CN100564511C - 具有免疫调节作用的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明是含有具有免疫调节作用的新型乳酸菌的组合物。更具体而言，本发明含有分离自日本国京都传统咸菜紫苏腌茄子的新型乳酸菌，用于具有免疫调节作用的饮食品和医药品等。另外，本乳酸菌的特征在于，属于戊糖乳杆菌，且无甘油同化性或甘油同化性较弱。

Description

具有免疫调节作用的组合物

技术领域

本发明是含有具有免疫调节作用的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)的组合物。

背景技术

众所周知，乳酸菌具有整肠作用和免疫赋活作用等有益生理活性。具有上述有益生理活性的乳酸菌，大多是分离自发酵乳制品和肠管等的动物性乳酸菌，但在植物性乳酸菌中也发现了具有免疫赋活作用的菌株。

例如，专利文献1中记载了具有免疫赋活作用的乳酸菌：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)L-137株。另外，已知分离自京都传统咸菜“酸萝卜咸菜”的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)Labre株、分离自“紫苏腌茄子”的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)DA74N株等也具有免疫赋活作用(参照非专利文献1、2)。

[专利文献1]

日本特开平10-167972号公报(公开日：平成10年6月23日)

[非专利文献1]

岸惇子、小久保AOI(日语原名；小久保あおい)、赤谷薰、扇谷ERI子(日语原名；扇谷えり子)、藤田晢也、岸田纲太郎：选择有用乳酸菌的筛选①人末梢血中植物性乳酸菌的体外免疫赋活效果、Pasken Journal 15.21-26，2002

[非专利文献2]

赤谷薰、岸惇子、扇谷ERI子(日语原名；扇谷えり子)、小久保AOI(日语原名；小久保あおい)、藤田晢也、岸田纲太郎：第6回肠内细菌学会(2002.05.30-31)要旨

从日本国京都的传统咸菜中，可分离出多种菌类，除上述Labre株外，还存在具有免疫赋活作用等有用生理活性的菌株。上述咸菜中分离的菌株中，分离频率最高的菌株为植物乳杆菌和戊糖乳杆菌，但以往对分离自咸菜的菌类的功效，并未作深入研究。此外，由于分离自咸菜的乳酸菌原本即为食品中含有的菌类，因此，即使将其摄入体内，安全性也很高。所以，只要从咸菜中分离有用性高的乳酸菌，即可构成含有该乳酸菌的有用组合物。

鉴于上述问题完成了本发明，其目的在于提供：含有分离自日本国京都传统咸菜的具有有用生理活性的乳酸菌且安全性高的饮食品和医药品等。

发明内容

为了解决上述课题，本发明者等以分离自咸菜的16种乳酸菌为对象，研究其免疫调节作用，并对从中选择的属于戊糖乳杆菌的乳酸菌的免疫调节作用进行深入研究，结果发现：将该乳酸菌与饮用水混合让动物摄取时，或给与动物该乳酸菌的悬浮液时，发现具有免疫赋活作用和抗过敏作用等免疫调节作用，从而完成了本发明。

即，本发明组合物的特征在于，含有属于戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)且无甘油同化性或甘油同化性较弱的乳酸菌。本乳酸菌优选具有免疫调节作用，另外，优选细胞外多糖产生株。

作为优选的乳酸菌，可列举戊糖乳杆菌S-PT84株。本戊糖乳杆菌S-PT84株是本发明者等从紫苏腌茄子中分离并发现具有较强免疫调节作用的菌株。本菌也被称为DS84C株。本菌保藏于日本国独立行政法人产业技术综合研究所特许生物保藏中心(Lactobacillus pentosus SAM 2336)，其保藏编号为FERMBP-10028。因此，本发明的组合物，优选含有上述戊糖乳杆菌S-PT84株的组合物。

本发明的组合物是含有上述乳酸菌的组合物，是具有免疫调节作用的组合物。另外，本发明的组合物是含有上述乳酸菌的组合物，是具有抗过敏作用的组合物。此外，本发明的组合物也可以是以活菌形式含有乳酸菌的组合物。上述组合物可有效用于具有免疫调节作用和/或抗过敏作用的饮食品和医药品。

