CN101301316A - 一种含乳酸菌发酵物的复方制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种含乳酸菌发酵物的复方制剂及其制备方法和应用，该制剂复方制剂为活菌制剂或非活菌制剂，采用冷冻干燥或喷雾干燥制得，所述复方制剂的配方为：按照质量百分数：10～98.5％乳酸菌发酵物，1.5～90％大豆皂甙，制备方法为：将所述乳酸菌发酵物与大豆皂甙按质量配比混合，经过混合，过筛，制粒，制备成复方制剂，该复方制剂制备具有提高免疫力功能、抗肿瘤作用药物或者提高抗肿瘤药物疗效作用的药物用途，或者直接作为该类药物或保健品的用途。本发明的复方制剂为活菌或非活菌制剂，生物活性大，有效提高人体的免疫力，具有抗癌防癌的疗效，制备方法简单、可操作性强，适合大规模推广，具有显著的经济效益和社会效益。
Description
技术领域
本发明属于生物制剂领域，更具体涉及一种含乳酸菌发酵物的复方制剂及其制备方法和应用。
背景技术
肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的调控，导致单克隆性异常增生而形成，一般分为良性肿瘤和恶性肿瘤两大类，其中恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重的一类疾病，也就是我们通常意义上所称的“癌症”。目前常用的治疗癌症和肿瘤的方法为化学疗法和放射性疗法，这些在杀死癌细胞的同时，对人体的健康细胞也有很大的危害，而且严重降低人体自身免疫力，引起并发症。
乳酸菌是一种对人体健康十分有益的微生物，其在发酵过程中能够产生代谢产物如胞外多糖和肽聚糖，它们是免疫调节剂，能激活免疫受体，提高机体免疫功能，从而在促进人体健康和防止疾病中发挥着重要作用，
大豆皂甙是从大豆及豆粕、豆脐中经过提取、分离而得的一种天然活性物质，具有较多有益的生理功能，如降低血中胆固醇和甘油三酯含量，抗氧化、抗自由基、降低过氧化脂质含量，抑制肿瘤细胞生长，抑制血小板凝聚，抗病毒，免疫调节作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种含乳酸菌发酵物的复方制剂及其制备方法和应用，该复方制剂为活菌制剂或非活菌制剂，生物活性大，有效提高人体的免疫力，具有抗癌防癌的疗效，制备方法简单、可操作性强，适合大规模推广，具有显著的经济效益和社会效益。
本发明的含乳酸菌发酵物的复方制剂，其特征在于：所述复方制剂为活菌制剂或非活菌制剂，采用冷冻干燥或喷雾干燥制得，所述复方制剂的配方为：按照质量百分数：10～98.5％乳酸菌发酵物，1.5～90％大豆皂甙。
本发明的含乳酸菌发酵物的复方制剂的制备方法，其特征在于：将乳酸菌菌种在36～42℃接种乳酸菌发酵培养基中，在37～42℃发酵5～52小时后浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥获得活菌乳酸菌发酵物或者100～115℃灭菌，喷雾干燥获得非活菌乳酸菌发酵物；将所述乳酸菌发酵物与大豆皂甙按质量配比混合，经过40～100目筛，加入所述混合物总质量0.5％的硬脂酸镁，混合，经过40～100目筛，填装胶囊，制备成复方制剂。
本发明的含乳酸菌发酵物的复方制剂的应用为：所述复方制剂用于制备具有提高免疫力功能药物或保健品的用途，或者直接作为具有提高免疫力功能药物或保健品的用途。
所述复方制剂用于制备具有抗肿瘤作用药物或保健品的用途，或者直接作为具有抗肿瘤作用药物或保健品的用途。
所述复方制剂用于制备具有提高抗肿瘤药物疗效作用的药物或保健品的用途，或者直接作为具有提高抗肿瘤药物疗效作用的药物或保健品的用途。
