CN101300343B - 来自人类脂肪组织的多能干细胞和包含该多能干细胞的细胞治疗剂 - Google Patents

来自人类脂肪组织的多能干细胞和包含该多能干细胞的细胞治疗剂 Download PDF

Info

Publication number
CN101300343B
CN101300343B CN2005800519455A CN200580051945A CN101300343B CN 101300343 B CN101300343 B CN 101300343B CN 2005800519455 A CN2005800519455 A CN 2005800519455A CN 200580051945 A CN200580051945 A CN 200580051945A CN 101300343 B CN101300343 B CN 101300343B
Authority
CN
China
Prior art keywords
stem cell
cells
cell
stem cells
adult stem
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN2005800519455A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101300343A (zh
Inventor
姜庆顺
罗正灿
朴贞兰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
RNL Bio Co Ltd
Original Assignee
RNL Bio Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=38041072&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN101300343(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by RNL Bio Co Ltd filed Critical RNL Bio Co Ltd
Publication of CN101300343A publication Critical patent/CN101300343A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101300343B publication Critical patent/CN101300343B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0607—Non-embryonic pluripotent stem cells, e.g. MASC
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
    • C12N2500/14—Calcium; Ca chelators; Calcitonin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/20—Transition metals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/32—Amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/44—Thiols, e.g. mercaptoethanol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/80—Undefined extracts from animals
    • C12N2500/84—Undefined extracts from animals from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/11—Epidermal growth factor [EGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/115—Basic fibroblast growth factor (bFGF, FGF-2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/33—Insulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/39—Steroid hormones

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Neurology (AREA)

Abstract

本发明涉及来自人类脂肪组织的多能成体干细胞，具体涉及来自人类乳房脂肪组织的多能成体干细胞，其可通过形成球体以未分化状态保持很长一段时间，并具有较高的增殖率，本发明还涉及用于分离和保持成体干细胞的方法，用于将成体干细胞分化成神经细胞、脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞和胰岛素释放胰腺β细胞的方法。而且，本发明涉及用于治疗骨关节炎、骨质疏松症和糖尿病的细胞治疗剂，以及用于形成乳房组织的细胞治疗剂，其含有分化的细胞或者成体干细胞。虽然多能干细胞是成体干细胞，但它们具有分化成成骨细胞、神经细胞、星形细胞、脂肪细胞、软骨细胞以及胰岛素释放胰腺β细胞的能力，并有效地治疗骨关节炎、骨质疏松症、神经疾病、糖尿病等疾病的细胞治疗剂。而且干细胞在含有CORM-2的培养基中形成球体，由此可长时间保持在未分化状态。而且，干细胞具有非常高的增殖率。因此，干细胞作为细胞治疗剂是有用的。