本发明的其他目的、特征及优点，通过以下说明可充分了解。此外，参照附图，结合以下说明，可明白本发明的有益效果。

附图说明

图1所示为16种乳酸菌体外刺激对巨噬细胞IL-12诱导实验的结果。

图2所示为S-PT84腹腔内给与后血清IL-12浓度随时间的变化。

图3所示为16种乳酸菌腹腔内给与后小鼠血清IL-12浓度的测定结果。

图4(a)～(c)所示为淋巴细胞因S-PT84刺激而产生的细胞因子的分析结果的流式细胞仪图表，(a)所示为培养基中不添加任何物质时的结果，(b)所示为培养基中添加S-PT84死菌时的结果，(c)所示为培养基中添加刀豆素A时的结果。

图5(a)～(c)所示为S-PT84刺激对CD4+、CD8+以及CD69+细胞的影响的分析结果的流式细胞仪图表。(a)所示为培养基中不添加任何物质时的结果，(b)所示为培养基中添加S-PT84死菌时的结果，(c)所示为培养基中添加刀豆素A时的结果。

图6所示为S-PT84腹腔内给与后肝淋巴细胞的NK活性的测定结果。

图7(a)·(b)所示为S-PT84腹腔内给与对肝淋巴细胞的CD4+、CD8+以及CD69+细胞的影响的分析结果的流式细胞仪图表。(a)所示为对照的结果，(b)所示为S-PT84给与后的结果。

图8所示为S-PT84经口摄取后的小鼠的血清IL-12浓度测定结果。

图9所示为S-PT84经口摄取后的小鼠的脾细胞NK活性测定结果。

图10所示为S-PT84经口摄取后的小鼠的脾细胞Th1/Th2比测定结果。

图11所示为S-PT84经口摄取后的小鼠在环磷酰胺给与后的体重变化。

图12所示为S-PT84经口摄取后的小鼠在环磷酰胺给与后的血清IL-12浓度测定结果。

图13所示为S-PT84经口摄取后的小鼠在OVA给与后OVA特异性IgE浓度的变化。

图14所示为S-PT84经口摄取后的小鼠在OVA给与3周后总IgE浓度测定结果。

图15所示为S-PT84经口摄取后的小鼠对应激时免疫低下的抑制效果。

图16所示为4种乳酸菌(DB22C、DS51C、DS2C、DS84C(S-PT84))过热死菌或活菌腹腔内给与后的小鼠的血清IL-12浓度测定结果。

具体实施方式

下面，对本发明的一个实施形态进行说明。另外，本发明不限于此。

本发明的组合物中含有的乳酸菌，只要是属于戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)且无甘油同化性或甘油同化性较弱的乳酸菌即可。含有上述乳酸菌的组合物，能够发挥该乳酸菌所具有的有用生理活性，其价值很高。其中，优选具有免疫调节作用的组合物。具有免疫调节作用意为具有下述至少任意一方面的作用：当稳态和免疫功能低下时使其活化的作用(免疫赋活作用)、当免疫功能过度亢进时进行抑制使其处于适宜免疫状态的作用(免疫抑制作用)、使细胞免疫和体液免疫处于最佳平衡的作用。免疫调节作用，可列举：促进或抑制细胞因子的产生、活化淋巴细胞、增强NK(natural killer)活性、改善Th1/Th2平衡、抑制免疫低下、抗过敏等作用，但不限于这些。

本发明的组合物中含有的乳酸菌，还优选细胞外多糖(Extracel lulerPolysaccharide：以下简称为“EPS”)产生株。根据菌属、菌种、菌株不同，EPS的性质和化学结构也各不相同，本乳酸菌的EPS是附着于菌体表面的荚膜多糖，利用墨汁染色，即可鉴别。EPS产生株与非产生株相比，亲水性高，因此易于在食品中应用。

作为本发明组合物中含有的乳酸菌的代表性菌株，可列举戊糖乳杆菌S-PT84株。本菌保藏于日本国独立行政法人产业技术综合研究所特许生物保藏中心，其保藏编号为FERM BP-10028。下面，对戊糖乳杆菌S-PT84株(以下简称为“S-PT84”)进行说明。