本发明的显著优点是：本发明采用乳酸菌发酵物和大豆皂甙为原料，充分利用了乳酸菌发酵物中含有的有益菌，如嗜酸乳杆菌等，能够有效阻止病原菌、病毒的侵袭；刺激人体分泌抗体，提高人体免疫力；选择性杀死某些致病菌，保护促进有益菌的生长；调节人体电解质、水分平衡；大豆皂甙是类同醇或三萜系化合物的低聚配糖体的总称，是一种具有广泛应用价值的天然生物活性物质，可以提高LAK(淋巴因子激活的杀伤性细胞)细胞、NK(自然杀伤性细胞)细胞的活性，增加IL-2(白介素)的分泌及增强T、B淋巴细胞对ConA(刀豆蛋白A)、LPS01～多糖)的增殖能力，说明大豆皂甙在体内对小鼠的免疫功能有广泛的调节效应。大豆皂甙对T细胞功能的增强作用，特别是T细胞功能的增强使IL-2的分泌增强，而IL-2的功能是保持T细胞的存活与增殖，促进T细胞产生淋巴因子，增加诱导杀伤性T细胞、NK细胞分化及提高LAK细胞活性，从而表现出较强的免疫功能，本发明将这两种有益物质有机的结合起来制成的复方制剂具有显著的提高人体的免疫力，抗癌防癌的疗效，抗肿瘤的效果，并且制备方法简单、可操作性强，适合大规模推广，而且制作的复方制剂为活菌制剂或非活菌制剂，生物活性大，具有显著的经济效益和社会效益。
具体实施方式
活菌乳酸菌发酵物的制备方法为：将乳酸菌菌种在36～42℃接种乳酸菌发酵培养基中，在37～42℃发酵5～52小时后浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥获得活菌乳酸菌发酵物。
非活菌乳酸菌发酵物的制备方法为：将乳酸菌菌种在36～42℃接种乳酸菌发酵培养基中，在37～42℃发酵5～52小时后浓缩，100～115℃灭菌，喷雾干燥获得非活菌乳酸菌发酵物。
将所述乳酸菌发酵物与大豆皂甙按质量配比混合，过40～100目筛，加入(上述混合物总质量)0.5％的硬脂酸镁，混合，过40～100目筛，填装胶囊，制备成复方制剂。
所述的复方制剂可以为颗粒剂、片剂、胶囊剂、粉剂或任何其它药物成品形态的制剂。
所述乳酸菌菌种的接种量为：按照菌种发酵剂容量(L)与培养基容量(L)比的3％；所述乳酸菌发酵培养基是以大豆或大豆蛋白粉或乳粉为主，辅以酵母膏，糖及微量元素。
本发明所采用的乳酸菌菌种可以是但不完全是：嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus、嗜热链球菌Streptococcus thermophilus、罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri、干酪乳杆菌Lactobacillus casei subsp.Casei、德氏乳杆菌保加利亚种Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus。
本发明的复方制剂可以用于制备具有提高免疫力、抗肿瘤作用、提高抗肿瘤药物疗效作用的药物或保健品的用途，或者直接作为具有提高免疫力、抗肿瘤作用、提高抗肿瘤药物疗效作用的药物或保健品的用途。
本发明所述的原料大豆皂甙是以大豆或豆粕或豆脐为原料，经提取、分离结晶加工而成的固体，其含量为20～90％。
以下是本发明的几个实施例，但是本发明不仅限于此。
实施例1
乳酸菌发酵物的培养
在斜面培养基中接入嗜酸乳杆菌，培养温度37℃，培养时间48小时。将斜面菌种接入装有100mL培养基的500mL三角瓶中，40℃静置培养24小时。然后该菌种接入装有100mL培养基的500mL三角瓶中40℃静置扩大培养24小时，将扩大培养后的菌种2000mL合并到5L的抽滤瓶中，把抽滤瓶中菌种接到装有40L的GY345-SM三级液体菌种发酵罐(江苏省工学院生物工程设备联营厂)中，40℃静置培养24小时。将菌种发酵罐中的发酵液转接入装有400L发酵培养基的1000L发酵罐中，37℃静置培养48-56小时，检测发酵液乳酸大于5.5mg/g、酸度大于10mg/g时终止发酵。接种量为3％(菌种发酵剂容量(L)/培养基容量(L)
斜面培养基配方：酪蛋白胨10.0g，牛肉提取物10.0g，酵母提取物5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween 801.0ml，K2HPO4 2.0g，MgSO4·7H2O 0.2g，MnSO4·H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8