Description

来自人类脂肪组织的多能干细胞和包含该多能干细胞的细胞治疗剂
技术领域
本发明涉及来自人类脂肪组织的多能成体干细胞，具体涉及来自人类乳房脂肪组织的多能成体干细胞，其可通过形成球体而长时间保持未分化状态，并具有较高的增殖率。此外，本发明还涉及用于分离和保持成体干细胞的方法，用于将成体干细胞分化成神经细胞、脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞和胰岛素释放胰腺β细胞的方法，用于治疗骨关节炎、骨质疏松症和糖尿病的细胞治疗剂，以及用于形成乳房组织的细胞治疗剂。
背景技术
21世纪生物技术以提高人类繁荣为最终目标提供了食物、环境和健康问题上新解决办法的可能性。近年来，使用干细胞的技术已经被认为是治疗不可治愈的疾病的新途径。以前，器官移植、基因治疗等被提出用于治疗不可治愈的人类疾病，但是由于免疫排斥、器官源短缺、载体发展的不足以及缺乏对疾病基因知识，不能将它们高效地使用。
由于这种原因，随着对干细胞研究兴趣的增加，人们已经认识到通过增殖和分化具有形成所有器官的能力的全能干细胞不仅能够治疗绝大多数疾病，而且基本治愈器官损伤。而且，许多科学家已经提出干细胞用于再生所有器官和治疗不可治愈疾病的适用性，包括帕金森症、各种癌症、糖尿病和脊柱损伤。
干细胞指的是不仅具有自我复制能力而且具有分化成至少两种细胞的能力的细胞，其可被分成全能干细胞、亚全能干细胞和多能干细胞。
全能干细胞是具有能够形成一个完整个体的全能性的细胞，卵母细胞和精子受精后到8细胞期的细胞具有这些性质。当这些细胞被分离并移植到子宫中时，它们可发育成一个完整个体。
亚全能干细胞是能够形成来源于外胚层、中胚层和内胚层的各种细胞和组织的细胞，亚全能干细胞来自定位在受精4-5天后产生的胚泡内的内部球团。这些细胞被称为“胚胎干细胞”，并可分化成各种其它组织细胞，但不能形成新的活体组织。
多能干细胞是仅能分化成对含有这些细胞的组织和器官具有特异性的细胞，多能干细胞不仅在胎儿、新生儿和成人阶段的各种组织和器官的生长和发育中涉及，而且还在保持成人组织的内环境平衡和当组织损伤时诱导再生的功能中涉及。组织特异性多能细胞统称为“成体干细胞”。
成体干细胞通过从各种人类器官中收集细胞并使细胞发育成干细胞而获得，其特征在于它们仅仅分化成特定组织。但是，近年来，用于将成体干细胞分化成各种组织包括肝细胞的实验也明显获得成功。
多能干细胞首先从成人骨髓细胞中分离(Jiang等人，Nature，418：41，2002)，然后在其它各种成人组织中均被发现(Verfaillie，Trends Cell Biol.，12：502，2002)。换言之，虽然骨髓是最广为人知的干细胞源，但多能干细胞在皮肤、血管、肌肉和脑中也被发现(Tomas等人，Nat.Cell Biol.，3：778，2001；Sampaolesi等人，Science，301：487，2003；Jiang等人，Exp.Hematol.，30：896，2002)。但是，成人组织诸如骨髓中的干细胞存在非常少，这些细胞在不诱导分化的情况下难以培养，在不存在特定筛选培养基的情况下同样也难以培养。也就是说，在体外保持这些分离的干细胞非常困难。
近年来，发现脂肪组织是一种新的多能干细胞源(Cousin等人，BBRC.，301：1016，2003；Miranville等人，Circulation，110：349，2004；Gronthos等人，J.Cell Physiol.，189：54，2001；Seo等人，BBRC.，328：258，2005)。也就是说，据报道通过吸脂术得到的人类脂肪组织中含有一组未分化细胞。其具有分化成脂肪细胞、成骨细胞、成肌细胞、成软骨细胞的能力(Zuk等人，Tissue Eng.，7：211，2001；Rodriguez等人，BBRC.，315：255，2004)。这种脂肪组织具有的优点是可以被大量提取，因此，作为克服现有技术的缺点的新干细胞源而引起注意。
而且，使用动物模型实验所进行的新近研究表明，脂肪组织源细胞具有再生肌肉并刺激神经血管分化的能力。因此，这些脂肪组织源细胞作为新的干细胞源而引起注意。
到目前为止已知的脂肪组织源干细胞包括可分化成上皮细胞的人脂肪源成体干细胞(Brzoska等人，BBRC，330：142，2005)，可分化成成骨细胞和脂肪细胞的人脂肪源成体干细胞(Cao等人，BBRC，332：370，2005)，可分化成神经细胞的人脂肪源成体干细胞(Safford等人，BBRC，294：371，2002)，可分化成脂肪细胞的鼠脂肪源干细胞(Ogawa等人，BBRC，319：511，2004)，可分化成成骨细胞和成软骨细胞的鼠脂肪源干细胞(Ogawa等人，BBRC，313：871，2004)，可分化成软骨细胞的人脂肪源干细胞(Biomaterials，25：3211，2004)，可分化成神经细胞的鼠脂肪源干细胞(Fujimura等人，BBRC，333：116，2005)，可分化成骨细胞、软骨细胞、神经细胞或者肌肉细胞的脂肪源干细胞(美国专利US6777231)。