本发明者等设定如下基准，选择出16种从紫苏腌茄子中分离的乳酸菌(Lactobacillus plantarum 4种、Lactobacillus pentosus 12种)。即，从植物性乳酸菌中，选择出16种符合下述四个基准的乳酸菌，即：是乳杆菌属(Lactobacillus)、分离出多株具有相同性状的菌株、在培养基中显示良好的增殖情况、是咸菜的特征菌。

以上述16种乳酸菌为对象，比较白细胞介素12(以下简称为“IL-12”)诱导能力，结果发现：向小鼠腹腔内给与菌体后，戊糖乳杆菌S-PT84株使血清IL-12浓度上升最显著。

然后，详细探讨了该S-PT84的免疫调节作用，得到以下发现。

(1)对从小鼠制备的脾细胞进行体外处理后，诱导Th1型细胞因子IFN-γ(干扰素γ)以及TNF-α(肿瘤坏死因子α)产生，使CD4+CD69+细胞以及CD8+CD69+细胞增加，即S-PT84具有活化辅助性T细胞和杀伤性T细胞的作用。

(2)向小鼠腹腔内给与后，具有增强肝淋巴细胞NK活性的作用。另外，使CD8+细胞以及CD8+CD69+细胞增加，增强细胞免疫。

(3)让小鼠经口摄取后，使血清IL-12浓度上升，使脾细胞的CD4+、CD8+以及CD3+的细胞数增加，使脾细胞的NK活性增强，使脾细胞的Th1/Th2平衡转向Th1优势。

(4)让小鼠经口摄取后，抑制因环磷酰胺给与而引起的体重下降，抑制免疫反应的低下。

(5)让小鼠经口摄取后，即使用卵白蛋白(OVA)致敏，也可抑制OVA特异性IgE以及总IgE的上升。

(6)让小鼠经口摄取后，抑制应激引起的NK活性的下降。

由此表明，S-PT84是具有免疫调节作用的菌株。

S-PT84的菌学性质见表1。

[表1]

众所周知，通常戊糖乳杆菌的甘油同化性高，但由表1可知，S-PT84的甘油同化性较弱，不同于迄今为止已知的戊糖乳杆菌。

从S-PT84提取DNA后，用Microseq Full Gene 16S rDNA kit(AppliedBiosystems公司生产)对16SrRNA基因整个区域约500bp进行解读。经解读的S-PT84的16SrRNA基因序列(序列号1)与戊糖乳杆菌JCM^T(D79211)的16SrRNA基因序列具有100％同源性，因此鉴定为戊糖乳杆菌。

S-PT84与不产生EPS的菌相比，亲水性高，几乎不粘附于塑料表面。另外，几乎没有酵母凝集作用。

本发明的组合物，只要是含有属于戊糖乳杆菌且无甘油同化性或甘油同化性较弱的乳酸菌的组合物即可，优选具有免疫调节作用的组合物，或具有抗过敏作用的组合物。当然，若是兼具免疫调节作用和抗过敏作用的组合物，则更加有用。

本发明的组合物可作为具有免疫调节作用和/或抗过敏作用的饮食品和医药品，得到有效利用。即，优选作为具有免疫调节作用和/或抗过敏作用的药学组合物使用。

上述组合物中含有的乳酸菌可以是乳酸菌(活菌和死菌)、乳酸菌含有物、乳酸菌处理物等。从该乳酸菌培养液等乳酸菌含有物中，可得到活菌。通过对活菌进行加热、紫外线照射、福尔马林处理等，可得到死菌。得到的活菌、死菌进一步通过磨碎和破碎等处理，可制成处理物。

即，本发明的组合物，只要含有乳酸菌、乳酸菌含有物、乳酸菌处理物中的至少任意一种即可。上述乳酸菌可以是活菌体、湿菌、干菌等。上述乳酸菌含有物可以是例如，乳酸菌悬浮液、乳酸菌培养物(包含菌体、培养上清、培养基成分)、乳酸菌培养液(从菌培养物中除去固体成分后的物质)、乳酸菌发酵乳(乳酸菌饮料、乳清、酸奶(yoghurt)等)。另外，乳酸菌处理物可以是例如，磨碎物、破碎物、液状物(提取液等)、浓缩物、糊化物、干燥物(喷雾干燥物、冷冻干燥物、真空干燥物、鼓式干燥物等)、稀释物等。由于本发明组合物中含有的S-PT84原本即为从发酵食品紫苏腌茄子中分离的菌株，因此，含有果蔬类和谷物类经S-PT84发酵后的发酵物的物质也是本发明组合物的优选形态之一。如上所述，由于S-PT84原本即为从食品中分离的菌株，因此，含有S-PT84的组合物的安全性高。