斜面转接三角瓶培养基配方：酪蛋白胨10.0g，牛肉提取物10.0g，酵母提取物5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween 801.0ml，K2HPO4 2.0g，MgSO4·7H2O 0.2g，MnSO4·H2O 0.05g，CaCO320.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8菌种扩大培养及发酵罐培养基配方：大豆蛋白粉10％、葡萄糖5％、酵母膏0.04％，饮用水84.96％。
实施例2
以嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、罗伊氏乳杆菌单独斜面培养，培养后的菌种分别接入三角瓶液体培养基培养、接种量为3％(菌种发酵剂容量(L)/培养基容量(L)，培养后的三种菌种按1∶1∶1的比例合并再接到三角瓶液体培养基中扩大培养，接下如实施1中进行扩大发酵生产，最终发酵液的乳酸大于5.5mg/g，酸度大于10mg/g。本实施的培养基及培养温度及时间同实施1。
实施例3
以嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚种按1∶1∶1比例按实施2进行培养，最终发酵液的乳酸也大于5.5mg/g，酸度也大于10mg/g。
实施例4
取实施例1的发酵止液，经105℃加热灭菌，浓缩，真空度200-400Pa、蒸发温度80～85℃，浓缩液经喷雾干燥，塔温80～95℃得到乳酸菌发酵物。
将乳酸菌发酵物与含量80％大豆皂甙，按92.5∶7.5比例混合，过筛，加入(上述混合物总质量)0.5％的硬脂酸镁，填装胶囊，每粒250mg。每粒内含大豆皂甙15mg、乳酸20mg
实施例5
取用实施例1的发酵终止液，喷雾干燥，塔温80～95℃，得到活菌乳酸菌发酵物。
将乳酸菌发酵物与含量80％大豆皂甙，按92.5∶7.5比例混合，过筛，加入(上述混合物总质量)0.5％的硬脂酸镁，混合，过筛，填装胶囊，每粒250mg。每粒内含大豆皂甙15mg、乳酸20mg
实施例6
取用实施例1的发酵终止液，冷冻干燥，温度-45～-55℃，得到活菌乳酸菌发酵物。
将乳酸菌发酵物与含量80％大豆皂甙，按92.5∶7.5比例混合，过筛，加入(上述混合物总质量)0.5％的硬脂酸镁，混合，过筛，填装胶囊，每粒250mg。每粒内含大豆皂甙15mg、乳酸20mg
效果试验
跟据“保健食品功能学评价程序和检验方法”的判定标准，证明本发明的含有乳酸菌发酵物的复方制剂具有提高免疫力作用。
具体的实验和判断方法如下：材料和方法：
1.1样品：由本发明的复方制剂，内容物呈淡黄棕色粉末状或颗料状，临用前用蒸馏水配至所需浓度。
1.2实验动物：选用上海斯莱克实验动物有限责任公司提供的清洁级ICR雌性小鼠200只，体重18～22g。许可证号：SCXK(沪)2003-0003。
1.3饲养环境：福建省疾病预防控制中心SPF级(屏障系统)动物实验室，许可证号：SYSK(闽)2005-0001。
1.4分组及剂量设置：851牌新益源胶囊成人(60kg计)推荐用量为3.0g/60kg/d即0.05g/kgBW/d。试验动物按体重随机分成20组，每组10只，每四组为一实验组，分别为免疫一组：空斑、溶血素测定；免疫二组：脏器指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验；免疫三组：NK活性、淋转试验；免疫四组：DTH试验：免疫五组：小鼠碳廓清试验。每组实验按人日推荐量的5倍、10倍、30倍分别设0.25、0.50、1.50g/kgBW三个剂量组和蒸馏水对照组。
1.5样品的配制：低剂量组称取样品0.5g加蒸馏水至40ml；中剂量组称取样品1.0g加蒸馏水至40ml；高剂量组称取样品3.0加蒸馏水至40ml。
2.结果
2.1样品对小鼠体重的影响：
样品各组小鼠的体重与对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1～5。
表1 样品(免疫一组)对小鼠体重的影响(g，X ±s)