但是，到目前为止绝大多数已知的脂肪源干细胞是来源于除人类以外的其它动物的脂肪组织的干细胞。即便它们是来源于人类脂肪组织的干细胞，它们也被限制在通过腹部脂肪吸脂术获得的组织来源，并且由这些干细胞分化而成的细胞的种类也是有限的。特别地，分离的干细胞具有低增殖率，并且难以长期保持在未分化状态，因此，在应用方面受到限制。
因此，本发明的发明人付出了极大的努力来开发具有高增殖率的成人多能干细胞，它们可通过形成球体而长期保持在未分化状态，并可分化成更多种细胞，结果发现，从人类脂肪组织中分离的多能干细胞可分化成各种细胞，包括成骨细胞、成软骨细胞、神经细胞、星形细胞、脂肪细胞和胰岛素释放胰腺β细胞，具有非常高的增殖率，并可通过形成球体长期保持在未分化状态，由此完成本发明。
发明内容
因此，本发明的目的在于，提供脂肪组织源多能成体干细胞，其具有高增殖率并可通过形成球体长时间保持在未分化状态，本发明还提供了这种多能干细胞的生产方法。
本发明的另一个目的在于，提供将所述多能干细胞分化成神经细胞、星形细胞、软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞以及胰岛素释放胰腺β细胞的方法，以及含有所述分化细胞或者成体干细胞的治疗剂。
为了实现上述目的，本发明提供了用于生产成体干细胞的方法，包括在含有N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)的培养基中培养人脂肪组织源球团，然后收集培养的细胞，所述成体干细胞的特征在于：(a)对所有CD73、CD90、CD29、CD44和CD105产生阳性免疫应答，并对所有CD33、CD34、CD45、CD4、CD31、CD62p、CD14和HLA-DR产生阴性免疫应答；(b)附着于塑料生长，显示梭状形态学特征，并在含有CORM-2的培养基中形成球体，从而能够长时间保持为在分化状态；和(c)具有分化成中胚层源细胞的能力。
在本发明中，含NAC的培养基另外包括抗坏血酸、钙、rEGF、BPE、胰岛素和皮质醇。
另一方面，本发明提供了一种将成体干细胞细胞保持在未分化状态的方法，该方法包括在含有CORM-2的培养基中培养由所述方法制备的成体干细胞使其形成球体。
在本发明中，含有CROM-2的培养基优选为无血清培养基，其另外包含抗真菌抗生素溶液、皮质醇、胰岛素、rEGF、FGF、B27和β-巯基乙醇。
在又一方面，本发明提供了由所述方法生产的成体干细胞，其特征在于：(a)对所有CD73、CD90、CD29、CD44和CD105产生阳性免疫应答，并对所有CD33、CD34、CD45、CD4、CD31、CD62p、CD14和HLA-DR产生阴性免疫应答；(b)附着于塑料生长，显示梭状形态学特征，并在含有CORM-2的培养基中形成球体，从而能够长时间保持在未分化状态；和(c)具有分化成中胚层源细胞的能力。
在本发明中，成体干细胞优选以未分化状态培养到至少16代，中胚层源细胞优选为软骨细胞、成骨细胞、神经细胞、星形细胞、脂肪细胞、以及胰岛素释放胰腺β细胞。
在再一方面，本发明提供了将成体干细胞分化成神经细胞的方法，所述方法包括下列步骤：(a)在含有BME和FBS的DEME培养基中预培养成体干细胞；和(b)用DMSO和BHA处理预培养的培养液以便诱导分化成神经细胞。而且，本发明提供了用于治疗神经疾病的细胞治疗剂，其含有所述分化的神经细胞作为活性成分。
在还一方面，本发明提供了用于将成体干细胞分化成软骨细胞的方法，所述方法包括在含有TFG-β1、L-抗坏血酸盐-2-磷酸盐和胰岛素的α-MEM培养基中培养成体干细胞。而且，本发明提供了用于治疗骨关节炎的细胞治疗剂，其含有所述分化的软骨细胞作为活性成分。
在又一方面，本发明提供了用于将成体干细胞分化成成骨细胞的方法，所述方法包括将成体干细胞与磷酸三钙(TCP)混合并同基因移植(isotransplanting)该混合物。而且，本发明提供了用于治疗骨缺损的细胞治疗剂，其含有所述分化的成骨细胞作为活性成分。
在还一方面，本发明提供了用于将成体干细胞分化成脂肪细胞的方法，所述方法包括在含有地塞米松、抗炎吲哚酸、胰岛素和IBMX的α-MEM培养基中培养成体干细胞。而且，本发明提供了用于形成乳房组织的细胞治疗剂，其含有所述分化的脂肪细胞作为活性成分。
在再一方面，本发明提供了将成体干细胞分化成胰岛素释放胰腺β细胞的方法，所述方法包括下列步骤：(a)将成体干细胞在含有尼克酰胺、β-巯基乙醇和FBS的低葡萄糖DEME培养基中培养12-72小时；和(b)将培养的细胞在含有尼克酰胺、β-巯基乙醇和FBS的高葡萄糖DEME培养基中培养4-7天。而且，本发明提供了用于治疗糖尿病的细胞治疗剂，其含有所述胰岛素释放胰腺β细胞作为活性成分。
在又一方面，本发明提供了用于治疗神经疾病的细胞治疗剂，其含有具有分化成神经细胞能力的成体干细胞作为活性成分。
在又一方面，本发明提供了用于治疗糖尿病的细胞治疗剂，其含有具有分化成胰岛素释放胰腺β细胞能力的成体干细胞作为活性成分。
在又一方面，本发明提供了用于治疗骨关节炎的细胞治疗剂，其含有具有分化成软骨细胞能力的成体干细胞作为活性成分。
在又一方面，本发明提供了用于治疗骨缺损的细胞治疗剂，其含有具有分化成成骨细胞能力的成体干细胞作为活性成分。