本发明的组合物，优选作为上述饮食品和医药品等、即具有免疫调节作用的药学组合物使用。用于饮食品中时，优选作为具有免疫调节作用的健康食品使用。另外，也可以与公知的甜味料、酸味料、维生素等各种成分混合，制成符合消费者口味的产品。例如，可以以片剂、胶囊剂、保健营养液、酸奶或乳酸菌饮料等乳制品、调味料、加工食品、甜点类、糕点等形态提供。

作为医药品时，可列举免疫赋活剂和抗过敏药。另外，也可以在主药中添加赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味矫臭剂、助溶剂、悬浮剂、包衣剂等医药制剂技术领域中常用的公知辅助剂，制成制剂。剂型可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆剂、栓剂、注射剂等，无特殊限制。作为本医药品的给与途径，可列举：经口给与、直肠给与、经肠给与等，并无特殊限制。

[实施例]

[使用的乳酸菌株]

从日本国京都传统咸菜紫苏腌茄子中，分离出4种Lactobacillusplantarum、12种Lactobacillus pentosus，用于比较白细胞介素12(IL-12)诱导能力的实验，以选择Th1型免疫赋活能力高的菌株。表2中显示使用菌株的株名、种名以及EPS的有无。比较IL-12诱导能力，结果发现DS84C株(S-PT84)的活性特别强，因此，之后的实验仅用S-PT84来进行。

[表2]

株名	种名	细胞外多糖(EPS)
			DW69N	Lactobacillus.pentosus	-
DW69C	Lactobacillus.pentosus	+
			DS84N	Lactobacillus.pentosus	-
DS84C(S-PT84)	Lactobacillus.pentosus	+
			DB30N	Lactobacillus.pentosus	-
DB30C	Lactobacillus.pentosus	+
			DA74N	Lactobacillus.pentosus	-
DA74C	Lactobacillus.pentosus	+
			DS51N	Lactobacillus.pentosus	-
DS51C	Lactobacillus.pentosus	+
			DB22N	Lactobacillus.plantarum	-
DB22C	Lactobacillus.plantarum	+
			DS25N	Lactobacillus.pentosus	-
DS25C	Lactobacillus.pentosus	+
			DS2N	Lactobacillus.plantarum	-
DS2C	Lactobacillus.plantarum	+

[体外刺激对IL-12的诱导]

向BALB/c小鼠(7周龄·雄性)腹腔内给与4.05％硫乙醇酸钠，4天后，用PBS回收腹腔内巨噬细胞，用含10％FBS的RPMI培养基调整到2×10⁶cells/mL后，加入24孔板内，每孔0.5mL。向各孔中添加各菌株的加热死菌(10μg/mL)，培养24小时后，测定培养上清中的IL-12浓度。由于活性IL-12是由p35和p40亚单位结合的p70，因此测定IL-12(p70)即可。另外，用OptEIA mouse IL-12测定试剂盒(BD Pharmingen公司生产)测定IL-12。

结果在图1中显示。由图1可知，即使是菌种和亲株相同的菌株，IL-12的诱导能力也各不相同，DW69N、S-PT84(DS84C)、DS25C表现出特别高的活性。

[体内刺激对IL-12的诱导]

向BALB/c小鼠(7周龄·雄性)腹腔内给与各菌株的加热死菌(500μg/0.2mL/小鼠)悬浮液(溶剂：生理盐水)，6小时后，进行颈椎脱臼，然后，从心脏采血。另外，向control的小鼠等量给与生理盐水。之所以在给与后6小时采血，是因为事先用S-PT84探讨的结果显示：死菌给与后血清IL-12浓度的峰值出现在给与后6小时(参照图2)。采血后，通过离心分离，收集血清，用OptEIA mouseIL-12测定试剂盒(BD Pharmingen公司生产)测定血清中的IL-12浓度。