| 组别 | 动物数(只) | 初始体重 | 终期体重 | P |
| 对照组 | 10 | 20.7±0.9 | 30.8±2.3 | / |
| 低剂量组 | 10 | 20.7±0.9 | 31.4±3.2 | 0.643 |
| 中剂量组 | 10 | 20.6±0.8 | 29.6±3.1 | 0.356 |
| 高剂量组 | 10 | 20.7±0.9 | 29.5±2.8 | 0.318 |
表2 样品(免疫二组)对小鼠体重的影响(g，X±s)
| 组别 | 动物数(只) | 初始体重 | 终期体重 | P |
| 对照组 | 10 | 20.7±0.9 | 31.1±2.4 | / |
| 低剂量组 | 10 | 20.7±0.9 | 31.3±3.4 | 0.873 |
| 中剂量组 | 10 | 20.7±0.9 | 30.9±2.1 | 0.873 |
| 高剂量组 | 10 | 20.7±0.9 | 30.8±3.1 | 0.810 |
表3 样品(免疫三组)对小鼠体重的影响(g，X±s)
| 组别 | 动物数(只) | 初始体重 | 终期体重 | P |
| 对照组 | 10 | 20.6±0.8 | 30.4±2.2 | / |
| 低剂量组 | 10 | 20.6±0.8 | 31.9±3.1 | 0.223 |
| 中剂量组 | 10 | 20.6±0.8 | 30.0±3.1 | 0.743 |
| 高剂量组 | 10 | 20.7±0.9 | 30.3±2.2 | 0.935 |
表4 样品(免疫四组)对小鼠体重的影响(g，X±s)
| 组别 | 动物数(只) | 初始体重 | 终期体重 | P |
| 对照组 | 10 | 20.7±0.9 | 31.3±2.5 | / |
| 低剂量组 | 10 | 20.7±0.9 | 31.5±3.7 | 0.888 |
| 中剂量组 | 10 | 20.6±0.8 | 30.1±2.4 | 0.401 |
| 高剂量组 | 10 | 20.7±0.8 | 29.9±3.8 | 0.328 |
表5 样品(免疫五组)对小鼠体重的影响(g，X±s)
| 组别 | 动物数(只) | 初始体重 | 终期体重 | P |
| 对照组 | 10 | 20.7±0.9 | 31.5±2.1 | / |
| 低剂量组 | 10 | 20.7±0.9 | 31.4±3.3 | 0.939 |
| 中剂量组 | 10 | 20.7±0.9 | 30.2±2.3 | 0.325 |
| 高剂量组 | 10 | 20.6±0.8 | 31.4±3.7 | 0.939 |
2.2小鼠碳廓清试验：
样品各剂量组的小鼠碳廓清能力与对照组相比，差异均无统计学意义(P＞0.05)结果见表6。
表6 碳廓清试验(X±s)
| 组别 | 动物数(只) | 右噬指数a | P |
| 对照组 | 10 | 3.68±1.84 | / |
| 低剂量组 | 10 | 3.55±0.93 | 1.000 |
| 中剂量组 | 10 | 4.13±0.85 | 0.983 |
| 高剂量组 | 10 | 3.54±0.75 | 1.000 |
2.3DTH测定：
样品中、高剂量组均能明显增强DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表7。
表7 DTH测定结果(X±s)
| 组别 | 动物数(只) | 左右耳肿胀度差(mg) | P |
| 对照组 | 10 | 15.6±6.9 | / |
| 低剂量组 | 10 | 17.5±4.0 | 0.418 |
| 中剂量组 | 10 | 21.9±5.7* | 0.010 |
| 高剂量组 | 10 | 22.5±3.4* | 0.005 |
*与对照组相比P＜0.05
2.4抗体生成细胞检测试验：
样品高剂量组能明显增加溶血空斑数，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表8。
表8 抗体生成细胞检测试验(X±s)