在又一方面，本发明提供了用于形成乳房组织的细胞治疗剂，其含有具有分化成脂肪细胞能力的成体干细胞作为活性成分。
通过下列详细描述和所附的权利要求书，本发明的上述和其它目的、特征和实施方式将会更显而易见地被理解。
附图说明
图1显示了根据本发明的人脂肪组织源多能干细胞的放大100倍拍摄的照片。
图2显示了根据本发明的人脂肪组织源多能干细胞的累计倍增数目水平(CPDL)。A-1和A-2：根据本发明的人脂肪组织源多能干细胞；B和C：根据现有技术的脂肪源干细胞。
图3显示了根据本发明的人乳房脂肪组织源多能干细胞培养7天后形成的球体的放大200倍拍摄的照片。
图4显示了通过干细胞在琼脂中增殖形成的球体形状的放大200倍拍摄的照片。
图5示出了放大100倍拍摄的照片，其显示了巢蛋白，Oct4，SH2，SH3/4在本发明的人脂肪组织源多能干细胞中的表达，该人脂肪组织源多能干细胞在含有MEBM的CORM-2培养基中培养成球体然后免疫染色。
图6显示了根据本发明的人脂肪组织源多能干细胞分化成神经细胞和星形细胞。
图7显示了由根据本发明的人脂肪组织源多能干细胞分化而成的脂肪细胞的放大200倍拍摄的照片。A：分化阶段对比；B：通过油红O染色法染色。
图8显示了由根据本发明的人脂肪组织源多能干细胞分化而成的软骨细胞的放大100倍拍摄的照片。A：分化阶段对比；B：爱尔新蓝染色结果，显示分化成软骨细胞。
图9显示了由根据本发明的人脂肪组织源多能干细胞分化而成的成骨细胞。A：TCP单独处理组；B：TCP和骨髓干细胞处理组；和C：TCP和脂肪源干细胞处理组。
图10显示了由根据本发明的人脂肪组织源多能干细胞分化而成的胰岛素释放胰腺β细胞的免疫染色结果。
具体实施方式
本发明涉及从人乳房脂肪组织分离的多能干细胞。
在本发明中，多能干细胞首先以下列方式从人乳房脂肪组织中分离并纯化。分离的人脂肪组织用PBS清洗，并精细地切割然后在添加了1型胶原酶(1mg/ml)的DMEM培养基中在37℃消化2小时。用PBS清洗后，将组织以1000rpm离心5分钟。吸去上清，用PBS清洗保留在底部的球团，然后以1000rpm离心5分钟。得到的球团通过100μm筛过滤除去残渣，接着用PBS清洗。然后，球团在DMEM培养基(10％FBS，2mM NAC，0.2mM抗坏血酸)中培养。过一夜后，用PBS将未附着的细胞洗去，剩余细胞在K-NAC培养基(角质化细胞-SFM培养基+2mMNAC+0.2mM抗坏血酸+0.09mM钙+5ng/ml rEGF+50μg/ml BPE+5μg/ml胰岛素+74ng/ml皮质醇)中培养，同时每隔两天更换一次培养基，从而得到人乳房脂肪组织源多能干细胞溶液。
检查分离的人乳房脂肪组织源多能干细胞的增殖率，结果发现，CPDL逐渐增加到16代数，表明干细胞具有高增殖率。
同时，对于干细胞的球体培养物，将5×104-1×105细胞/ml分离的人乳房脂肪组织源多能干细胞接种到含有MEBM培养基(10μM CORM-2(三羰基二氯代钌(II)二聚体)、B27、5ml抗真菌抗生素溶液(100X)，1μg/ml皮质醇、5μg/ml胰岛素，20ng/ml EGF，40ng/ml FGF和β-巯基乙醇)的6孔板的每个孔中，结果，它们从接种3天后就开始形成球体。这显示干细胞具有高增殖率并保持在未分化状态。
从上述得到的人脂肪组织源干细胞培养液中获得表达所需表面抗原的多能干细胞的方法包括，使用具有分选功能的流式细胞仪的FACS方法(Int.Immunol.，10(3)：275，1998)，使用磁珠的方法和使用抗体特异地识别多能干细胞的淘选方法(J.Immunol.，141(8)：2797，1998)。而且，用于从大量培养液中获得多能干细胞的方法包括其中在细胞表面上表达的抗体特异地识别分子(此后称为“表面抗原”)被单独使用或者结合成列(as column)使用的方法。
流式细胞仪可包括水滴电荷法和细胞捕获法。在这些方法的任何一种中，特异地识别细胞表面上的抗原的抗体被荧光标记，将与细胞表面上表达的分子结合的抗体发出的荧光强度转化成电信号，从而对抗原的表达量进行定量。还能够通过结合使用的荧光类型来分离表达多个表面抗原的细胞。在这种情况下可使用的荧光的例子包括FITC(荧光异硫氰酸酯)、PE(藻红蛋白)、APC(别藻蓝蛋白)、TR(Texas Red)、Cy3、CyChrome、Red 613、Red 670、TRI-Color、Quantum Red等。
使用流式细胞仪的FACS方法包括：其中从分离的细胞中通过例如离心并直接用抗体染色来收集上述干细胞培养液的方法；和其中细胞在合适的培养基上培养并生长然后用抗体染色的方法。细胞的染色通过将识别表面抗原的初级抗体与靶细胞样品混合并在冰上将混合物培养30分钟到1小时。当初级抗体被标记上荧光后，清洗后用流式细胞仪分离细胞。当初级抗体没有被标记上荧光时，清洗后混合与初级抗体反应的细胞和荧光标记的对初级抗体具有结合活性的第二抗体，并在冰上培养30分钟到1小时。清洗后，由初级抗体和第二抗体染色的细胞用流式细胞仪分离。
各种表面抗原可包括造血相关抗原、间叶细胞的表面抗原和对神经系统神经元特异的抗原。造血相关抗原包括CD34、CD35等，间叶细胞的表面抗原包括SH-2、SH-3等，对神经系统神经元特异的抗原包括NSE、GFAP等。识别上述表面抗原的抗体单独或结合使用允许获得所需细胞。