结果见图3。由图3可知，给与S-PT84(DS84C)、DS51C以及DS25C这3株菌株后的血清IL-12浓度高于control。其中，给与S-PT84(DS84C)后的血清IL-12浓度最高，因此，之后的实验仅采用S-PT84。

[S-PT84对淋巴细胞的影响]

从BALB/c小鼠(7周龄·雄性)中取出脾脏，按常法制备脾细胞。在含有上述S-PT84加热死菌(1μg/mL)的培养基中培养24小时。将在不添加任何物质的培养基中培养的脾细胞(control)和添加刀豆素A(2.5μg/mL)培养的脾细胞(ConA)设为对照。为了弄清因S-PT84死菌的刺激而产生的细胞因子，用CBAkit(BD Pharmingen公司生产)测定各培养上清中的细胞因子浓度。另外，回收脾细胞，用经荧光标记的抗CD4抗体(CY-CHCROME^TM标记、BD bioscience公司生产)、抗CD8抗体(FITC标记、Immunotech公司生产)、抗CD69抗体(PE标记、BD bioscience公司生产)标记细胞，用流式细胞仪(Beckman Coulter公司生产)测定CD4、CD8以及CD69阳性细胞的比例。

细胞因子的生成结果见图4。图4(a)所示为培养基中不添加任何物质时(control)的结果，图4(b)所示为培养基中添加S-PT84死菌时(S-PT84)的结果，图4(c)所示为培养基中添加刀豆素A时(ConA)的结果。由图4可知，通过S-PT84的刺激，诱导IFN-γ(干扰素γ)以及TNF-α(肿瘤坏死因子α)产生，而在control中没有发现上述细胞因子的产生。这些细胞因子是Th1型细胞因子，认为S-PT84特异性诱导Th1型细胞因子。另一方面，没有产生Th2型细胞因子IL-4和IL-5。另外，用刀豆素A刺激后，产生另一种Th1型细胞因子IL-2(白细胞介素2)。

对CD4+、CD8+以及CD69+细胞的影响的结果见图5。图5(a)所示为培养基中不添加任何物质时(control)的结果，图5(b)所示为培养基中添加S-PT84死菌(1μg/ml)时(S-PT84)的结果，图5(c)所示为培养基中添加刀豆素A时(ConA)的结果。另外，图5中，箭头越往上或越往右，表示各表面抗原的阳性细胞越多。由图5可知，S-PT84活化辅助性T细胞和杀伤性T细胞。

[S-PT84腹腔内给与后的肝淋巴细胞的变化]

向C57BL/6小鼠(7周龄·雄性)腹腔内给与S-PT84加热死菌(500μg/0.2mL/小鼠)悬浮液(溶剂：生理盐水)，24小时后，取出肝脏，用离心法制备肝淋巴细胞。作为对照(control)，腹腔内只给与生理盐水。用PINK法测定制备的肝淋巴细胞的NK活性。PINK法即用疏水性膜系荧光色素3，3′-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate(Dio)标记靶细胞Yac-1，然后用膜不透过性核酸嵌入型荧光色素propidium iodide(PI)对死细胞的细胞核进行双重染色，未被杀伤的Yac-1为Dio单染色，被杀伤的Yac-1为双重染色，通过流式细胞仪检出，算出小鼠淋巴细胞的细胞毒活性。另外，用经荧光标记的抗CD4抗体(CY-CHCROME^TM标记、BD bioscience公司生产)、抗CD8抗体(FITC标记、Immunotech公司生产)、抗CD69抗体(PE标记、BD bioscience公司生产)标记细胞，用流式细胞仪(Beckman Coulter公司生产)测定CD4、CD8以及CD69阳性细胞的比例。

NK活性的测定结果见图6。图6中，NK activity(％)表示小鼠肝淋巴细胞对Yac-1的细胞毒活性，E:T ratio表示反应的肝淋巴细胞数：Yac-1数。由图6可知，与control相比，从给与S-PT84后的小鼠制备的肝淋巴细胞的NK活性明显上升。