| 组别 | 动物数(只) | 溶血空斑数(×103个/全脾) | P |
| 对照组 | 10 | 3.49±0.82 | / |
| 低剂量组 | 10 | 3.17±0.95 | 0.459 |
| 中剂量组 | 10 | 3.78±1.09 | 0.505 |
| 高剂量组 | 10 | 4.54±0.95* | 0.018 |
*与对照组相比P＜0.05
2.5血清溶血素试验：
样品高剂量组能明显促进小鼠抗体积数的生成，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表9。
表9 血清溶血素试验(X±s)
| 组别 | 动物数(只) | 抗体积数 | P |
| 对照组 | 10 | 80.3±18.2 | / |
| 低剂量组 | 10 | 81.1±20.7 | 0.932 |
| 中剂量组 | 10 | 93.8±16.1 | 0.158 |
| 高剂量组 | 10 | 131.0±27.1* | 0.000 |
*与对照组相比P＜0.05
2.6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验：
样品各剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数分别与对照组相比，差异均无统计学意义(P＞0.05)，结果见表10。
表10 巨噬细胞吞噬试验(X±s)
| 组别 | 动物数(只) | 吞噬率(％) | 转换值X | px | 吞噬指数 | P |
| 对照组 | 10 | 12.05±2.65 | 0.35±0.04 | / | 0.14±0.02 | / |
| 低剂量组 | 10 | 11.35±2.94 | 0.340±0.05 | 0.508 | 0.14±0.03 | 0.857 |
| 中剂量组 | 10 | 12.75±2.70 | 0.36±0.04 | 0.528 | 0.15±0.02 | 0.197 |
| 高剂量组 | 10 | 10.6±1.47 | 0.33±0.02 | 0.209 | 0.14±0.02 | 1.000 |
2.7胸腺指数、脾指数的测定：
样品各剂量组脾指数与对照组相比，差异均无统计学意义(P＞0.05)；样品高剂量组胸腺指数增加，与对照组相比，差异均有统计学意义(P＜0.05)，结果见表11。
表11 胸腺指数、脾指数的测定(X±s)
| 组别 | 动物数(只) | 胸腺指数(％) | p | 脾重指数(％) | p |
| 对照组 | 10 | 0.26±0.06 | / | 0.48±0.08 | / |
| 低剂量组 | 10 | 0.29±0.05 | 0.195 | 0.47±0.05 | 0.703 |
| 中剂量组 | 10 | 0.27±0.04 | 0.619 | 0.49±0.09 | 0.684 |
| 高剂量组 | 10 | 0.32±0.05* | 0.006 | 0.54±0.09 | 0.109 |
*与对照组相比P＜0.05
2.8ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验：
样品高剂量组使ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力明显增加，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表12。
表12 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(X±s)
| 组别 | 动物数(只) | OD差值 | P |
| 对照组 | 10 | 0.046±0.020 | / |
| 低剂量组 | 10 | 0.048±0.015 | 0.891 |
| 中剂量组 | 10 | 0.062±0.023 | 0.131 |
| 高剂量组 | 10 | 0.086±0.028* | 0.000 |