根据本发明的分离的多能成年干细胞使用流式细胞术分析，结果，对CD73、CD90、CD29、CD44和CD105显示阳性应答。而且，多能干细胞对所有的CD33、CD34、CD45、CD4，CD31、CD62p、CD14和HLA-DR显示阴性免疫应答。
另外发现，根据本发明的分离多能干细胞是可分化成神经细胞、星形细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞以及胰岛素释放胰腺β细胞的多能干细胞。
实施例
随后将通过实施例详细描述本发明。但是应当理解，这些实施例仅用于说明的目的，而不构成对本发明的范围的限制。
实施例1：从脂肪组织中分离多能干细胞
脂肪组织由首尔国立大学乳腺癌中心提供的妇女乳房组织中分离，用PBS清洗然后精细切割。切割的组织在添加了1型胶原酶(1mg/ml)的DMEM培养基中在37℃下消化2小时。消化的组织用PBS清洗然后以1000rpm离心5分钟，吸去上清，并用PBS清洗保留在底部的球团，然后以1000rpm离心5分钟。得到的球团经100μm筛过滤除去残渣，然后用PBS清洗。得到的细胞在DMEM培养基(10％FBS，2mM NAC，0.2mM抗坏血酸)中培养。过一夜后，用PBS洗去未附着的细胞，并在角质形成细胞-SFM培养基(含有2mM NAC，0.2mM抗坏血酸，0.09mM钙，5ng/ml rEGF，50μg/ml BPE，5μg/ml胰岛素和74ng/ml皮质醇)中培养，同时以两天为间隔更换培养基，由此分离多能干细胞。图1显示了上述分离的人脂肪组织源多能干细胞放大100倍拍摄的照片。
实施例2：脂肪组织源干细胞的增殖率检查
脂肪组织根据上述实施例1中描述的分离方法从每种不同人乳房组织样品获得。为了检查来自分离的人乳房脂肪组织的多能干细胞的增殖率，将2×105个细胞接种到T-75烧瓶中并测定CPDL(累计倍增数目水平)并表示为代数的函数。CPDL是细胞增殖率的指数表示并表示为下列方程。
CPDL＝ln(Nf/Ni)/ln2，其中Ni：初始接种细胞数；和Nf：最终细胞数。
结果，如图2的“A-1”和“A-2”中所示，根据本发明的成体干细胞(hMAD-MCS1和hMAD-MCS2)在传代16代数时显示了大约50的CPDL值。
同时，图2的“B”和“C”显示了作为代数的函数的现有技术的人脂肪组织源干细胞的CPDL值(Lin等人，Stem Cells and Development，14：92，2005；Zuk等人，Tissue Eng.，7：211，2001)。如图2所示，在代数为7和13时细胞的CPDL值分别为30-35和21。
这些结果显示根据本发明的成体干细胞具有非常高的增殖率。
实施例3：脂肪源多能干细胞的免疫学特性
在实施例1中得到的脂肪组织源多能干细胞用PBS清洗并用胰蛋白酶处理。收集处理的细胞并以1000rpm离心5分钟。除去上清然后用2％FBS和PBS的混合物清洗，然后以1000rpm离心5分钟。除去上清，将细胞悬浮于PBS中，对每种样品将1×105个细胞分散到孔板中，将抗体(R-藻红蛋白结合的鼠抗人单克隆抗体)放置到每个孔中并在冰上培养40分钟。培养后，将培养基以1000rpm离心5分钟。除去上清并用PBS清洗细胞并以1000rpm离心5分钟。再次除去上清，用PBS清洗细胞并以1000rpm离心5分钟。除去上清后，将细胞与1％的多聚甲醛混合并使用流式细胞仪分析。
表1：脂肪源干细胞的表面抗原的FACS分析
  抗原   AD-MSCs
  CD73   +
  CD90   +
  CD29   +
  CD44   +
  CD105   +
  CD33   -
  CD34   -
  CD45 -
  CD4 -
  CD31 -
  CD62p -
  CD14 -
  HLA-DR -
结果，如表1所示，根据本发明的脂肪组织源成体干细胞显示了对CD73为91％，对CD90为97％，对CD29为96％，对CD44为83％，以及对CD105为80％的阳性应答。而且，本发明的干细胞对所有CD33、CD34、CD45、CD4、CD31，CD62p、CD14和HLA-DR显示阴性免疫应答。
实施例4：脂肪组织源多能干细胞的球体形成
将实施例1中得到的5×104-1×105/ml人乳房脂肪组织源多能干细胞接种到含有10μM CORM-2，5ml抗生素溶液(100X)，1μg/ml皮质醇，5μg/ml胰岛素，20ng/ml EGF，40ng/ml FGF，B27和β-巯基乙醇的无血清MEBM培养基的6孔板的每个孔中。结果，接种后3-7天细胞开始形成球体，如图3和图4所示，甚至在接种后7-10天细胞增殖形成球体。
而且，根据本发明的干细胞在琼脂中培养。结果，如图4所示，细胞形成球体。
同时，将实施例1中得到的5×104个干细胞接种到24孔板的每个孔中并在每个代数测定球体的数目(见表2)。结果，如表2所示，细胞保持球体，表明细胞可增殖并长期保持。而且，如图5所示，Oct4阳性表达，表明细胞具有高增殖率并保持在未分化状态。