CD4+、CD8+以及CD69+细胞的结果见图7。图7(a)所示为对照(control)的结果，图7(b)所示为给与S-PT84后的结果。另外，图7中，箭头越往上或越往右，表示各表面抗原的阳性细胞越多。由图7可知，CD8+的细胞明显增加，CD8+CD69+的细胞也有所增加，由此可知，通过给与S-PT84，肝脏中杀伤性T细胞增加，而且，活化的杀伤性T细胞也增加。

[S-PT84经口摄取产生的Th1/Th2平衡调节作用]

让6只BALB/c小鼠(7周龄·雄性)通过饮水1周(相当于2mg/day)自由摄取S-PT84(死菌体)。另外，设置不摄取S-PT84的对照组(6只)。1周后，从心脏采血，然后取出脾脏。通过离心分离，从血液收集血清，用OptEIA mouseIL-12测定试剂盒(BD Biosciences公司生产)测定血清中的IL-12浓度。另外，按常法从取出的脾脏中制备脾细胞，测定脾淋巴细胞的CD4+、CD8+以及CD3+细胞数(采用各自的标记抗体，用流式细胞仪测定)，用PINK法测定NK活性，以及测定Th1/Th2的比(使刀豆素A 2.5μg/mL作用于小鼠脾细胞5×10⁶个24小时，测定上清中产生的IL-4以及IFN-γ浓度。Th1/Th2比为IFN-γ浓度比IL-4浓度的值)。

血清IL-12浓度的测定结果见图8。由图8可知，与对照组(Cont)相比，经口摄取S-PT84后的小鼠的血清IL-12浓度显著上升。

CD4+、CD8+以及CD3+细胞数的测定结果见表3。由表3可知，脾T淋巴细胞亚群有增加的趋势。

[表3]

NK活性的测定结果见图9。图9中，NK activity(％)表示小鼠脾细胞对Yac-1的细胞毒活性，E:T ratio表示反应的脾细胞数：Yac-1数。由图9可知，与对照组(Cont)相比，从经口摄取S-PT84后的小鼠制备的脾细胞的NK活性显著上升。

Th1/Th2比的测定结果见图10。由图10可知，与对照组(Cont)相比，从经口摄取S-PT84后的小鼠制备的脾细胞的Th1细胞因子生成率显著增加。

如上所述，经口摄取S-PT84后的小鼠，其Th1型细胞因子被诱导，Th1/Th2平衡转向Th1优势，NK活性增加。由此可知：S-PT84具有Th1/Th2平衡调节作用以及免疫赋活作用。

[对环磷酰胺给与小鼠的体重变化的影响]

将20只BALB/c小鼠(7周龄·雄性)分成2组，各组平均体重大致相等，分别为S-PT84摄取组和S-PT84非摄取组(对照组)。对S-PT84摄取组，使其通过饮水22天(相当于2mg/day)自由摄取S-PT84(死菌体)。摄取开始的第8天，以200mg/kg的剂量，向全体小鼠腹腔内给与作为癌症化疗药物的烷化剂环磷酰胺(Cyclophosphamide：CY)。在CY给与后第1、2、3、5、8、12及15天，测定各个体的体重。

两组的平均体重的变化见图11。由图11可知，与对照组(Control)相比，S-PT84摄取组抑制因CY给与而引起的体重下降。

[对环磷酰胺给与小鼠的IL-12生成的影响]

将BALB/c小鼠(7周龄·雄性)分成5组。组的构成：无处置组(5只)、S-PT84非摄取·CY非给与组(10只)、S-PT84非摄取·CY给与组(10只)、S-PT84摄取·CY非给与组(10只)以及S-PT84摄取·CY给与组(11只)。对摄取S-PT84的2组，使其通过饮水12天(相当于2mg/day)自由摄取S-PT84(死菌体)。摄取开始的第7天，以200mg/kg的剂量，向CY给与组小鼠腹腔内给与作为癌症化疗药物的烷化剂环磷酰胺(Cyclophosphamide：CY)。CY给与后第5天，除无处置组外，对其他4组小鼠腹腔内给与S-PT84加热死菌(500μg/0.2mL/小鼠)悬浮液(溶剂：生理盐水)。S-PT84死菌给与后第6小时，对包括无处置组在内的全体小鼠进行心脏采血。采血后，通过离心分离，收集血清，用OptEIAmouse IL-12测定试剂盒(BD Pharmingen公司生产)测定血清中的IL-12浓度。