*与对照组相比P＜0.05
2.9NK细胞活性测定：
样品高剂量组能显著增强NK细胞活性，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表13。
表13 NK细胞活性测定(X±s)
| 组别 | 动物数(只) | NK细胞活性％ | 转换值X | px |
| 对照组 | 10 | 20.76±16.36 | 0.45±0.21 | / |
| 低剂量组 | 10 | 20.57±15.66 | 0.45±0.20 | 0.982 |
| 中剂量组 | 10 | 27.59±15.53 | 0.54±0.18 | 0.263 |
| 高剂量组 | 10 | 40.49±14.00 | 0.68±0.15* | 0.006 |
*与对照组相比P＜0.05
3.结论：
样品组与对照组相比：
1)各剂量组对小鼠碳廓清能力、小鼠脾指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数的差异均无统计学意义。
2)中、高剂量组能明显增强DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应。
3)高剂量组能明显促进抗体生成细胞的生成并提高血清溶血素水平及升高小鼠胸腺指数。
4)高剂量组能使ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力明显增强，并提高小鼠NK细胞活性。
检验结果及判定意见：
本发明的复方制剂成人推荐量为3.0g/d，即0.05g/kg BW/d(成人体重按60kg计)。动物采用清洁级ICR雌性小鼠。实验按人推荐用量的5倍、10倍、30倍、分别设0.25、0.50、1.50g/kg BW三个剂量组和蒸馏水对照组，试验结果表明，样品各剂量组与对照组比较，本发明的复方制剂：
5)各剂量组对小鼠碳廓清能力、小鼠脾指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数的差异均无统计学意义。
6)中、高剂量组能明显增强DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应。
7)高剂量组能明显促进抗体生成细胞的生成并提高血清溶血素水平及升高小鼠胸腺指数。
8)高剂量组能使ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力明显增强，并提高小鼠NK细胞活性。
根据《保健食品检验与评价技术规范》(卫生部2003)，提示该样品具有增强免疫力功能。
2.本发明的复方制剂对肝癌荷瘤鼠存活率的影响
跟据《新药临床前研究指导原则》进行试验。
一、试验目的：通过本发明的复方制剂对肝癌荷瘤鼠存活时间的影响，
二、受试品：本发明的复方制剂试验前以水为溶媒稀释至适当浓度供小鼠灌胃(ig)。
三、试验动物：昆明种小鼠，雌性，17.5～19.5g，
四、试验方法和结果
取健康小鼠100只，雌，体重17.5～19.5g，首先给每鼠腹腔注射腹水型肝癌细胞悬液(107/mm3)0.2ml。然后按体重随机分为10组，每组10只。其中，3组分别ig 25％本发明的复方制剂0.4、0.24以及0.144ml/10g；另1组做为单纯模型对照组，ig水0.4ml/10g。以上均每日给药1次，直至组内试验小鼠死亡50％之日止。记录各小鼠接种肝癌细胞悬液后的存活时间，计算各组存活平均日数(X)及标准差(SD)，以单纯模型组为对照进行t检验，结果见下表。
表三 种制剂对肝癌荷瘤小鼠的生命延长率
| 组别 | 药物 | 鼠数 | 存活时间(日，X±s) | 生命延长率(％) | p值 |
| 水 | 0.4ml/10g | 10 | 13.35±1.55 | ||
| 25％本发明的复方制剂 | 0.4ml/10g | 10 | 14.35±2.58 | 7.49 | ＞0.05 |
| 25％本发明的复方制剂 | 0.24ml/10g | 10 | 16.15±2.74 | 20.97 | ＜0.05 |