表2
  代数   球体数
  1   270
  2   260
  3   271
实施例5：脂肪组织源干细胞的免疫染色分析
将实施例4中得到的脂肪组织源干细胞球用PBS清洗3次并与含PBS的4％多聚甲醛混合30分钟。用PBS清洗3次后，将球体用含有0.1％Triton-X100的PBS渗透10分钟。用PBS清洗3次后，允许球体与10％NGS反应1小时，然后与含有初级抗体的PBS反应过夜。用PBS清洗3次后，允许球体与第二抗体在暗室中反应1小时。用PBS清洗3次后，对球体进行测定(mount)。
结果，如图5所示，根据本发明的多能干细胞球对所有可被认为是神经祖细胞的标记物的巢蛋白、可被认为是未分化细胞的标记物的Oct4和间叶细胞的标记物SH2(CD105)及SH3/4(CD73)都显示阳性应答。
实施例6：脂肪源多能干细胞分化成神经细胞和星形细胞
实施例1中得到的脂肪组织源多能干细胞在添加了1mM BME和10％FBS的DMEM培养基中预培养24小时。预培养后，为了诱导神经细胞分化，将干细胞在含有1％DMSO和100μM BHA(丁基羟基茴香醚)的培养基中培养90分钟以便诱导分化成神经细胞，接着进行免疫染色(图6)。结果，如图6所示，根据本发明的人脂肪组织源多能干细胞对神经系统中的星形细胞特异的抗原GFAP(神经胶质纤维酸性蛋白)和神经细胞特异性物质MAP2(微管相关蛋白2)都显示阳性应答。
图6中第一行的照片显示阴性对照组的结果，表示分化的细胞本身没有显示FITC和TRITC的荧光。第二行左侧的MAP2照片显示TRITC红色荧光，表明MAP2表达。通过这些阶段对比照片和融合照片发现，红色荧光是由其中表达MAP2的细胞发出的荧光。而且，第三行左侧的GFAP照片显示FITC绿色荧光，从阶段对比照片和融合照片可以看出，绿色荧光是由表达GFAP的细胞发出的荧光。这些结果表明，根据本发明的人脂肪源多能干细胞分化成神经细胞和星形细胞。
实施例7：脂肪源多能干细胞分化成神经细胞
实施例1中得到的脂肪组织源多能干细胞在含有5％FBS，1μM地塞米松，200μM抗炎吲哚酸、10μg/ml胰岛素和0.5mM IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)的α-MEM培养基中培养两周以便诱导分化成脂肪细胞然后使用油红O染色法进行分析。结果，如图7所示，观察到人脂肪组织源多能干细胞分化成脂肪细胞。
实施例8：脂肪源多能干细胞分化成软骨细胞
将实施例1中得到的107个干细胞以10μl的量接种到24孔板的每个中心。然后，将细胞在含有5％FBS，10ng/ml TFG-β1，50μM L-抗坏血酸盐-2-磷酸盐和6.25μg/ml胰岛素的α-MEM培养基中培养两周，以便诱导分化成软骨细胞。然后，多能干细胞是否分化成软骨细胞使用爱尔新蓝染色法进行分析。结果，如图8所示，人脂肪组织源多能干细胞分化成软骨细胞。
实施例9：脂肪源多能干细胞分化成成骨细胞
将实施例1中得到的107个干细胞与TCP(磷酸三钙)混合并皮下同基因移植到狗的身体中。14天后，使用H&E染色法处理并分析。结果，如图9所示，用TCP单独处理的组(A)显示炎性细胞渗透到部分周围的TCP中，用TCP和骨髓干细胞的混合物处理的组(B)显示炎性响应保持与周围TCP未接触。但是，在用TCP和脂肪源干细胞的混合物处理的组(C)中，绝大多数TCP被吸收，并观察到典型的初始骨生成，还观察到成骨细胞状细胞、多核破骨细胞状细胞和骨基质。这些结果表明，人脂肪组织源多能干细胞分化成成骨细胞。
实施例10：脂肪源多能干细胞分化成胰岛素释放胰腺β细胞
实施例1中得到的脂肪组织源多能干细胞在含有10mmol/L尼克酰胺、1mmol/L β-巯基乙醇和10％FBS的低葡萄糖DMEM培养基中培养24小时，然后在含有10mmol/L尼克酰胺、1mmol/L β-巯基乙醇和5％FBS的高葡萄糖DMEM培养基中培养5天，以便诱导分化成胰岛素释放胰腺β细胞。诱导分化后，通过免疫染色法分析细胞，结果在图10中显示。如图10所示，细胞中存在C-肽和胰岛素。如同本领域已知的那样，被分成胰岛素和C-肽的胰岛素原在胰岛素释放胰腺β细胞中产生。因此，上述结果表明，根据本发明的脂肪组织源干细胞分化成了胰岛素释放胰腺β细胞。
虽然已经参照特定特征对本发明进行了详细描述，对本领域技术人员来说显而易见的是，该描述仅仅是优选实施方式，而不是对本发明的范围的限制。因此，本发明的实际范围将由所附的权利要求书及其等同物限定。
工业实用性
如上面详细描述的那样，虽然根据本发明的多能干细胞是成体干细胞，它们可分化成比现有脂肪源成体干细胞分化的那些细胞更多种类的细胞。特别地，本发明的成人多能干细胞具有分化成神经细胞、星形细胞、脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞或者胰岛素释放胰腺β细胞的能力，并有效地治疗骨质疏松症、骨关节炎、神经疾病、糖尿病等，还用于形成乳房组织。而且，本发明的成体干细胞在无血清培养基中形成球体，使它们可被高纯度地分离，长时间保持未分化状态并具有高增殖率。因此，本发明的成体干细胞作为细胞治疗剂是有用的。