结果见图12。由图12可知，通过给与CY，S-PT84非摄取组的血清IL-12浓度显著降低，而S-PT84摄取组则显著抑制因CY给与而引起的血清IL-12浓度的降低，与对照组的血清IL-12浓度几乎相同。

上述结果表明：S-PT84抑制由CY引起的体重下降以及免疫低下，即具有免疫赋活作用。

[抗过敏作用的探讨]

将36只BALB/c小鼠(7周龄·雄性)分成4组。组的构成：无处置组(5只)、对照组(10只)、S-PT84组(11只)、Dex摄取组(10只)，对S-PT84组，使其通过饮水7周(相当于2mg/day)自由摄取S-PT84(死菌体)，对Dex摄取组，以0.5mg/kg的剂量，7周强制经口给与。对无处置组和对照组，使其自由摄取自来水7周。另外，Dex是具有消炎、抗过敏作用的类固醇制剂，作为阳性对照药使用。S-PT84摄取或Dex给与开始1周后和2周后，将20μg卵白蛋白(OVA)与2mg氢氧化铝凝胶混合，除无处置组外，向其余3组小鼠腹腔内给与。从第2次的给与日(第0周)开始，每隔1周对全体小鼠进行采血，直至第5周，合计6次，测定OVA特异性IgE浓度。OVA特异性IgE浓度测定时，通过改良OptEIA mouse IgE测定试剂盒(BD Pharmingen公司生产)，采用包被OVA以代替补足用抗体的ELISA法进行测定。另外，用第3周的血液样品，测定总IgE。总IgE测定时，采用OptEIA mouse IgE测定试剂盒(BD Pharmingen公司生产)，用ELISA法测定。

图13所示为OVA特异性IgE浓度的变化，图14所示为总IgE浓度的测定结果。由图13可知，S-PT84组与对照组(Control)相比，显著抑制OVA特异性IgE浓度的上升。Dex组虽然显示抑制趋势，但无显著性差异。另外，由图14可知，与对照组(Control)相比，S-PT84组和Dex组显著抑制总IgE浓度的上升。

以上结果表明：S-PT84具有抗过敏作用。

[对应激引起的免疫低下的抑制效果的探讨]

将9只C57BL/6小鼠(6周龄·雄性)分成3组，各组平均体重大致相等。组的构成：对照组(3只)、应激组(3只)以及S-PT84摄取+应激组(3只)。对S-PT84摄取组，使其通过饮水7天(相当于2mg/day)自由摄取S-PT84(死菌体)。摄取开始的第8天，将应激组和S-PT84摄取+应激组的6只小鼠水浸一次后，放入顶端开有空气孔的50mL聚乙烯管中，束缚24小时。对照组则绝水绝食24小时。然后，从动物中取出脾脏，制备脾淋巴细胞，测定NK活性。

NK活性的测定结果见图15。与对照组相比，应激组的NK活性显著下降。但是，S-PT84摄取+应激组维持与对照组相同的NK活性，与应激组相比，呈显著高值。由此表明：S-PT84抑制由应激引起的免疫低下。

[死菌与活菌之间的免疫赋活作用的差异]

以图3中通过腹腔内给与使小鼠血清IL-12浓度增加的乳酸菌为对象，比较死菌与活菌之间的免疫赋活作用。

制备4种乳酸菌(DB22C、DS51C、DS2C、DS84C(S-PT84))过热死菌或活菌(均为500μg(2.5×10⁸个)/0.2ml/小鼠)的悬浮液，向BALB/c小鼠(7周龄·雄性)腹腔内给与，6小时后，使小鼠颈椎脱臼，从心脏采血。另外，作为Control，以生理盐水代替乳酸菌向小鼠等量给与。

采血后，通过离心分离，收集血清，用Opt EIA(BD Pharmingen公司生产)测定血清中的IL-12浓度。结果如图16所示。

与图3同样，DS84C(S-PT84)给与组的IL-12生成量最高。此外，从图16可知，DS84C(S-PT84)活菌给与组的IL-12生成量高于死菌给与组。

[制造例1：片剂]

