtctagatttttagggt
taaagcaatcaatcacctgacgattcaaggtggttggatcatgacgattccagaaaacatcaagcaagc
tctcaaagctacactctttgggatcatactgaactctaacaacctcgttatgtcccgtagtgccagtacag
acatcctcgtaactcggattgtgcacgatgccatgactatacccaacctcggtcttggtcacaccagga
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ttctagaatgtcgcggaacaaattttaaaactaaatcctaaatttttctaattttgttgccaatagtggatatg
tgggccgtatagaaggaatctattgaaggcccaaacccatactgacgagcccaaaggttcgttttgcgt
tttatgtttcggttcgatgccaacgccacattctgagctaggcaaaaaacaaacgtgtctttgaatagact
cctctcgttaacacatgcagcggctgcatggtgacgccattaacacgtggcctacaattgcatgatgtct
ccattgacacgtgacttctcgtctcctttcttaatatatctaacaaacactcctacctcttccaaaatatatac
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ggatgccgaggcacccttcttgatgatcatcgacaacaaggtgtacgatgtccgcgagttcgtccctga
tcatcccggtggaagtgtgattctcacgcacgttggcaaggacggcactgacgtctttgacacttttcac
cccgaggctgcttgggagactcttgccaacttttacgttggtgatattgacgagagcgaccgcgatatc
aagaatgatgactttgcggccgaggtccgcaagctgcgtaccttgttccagtctcttggttactacgattc
ttccaaggcatactacgccttcaaggtctcgttcaacctctgcatctggggtttgtcgacggtcattgtgg
ccaagtggggccagacctcgaccctcgccaacgtgctctcggctgcgcttttgggtctgttctggcag
cagtgcggatggttggctcacgactttttgcatcaccaggtcttccaggaccgtttctggggtgatctttt
cggcgccttcttgggaggtgtctgccagggcttctcgtcctcgtggtggaaggacaagcacaacactc
accacgccgcccccaacgtccacggcgaggatcccgacattgacacccaccctctgttgacctggag
tgagcatgcgttggagatgttctcggatgtcccagatgaggagctgacccgcatgtggtcgcgtttcat
ggtcctgaaccagacctggttttacttccccattctctcgtttgcccgtctctcctggtgcctccagtccatt
ctctttgtgctgcctaacggtcaggcccacaagccctcgggcgcgcgtgtgcccatctcgttggtcga
gcagctgtcgcttgcgatgcactggacctggtacctcgccaccatgttcctgttcatcaaggatcccgtc
aacatgctggtgtactttttggtgtcgcaggcggtgtgcggaaacttgttggcgatcgtgttctcgctcaa
ccacaacggtatgcctgtgatctcgaaggaggaggcggtcgatatggatttcttcacgaagcagatca
tcacgggtcgtgatgtccacccgggtctatttgccaactggttcacgggtggattgaactatcagatcga
gcaccacttgttcccttcgatgcctcgccacaacttttcaaagatccagcctgctgtcgagaccctgtgc
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gaacgaggtctccaaggctgcctccaagatgggtaaggcgcagtaagcttgttaccccactgatgtca
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ggggagataataaaagccgagtttgaatctttttgttataagtaatgtttatgtgtgtttctatatgttgtcaa
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ggtaacggtggtctatatatggaaaaggtcttgttttgttaaacttatgttagttaactggattcgtctttaac
cacaaaaagttttcaataagctacaaatttagacacgcaagccgatgcagtcattagtacatatatttattg
caagtgattacatggcaacccaaacttcaaaaacagtaggttgctccatttagtaacctgaattgcctcct
gattctagttgatcccggtaccgaattcgaatccaaaaattacggatatgaatataggcatatccgtatcc
gaattatccgtttgacagctagcaacgattgtacaattgcttctttaaaaaaggaagaaagaaagaaaga
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ccgcctcaaacacaaaaataatcttctacagcctatatatacaacccccccttctatctctcctttctcaca
attcatcatctttctttctctacccccaattttaagaaatcctctcttctcctcttcattttcaaggtaaatctctc
tctctctctctctctctgttattccttgttttaattaggtatgtattattgctagtttgttaatctgcttatcttatgta
tgccttatgtgaatatctttatcttgttcatctcatccgtttagaagctataaatttgttgatttgactgtgtatct
acacgtggttatgtttatatctaatcagatatgaatttcttcatattgttgcgtttgtgtgtaccaatccgaaat
cgttgatttttttcatttaatcgtgtagctaattgtacgtatacatatggatctacgtatcaattgttcatctgttt
gtgtttgtatgtatacagatctgaaaacatcacttctctcatctgattgtgttgttacatacatagatatagat
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gattttgttatttacgtatgtatatatgtagatctggactttttggagttgttgacttgattgtatttgtgtgtgtat
atgtgtgttctgatcttgatatgttatgtatgtgcagccaaggctacgggcgatccaccatgtctccggag
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tacattgagacgtctacagtgaactttaggacagagccacaaacaccacaagagtggattgatgatcta
gagaggttgcaagatagatacccttggttggttgctgaggttgagggtgttgtggctggtattgcttacg
ctgggccctggaaggctaggaacgcttacgattggacagttgagagtactgtttacgtgtcacataggc
atcaaaggttgggcctaggttccacattgtacacacatttgcttaagtctatggaggcgcaaggttttaag
tctgtggttgctgttataggccttccaaacgatccatctgttaggttgcatgaggctttgggatacacagc
ccggggtacattgcgcgcagctggatacaagcatggtggatggcatgatgttggtttttggcaaaggg
attttgagttgccagctcctccaaggccagttaggccagttacccagatctgagtcgaccgaatgagttc
caagatggtttgtgacgaagttagttggttgtttttatggaactttgtttaagctagcttgtaatgtggaaag
aacgtgtggctttgtggtttttaaatgttggtgaataaagatgtttcctttggattaactagtatttttcctattg
gtttcatggttttagcacacaacattttaaatatgctgttagatgatatgctgcctgctttattatttacttaccc
ctcaccttcagtttcaaagttgttgcaatgactctgtgtagtttaagatcgagtgaaagtagattttgtctata
tttattaggggtatttgatatgctaatggtaaacatggtttatgacagcgtacttttttggttatggtgttgac
gtttccttttaaacattatagtagcgtccttggtctgtgttcattggttgaacaaaggcacactcacttggag
atgccgtctccactgatatttgaaca
采用这个构建序列的红花的转化由SemBioSys Genetics Inc.(Calgary，Canada)公司完成。SemBioSys Genetics Inc.公司采用的技术可参考WO 2004/111244，这个专利因为整体被引用而被合并于此。转基因植物是生长的，且可以收获种子。
从转基因植物中收集种子，采用″Official Methods andRecommended Practices of the AOCS″，5th Ed.，Method Ce 1-62，American Oil Chemists Society：Champaign，Illinois(1997)中所描述方法的改进方法，由气相色谱法确定脂肪酸组分。
如表10所示，M.diclina中表达Δ6去饱和酶的pSBS4763转基因系的T1种子中GLA  浓度范围是7.8％(4763-13-2)～50.19％(4763-28-1)。因为T1重复片段是分离的，由于无效的插入杂合型和插入纯合型，单粒种子样品的测量可出现一些差异。在Centennial controls和零控系中，GLA的浓度为0.05或更低。Centennial中天然含有高浓度的LA，Centennial中的GLA浓度只能通过Δ6去饱和酶的表达来提高。
表10：Centennial中表达的pSBS4763构建序列的T1种子的单粒种子的脂肪酸组成。
  表10系号 类型 C18:3n6 C16:0 C18:0 C18:1n9 C18:2n6
  4763-1-1   转基因   8.36   6.41   1.50   7.70   74.82
  4763-1-2   转基因   14.28   6.26   1.56   9.01   67.69
  4763-2-1   转基因   16.29   6.56   1.53   8.19   66.38
  4763-2-2   转基因   11.31   6.46   1.59   9.12   70.23
  4763-13-2   转基因   7.80   6.54   1.53   8.69   74.06
  4763-13-3   NULL   0.05   6.27   1.33   8.16   82.98
  4763-15-1   转基因   11.22   6.24   1.26   7.91   70.36
  4763-15-2   转基因   19.40   6.56   2.43   7.65   62.65
  4763-16-1   转基因   17.94   6.22   1.42   7.29   66.36
  表10系号 类型 C18:3n6 C16:0 C18:0 C18:1n9 C18:2n6
  4763-16-2   转基因   11.79   6.08   1.86   7.97   70.78
  4763-17-2   NULL   0.04   6.33   1.37   9.19   81.84
  4763-17-3   转基因   8.43   6.52   1.53   9.56   72.75
  4763-18-2   转基因   8.73   6.81   2.00   9.33   70.68
  4763-18-3   NULL   0.00   6.68   1.88   9.38   80.91
  4763-19-4   转基因   12.71   6.72   1.87   7.16   68.74
  4763-19-15   转基因   14.55   6.46   1.75   7.41   67.84
  4763-21-2   转基因   20.62   6.89   2.37   5.51   59.73
  4763-21-11   转基因   20.99   6.93   1.77   6.12   61.40
  4763-22-4   转基因   10.55   6.45   1.53   7.47   73.23
  4763-22-5   转基因   16.32   6.71   1.47   8.05   66.28
  4763-23-12   转基因   34.02   6.92   2.06   5.21   49.27
  4763-23-14   转基因   36.92   7.58   1.60   7.20   45.69
  4763-24-6   转基因   17.67   8.80   3.89   7.22   56.08
  4763-24-7   转基因   14.42   8.78   5.30   9.12   57.06
  4763-25-2   转基因   18.05   8.68   4.35   7.01   54.70
  4763-25-3   转基因   26.62   10.06   7.29   6.10   38.93
  4763-27-3   转基因   40.91   8.92   3.40   5.04   24.89
  4763-27-9   转基因   19.61   14.67   15.70   3.95   19.56
  4763-28-1   转基因   50.19   9.71   1.88   6.14   30.45
  4763-28-2   转基因   37.35   7.78   1.61   6.18   46.12
  4763-30-12   转基因   8.04   7.22   2.11   7.87   73.03
  4763-30-13   转基因   9.08   7.55   2.17   9.44   69.75
  Centennial-1   Control   0.00   6.33   2.18   15.74   74.86
  Centennial-3   Control   0.00   6.97   2.13   13.92   76.18
这些数据表明多种来源的Δ6去饱和酶可用于增加红花中GLA的产量。天然含有高含量LA的植物如Centennial中Δ6去饱和酶的转基因表达对于增加GLA的含量是有效的。
序列表
<110>阿凯迪亚生物科学公司
可耐福·维克·C
克里斯廷·休梅克
弗利德·弗兰克·J
艾姆雷·唐纳德
雷·埃里克
<120>高γ-亚麻酸红花
<130>595792000840
<150>US 60/684,134
<151>2005-05-23
<150>US 60/735,984
<151>2005-11-10
<160>19
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>7803
<212>DNA
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Plasmid pSBS4766
<400>1
ctgcaggaat tcgatctcta ttgattcaaa ttacgatctg atactgataa cgtctagatt  60
tttagggtta aagcaatcaa tcacctgacg attcaaggtg gttggatcat gacgattcca 120
gaaaacatca agcaagctct caaagctaca ctctttggga tcatactgaa ctctaacaac 180
ctcgttatgt cccgtagtgc cagtacagac atcctcgtaa ctcggattgt gcacgatgcc 240
atgactatac ccaacctcgg tcttggtcac accaggaact ctctggtaag ctagctccac 300
tccccagaaa caaccggcgc caaattgcgc gaattgctga cctgaagacg gaacatcatc 360
gtcgggtcct tgggcgattg cggcggaaga tgggtcagct tgggcttgag gacgagaccc 420
gaatccgagt ctgttgaaaa ggttgttcat tggggatttg tatacggaga ttggtcgtcg 480
agaggtttga gggaaaggac aaatgggttt ggctctggag aaagagagtg cggctttaga 540
gagagaattg agaggtttag agagagatgc ggcggcgatg agcggaggag agacgacgag 600
gacctgcatt atcaaagcag tgacgtggtg aaatttggaa cttttaagag gcagatagat 660
ttattatttg tatccatttt cttcattgtt ctagaatgtc gcggaacaaa ttttaaaact  720
aaatcctaaa tttttctaat tttgttgcca atagtggata tgtgggccgt atagaaggaa  780
tctattgaag gcccaaaccc atactgacga gcccaaaggt tcgttttgcg ttttatgttt  840
cggttcgatg ccaacgccac attctgagct aggcaaaaaa caaacgtgtc tttgaataga  900
ctcctctcgt taacacatgc agcggctgca tggtgacgcc attaacacgt ggcctacaat  960
tgcatgatgt ctccattgac acgtgacttc tcgtctcctt tcttaatata tctaacaaac 1020
actcctacct cttccaaaat atatacacat ctttttgatc aatctctcat tcaaaatctc 1080
attctctcta gtaaacaaga acaaaaaacc atggctgctg ctcccagtgt gaggacgttt 1140
actcgggccg aggttttgaa tgccgaggct ctgaatgagg gcaagaagga tgccgaggca 1200
cccttcttga tgatcatcga caacaaggtg tacgatgtcc gcgagttcgt ccctgatcat 1260
cccggtggaa gtgtgattct cacgcacgtt ggcaaggacg gcactgacgt ctttgacact 1320
tttcaccccg aggctgcttg ggagactctt gccaactttt acgttggtga tattgacgag 1380
agcgaccgcg atatcaagaa tgatgacttt gcggccgagg tccgcaagct gcgtaccttg 1440
ttccagtctc ttggttacta cgattcttcc aaggcatact acgccttcaa ggtctcgttc 1500
aacctctgca tctggggttt gtcgacggtc attgtggcca agtggggcca gacctcgacc 1560
ctcgccaacg tgctctcggc tgcgcttttg ggtctgttct ggcagcagtg cggatggttg 1620
gctcacgact ttttgcatca ccaggtcttc caggaccgtt tctggggtga tcttttcggc 1680
gccttcttgg gaggtgtctg ccagggcttc tcgtcctcgt ggtggaagga caagcacaac 1740
actcaccacg ccgcccccaa cgtccacggc gaggatcccg acattgacac ccaccctctg 1800
ttgacctgga gtgagcatgc gttggagatg ttctcggatg tcccagatga ggagctgacc 1860
cgcatgtggt cgcgtttcat ggtcctgaac cagacctggt tttacttccc cattctctcg 1920
tttgcccgtc tctcctggtg cctccagtcc attctctttg tgctgcctaa cggtcaggcc 1980
cacaagccct cgggcgcgcg tgtgcccatc tcgttggtcg agcagctgtc gcttgcgatg 2040
cactggacct ggtacctcgc caccatgttc ctgttcatca aggatcccgt caacatgctg 2100
gtgtactttt tggtgtcgca ggcggtgtgc ggaaacttgt tggcgatcgt gttctcgctc 2160
aaccacaacg gtatgcctgt gatctcgaag gaggaggcgg tcgatatgga tttcttcacg 2220
aagcagatca tcacgggtcg tgatgtccac ccgggtctat ttgccaactg gttcacgggt 2280
ggattgaact atcagatcga gcaccacttg ttcccttcga tgcctcgcca caacttttca 2340
aagatccagc ctgctgtcga gaccctgtgc aaaaagtaca atgtccgata ccacaccacc 2400
ggtatgatcg agggaactgc agaggtcttt agccgtctga acgaggtctc caaggctgcc 2460
tccaagatgg gtaaggcgca gtaagcttgt taccccactg atgtcatcgt catagtccaa 2520
taactccaat gtcggggagt tagtttatga ggaataaagt gtttagaatt tgatcagggg 2580
gagataataa aagccgagtt tgaatctttt tgttataagt aatgtttatg tgtgtttcta 2640
tatgttgtca aatggtccca tgtttttctt cctctctttt tgtaacttgc aagtgttgtg 2700
ttgtacttta tttggcttct ttgtaagttg gtaacggtgg tctatatatg gaaaaggtct 2760
tgttttgtta aacttatgtt agttaactgg attcgtcttt aaccacaaaa agttttcaat 2820
aagctacaaa tttagacacg caagccgatg cagtcattag tacatatatt tattgcaagt 2880
gattacatgg caacccaaac ttcaaaaaca gtaggttgct ccatttagta acctgaattg 2940
cctcctgatt ctagttgatc ccggtaccga attccaggaa ttcgatctct attgattcaa 3000
attacgatct gatactgata acgtctagat ttttagggtt aaagcaatca atcacctgac 3060
gattcaaggt ggttggatca tgacgattcc agaaaacatc aagcaagctc tcaaagctac 3120