| 25％本发明的复方制剂 | 0.114ml/10g | 10 | 15.55±1.83 | 16.48 | ＜0.05 |
试验结论：在本试验中，本发明的复方制剂的中、小剂量组小鼠的生命延长率分别达到20.97％和16.48％，与单纯模型组比较在统计学上差异均有显著意义(p值均小于0.05)，
3.本发明的复方制剂对S180荷瘤鼠的作用研究
一：试验目的通过观察本发明的复方制剂对S180荷瘤鼠的抗肿瘤作用。
二：受试药本发明的复方制剂试验前用水为溶媒稀释至适当浓度供小鼠灌胃给药。
三：试验动物昆明种小鼠，雄性，18～21g，
四：试验方法与结果
取健康小鼠，雄性，体重18～21g，在严格无菌的条件下，抽取S180荷瘤鼠的瘤块，磨成凝浆，按1∶4稀释，每只小鼠腋下注射0.2ml，禁食给水12小时，随机分为14组，每组10只，对照组(生理盐水0.2ml/10g)、环磷酰胺(30mg/kg，1d、5d ig)，25％本发明的复方制剂(0.3、0.18、0.108ml/10g+环磷酰胺30mg/kg，1d、5d ig)，每日给药1次，共给药11天。第13天处死动物，剥取瘤块，在扭力天平上称重。环磷酰胺组与对照组比较，进行t检验。其余给药组分别与环磷酰胺组比较，进行t检验，结果见下表。
表四种制剂对S180荷瘤鼠的作用
*与单用环磷酰胺(组2)比较；p＜0.05
五：试验结论从本实验结果得出，各组均比单用环磷酰胺治疗组的抑瘤率高，但只有25％本发明的复方制剂0.3ml/10g组的抑瘤率显著高于单用环磷酰胺组(p＜0.05)，且该药对S180荷廇鼠的抑瘤作用具有量效关系。
Claims (8)
1.一种含乳酸菌发酵物的复方制剂，其特征在于：所述复方制剂为活菌制剂或非活菌制剂，采用冷冻干燥或喷雾干燥制得，所述复方制剂的配方为：按照质量百分数：10～98.5％乳酸菌发酵物，1.5～90％大豆皂甙。
2.一种如权利要求1所述的含乳酸菌发酵物的复方制剂的制备方法，其特征在于：将乳酸菌菌种在36～42℃接种乳酸菌发酵培养基中，在37～42℃发酵5～52小时后浓缩，冷冻干燥或喷雾干燥获得活菌乳酸菌发酵物或者100～115℃灭菌，喷雾干燥获得非活菌乳酸菌发酵物；将所述乳酸菌发酵物与大豆皂甙按质量配比混合，经过40～100目筛，加入所述混合物总质量0.5％的硬脂酸镁，混合，经过40～100目筛，填装胶囊，制备成复方制剂。
3.根据权利要求2所述的含乳酸菌发酵物的复方制剂的制备方法，其特征在于：所述的复方制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂、粉剂或任何其它药物、保健品成品形态的制剂。
4.根据权利要求2所述的含乳酸菌发酵物的复方制剂的制备方法，其特征在于：所述乳酸菌菌种的接种量为：按照菌种发酵剂容量(L)与培养基容量(L)比的3％；所述乳酸菌发酵培养基是以大豆或大豆蛋白粉或乳粉为主，辅以酵母膏，糖及微量元素。
5.根据权利要求2所述的含乳酸菌发酵物的复方制剂的制备方法，其特征在于：所述乳酸菌菌种为乳酸菌属下的嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、罗伊氏乳杆菌、干酪乳杆菌或德氏乳杆菌保加利亚种中的一种或多种。
6.一种如权利要求1、2、3、4或5所述的含乳酸菌发酵物的复方制剂的应用，其特征在于：所述复方制剂用于制备具有提高免疫力功能药物或保健品的用途，或者直接作为具有提高免疫力功能药物或保健品的用途。
7.一种如权利要求1、2、3、4或5所述的含乳酸菌发酵物的复方制剂的应用，其特征在于：所述复方制剂用于制备具有抗肿瘤作用药物或保健品的用途，或者直接作为具有抗肿瘤作用药物或保健品的用途。
8.一种如权利要求1、2、3、4或5所述的含乳酸菌发酵物的复方制剂的应用，其特征在于：所述复方制剂用于制备具有提高抗肿瘤药物疗效作用的药物或保健品的用途，或者直接作为具有提高抗肿瘤药物疗效作用的药物或保健品的用途。
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