Claims (2)

1.一种生产成体干细胞的方法，包括在含有N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)的培养基中培养人脂肪组织源球团，然后收集培养的细胞，其特征在于：在含有CORM-2的培养基中培养成体干细胞以便形成球体，所述成体干细胞，
(a)对所有CD73、CD90、CD29、CD44和CD105产生阳性免疫应答，并对所有CD33、CD34、CD45、CD4、CD31、CD62p、CD14和HLA-DR产生阴性免疫应答；
(b)附着于塑料生长，显示梭状形态学特征，并在含有CORM-2的培养基中形成球体，从而能够长时间保持在未分化状态；和
(c)具有分化成神经细胞、星形细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞以及胰岛素释放胰腺β细胞的能力。
2.根据权利要求1所述的产生成体干细胞的方法，其特征在于，含有NAC的培养基另外含有抗坏血酸、钙、rEGF、BPE、胰岛素和皮质醇。
CN2005800519455A 2005-11-16 2005-12-20 来自人类脂肪组织的多能干细胞和包含该多能干细胞的细胞治疗剂 Expired - Fee Related CN101300343B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020050109502A KR100679642B1 (ko) 2005-11-16 2005-11-16 인간 지방조직 유래 다분화능 줄기세포 및 이를 함유하는세포치료제
KR1020050109502 2005-11-16
PCT/KR2005/004383 WO2007058404A1 (en) 2005-11-16 2005-12-20 Multipotent stem cells derived from human adipose tissue and cellular therapeutic agents comprising the same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101300343A CN101300343A (zh) 2008-11-05
CN101300343B true CN101300343B (zh) 2011-06-22