actctttggg atcatactga actctaacaa cctcgttatg tcccgtagtg ccagtacaga 3180
catcctcgta actcggattg tgcacgatgc catgactata cccaacctcg gtcttggtca 3240
caccaggaac tctctggtaa gctagctcca ctccccagaa acaaccggcg ccaaattgcg 3300
cgaattgctg acctgaagac ggaacatcat cgtcgggtcc ttgggcgatt gcggcggaag 3360
atgggtcagc ttgggcttga ggacgagacc cgaatccgag tctgttgaaa aggttgttca 3420
ttggggattt gtatacggag attggtcgtc gagaggtttg agggaaagga caaatgggtt 3480
tggctctgga gaaagagagt gcggctttag agagagaatt gagaggttta gagagagatg 3540
cggcggcgat gagcggagga gagacgacga ggacctgcat tatcaaagca gtgacgtggt 3600
gaaatttgga acttttaaga ggcagataga tttattattt gtatccattt tcttcattgt 3660
tctagaatgt cgcggaacaa attttaaaac taaatcctaa atttttctaa ttttgttgcc 3720
aatagtggat atgtgggccg tatagaagga atctattgaa ggcccaaacc catactgacg 3780
agcccaaagg ttcgttttgc gttttatgtt tcggttcgat gccaacgcca cattctgagc 3840
taggcaaaaa acaaacgtgt ctttgaatag actcctctcg ttaacacatg cagcggctgc 3900
atggtgacgc cattaacacg tggcctacaa ttgcatgatg tctccattga cacgtgactt 3960
ctcgtctcct ttcttaatat atctaacaaa cactcctacc tcttccaaaa tatatacaca 4020
tctttttgat caatctctca ttcaaaatct cattctctct agtaaacaag aacaaaaaac 4080
catggcacct cccaacacta tcgatgccgg tttgacccag cgtcatatca gcacctcggc 4140
cccaaactcg gccaagcctg ccttcgagcg caactaccag ctccccgagt tcaccatcaa 4200
ggagatccga gagtgcatcc ctgcccactg ctttgagcgc tccggtctcc gtggtctctg 4260
ccacgttgcc atcgatctga cttgggcgtc gctcttgttc ctggctgcga cccagatcga 4320
caagtttgag aatcccttga tccgctattt ggcctggcct gtttactgga tcatgcaggg 4380
tattgtctgc accggtgtct gggtgctggc tcacgagtgt ggtcatcagt ccttctcgac 4440
ctccaagacc ctcaacaaca cagttggttg gatcttgcac tcgatgctct tggtccccta 4500
ccactcctgg agaatctcgc actcgaagca ccacaaggcc actggccata tgaccaagga 4560
ccaggtcttt gtgcccaaga cccgctccca ggttggcttg cctcccaagg agaacgctgc 4620
tgctgccgtt caggaggagg acatgtccgt gcacctggat gaggaggctc ccattgtgac 4680
tttgttctgg atggtgatcc agttcttgtt cggatggccc gcgtacctga ttatgaacgc 4740
ctctggccaa gactacggcc gctggacctc gcacttccac acgtactcgc ccatctttga 4800
gccccgcaac tttttcgaca ttattatctc ggacctcggt gtgttggctg ccctcggtgc 4860
cctgatctat gcctccatgc agttgtcgct cttgaccgtc accaagtact atattgtccc 4920
ctacctcttt gtcaactttt ggttggtcct gatcaccttc ttgcagcaca ccgatcccaa 4980
gctgccccat taccgcgagg gtgcctggaa tttccagcgt ggagctcttt gcaccgttga 5040
ccgctcgttt ggcaagttct tggaccatat gttccacggc attgtccaca cccatgtggc 5100
ccatcacttg ttctcgcaaa tgccgttcta ccatgctgag gaagctacct atcatctcaa 5160
gaaactgctg ggagagtact atgtgtacga cccatccccg atcgtcgttg cggtctggag 5220
gtcgttccgt gagtgccgat tcgtggagga tcagggagac gtggtctttt tcaagaagta 5280
agcttgttac cccactgatg tcatcgtcat agtccaataa ctccaatgtc ggggagttag 5340
tttatgagga ataaagtgtt tagaatttga tcagggggag ataataaaag ccgagtttga 5400
atctttttgt tataagtaat gtttatgtgt gtttctatat gttgtcaaat ggtcccatgt 5460
ttttcttcct ctctttttgt aacttgcaag tgttgtgttg tactttattt ggcttctttg 5520
taagttggta acggtggtct atatatggaa aaggtcttgt tttgttaaac ttatgttagt 5580
taactggatt cgtctttaac cacaaaaagt tttcaataag ctacaaattt agacacgcaa 5640
gccgatgcag tcattagtac atatatttat tgcaagtgat tacatggcaa cccaaacttc 5700
aaaaacagta ggttgctcca tttagtaacc tgaattgcct cctgattcta gttgatcccg 5760
gtgaatccaa aaattacgga tatgaatata ggcatatccg tatccgaatt atccgtttga 5820
cagctagcaa cgattgtaca attgcttctt taaaaaagga agaaagaaag aaagaaaaga 5880
atcaacatca gcgttaacaa acggccccgt tacggcccaa acggtcatat agagtaacgg 5940
cgttaagcgt tgaaagactc ctatcgaaat acgtaaccgc aaacgtgtca tagtcagatc 6000
ccctcttcct tcaccgcctc aaacacaaaa ataatcttct acagcctata tatacaaccc 6060
ccccttctat ctctcctttc tcacaattca tcatctttct ttctctaccc ccaattttaa 6120
gaaatcctct cttctcctct tcattttcaa ggtaaatctc tctctctctc tctctctctg 6180
ttattccttg ttttaattag gtatgtatta ttgctagttt gttaatctgc ttatcttatg 6240
tatgccttat gtgaatatct ttatcttgtt catctcatcc gtttagaagc tataaatttg 6300
ttgatttgac tgtgtatcta cacgtggtta tgtttatatc taatcagata tgaatttctt 6360
catattgttg cgtttgtgtg taccaatccg aaatcgttga tttttttcat ttaatcgtgt 6420
agctaattgt acgtatacat atggatctac gtatcaattg ttcatctgtt tgtgtttgta 6480
tgtatacaga tctgaaaaca tcacttctct catctgattg tgttgttaca tacatagata 6540
tagatctgtt atatcatttt tttattaatt gtgtatatat atatgtgcat agatctggat 6600
tacatgattg tgattattta catgattttg ttatttacgt atgtatatat gtagatctgg 6660
actttttgga gttgttgact tgattgtatt tgtgtgtgta tatgtgtgtt ctgatcttga 6720
tatgttatgt atgtgcagcc aaggctacgg gcgatccacc atgtctccgg agaggagacc 6780
agttgagatt aggccagcta cagcagctga tatggccgcg gtttgtgata tcgttaacca 6840
ttacattgag acgtctacag tgaactttag gacagagcca caaacaccac aagagtggat 6900
tgatgatcta gagaggttgc aagatagata cccttggttg gttgctgagg ttgagggtgt 6960
tgtggctggt attgcttacg ctgggccctg gaaggctagg aacgcttacg attggacagt 7020
tgagagtact gtttacgtgt cacataggca tcaaaggttg ggcctaggtt ccacattgta 7080
cacacatttg cttaagtcta tggaggcgca aggttttaag tctgtggttg ctgttatagg 7140
ccttccaaac gatccatctg ttaggttgca tgaggctttg ggatacacag cccggggtac 7200
attgcgcgca gctggataca agcatggtgg atggcatgat gttggttttt ggcaaaggga 7260
ttttgagttg ccagctcctc caaggccagt taggccagtt acccagatct gagtcgaccg 7320
aatgagttcc aagatggttt gtgacgaagt tagttggttg tttttatgga actttgttta 7380
agctagcttg taatgtggaa agaacgtgtg gctttgtggt ttttaaatgt tggtgaataa 7440
agatgtttcc tttggattaa ctagtatttt tcctattggt ttcatggttt tagcacacaa 7500
cattttaaat atgctgttag atgatatgct gcctgcttta ttatttactt acccctcacc 7560
ttcagtttca aagttgttgc aatgactctg tgtagtttaa gatcgagtga aagtagattt 7620
tgtctatatt tattaggggt atttgatatg ctaatggtaa acatggttta tgacagcgta 7680
cttttttggt tatggtgttg acgtttcctt ttaaacatta tagtagcgtc cttggtctgt 7740
gttcattggt tgaacaaagg cacactcact tggagatgcc gtctccactg atatttgaac 7800
aaa                                                               7803
<210>2
<211>5003
<212>DNA
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Plasmid pSBS4119
<400>2
ctgcaggaat tcgatctcta ttgattcaaa ttacgatctg atactgataa cgtctagatt   60
tttagggtta aagcaatcaa tcacctgacg attcaaggtg gttggatcat gacgattcca  120
gaaaacatca agcaagctct caaagctaca ctctttggga tcatactgaa ctctaacaac  180
ctcgttatgt cccgtagtgc cagtacagac atcctcgtaa ctcggattgt gcacgatgcc  240
atgactatac ccaacctcgg tcttggtcac accaggaact ctctggtaag ctagctccac  300
tccccagaaa caaccggcgc caaattgcgc gaattgctga cctgaagacg gaacatcatc  360
gtcgggtcct tgggcgattg cggcggaaga tgggtcagct tgggcttgag gacgagaccc  420
gaatccgagt ctgttgaaaa ggttgttcat tggggatttg tatacggaga ttggtcgtcg  480
agaggtttga gggaaaggac aaatgggttt ggctctggag aaagagagtg cggctttaga  540
gagagaattg agaggtttag agagagatgc ggcggcgatg agcggaggag agacgacgag  600
gacctgcatt atcaaagcag tgacgtggtg aaatttggaa cttttaagag gcagatagat  660
ttattatttg tatccatttt cttcattgtt ctagaatgtc gcggaacaaa ttttaaaact  720
aaatcctaaa tttttctaat tttgttgcca atagtggata tgtgggccgt atagaaggaa  780
tctattgaag gcccaaaccc atactgacga gcccaaaggt tcgttttgcg ttttatgttt  840
cggttcgatg ccaacgccac attctgagct aggcaaaaaa caaacgtgtc tttgaataga  900
ctcctctcgt taacacatgc agcggctgca tggtgacgcc attaacacgt ggcctacaat  960
tgcatgatgt ctccattgac acgtgacttc tcgtctcctt tcttaatata tctaacaaac 1020
actcctacct cttccaaaat atatacacat ctttttgatc aatctctcat tcaaaatctc 1080
attctctcta gtaaacaaga acaaaaaacc atggtccagg ggcaaaaggc cgagaagatc 1140
tcgtgggcga ccatccgtga gcacaaccgc caagacaacg cgtggatcgt gatccaccac 1200
aaggtgtacg acatctcggc ctttgaggac cacccgggcg gcgtcgtcat gttcacgcag 1260
gccggcgaag acgcgaccga tgcgttcgct gtcttccacc cgagctcggc gctcaagctc 1320
ctcgagcagt actacgtcgg cgacgtcgac cagtcgacgg cggccgtcga cacgtcgatc 1380
tcggacgagg tcaagaagag ccagtcggac ttcattgcgt cgtaccgcaa gctgcgcctt 1440
gaagtcaagc gcctcggctt gtacgactcg agcaagctct actacctcta caagtgcgcc 1500
tcgacgctga gcattgcgct tgtgtcggcg gccatttgcc tccactttga ctcgacggcc 1560
atgtacatgg tcgcggctgt catccttggc ctcttttacc agcagtgcgg ctggctcgcc 1620
catgactttc tgcaccacca agtgtttgag aaccacttgt ttggcgacct cgtcggcgtc 1680
atggtcggca acctctggca gggcttctcg gtgcagtggt ggaagaacaa gcacaacacg 1740
caccatgcga tccccaacct ccacgcgacg cccgagatcg ccttccacgg cgacccggac 1800
attgacacga tgccgattct cgcgtggtcg ctcaagatgg cgcagcacgc ggtcgactcg 1860
cccgtcgggc tcttcttcat gcgctaccaa gcgtacctgt actttcccat cttgctcttt 1920
gcgcgtatct cgtgggtgat ccagtcggcc atgtacgcct tctacaacgt tgggcccggc 1980
ggcacctttg acaaggtcca gtacccgctg ctcgagcgcg ccggcctcct cctctactac 2040
ggctggaacc tcggccttgt gtacgcagcc aacatgtcgc tgctccaagc ggctgcgttc 2100
ctctttgtga gccaggcgtc gtgcggcctc ttcctcgcga tggtctttag cgtcggccac 2160
aacggcatgg aggtctttga caaggacagc aagcccgatt tttggaagct gcaagtgctc 2220
tcgacgcgca acgtgacgtc gtcgctctgg atcgactggt tcatgggcgg cctcaactac 2280
cagatcgacc accacttgtt cccgatggtg ccccggcaca acctcccggc gctcaacgtg 2340
ctcgtcaagt cgctctgcaa gcagtacgac atcccatacc acgagacggg cttcatcgcg 2400
ggcatggccg aggtcgtcgt gcacctcgag cgcatctcga tcgagttctt caaggagttt 2460
cccgccatgt aagcttgtta ccccactgat gtcatcgtca tagtccaata actccaatgt 2520
cggggagtta gtttatgagg aataaagtgt ttagaatttg atcaggggga gataataaaa 2580
gccgagtttg aatctttttg ttataagtaa tgtttatgtg tgtttctata tgttgtcaaa 2640
tggtcccatg tttttcttcc tctctttttg taacttgcaa gtgttgtgtt gtactttatt 2700
tggcttcttt gtaagttggt aacggtggtc tatatatgga aaaggtcttg ttttgttaaa 2760
cttatgttag ttaactggat tcgtctttaa ccacaaaaag ttttcaataa gctacaaatt 2820
tagacacgca agccgatgca gtcattagta catatattta ttgcaagtga ttacatggca 2880
acccaaactt caaaaacagt aggttgctcc atttagtaac ctgaattgcc tcctgattct 2940
agttgatccc ggtaccgaat tcgaatccaa aaattacgga tatgaatata ggcatatccg 3000
tatccgaatt atccgtttga cagctagcaa cgattgtaca attgcttctt taaaaaagga 3060
agaaagaaag aaagaaaaga atcaacatca gcgttaacaa acggccccgt tacggcccaa 3120
acggtcatat agagtaacgg cgttaagcgt tgaaagactc ctatcgaaat acgtaaccgc 3180
aaacgtgtca tagtcagatc ccctcttcct tcaccgcctc aaacacaaaa ataatcttct 3240
acagcctata tatacaaccc ccccttctat ctctcctttc tcacaattca tcatctttct 3300
ttctctaccc ccaattttaa gaaatcctct cttctcctct tcattttcaa ggtaaatctc 3360
tctctctctc tctctctctg ttattccttg ttttaattag gtatgtatta ttgctagttt 3420
gttaatctgc ttatcttatg tatgccttat gtgaatatct ttatcttgtt catctcatcc 3480
gtttagaagc tataaatttg ttgatttgac tgtgtatcta cacgtggtta tgtttatatc 3540
taatcagata tgaatttctt catattgttg cgtttgtgtg taccaatccg aaatcgttga 3600
tttttttcat ttaatcgtgt agctaattgt acgtatacat atggatctac gtatcaattg 3660
ttcatctgtt tgtgtttgta tgtatacaga tctgaaaaca tcacttctct catctgattg 3720
tgttgttaca tacatagata tagatctgtt atatcatttt tttattaatt gtgtatatat 3780
atatgtgcat agatctggat tacatgattg tgattattta catgattttg ttatttacgt 3840
atgtatatat gtagatctgg actttttgga gttgttgact tgattgtatt tgtgtgtgta 3900
tatgtgtgtt ctgatcttga tatgttatgt atgtgcagcc aaggctacgg gcgatccacc 3960
atgtctccgg agaggagacc agttgagatt aggccagcta cagcagctga tatggccgcg 4020
gtttgtgata tcgttaacca ttacattgag acgtctacag tgaactttag gacagagcca 4080
caaacaccac aagagtggat tgatgatcta gagaggttgc aagatagata cccttggttg 4140
gttgctgagg ttgagggtgt tgtggctggt attgcttacg ctgggccctg gaaggctagg 4200
aacgcttacg attggacagt tgagagtact gtttacgtgt cacataggca tcaaaggttg 4260
ggcctaggtt ccacattgta cacacatttg cttaagtcta tggaggcgca aggttttaag 4320
tctgtggttg ctgttatagg ccttccaaac gatccatctg ttaggttgca tgaggctttg 4380
ggatacacag cccggggtac attgcgcgca gctggataca agcatggtgg atggcatgat 4440
gttggttttt ggcaaaggga ttttgagttg ccagctcctc caaggccagt taggccagtt 4500