按下述方法，制造含有S-PT84的医药品(片剂)。

将S-PT84的干燥粉碎物66.7g与乳糖232.0g以及硬脂酸镁1.3g混合，用单冲式打片机打片，制造直径10mm、重量300mg的片剂。

[制造例2：酸奶]

将乳固体成分21％的S-PT84发酵乳添加到市售牛奶中，静置3天，制备酸奶。得到的酸奶呈现良好香味。

[制造例3：乳酸菌饮料]

按表4所示的组成，用S-PT84制备乳酸菌饮料。得到的乳酸菌饮料呈现良好香味。

[表4]

另外，具体实施方式中的具体实施形态或实施例，只是对本发明技术内容的阐明，不应局限于上述具体例子进行狭义解释，在本发明的主旨和权利要求项的范围内，可进行各种变形。

本发明的组合物作为饮食品摄取或作为医药品给与时，通过赋活免疫功能，可抑制免疫功能低下，此外，通过调节免疫功能的平衡，可抑制对机体产生不良影响的免疫功能过度亢进。

本发明的组合物可作为具有免疫调节作用的健康食品和医药品使用。因此，本发明可用于食品工业和医药品工业。

序列表(SEQUENCE LISTING)

<110>三得利株式会社(SUNTORY LIMITED)

<120>具有免疫调节作用的组合物(A Composition Having Immunoregulating ActivitiesComprising Lactobacillus Pentosus)

<130>FP2005-040

<140>PCT/JP2005/006585

<141>2005-03-29

<150>JP 2004-159461

<151>2004-05-28

<160>1

<170>PatentIn Ver.2.1

<210>1

<211>1519

<212>DNA

<213>乳酸菌(Lactobacillus pentosus)

<400>1

gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gaactctggt attgattggt 60

gcttgcatca tgatttacat ttgagtgagt ggcgaactgg tgagtaacac gtgggaaacc 120

tgcecagaag cgggggataa cacctggaaa cagatgctaa taccgcataa caacttggac 180

cgcatggtcc gagtttgaaa gatggcttcg gctatcactt ttggatggtc ccgcggcgta 240

ttagctagat ggtggggtaa cggctcacca tggcaatgat acgtagccga cctgagaggg 300

taatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga 360

atcttccaca atggacgaaa gtctgatgga gcaacgccgc gtgagtgaag aagggtttcg 420

gctcgtaaaa ctctgttgtt aaagaagaac atatctgaga gtaactgttc aggtattgac 480

ggtatttaac cagaaagcca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg 540

gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca ggcggttttt taagtctgat 600

gtgaaagcct tcggctcaac cgaagaagtg catcggaaac tgggaaactt gagtgcagaa 660

gaggacagtg gaactccatg tgtagcggtg aaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt 720

ggcgaaggcg gctgtctggt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagtatg ggtagcaaac 780

aggattagat accctggtag tccataccgt aaacgatgaa tgctaagtgt tggagggttt 840

ccgcccttca gtgctgcagc taacgcatta agcattccgc ctggggagta cggccgcaag 900

gctgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 960

gaagctacgc gaagaacctt accaggtctt gacatactat gcaaatctaa gagattagac 1020

gttcccttcg gggacatgga tacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1080

tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttattatc agttgccagc attaagttgg 1140

gcactctggt gagactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc 1200

atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga tggtacaacg agttgcgaac 1260

tcgcgagagt aagctaatct cttaaagcca ttctcagttc ggattgtagg ctgcaactcg 1320

cctacatgaa gtcggaatcg ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc 1380

cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgagagtttg taacacccaa agtcggtggg 1440

gtaacctttt aggaaccagc cgcctaaggt gggacagatg attagggtga agtcgtaaca 1500

aggtagccgt aggagaacc                                        1519

Claims (7)

1.组合物，其特征在于，其含有戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)S-PT84株，其保藏编号为FERM BP-10028。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述戊糖乳杆菌S-PT84株具有免疫调节作用和/或抗过敏作用。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述戊糖乳杆菌S-PT84株是细胞外多糖产生株。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，其具有免疫调节作用。

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，其具有抗过敏作用。

6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，其以活菌形式含有所述的戊糖乳杆菌S-PT84株。

7.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，其是饮食品或医药品。

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