acccagatct gagtcgaccg aatgagttcc aagatggttt gtgacgaagt tagttggttg 4560
tttttatgga actttgttta agctagcttg taatgtggaa agaacgtgtg gctttgtggt 4620
ttttaaatgt tggtgaataa agatgtttcc tttggattaa ctagtatttt tcctattggt 4680
ttcatggttt tagcacacaa cattttaaat atgctgttag atgatatgct gcctgcttta 4740
ttatttactt acccctcacc ttcagtttca aagttgttgc aatgactctg tgtagtttaa 4800
gatcgagtga aagtagattt tgtctatatt tattaggggt atttgatatg ctaatggtaa 4860
acatggttta tgacagcgta cttttttggt tatggtgttg acgtttcctt ttaaacatta 4920
tagtagcgtc cttggtctgt gttcattggt tgaacaaagg cacactcact tggagatgcc 4980
gtctccactg atatttgaac aaa                                         5003
<210>3
<211>5013
<212>DNA
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Plasmid pSBS4763
<400>3
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tttagggtta aagcaatcaa tcacctgacg attcaaggtg gttggatcat gacgattcca  120
gaaaacatca agcaagctct caaagctaca ctctttggga tcatactgaa ctctaacaac  180
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tccccagaaa caaccggcgc caaattgcgc gaattgctga cctgaagacg gaacatcatc  360
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agaggtttga gggaaaggac aaatgggttt ggctctggag aaagagagtg cggctttaga  540
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ttattatttg tatccatttt cttcattgtt ctagaatgtc gcggaacaaa ttttaaaact  720
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actcctacct cttccaaaat atatacacat ctttttgatc aatctctcat tcaaaatctc 1080
attctctcta gtaaacaaga acaaaaaacc atggctgctg ctcccagtgt gaggacgttt 1140
actcgggccg aggttttgaa tgccgaggct ctgaatgagg gcaagaagga tgccgaggca 1200
cccttcttga tgatcatcga caacaaggtg tacgatgtcc gcgagttcgt ccctgatcat 1260
cccggtggaa gtgtgattct cacgcacgtt ggcaaggacg gcactgacgt ctttgacact 1320
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ttccagtctc ttggttacta cgattcttcc aaggcatact acgccttcaa ggtctcgttc 1500
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ttgacctgga gtgagcatgc gttggagatg ttctcggatg tcccagatga ggagctgacc 1860
cgcatgtggt cgcgtttcat ggtcctgaac cagacctggt tttacttccc cattctctcg 1920
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cactggacct ggtacctcgc caccatgttc ctgttcatca aggatcccgt caacatgctg 2100
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catcatcttt ctttctctac ccccaatttt aagaaatcct ctcttctcct cttcattttc 3360
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ttcatctcat ccgtttagaa gctataaatt tgttgatttg actgtgtatc tacacgtggt 3540
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acgtatcaat tgttcatctg tttgtgtttg tatgtataca gatctgaaaa catcacttct 3720
ctcatctgat tgtgttgtta catacataga tatagatctg ttatatcatt tttttattaa 3780
ttgtgtatat atatatgtgc atagatctgg attacatgat tgtgattatt tacatgattt 3840
tgttatttac gtatgtatat atgtagatct ggactttttg gagttgttga cttgattgta 3900
tttgtgtgtg tatatgtgtg ttctgatctt gatatgttat gtatgtgcag ccaaggctac 3960
gggcgatcca ccatgtctcc ggagaggaga ccagttgaga ttaggccagc tacagcagct 4020
gatatggccg cggtttgtga tatcgttaac cattacattg agacgtctac agtgaacttt 4080
aggacagagc cacaaacacc acaagagtgg attgatgatc tagagaggtt gcaagataga 4140
tacccttggt tggttgctga ggttgagggt gttgtggctg gtattgctta cgctgggccc 4200
tggaaggcta ggaacgctta cgattggaca gttgagagta ctgtttacgt gtcacatagg 4260
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caaggtttta agtctgtggt tgctgttata ggccttccaa acgatccatc tgttaggttg 4380
catgaggctt tgggatacac agcccggggt acattgcgcg cagctggata caagcatggt 4440
ggatggcatg atgttggttt ttggcaaagg gattttgagt tgccagctcc tccaaggcca 4500
gttaggccag ttacccagat ctgagtcgac cgaatgagtt ccaagatggt ttgtgacgaa 4560
gttagttggt tgtttttatg gaactttgtt taagctagct tgtaatgtgg aaagaacgtg 4620
tggctttgtg gtttttaaat gttggtgaat aaagatgttt cctttggatt aactagtatt 4680
tttcctattg gtttcatggt tttagcacac aacattttaa atatgctgtt agatgatatg 4740
ctgcctgctt tattatttac ttacccctca ccttcagttt caaagttgtt gcaatgactc 4800
tgtgtagttt aagatcgagt gaaagtagat tttgtctata tttattaggg gtatttgata 4860
tgctaatggt aaacatggtt tatgacagcg tacttttttg gttatggtgt tgacgtttcc 4920
ttttaaacat tatagtagcg tccttggtct gtgttcattg gttgaacaaa ggcacactca 4980
cttggagatg ccgtctccac tgatatttga aca                              5013
<210>4
<211>448
<212>PRT
<213>Borago officinalis
<400>4
Met Ala Ala Gln Ile Lys Lys Tyr Ile Thr Ser Asp Glu Leu Lys Asn
1                    5                      10                   15
His Asp Lys Pro Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile Gln Gly Lys Ala Tyr
               20                      25                     30
Asp Val Ser Asp Trp Val Lys Asp His Pro Gly Gly Ser Phe Pro Leu
         35                      40                      45
Lys Ser Leu Ala Gly Gln Glu Val Thr Asp Ala Phe Val Ala Phe His
     50                     55                      60
Pro Ala Ser Thr Trp Lys Asn Leu Asp Lys Phe Phe Thr Gly Tyr Tyr
65                      70                      75               80
Leu Lys Asp Tyr Ser Val Ser Glu Val Ser Lys Asp Tyr Arg Lys Leu
                    85                      90                 95
Val Phe Glu Phe Ser Lys Met Gly Leu Tyr Asp Lys Lys Gly His Ile
              100                    105                    110
Met Phe Ala Thr Leu Cys Phe Ile Ala Met Leu Phe Ala Met Ser Val
         115                     120                    125
Tyr Gly Val Leu Phe Cys Glu Gly Val Leu Val His Leu Phe Ser Gly
     130                   135                      140
Cys Leu Met Gly Phe Leu Trp Ile Gln Ser Gly Trp Ile Gly His Asp
145                    150                     155               160
Ala Gly His Tyr Met Val Val Ser Asp Ser Arg Leu Asn Lys Phe Met
                   165                     170                 175
Gly Ile Phe Ala Ala Asn Cys Leu Ser Gly Ile Ser Ile Gly Trp Trp
               180                    185                     190
Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys Asn Ser Leu Glu Tyr
         195                     200                     205
Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Phe Leu Val Val Ser Ser Lys Phe
    210                     215                     220
Phe Gly Ser Leu Thr Ser His Phe Tyr Glu Lys Arg Leu Thr Phe Asp
225                     230                   235               240
Ser Leu Ser Arg Phe Phe Val Ser Tyr Gln His Trp Thr Phe Tyr Pro
               245                       250                     255
Ile Met Cys Ala Ala Arg Leu Asn Met Tyr Val Gln Ser Leu Ile Met
            260                       265                     270
Leu Leu Thr Lys Arg Asn Val Ser Tyr Arg Ala His Glu Leu Leu Gly
        275                      280                    285
Cys Leu Val Phe Ser Ile Trp Tyr Pro Leu Leu Val Ser Cys Leu Pro
    290                      295                     300
Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Val Ile Ala Ser Leu Ser Val Thr
305                     310                     315               320
Gly Met Gln Gln Val Gln Phe Ser Leu Asn His Phe Ser Ser Ser Val
                  325                    330                   335
Tyr Val Gly Lys Pro Lys Gly Asn Asn Trp Phe Glu Lys Gln Thr Asp
              340                     345                   350
Gly Thr Leu Asp Ile Ser Cys Pro Pro Trp Met Asp Trp Phe His Gly
        355                      360                    365
Gly Leu Gln Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Lys Met Pro Arg
    370                     375                     380
Cys Asn Leu Arg Lys Ile Ser Pro Tyr Val Ile Glu Leu Cys Lys Lys
385                    390                      395               400
His Asn Leu Pro Tyr Asn Tyr Ala Ser Phe Ser Lys Ala Asn Glu Met
                   405                     410                 415
Thr Leu Arg Thr Leu Arg Asn Thr Ala Leu Gln Ala Arg Asp Ile Thr
             420                     425                     430
Lys Pro Leu Pro Lys Asn Leu Val Trp Glu Ala Leu His Thr His Gly
         435                     440                    445
<210>5
<211>453
<212>PRT
<213>Primula farinosa
<400>5
Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser
1                   5                     10                     15
Ser Asp Leu Lys Ser His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile
             20                       25                      30
His Gly Gln Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Ala Leu His Pro Gly
         35                      40                      45
Gly Thr Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala
    50                      55                      60
Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu
65                      70                      75               80
Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser
                  85                     90                      95
Asp Tyr Arg Lys Leu Leu Asp Asn Phe His Lys His Gly Leu Phe Arg
             100                    105                     110
Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Phe Met Ile Ala Met
         115                     120                     125
Phe Leu Met Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val
    130                     135                     140
His Leu Ala Ser Gly Gly Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly
145                     150                   155                160
Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys
                    165                     170                175
Trp Asn Trp Phe Ala Gln Ile Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile
                 180                   185                   190
Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys
          195                     200                     205
Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val
    210                     215                     220
Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys
225                     230                      235            240
Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His
                  245                     250                 255
Trp Thr Phe tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Leu Ala
              260                     265                   270
Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Cys His Arg Ala
         275                     280                     285
Gln Glu Val Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu
    290                     295                     300
Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala
305                    310                     315               320
Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His
                    325                     330                335
Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Gly Asn Asp Trp Phe
              340                     345                    350
Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met
         355                     360                     365
Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe
    370                     375                   380
Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg
385                   390                      395                400
Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr
                 405                     410                   415
Lys Ala Asn Val Phe Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu
             420                     425                     430
Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Leu Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala
         435                   440                    445
Leu Lys Thr Leu Gly
450
<210>6
<211>453
<212>PRT
<213>Primula vialli
<400>6
Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser
1                   5                     10                      15
Ser Asp Leu Lys Gly His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile
             20                      25                       30
His Gly Glu Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Gly Leu His Pro Gly
         35                      40                      45
Gly Ser Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala
    50                      55                      60
Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu
65                      70                      75                80
Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser
                  85                     90                     95
Asp Tyr Arg Lys Leu Leu His Asn Phe His Lys Ile Gly Met Phe Arg
             100                    105                     110
Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Ile Met Ile Val Met
        115                     120                       125
Phe Leu Thr Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val
    130                     135                     140
His Leu Ala Ser Gly Ala Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly
145                     150                     155               160
Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys
                    165                     170                175
Trp Asn Trp Phe Ala Gln Val Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile
              180                     185                   190
Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys
          195                     200                    205
Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val
    210                      215                    220
Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys
225                     230                   235                 240
Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His
                  245                    250                   255
Trp Thr Phe Tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Ile Ala
                260                    265                      270
Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Gly His Arg Ala
         275                     280                     285
Gln Glu Ile Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu
    290                     295                     300
Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Ser Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala
305                   310                     315                  320
Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His
                   325                    330                  335
Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Ala Asn Asp Trp Phe
              340                     345                    350
Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met
         355                     360                     365
Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe
    370                       375                     380
Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg
385                   390                     395                  400
Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr
                 405                     410                    415
Lys Ala Asn Val Leu Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu
             420                     425                     430
Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Thr Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala
         435                     440                    445
Val His Thr His Gly
    450
<210>7
<211>457
<212>PRT
<213>Mortierella alpina
<400>7
Met Ala Ala Ala Pro Ser Val Arg Thr Phe Thr Arg Ala Glu Val Leu
1                   5                     10                      15
Asn Ala Glu Ala Leu Asn Glu Gly Lys Lys Asp Ala Glu Ala Pro Phe
             20                     25                      30
Leu Met Ile Ile Asp Asn Lys Val Tyr Asp Val Arg Glu Phe Val Pro
         35                      40                      45
Asp His Pro Gly Gly Ser Val Ile Leu Thr His Val Gly Lys Asp Gly
    50                      55                       60
Thr Asp Val Phe Asp Thr Phe His Pro Glu Ala Ala Trp Glu Thr Leu
65                    70                      75                  80
Ala Asn Phe Tyr Val Gly Asp Ile Asp Glu Ser Asp Arg Asp Ile Lys
                 85                      90                      95
Asn Asp Asp Phe Ala Ala Glu Val Arg Lys Leu Arg Thr Leu Phe Gln
             100                     105                    110
Ser Leu Gly Tyr Tyr Asp Ser Ser Lys Ala Tyr Tyr Ala Phe Lys Val
         115                     120                     125
Ser Phe Asn Leu Cys Ile Trp Gly Leu Ser Thr Val Ile Val Ala Lys
     130                    135                      140
Trp Gly Gln Thr Ser Thr Leu Ala Asn Val Leu Ser Ala Ala Leu Leu
145                     150                   155                    160
Gly Leu Phe Trp Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His
                      165                 170                    175
His Gln Val Phe Gln Asp Arg Phe Trp Gly Asp Leu Phe Gly Ala Phe
              180                    185                    190
Leu Gly Gly Val Cys Gln Gly Phe Ser Ser Ser Trp Trp Lys Asp Lys
        195                     200                     205
His Asn Thr His His Ala Ala Pro Asn Val His Gly Glu Asp Pro Asp
    210                     215                     220
Ile Asp Thr His Pro Leu Leu Thr Trp Ser Glu His Ala Leu Glu Met
225                     230                     235                   240
Phe Ser Asp Val Pro Asp Glu Glu Leu Thr Arg Met Trp Ser Arg Phe
                    245                   250                    255
Met Val Leu Asn Gln Thr Trp Phe Tyr Phe Pro Ile Leu Ser Phe Ala
             260                     265                     270
Arg Leu Ser Trp Cys Leu Gln Ser Ile Leu Phe Val Leu Pro Asn Gly
        275                     280                     285
Gln Ala His Lys Pro Ser Gly Ala Arg Val Pro Ile Ser Leu Val Glu
    290                     295                     300
Gln Leu Ser Leu Ala Met His Trp Thr Trp Tyr Leu Ala Thr Met Phe
305                    310                    315                    320
Leu Phe Ile Lys Asp Pro Val Asn Met Leu Val Tyr Phe Leu Val Ser
                  325                    330                    335
Gln Ala Val Cys Gly Asn Leu Leu Ala Ile Val Phe Ser Leu Asn His
             340                    345                     350
Asn Gly Met Pro Val Ile Ser Lys Glu Glu Ala Val Asp Met Asp Phe
         355                    360                     365
Phe Thr Lys Gln Ile Ile Thr Gly Arg Asp Val His Pro Gly Leu Phe
    370                      375                     380
Ala Asn Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu
385                   390                     395                    400
Phe Pro Ser Met Pro Arg His Asn Phe Ser Lys Ile Gln Pro Ala Val
                  405                     410                    415
Glu Thr Leu Cys Lys Lys Tyr Asn Val Arg Tyr His Thr Thr Gly Met
             420                    425                     430
Ile Glu Gly Thr Ala Glu Val Phe Ser Arg Leu Asn Glu Val Ser Lys
         435                    440                    445
Ala Ala Ser Lys Met Gly Lys Ala Gln
    450                     455
<210>8
<211>523
<212>PRT
<213>Mucor circinielloides
<400>8
Met Pro Pro Asn Thr Ala Ala Asp Arg Leu Leu Ser Ser Thr Ser Thr
1                   5                    10                      15
Arg Ser Ser Asn Ile Val Thr Glu Glu Lys Phe Gln Glu Leu Ile Lys
              20                     25                      30
Gln Gly Asp Ser Val Phe Ile Tyr Glu Gln Lys Val Tyr Arg Val Asn
         35                       40                     45
Asn Phe Met Ala Lys His Pro Gly Gly Glu Ala Ala Leu Arg Ser Ala
    50                      55                     60
Leu Gly Arg Asp Val Thr Asp Glu Ile Arg Thr Met His Pro Pro Gln
65                     70                    75                    80
Val Tyr Glu Lys Met Ile Asn Leu Tyr Cys Ile Gly Asp Tyr Met Pro
                 85                       90                    95
Asp Val Ile Arg Pro Ala Ser Met Lys Gln Gln His Thr Phe Thr Lys
              100                    105                     110
Pro Lys Glu Asp Lys Pro Val Leu Thr Ala Thr Trp Glu Gly Gly Phe
         115                    120                     125
Thr Val Gln Ala Tyr Asp Asp Ala Ile Gln Asp Leu His Lys His His
    130                     135                     140
Ser His Asp Leu Ile Lys Asp Ala Val Leu Gln Lys Asp Leu Asn Gly
145                     150                     155                    160
Asp Gln Ile Arg Asn Ala Tyr Arg Lys Leu Glu Ala Glu Leu Tyr Ala
                   165                    170                    175
Lys Gly Leu Phe Lys Cys Asn Tyr Trp Lys Tyr Ala Arg Glu Gly Cys
             180                     185                    190
Arg Tyr Thr Leu Leu Ile Phe Leu Ser Leu Trp Phe Thr Leu Lys Gly
         195                    200                     205
Thr Glu Thr Trp His Tyr Met Ala Gly Ala Ala Phe Met Ala Met Phe
    210                     215                     220
Trp His Gln Leu Val Phe Thr Ala His Asp Ala Gly His Asn Glu Ile
225                    230                    235                    240
Thr Gly Lys Ser Glu Ile Asp His Val Ile Gly Val Ile Ile Ala Asn
                  245                      250                    255
Phe Ile Gly Gly Leu Ser Leu Gly Trp Trp Lys Asp Asn His Asn Val
                260                     265                     270
His His Ile Val Thr Asn His Pro Glu His Asp Pro Asp Ile Gln His
          275                     280                     285
Val Pro Phe Met Ala Ile Thr Thr Lys Phe Phe Asn Asn Ile Tyr Ser
    290                     295                     300
Thr Tyr Tyr Lys Arg Val Leu Pro Phe Asp Ala Ala Ser Arg Phe Phe
305                     310                    315                    320
Val Arg His Gln His Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ile Leu Ser Phe Gly Arg
                  325                     330                    335
Phe Asn Leu His Arg Leu Ser Phe Ala Tyr Leu Leu Thr Cys Lys Asn
             340                     345                    350
Val Arg Thr Arg Thr Leu Glu Leu Val Gly Ile Thr Phe Phe Phe Val
         355                    360                     365
Trp Phe Gly Ser Leu Leu Ser Thr Leu Pro Thr Trp Asn Ile Arg Ile
     370                    375                    380
Ala Tyr Ile Met Val Ser Tyr Met Leu Thr Phe Pro Leu His Val Gln
385                     390                     395                    400
Ile Thr Leu Ser His Phe Gly Met Ser Thr Glu Asp Arg Gly Pro Asp
                    405                    410                    415
Glu Pro Phe Pro Ala Lys Met Leu Arg Thr Thr Met Asp Val Asp Cys
             420                    425                     430
Pro Glu Trp Leu Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Tyr Gln Ala Val
        435                     440                     445
His His Leu Phe Pro Arg Leu Pro Arg His Asn Leu Arg Gln Cys Val
    450                     455                    460
Pro Leu Val Lys Lys Phe Cys Asp Glu Val Gly Leu His Tyr Tyr Met
465                    470                    475                    480
Tyr Asn Phe Ser Thr Gly Asn Gly Val Val Leu Gly Thr Leu Lys Ser
                  485                    490                     495
Val Ala Asp Gln Val Gly Phe Met Asn Glu Val Ala Lys Ser Asn Ala
             500                    505                     510
Glu Ile Trp Ala Asn Asp Lys Glu His Ala His
          515                    520
<210>9
<211>456
<212>PRT
<213>Thraustochytrium aureum
<400>9
Met GlyArg Gly Gly Glu Lys Ser Glu Val Asp Gln Val Gln Pro Gln
1                5                      10                     15
Lys Thr Glu Gln Leu Gln Lys Ala Lys Trp Glu Asp Val Val Arg Ile
              20                     25                      30
Asn Gly Val Glu Tyr Asp Val Thr Asp Tyr Leu Arg Lys His Pro Gly
         35                      40                     45
Gly Ser Val Ile Lys Tyr Gly Leu Ala Asn Thr Gly Ala Asp Ala Thr
    50                       55                      60
Ser Leu Phe Glu Ala Phe His Met Arg Ser Lys Lys Ala Gln Met Val
65                    70                      75                    80
Leu Lys Ser Leu Pro Lys Arg Ala Pro Val Leu Glu Ile Gln Pro Asn
                  85                     90                     95
Gln Leu Pro Glu Glu Gln Thr Lys Glu Ala Glu Met Leu Arg Asp Phe
             100                     105                  110
Lys Lys Phe Glu Asp Glu Ile Arg Arg Asp Gly Leu Met Glu Pro Ser
         115                     120                    125
Phe Trp His Arg Ala Tyr Arg Leu Ser Glu Leu Val Gly Met Phe Thr
    130                     135                     140
Leu Gly Leu Tyr Leu Phe Ser Leu Asn Thr Pro Leu Ser Ile Ala Ala
145                   150                    155                    160
Gly Val Leu Val His Gly Leu Phe Gly Ala Phe Cys Gly Trp Cys Gln
                  165                    170                    175
His Glu Ala Gly His Gly Ser Phe Phe Tyr Ser Leu Trp Trp Gly Lys
              180                    185                     190
Arg Val Gln Ala Met Leu Ile Gly Phe Gly Leu Gly Thr Ser Gly Asp
         195                     200                    205
Met Trp Asn Met Met His Asn Lys His His Ala Ala Thr Gln Lys Val
    210                    215                    220
His His Asp Leu Asp Ile Asp Thr Thr Pro Phe Val Ala Phe Phe Asn
225                     230                     235                    240
Thr Ala Phe Glu Lys Asn Arg Trp Lys Gly Phe Ser Lys Ala Trp Val
                  245                    250                    255
Arg Phe Gln Ala Phe Thr Phe Ile Pro Val Thr Ser Gly Met Ile Val
             260                     265                      270
Met Leu Phe Trp Leu Phe Phe Leu His Pro Arg Arg Val Val Gln Lys
        275                    280                     285
Lys Asn Phe Glu Glu Gly Phe Trp Met Leu Ser Ser His Ile Val Arg
    290                   295                     300
Thr Tyr Leu Phe His Leu Val Thr Gly Trp Glu Ser Leu Ala Ala Cys
305                   310                     315                    320
Tyr Leu Val Gly Tyr Trp Ala Cys Met Trp Val Ser Gly Met Tyr Leu
                  325                    330                    335
Phe Gly His Phe Ser Leu Ser His Thr His Met Asp Ile Val Glu Ala
             340                     345                     350
Asp Val His Lys Asn Trp Val Arg Tyr Ala Val Asp His Thr Val Asp
          355                    360                    365
Ile Ser Pro Ser Asn Pro Leu Val Cys Trp Val Met Gly Tyr Leu Asn
    370                      375                    380
Met Gln Thr Ile His His Leu Trp Pro Ala Met Pro Gln Tyr His Gln
385                     390                     395                    400
Val Glu Val Ser Arg Arg Phe Ala Ile Phe Ala Lys Lys His Gly Leu
                   405                      410                    415
Asn Tyr Arg Val Val Ser Tyr Phe Glu Ala Trp Arg Leu Met Leu Gln
             420                      425                    430
Asn Leu Ala Asp Val Gly Ser His Tyr His Glu Asn Gly Val Lys Arg
        435                     440                     445
Ala Pro Lys Lys Ala Lys Ala Gln
    450                     455
<210>10
<211>453
<212>PRT
<213>Saprolegnia diclina
<400>10
Met Val Gln Gly Gln Lys Ala Glu Lys Ile Ser Trp Ala Thr Ile Arg
1                 5                       10                      15
Glu His Asn Arg Gln Asp Asn Ala Trp Ile Val Ile His His Lys Val
             20                      25                         30
Tyr Asp Ile Ser Ala Phe Glu Asp His Pro Gly Gly Val Val Met Phe
          35                     40                      45
Thr Gln Ala Gly Glu Asp Ala Thr Asp Ala Phe Ala Val Phe His Pro
    50                      55                      60
Ser Ser Ala Leu Lys Leu Leu Glu Gln Tyr Tyr Val Gly Asp Val Asp
65                      70                    75                    80
Gln Ser Thr Ala Ala Val Asp Thr Ser Ile Ser Asp Glu Val Lys Lys
                  85                        90                    95
Ser Gln Ser Asp Phe Ile Ala Ser Tyr Arg Lys Leu Arg Leu Glu Val
              100                     105                    110
Lys Arg Leu Gly Leu Tyr Asp Ser Ser Lys Leu Tyr Tyr Leu Tyr Lys
        115                     120                     125
Cys Ala Ser Thr Leu Ser Ile Ala Leu Val Ser Ala Ala Ile Cys Leu
    130                     135                      140
His Phe Asp Ser Thr Ala Met Tyr Met Val Ala Ala Val Ile Leu Gly
145                     150                   155                    160
Leu Phe Tyr Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His His
                  165                    170                    175
Gln Val Phe Glu Asn His Leu Phe Gly Asp Leu Val Gly Val Met Val
              180                    185                    190
Gly Asn Leu Trp Gln Gly Phe Ser Val Gln Trp Trp Lys Asn Lys His
         195                     200                     205
Asn Thr His His Ala Ile Pro Asn Leu His Ala Thr Pro Glu Ile Ala
    210                      215                    220
Phe His Gly Asp Pro Asp Ile Asp Thr Met Pro Ile Leu Ala Trp Ser
225                   230                       235                    240
Leu Lys Met Ala Gln His Ala Val Asp Ser Pro Val Gly Leu Phe Phe
                  245                     250                    255
Met Arg Tyr Gln Ala Tyr Leu Tyr Phe Pro Ile Leu Leu Phe Ala Arg
             260                     265                     270
Ile Ser Trp Val Ile Gln Ser Ala Met Tyr Ala Phe Tyr Asn Val Gly
          275                     280                     285
Pro Gly Gly Thr Phe Asp Lys Val Gln Tyr Pro Leu Leu Glu Arg Ala
    290                    295                    300
Gly Leu Leu Leu Tyr Tyr Gly Trp Asn Leu Gly Leu Val Tyr Ala Ala
305                   310                    315                    320
Asn Met Ser Leu Leu Gln Ala Ala Ala Phe Leu Phe Val Ser Gln Ala
                 325                     330                     335
Ser Cys Gly Leu Phe Leu Ala Met Val Phe Ser Val Gly His Asn Gly
             340                    345                     350
Met Glu Val Phe Asp Lys Asp Ser Lys Pro Asp Phe Trp Lys Leu Gln
        355                     360                     365
Val Leu Ser Thr Arg Asn Val Thr Ser Ser Leu Trp Ile Asp Trp Phe
    370                     375                      380
Met Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Asp His His Leu Phe Pro Met Val
385                   390                     395                    400
Pro Arg His Asn Leu Pro Ala Leu Asn Val Leu Val Lys Ser Leu Cys
                  405                     410                    415
Lys Gln Tyr Asp Ile Pro Tyr His Glu Thr Gly Phe Ile Ala Gly Met
              420                     425                     430
Ala Glu Val Val Val His Leu Glu Arg Ile Ser Ile Glu Phe Phe Lys
         435                     440                      445
Glu Phe Pro Ala Met
    450
<210>11
<211>467
<212>PRT
<213>Mucor circinelloides
<400>11
Met Ser Ser Asp Val Gly Ala Thr Val Pro His Phe Tyr Thr Arg Ala
1                   5                     10                      15
Glu Leu Ala Asp Ile His Gln Asp Val Leu Asp Lys Lys Pro Glu Ala
              20                      25                        30
Arg Lys Leu Ile Val Val Glu Asn Lys Val Tyr Asp Ile Thr Asp Phe
         35                      40                       45
Val Phe Asp His Pro Gly Gly Glu Arg Val Leu Leu Thr Gln Glu Gly
     50                     55                      60
Arg Asp Ala Thr Asp Val Phe His Glu Met His Pro Pro Ser Ala Tyr
65                    70                      75                    80
Glu Leu Leu Ala Asn Cys Tyr Val Gly Asp Cys Glu Pro Lys Leu Pro
                  85                     90                     95
Ile Asp Ser Thr Asp Lys Lys Ala Leu Asn Ser Ala Ala Phe Ala Gln
              100                     105                    110
Glu Ile Arg Asp Leu Arg Asp Lys Leu Glu Lys Gln Gly Tyr Phe Asp
          115                   120                     125
Ala Ser Thr Gly Phe Tyr Ile Tyr Lys Val Ser Thr Thr Leu Leu Val
    130                      135                     140
Cys Ile Val Gly Leu Ala Ile Leu Lys Ala Trp Gly Arg Glu Ser Thr
145                     150                     155                    160
Leu Ala Val Phe Ile Ala Ala Ser Leu Val Gly Leu Phe Trp Gln Gln
                    165                     170                    175
Cys Gly Trp Leu Ala His Asp Tyr Ala His Tyr Gln Val Ile Lys Asp
             180                     185                      190
Pro Asn Val Asn Asn Leu Phe Leu Val Thr Phe Gly Asn Leu Val Gln
         195                    200                    205
Gly Phe Ser Leu Ser Trp Trp Lys Asn Lys His Asn Thr His His Ala
    210                     215                     220
Ser Thr Asn Val Ser Gly Glu Asp Pro Asp Ile Asp Thr Ala Pro Ile
225                     230                     235                    240
Leu Leu Trp Asp Glu Phe Ala Val Ala Asn Phe Tyr Gly Ser Leu Lys
                 245                     250                     255
Asp Asn Ala Ser Gly Phe Asp Arg Phe Ile Ala Glu His Ile Leu Pro
             260                     265                     270
Tyr Gln Thr Arg Tyr Tyr Phe Phe Ile Leu Gly Phe Ala Arg Thr Ser
         275                     280                     285
Trp Ala Ile Gln Ser Ile Ile Tyr Ser Phe Lys Asn Glu Thr Leu Asn
    290                       295                     300
Lys Ser Lys Leu Leu Ser Trp Cys Glu Arg Ile Phe Leu Ile Val His
305                     310                     315                    320
Trp Val Phe Phe Thr Tyr Cys Thr Ile Ala Trp Ile Ser Ser Ile Arg
                  325                     330                    335
Asn Ile Ala Met Phe Phe Val Val Ser Gln Ile Thr Thr Gly Tyr Leu
              340                     345                     350
Leu Ala Ile Val Phe Ala Met Asn His Asn Gly Met Pro Val Tyr Ser
          355                    360                    365
Pro Glu Glu Ala Asn His Thr Glu Phe Tyr Glu Leu Gln Cys Ile Thr
     370                    375                    380
Gly Arg Asp Val Asn Cys Thr Val Phe Gly Asp Trp Leu Met Gly Gly
385                   390                     395                    400
Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Glu Met Pro Arg His
                  405                     410                    415
His Leu Ser Lys Val Lys Ser Met Val Lys Pro Ile Ala Gln Lys Tyr
             420                      425                     430
Asn Ile Pro Tyr His Asp Thr Thr Val Ile Gly Gly Thr Ile Glu Val
         435                     440                      445
Leu Gln Thr Leu Asp Phe Val Gln Lys Ile Ser Gln Lys Phe Ser Lys
    450                   455                       460
Lys Met Leu
465
<210>12
<211>383
<212>PRT
<213>Borago officinalis
<400>12
Met Gly Gly Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Lys Gly Lys Lys Ser
1                 5                      10                     15
Lys Ser Asp Val Phe Gln Arg Val Pro Ser Glu Lys Pro Pro Phe Thr
              20                      25                     30
Val Gly Asp Leu Lys Lys Val Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser
         35                     40                       45
Val Leu His Ser Phe Ser Tyr Val Val Tyr Asp Leu Val Ile Ala Ala
     50                      55                      60
Leu Phe Phe Tyr Thr Ala Ser Arg Tyr Ile His Leu Gln Pro His Pro
65                    70                        75                    80
Leu Ser Tyr Val Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Phe Cys Gln Gly Ser Val
                   85                      90                    95
Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala Phe
             100                      105                     110
Ser Asp Tyr Gln Typ Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Leu Leu His Ser
         115                    120                    125
Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His
    130                     135                     140
His Ser Asn Thr Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys
145                     150                   155                    160
Lys Arg Ser Gly Ile Ser Trp Ser Ser Glu Tyr Leu Asn Asn Pro Pro
                    165                     170                   175
Gly Arg Val Leu Val Leu Leu Val Gln Leu Thr Leu Gly Trp Pro Leu
             180                     185                     190
Tyr Leu Met Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Arg Phe Ala Cys
        195                     200                     205
His Phe Asp Pro Lys Ser Pro Ile Tyr Asn Asp Arg Glu Arg Leu Gln
    210                     215                     220
Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Val Ala Val Met Tyr Gly Leu Tyr
225                      230                      235                    240
Arg Leu Val Ala Ala Lys Gly Val Ala Trp Val Val Cys Tyr Tyr Gly
                  245                     250                    255
Val Pro Leu Leu Val Val Asn Gly Phe Leu Val Leu Ile Thr Tyr Leu
             260                     265                     270
Gln His Thr Gln Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Ser Glu Trp Asp
         275                     280                     285
Trp Leu Lys Gly Ala Leu Ala Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Phe Leu
    290                     295                     300
Asn Lys Val Leu His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His Leu
305                   310                       315                    320
Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile
                  325                     330                    335
Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr Gln Cys Asp Arg Thr Pro Val Phe
              340                    345                     350
Lys Ala Met Tyr Arg Glu Val Lys Glu Cys Ile Tyr Val Glu Ala Asp
        355                     360                      365
Glu Gly Asp Asn Lys Lys Gly Val Phe Trp Tyr Lys Asn Lys Leu
    370                    375                    380
<210>13
<211>382
<212>PRT
<213>Helianthus annuus
<400>13
Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Ser Ser Pro Asn Gly Lys Glu Lys Asp
1                 5                      10                      15
Gly Pro Lys Pro Leu Glu Arg Ala Leu His Glu Lys Pro Pro Phe Thr
             20                      25                      30
Val Gly Asp Ile Lys Lys Val Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser
         35                      40                      45
Val Ile Arg Ser Phe Ser Tyr Val Val Tyr Asp Leu Thr Ile Ala Ser
    50                       55                      60
Ile Phe Tyr Tyr Leu Ala Asn Asn Tyr Ile Pro Leu Leu Pro Asn Ser
65                      70                      75                    80
Leu Ala Tyr Val Ala Trp Pro Val Tyr Trp Ile Phe Gln Gly Cys Val
                  85                     90                      95
Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala Phe
             100                      105                     110
Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Ile Leu His Ser
         115                     120                    125
Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His
    130                     135                     140
His Ser Asn Thr Gly Ser Ile Glu His Asp Glu Val Phe Val Pro Lys
145                     150                     155                    160
Leu Lys Ser Ser Val Arg Ser Thr Ala Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Pro
                   165                     170                    175
Gly Arg Ile Leu Thr Leu Leu Val Thr Leu Thr Met Gly Trp Pro Leu
              180                     185                    190
Tyr Leu Met Phe Asn Val Ser Gly Arg Tyr Tyr Asp Arg Phe Ala Cys
        195                     200                     205
His Phe Asp Pro Asn Ser Pro Ile Tyr Ser Asn Arg Glu Arg Ala Gln
    210                     215                     220
Ile Phe Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Thr Val Phe Tyr Ile Leu Phe
225                      230                     235                    240
Arg Leu Ala Ser Thr Lys Gly Leu Val Trp Val Leu Thr Met Tyr Gly
                  245                    250                    255
Gly Pro Leu Leu Val Val Asn Gly Phe Leu Val Leu Ile Thr Phe Leu
             260                     265                     270
Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asp
         275                     280                     285
Trp Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile Leu
    290                     295                     300
Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Thr His His Leu
305                   310                     315                    320
Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile
                  325                     330                    335
Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr Gln Phe Asp Gly Thr Ser Ile Phe
              340                    345                     350
Lys Ala Met Tyr Arg Glu Thr Lys Glu Cys Ile Tyr Val Asp Lys Asp
         355                    360                      365
Glu Asp Val Lys Asp Gly Val Tyr Trp Tyr Arg Asn Lys Ile
    370                     375                     380
<210>14
<211>384
<212>PRT
<213>Brassica napus
<400>14
Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Gln Val Ser Pro Pro Ser Ser Ser Pro
1                 5                       10                     15
Gly Thr Asn Thr Leu Lys Arg Val Pro Cys Glu Thr Pro Pro Phe Thr
             20                      25                       30
Val Gly Glu Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser
         35                      40                       45
Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Ile Trp Asp Ile Ile Ile Ala Ser
     50                      55                        60
Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Thr Tyr Phe Pro Leu Leu Pro His Pro
65                      70                      75                    80
Leu Ser Tyr Phe Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Ala Cys Gln Gly Cys Val
                  85                      90                      95
Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala Phe
             100                      105                     110
Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Ile Phe His Ser
         115                    120                     125
Phe Pro Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His
    130                     135                      140
His Ser Asn Thr Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys
145                     150                    155                    160
Lys Lys Ser Asp Ile Lys Trp Tyr Gly Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Leu
                    165                     170                    175
Gly Arg Thr Val Met Leu Thr Val Gln Phe Thr Leu Gly Trp Pro Leu
              180                        185                190
Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Ser Asp Gly Phe Ala
         195                     200                     205
Cys His Phe His Pro Asn Ala Pro Ile Tyr Asn Asp Arg Glu Arg Leu
    210                     215                     220
Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Val Leu Ser Val Cys Tyr Gly Leu
225                      230                     235                    240
Tyr Arg Tyr Ala Gly Ser Arg Gly Val Ala Ser Met Val Cys Val Tyr
                  245                     250                    255
Gly Val Pro Leu Met Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Leu Ile Thr Tyr
             260                     265                     270
Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Ser Glu Trp
        275                      280                     285
Asp Trp Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile
    290                     295                   300
Leu Ser Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His
305                     310                    315                     320
Leu Phe Ser Thr Met Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala
                 325                     330                     335
Ile Lys Pro Ile Leu Gly Glu Tyr Tyr Gln Phe Asp Gly Thr Pro Val
              340                    345                       350
Val Lys Ala Met Trp Ary Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Val Glu Pro
         355                     360                     365
Asp Arg Gln Gly Glu Lys Lys Gly Val Phe Trp Tyr Asn Asn Lys Leu
    370                     375                     380
<210>15
<211>388
<212>PRT
<213>Oriza sativa
<400>15
Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Thr Glu Lys Glu Arg Glu Glu Gln Gln
1                 5                      10                      15
Lys Leu Leu Gly Arg Ala Gly Asn Gly Ala Ala Val Gln Arg Ser Pro
             20                     25                      30
Thr Asp Lys Pro Pro Phe Thr Leu Gly Gln Ile Lys Lys Ala Ile Pro
         35                     40                      45
Pro His Cys Phe Gln Arg Ser Val Ile Lys Ser Phe Ser Tyr Val Val
    50                      55                       60
His Asp Leu Val Ile Val Ala Ala Leu Leu  Tyr Phe Ala Leu Val Met
65                      70                       75                    80
Ile Pro Val Leu Pro Ser Gly Met Glu Phe Ala Ala Trp Pro Leu Tyr
                    85                        90                   95
Trp Ile Ala Gln Gly Cys Val Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His
              100                     105                     110
Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Asp Tyr Ser Val Leu Asp Asp Ile
        115                     120                     125
Val Gly Leu Val Leu His Ser Ser Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp
    130                     135                     140
Lys Tyr Ser His Arg Arg His His Ser Asn Thr Gly Ser Leu Glu Arg
145                     150                     155                    160
Asp Glu Val Phe Val Pro Lys Gln Lys Ser Ala Met Ala Trp Tyr Thr
                  165                     170                     175
Pro Tyr Val Tyr His Asn Pro Ile Gly Arg Leu Val HisIle Phe Val
              180                     185                     190
Gln Leu Thr Leu Gly Trp Pro Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly
        195                      200                    205
Arg Pro Tyr Pro Arg Phe Ala Cys His Phe Asp Pro Tyr Gly Pro Ile
    210                     215                     220
Tyr Asn Asp Arg Glu Arg Val Gln Ile Phe Ile Ser Asp Val Gly Val
225                   230                       235                    240
Val Ser Ala Gly Leu Ala Leu Phe Lys Leu Ser Ser Ala Phe Gly Phe
                    245                     250                     255
Trp Trp Val Val Arg Val Tyr Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Ala
              260                     265                     270
Trp Leu Val Leu Ile Thr Tyr Leu Gln His Thr His Pro Ala Leu Pro
        275                      280                     285
His Tyr Asp Ser Ser Glu Trp Asp Trp Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr
    290                     295                     300
Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr
305                   310                     315                     320
Asp Thr His Val Ala His His Leu Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His
                  325                     330                     335
Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile Arg Pro Ile Leu Gly Glu Tyr Tyr
             340                      345                     350
Gln Phe Asp Pro Thr Pro Val Ala Lys Ala Thr Trp Arg Glu Ala Lys
         355                     360                     365
Glu Cys Ile Tyr Val Glu Pro Glu Asp Asn Lys Gly Val Phe Trp Tyr
    370                     375                     380
Asn Asn Lys Phe
385
<210>16
<211>399
<212>PRT
<213>Mortierella alpina
<400>16
Met Ala Pro Pro Asn Thr Ile Asp Ala Gly Leu Thr Gln Arg His Ile
1                 5                       10                      15
Ser Thr Ser Ala Pro Asn Ser Ala Lys Pro Ala Phe Glu Arg Asn Tyr
              20                      25                     30
Gln Leu Pro Glu Phe Thr Ile Lys Glu Ile Arg Glu Cys Ile Pro Ala
         35                      40                      45
His Cys Phe Glu Arg Ser Gly Leu Arg Gly Leu Cys His Val Ala Ile
     50                     55                    60
Asp Leu Thr Trp Ala Ser Leu Leu Phe Leu Ala Ala Thr Gln Ile Asp
65                      70                    75                     80
Lys Phe Glu Asn Pro Leu Ile Arg Tyr Leu Ala Trp Pro Val Tyr Trp
                  85                      90                      95
Ile Met Gln Gly Ile Val Cys Thr Gly Val Trp Val Leu Ala His Glu
              100                     105                     110
Cys Gly His Gln Ser Phe Ser Thr Ser Lys Thr Leu Asn Asn Thr Val
        115                     120                     125
Gly Trp Ile Leu His Ser Met Leu Leu Val Pro Tyr His Ser Trp Arg
     130                      135                    140
Ile Ser His Ser Lys His His Lys Ala Thr Gly His Met Thr Lys Asp
145                     150                     155                     160
Gln Val Phe Val Pro Lys Thr Arg Ser Gln Val Gly Leu Pro Pro Lys
                  165                     170                     175
Glu Asn Ala Ala Ala Ala Val Gln Glu Glu Asp Met Ser Val His Leu
             180                     185                     190
Asp Glu Glu Ala Pro Ile Val Thr Leu Phe Trp Met Val Ile Gln Phe
        195                      200                      205
Leu Phe Gly Trp Pro Ala Tyr Leu Ile Met Asn Ala Ser Gly Gln Asp
    210                     215                     220
Tyr Gly Arg Trp Thr Ser His Phe His Thr Tyr Ser Pro Ile Phe Glu
225                     230                     235                     240
Pro Arg Asn Phe Phe Asp Ile Ile Ile Ser Asp Leu Gly Val Leu Ala
                  245                       250                     255
Ala Leu Gly Ala Leu Ile Tyr Ala Ser Met Gln Leu Ser Leu Leu Thr
             260                     265                     270
Val Thr Lys Tyr Tyr Ile Val Pro Tyr Leu Phe Val Asn Phe Trp Leu
         275                      280                     285
Val Leu Ile Thr Phe Leu Gln His Thr Asp Pro Lys Leu Pro His Tyr
    290                     295                     300
Arg Glu Gly Ala Trp Asn Phe Gln Arg Gly Ala Leu Cys Thr Val Asp
305                   310                     315                     320
Arg Ser Phe Gly Lys Phe Leu Asp His Met Phe His Gly Ile Val His
                  325                     330                     335
Thr His Val Ala His His Leu Phe Ser Gln Met Pro Phe Tyr His Ala
              340                     345                     350
Glu Glu Ala Thr Tyr His Leu Lys Lys Leu Leu Gly Glu Tyr Tyr Val
        355                     360                     365
Tyr Asp Pro Ser Pro Ile Val Val Ala Val Trp Arg Ser Phe Arg Glu
    370                     375                     380
Cys Arg Phe Val Glu Asp Gln Gly Asp Val Val Phe Phe Lys Lys
385                   390                     395
<210>17
<211>424
<212>PRT
<213>Aspergillus furnigatus
<400>17
Met Ala Ser Asp Ala Glu Lys Thr Ser Ser Lys Met Ile Asp Thr Tyr
1                 5                       10                      15
Gly Asn Glu Phe Lys Ile Pro Asp Tyr Thr Ile Lys Gln Ile Arg Asp
                20                     25                     30
Ala Ile Pro Ala His Cys Tyr Gln Arg Ser Ala Ala Thr Ser Leu Tyr
           35                     40                      45
Tyr Val Phe Arg Asp Met Ala Ile Leu Ala Ser Val Phe Tyr Val Phe
    50                      55                      60
His Asn Tyr Val Thr Pro Glu Thr Val Pro Ser Met Pro Val Arg Val
65                      70                      75                       80
Val Leu Trp Thr Ile Tyr Thr Val Val Gln Gly Leu Val Gly Thr Gly
                    85                      90                      95
Val Trp Val Leu Ala His Glu Cys Gly His Gln Ala Phe Ser Thr Ser
              100                     105                     110
Lys Val Leu Asn Asp Thr Val Gly Trp Ile Cys His Ser Leu Leu Leu
         115                     120                     125
Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Ile Ser His Gly Lys His His Lys Ala
     130                     135                     140
Thr Gly Asn Ile Ala Arg Asp Met Val Phe Val Pro Lys Thr Arg Glu
145                     150                     155                       160
Glu Tyr Ala Thr Arg Ile Gly Arg Ala Ala His Glu Leu Ser Glu Leu
                   165                      170                     175
Met Glu Glu Thr Pro Ile Leu Thr Ala Thr Asn Leu Val Leu Gln Gln
             180                     185                     190
Leu Phe Gly Trp Pro Met Tyr Leu Leu Thr Asn Val Thr Gly His Asn
         195                    200                    205
Asn His Glu Arg Gln Pro Glu Gly Arg Gly Lys Gly Lys Arg Asn Gly
    210                     215                   220
Tyr Phe Gly Gly Val Asn His Phe Asn Pro Ser Ser Pro Leu Tyr Glu
225                     230                    235                        240
Ala Lys Asp Ala Lys Leu Ile Val Leu Ser Asp Leu Gly Leu Phe Leu
                   245                     250                      255
Val Gly Ser Leu Leu Tyr Tyr Ile Gly Ser Thr Tyr Gly Trp Leu Asn
                  260                  265                    270
Leu Leu Val Trp Tyr Gly Ile Pro Tyr Leu Trp Val Asn His Trp Leu
         275                      280                    285
Val Ala Ile Thr Phe Leu Gln His Thr Asp Pro Thr Leu Pro His Tyr
     290                     295                     300
Gln Pro Glu Ala Trp Asp Phe Thr Arg Gly Ala Ala Ala Thr Ile Asp
305                    310                     315                       320
Arg Asp Phe Gly Phe Val Gly Arg His Ile Phe His Gly Ile Ile Glu
                   325                     330                      335
Thr His Val Leu His His Tyr Val Ser Thr Ile Pro Phe Tyr His Ala
              340                     345                      350
Asp Glu Ala Ser GluAla Ile Gln Lys Val Met Gly Pro His Tyr Arg
         355                    360                     365
Ser Glu Ala His Thr Gly Trp Thr Gly Phe Leu Lys Ala Leu Trp Thr
     370                     375                     380
Ser Ala Arg Thr Cys Gln Trp Val Glu Pro Thr Glu Gly Ala Lys Gly
385                     390                     395                     400
Glu Ser Gln Tyr Val Leu Phe Tyr Arg Asn Ile Asn Gly Ile Gly Val
                   405                     410                     415
Pro Pro Ala Lys Ile Pro Ala Lys
              420
<210>18
<211>436
<212>PRT
<213>Candida albicans
<400>18
Met Ala Ala Ala Thr Thr Ser Phe Ser Ser Gly Phe Asn Asn Asn Asn
 1                  5                      10                      15
Asn Ala Asp Gln Ser Thr Asp Ser Ser Ala Thr Ile Ser Lys Ser Gly
             20                      25                       30
Asn Val Ala Ser Phe Lys Thr Thr Ser Thr Thr Ser Thr Tyr Gln Thr
         35                      40                      45
Asn Leu Thr Ala Ile Asp Thr Tyr Gly Asn Glu Phe Lys Val Pro Asp
    50                      55                      60
Tyr Thr Ile Lys Asp Ile Leu Ser Ala Ile Pro Thr His Cys Tyr Glu
65                       70                    75                    80
Arg Arg Leu Leu Gln Ser Leu Ser Tyr Val Phe Arg Asp Ile Phe Cys
                 85                       90                      95
Met Val Val Leu Gly Phe Ile Ala Asn Asn Tyr Ile His Leu Ile Pro
              100                     105                      110
Asn Gln Phe Ile Arg Phe Ala Ala Trp Thr Gly Tyr Val Trp Cys Gln
         115                     120                     125
Gly Leu Phe Gly Thr Gly Ile Trp Val Leu Ala His Glu Cys Gly His
    130                     135                     140
Gln Ala Phe Ser Asp Tyr Gly Ser Val Asn Asp Phe Val Gly Trp Val
145                     150                     155                     160
Leu His Ser Tyr Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Phe Ser His
                   165                    170                       175
Gly Lys His His Lys Ala Thr Gly His Leu Thr Arg Asp Met Val Phe
              180                     185                    190
Val Pro Lys Thr Lys Glu Glu Phe Leu Gln Asn Arg Gly Val Lys Asp
         195                     200                    205
Leu Asp Asp Leu Leu Gly Asp Ser Pro Met Tyr Ser Leu Leu Thr Leu
    210                   215                     220
Ile Phe Gln Gln Thr Phe Gly Trp Ile Ser Tyr Leu Val Ala Asn Val
225                     230                     235                     240
Ser Gly Gln Lys Tyr Pro Gly Val Ser Phe Leu Lys Leu Asn His Phe
                   245                    250                      255
Asn Pro Asn Ser Leu Ile Phe Asp Lys Lys Asp Tyr Trp Tyr Ile Leu
             260                     265                      270
Leu Ser Asp Leu Gly Ile Leu Leu Gln Phe Phe Asn Leu Tyr Val Trp
         275                    280                    285
Tyr Gln Ser Phe Gly Gly Phe Asn Leu Leu Val Asn Tyr Val Leu Pro
    290                     295                    300
Tyr Phe Leu Val Asn His Trp Leu Val Phe Ile Thr Tyr Leu Gln His
305                    310                      315                     320
Ser Asp Pro Gln Met Pro His Tyr Glu Ala Ser Gln Trp Thr Phe Ala
                  325                      330                      335
Arg Gly Ala Ala Ala Thr Ile Asp Arg Glu Phe Gly Phe Val Gly Lys
              340                     345                    350
His Ile Phe His Asp Ile Ile Glu Thr His Val Leu His His Tyr Val
          355                      360                      365
Ser Arg Ile Pro Phe Tyr Asn Ala Arg Glu Ala Ser Glu Ala Ile Lys
     370                     375                     380
Lys Val Met Gly Ile His Tyr Gln His Ser Asp Glu Asn Met Trp Val
385                     390                     395                     400
Ser Leu Trp Lys Ser Ala Arg Trp Cys Gln Phe Val Asp Gly Asn Asn
                   405                     410                      415
Gly Val Leu Met Tyr Arg Asn Thr Asn Gly Phe Gly Val Asp Pro Lys
             420                     425                    430
Lys Gln Thr His
         435
<210>19
<211>433
<212>PRT
<213>Candida albicans
<400>19
Met Ser Val Val Glu Ala Ser Ser Ser Ser Val Val Glu Asp Ser Thr
 1                  5                       10                      15
Ala Ser Asn Val Val Gln Arg Gly Asn Ile Ser Ser Phe Ala Ser Thr
             20                       25                      30
Thr Ala Ser Ser Asn Leu Thr Thr Ile Asp Thr Asn Gly Lys Val Phe
         35                      40                      45
Lys Val Pro Asp Tyr Ser Ile Lys Asp Ile Leu Gln Ala Ile Pro Lys
    50                       55                       60
His Cys Tyr Glu Arg Ser Leu Ile Arg Ser Leu Gly Tyr Val Val Arg
65                      70                       75                      80
Asp Ile Thr Met Met Val Ile Ile Gly Tyr Val Gly His Thr Phe Ile
                  85                        90                      95
Pro Met Val Gln Ile Pro Glu Tyr Pro Ser Leu Ala Tyr Gly Leu Arg
              100                      105                    110
Gly Ala Leu Trp Met Val Gln Ser Tyr Cys Ile Gly Leu Phe Gly Phe
         115                     120                     125
Gly Leu Trp Ile Leu Ala His Glu Cys Gly His Gly Ala Phe Ser Asp
    130                      135                    140
Tyr Gln Asn Ile Asn Asp Phe Ile Gly Trp Val Leu His Ser Tyr Leu
145                     150                     155                     160
Ile Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Phe Ser His Ala Lys His His Lys
                    165                     170                     175
Ala Thr Gly His Leu Thr Lys Asp Met Val Phe Ile Pro Tyr Thr Lys
              180                    185                     190
Glu Glu Tyr Leu Glu Lys Asn Lys Val Glu Lys Val Ala Asp Leu Met
         195                    200                     205
Glu Glu Ser Pro Ile Tyr Ser Phe Leu Val Leu Val Phe Gln Gln Leu
    210                      215                      220
Gly Gly Leu Gln Leu Tyr Leu Ala Thr Asn Ala Thr Gly Gln Val Tyr
225                   230                    235                    240
Pro Gly Tyr Ser Lys Ile Ala Lys Ser His Tyr Thr Pro Thr Ser Pro
                   245                      250                  255
Val Phe Asp Lys His Gln Tyr Trp Tyr Ile Val Leu Ser Asp Ile Gly
             260                      265                      270
Ile Ile Leu Ala Phe Thr Thr Val Tyr Gln Trp Tyr Lys Asn Phe Gly
           275                     280                     285
Leu Phe Asn Met Met Ile Asn Trp Phe Val Pro Trp Leu Trp Val Asn
    290                    295                     300
His Trp Leu Val Phe Val Thr Phe Leu Gln His Thr Asp Pro Thr Met
305                     310                   315                    320
Pro His Tyr Thr Ser Lys Glu Trp Thr Phe Ala Arg Gly Ala Ala Ala
                   325                     330                    335
Thr Ile Asp Arg Asn Phe Gly Phe Val Gly Gln His Ile Phe His Asp
              340                     345                     350
Ile Ile Glu Thr His Val Leu His His Tyr Val Ser Arg Ile Pro Phe
           355                     360                      365
Tyr Asn Ala Arg Glu Ala Thr Asp Ala Ile Arg Lys Val Met Gly Glu
    370                     375                      380
His Tyr Arg Tyr Glu Gly Glu Ser Met Trp Tyr Ser Leu Trp Lys Cys
385                    390                      395                   400
Met Arg Met Cys Gln Phe Val Asp Asp Asp Lys Glu Asp Ala Lys Gly
                 405                     410                     415
Val Met Met Phe Arg Asn Val Asn Gly Trp Gly Pro Val Lys Pro Lys
       420              42             5430
Asp

Claims (49)

1.红花植物，其产生的种子含有重量百分含量至少1％的γ-亚麻酸。
2.权利要求1中所述植物的种子。
3.权利要求2中所述植物的种子油。
4.权利要求3中所述的油，其中含有重量百分含量1～5，5～10，0～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55-60％或更高含量的γ-亚麻酸。
5.含有能在所述红花植物中作用的重组体启动子的转基因红花植物，其中所述的启动子可连接编码Δ6去饱和酶的重组DNA序列，所述的红花植物产生种子，所述的种子含有重量百分数至少1％的γ-亚麻酸。
6.根据权利要求5中所述的含有能在所述红花植物中作用的重组体启动子的转基因红花植物，其中编码序列的去饱和酶是植物或真菌去饱和酶。
7.根据权利要求6中所述的含有能在所述红花植物中作用的重组体启动子的转基因红花植物，其中编码序列的去饱和酶来源于包括白霉，水霉，异枝水霉，被孢霉属，高山被孢霉，耳霉，腐霉，疫酶，青霉菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛霉，镰孢菌霉，曲霉，念珠菌，红酵母，虫霉，破囊壶菌，水霉，琉璃苣，樱草属，芸苔，稻，苔藓菌属的Δ6去饱和酶。
8.根据权利要求5中所述的含有能在所述红花植物中作用的重组体启动子的转基因红花植物，其中启动子是种子特异启动子。
9.根据权利要求8中所述的含有能在所述红花植物中作用的重组体启动子的转基因红花植物，其中种子特异启动子是油脂蛋白启动子或核丝启动子。
10.来源于权利要求5或6或7或8或9中所述的转基因红花植物的种子，其中种子中的γ-亚麻酸重量百分含量至少占所述种子总脂肪酸含量的1％。
11.由权利要求10所述种子制备的油。
12.根据权利要求11中所述的油，其中油含有重量百分含量为1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或以上的γ-亚麻酸。
13.转基因红花植物，包括：第一个编码Δ6去饱和酶的重组DNA序列和第二个编码Δ12去饱和酶重组DNA序列，其中所述的重组DNA序列可连接至少一个启动子，其中所述的红花植物产生的种子含有重量百分含量至少为1％的γ-亚麻酸。
14.根据权利要求13所述的转基因红花植物，其中所述的编码序列的Δ6去饱和酶和Δ12去饱和酶是植物或真菌的去饱和酶。
15.根据权利要求14所述的转基因红花植物，其中编码序列的去饱和酶来源于包括白霉，水霉，异枝水霉，被孢霉属，高山被孢霉，耳霉，腐霉，疫酶，青霉菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛霉，镰孢菌霉，曲霉，念珠菌，红酵母，虫霉，破囊壶菌，水霉，琉璃苣，樱草属，芸苔，稻，苔藓菌属的Δ6去饱和酶和Δ12去饱和酶。
16.根据权利要求13所述的转基因红花植物，其中所述的启动子是种子特异启动子。
17.根据权利要求16所述的转基因红花植物，其中所述的种子特异启动子是油脂蛋白启动子或核丝启动子。
18.来源于权利要求13或14或15或16或17中所述的转基因红花植物的种子，其中种子中的γ-亚麻酸重量百分含量至少占所述种子总脂肪酸含量的1％。
19.由权利要求18所述种子制备的油。
20.权利要求19所述种子制备的油，其中所述油包括重量百分含量约1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或更高的γ-亚麻酸。
21.一种在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，所述方法包括含有在所述红花植物中作用的重组体启动子的红花植物的生长，其中所述的启动子可连接一个编码Δ6去饱和酶重组DNA序列，其中所述的红花植物所述在Δ6去饱和酶序列被表达的条件下生长。
22.根据权利要求21所述在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的编码序列的Δ6去饱和酶和Δ12去饱和酶是植物或真菌去饱和酶。
23.根据权利要求22所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中编码序列去饱和酶来源于包括白霉，水霉，异枝水霉，被孢霉属，高山被孢霉，耳霉，腐霉，疫酶，青霉菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛霉，镰孢菌霉，曲霉，念珠菌，红酵母，虫霉，破囊壶菌，水霉，琉璃苣，樱草属，芸苔，稻，苔藓菌属的Δ6去饱和酶。
24.根据权利要求21所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的启动子是种子特异启动子。
25.根据权利要求24所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的种子特异启动子是油脂蛋白启动子或核丝启动子。
26.根据权利要求21或22或23或24或25所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的方法进一步包括来源于所述红花植物的单粒种子。
27.根据权利要求26所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的种子中γ-亚麻酸重量百分含量至少占所述种子总脂肪酸含量的1％。
28.根据权利要求26所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的方法进一步包括来自于红花植物种子的提取油。
29.权利要求26所述的油，其中含有约1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或重量百分含量更高的γ-亚麻酸。
30.一种在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，所述方法包括红花植物的生长：第一个编码Δ6去饱和酶的重组DNA序列和第二个编码Δ12去饱和酶重组DNA序列，其中所述的重组DNA序列可连接至少一个启动子，其中所述的红花植物在所述Δ6去饱和酶和Δ12去饱和酶序列被表达的条件下生长。
31.权利要求30所述的方法，其中所述的编码序列Δ6去饱和酶和Δ12去饱和酶是植物或真菌去饱和酶。
32.根据权利要求31所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中编码序列去饱和酶来源于包括白霉，水霉，异枝水霉，被孢霉属，高山被孢霉，耳霉，腐霉，疫酶，青霉菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛霉，镰孢菌霉，曲霉，念珠菌，红酵母，虫霉，破囊壶菌，水霉，琉璃苣，樱草属，芸苔，稻，苔藓菌属的Δ6去饱和酶和Δ12去饱和酶。
33.根据权利要求30所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的启动子是种子特异启动子。
34.根据权利要求33所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的种子特异启动子是油脂蛋白启动子或核丝启动子。
35.根据权利要求30或31或32或33或34所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的方法进一步包括来自源于所述红花植物的单粒种子。
36.根据权利要求35所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的种子中γ-亚麻酸重量百分含量至少占所述种子总脂肪酸含量的1％。
37.根据权利要求35所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中所述的方法进一步包括来源于红花植物种子的提取油。
38.根据权利要求37所述的在红花植物中生产γ-亚麻酸的方法，其中含有重量百分含量约1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或更高的γ-亚麻酸。
39.来源于转基因红花植物的红花油，其中所述的红花油含有重量百分含量高于1％的γ-亚麻酸。
40.来源于转基因红花植物的红花油，其中所述的红花油含有重量百分含量高于5％的γ-亚麻酸。
41.来源于转基因红花植物的红花油，其中所述的红花油含有重量百分含量高于10％的γ-亚麻酸。
42.来源于转基因红花植物的红花油，其中所述的红花油含有重量百分含量高于1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55-60的γ-亚麻酸。
43.一种治疗或预防精神病，神经或其它中枢或末梢神经系统状况和疾病的方法，其中包括根据权利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些疾病折磨的病人。
44.一种治疗或预防免疫状况或疾病的方法，其中包括根据权利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些疾病折磨的病人。
45.一种治疗或预防炎症状况和疾病的方法，其中包括根据权利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些疾病折磨的病人。
46.一种治疗或预防癌症状况和疾病的方法，其中包括根据权利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些疾病折磨的病人。
47.一种治疗或预防皮肤状况和疾病的方法，其中包括根据权利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些疾病折磨的病人。
48.一种治疗或预防心血管状况和疾病的方法，其中包括根据权利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，给药有效量的红花油给这些倾向于或是已经受这些疾病折磨的病人。
49.一种给婴儿提供营养的方法，其中包括根据权利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，给药有效量的红花油给婴儿。
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