Family

ID=38041072

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2005800519455A Expired - Fee Related CN101300343B (zh) 2005-11-16 2005-12-20 来自人类脂肪组织的多能干细胞和包含该多能干细胞的细胞治疗剂

Country Status (12)

Country Link
US (2) US7807461B2 (zh)
EP (1) EP1948786B1 (zh)
JP (1) JP4862046B2 (zh)
KR (1) KR100679642B1 (zh)
CN (1) CN101300343B (zh)
AT (1) ATE510007T1 (zh)
AU (1) AU2005338370B2 (zh)
BR (1) BRPI0520725A2 (zh)
DE (1) DE112005003001B4 (zh)
GB (1) GB2434801B (zh)
RU (1) RU2409665C2 (zh)
WO (1) WO2007058404A1 (zh)

Families Citing this family (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100679642B1 (ko) * 2005-11-16 2007-02-06 주식회사 알앤엘바이오 인간 지방조직 유래 다분화능 줄기세포 및 이를 함유하는세포치료제
US8592209B2 (en) * 2006-01-30 2013-11-26 University Of Virginia Patent Foundation Methods of preparing and characterizing mesenchymal stem cell aggregates and uses thereof
KR100871984B1 (ko) 2006-04-12 2008-12-05 주식회사 알앤엘바이오 태반 조직 유래 다능성 줄기세포 및 이를 함유하는세포치료제
KR100788632B1 (ko) * 2006-06-15 2007-12-26 주식회사 알앤엘바이오 인간 지방조직 유래 다분화능 줄기세포, 섬유아세포 및지방 또는 지방세포를 함유한 피부미용 또는 성형용조성물의 제조방법
KR100818214B1 (ko) 2006-09-29 2008-04-01 재단법인서울대학교산학협력재단 인간 태반조직의 양막 또는 탈락막 유래 다분화능 줄기세포및 그 제조방법
KR100818216B1 (ko) 2006-10-11 2008-04-01 재단법인서울대학교산학협력재단 Ｃｒｉｐｔｏ－１ 및 Ｏｃｔ４를 동시 발현하는 인간 지방조직 유래 다분화능 줄기세포 또는 종양 줄기세포 및 그 확인방법
EP2155860B1 (en) 2007-05-03 2014-08-27 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Multipotent stem cells and uses thereof
US8574567B2 (en) 2007-05-03 2013-11-05 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Multipotent stem cells and uses thereof
KR100895324B1 (ko) * 2007-05-08 2009-05-07 주식회사 휴림바이오셀 성체 줄기세포를 이용한 인슐린 분비세포로의 분화유도방법
WO2009009020A1 (en) 2007-07-12 2009-01-15 Discgenics Human disc tissue
WO2009069991A2 (en) 2007-11-30 2009-06-04 Rnl Bio Co., Ltd. Cellular therapeutic agent for incontinence of urine comprising stem cells originated from decidua or adipose
CA2712496C (en) * 2008-01-18 2021-01-12 Wei-Shou Hu Stem cell aggregates and methods for making and using
GB0805670D0 (en) * 2008-03-28 2008-04-30 Smith & Nephew Increasing the plasticity of stem cells
KR101175175B1 (ko) * 2008-07-28 2012-08-20 서울대학교병원 인간 줄기세포에서 고활성 줄기세포를 분리하는 방법 및상기 방법에 의해 분리된 고활성 줄기 세포
US20100098739A1 (en) * 2008-10-20 2010-04-22 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for modular soft tissue repair
US20100112696A1 (en) * 2008-11-03 2010-05-06 Baxter International Inc. Apparatus And Methods For Processing Tissue To Release Cells
US8309343B2 (en) 2008-12-01 2012-11-13 Baxter International Inc. Apparatus and method for processing biological material
CN102317442B (zh) * 2008-12-17 2014-08-13 斯克里普斯研究所 干细胞的产生和保持
EP2421959A1 (en) * 2009-04-23 2012-02-29 Cytori Therapeutics, Inc. Use adipose tissue-derived regenerative cells in the modulation of inflammation in the pancreas and in the kidney
KR20110095218A (ko) * 2010-02-18 2011-08-24 주식회사 강스템홀딩스 ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ＧＳＫ３ 경로를 통해 성체줄기세포의 증식, 다분화능 및 재프로그래밍을 촉진하는 ＣＤ４９ｆ
US10130736B1 (en) 2010-05-14 2018-11-20 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same
US8883210B1 (en) 2010-05-14 2014-11-11 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same
US9352003B1 (en) 2010-05-14 2016-05-31 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same
KR101211913B1 (ko) * 2010-07-16 2012-12-13 주식회사 알앤엘바이오 양막유래 중간엽 줄기세포 배양을 위한 배지조성물 및 이를 이용한 양막유래 중간엽 줄기세포의 배양방법
AU2011293440B2 (en) 2010-08-24 2016-05-05 Katholieke Universiteit Leuven Non-static suspension culture of cell aggregates
US8440440B2 (en) 2010-12-27 2013-05-14 Intellicell Biosciences Inc. Ultrasonic cavitation derived stromal or mesenchymal vascular extracts and cells derived therefrom obtained from adipose tissue and use thereof
US8834928B1 (en) 2011-05-16 2014-09-16 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissugenic implants, and methods of fabricating and using same
AU2012279995C1 (en) 2011-07-06 2019-10-24 Cell Therapy Limited Progenitor cells of mesodermal lineage
KR101138091B1 (ko) * 2011-08-31 2012-04-24 세원셀론텍(주) 중간엽 줄기세포 기본 배양 배지 조성방법, 중간엽 줄기세포 기본 배양 배지 및 이를 이용하여 배양분화된 세포치료제
US20140302480A1 (en) 2011-11-09 2014-10-09 The General Hospital Corporation Composite tissue graft and materials and methods for its production and use
WO2013081436A1 (ko) * 2011-12-01 2013-06-06 주식회사 알앤엘바이오 줄기세포를 젊게 만들기 위한 배지 조성물
WO2013082106A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 The General Hospital Corporation Differentiation into brown adipocytes
EP2818173B1 (en) * 2012-02-24 2021-09-22 Saeki, Masanori Cell preparation including fat cell
EP2840133B1 (en) * 2012-04-18 2017-06-14 Jeong Chan Ra Method for manufacturing stem cell having appropriate size for intravascular administration
CN102732480A (zh) * 2012-06-11 2012-10-17 中山大学 N-乙酰半胱氨酸对中央记忆性t细胞的绝对数量在体外扩增上的应用
KR101523040B1 (ko) * 2012-06-26 2015-05-26 라정찬 고농도의 줄기세포 제조방법
CN103845362A (zh) * 2012-12-05 2014-06-11 上海坤爱生物科技有限公司 一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法
KR101583569B1 (ko) * 2013-05-15 2016-01-08 라정찬 정맥 투여용 줄기세포 조성물
EP2999780B1 (en) 2013-05-22 2019-10-09 The Regents of the University of California Pluripotent human adipose adult stem cells: isolation, characterization and clinical implications
AU2014296259B2 (en) 2013-07-30 2017-04-27 Musculoskeletal Transplant Foundation Acellular soft tissue-derived matrices and methods for preparing same
KR101669038B1 (ko) * 2014-01-08 2016-10-26 사회복지법인 삼성생명공익재단 영양막 기저층으로부터 유래된 줄기세포 및 이를 포함하는 세포치료제
KR101669009B1 (ko) * 2014-01-08 2016-10-26 사회복지법인 삼성생명공익재단 순수 영양막층으로부터 유래된 줄기세포 및 이를 포함하는 세포치료제
CN110064527B (zh) * 2014-01-31 2021-12-14 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 脂肪组织离心装置和使用方法
KR101496804B1 (ko) * 2014-06-12 2015-03-02 서울대학교산학협력단 인슐린 생산세포로의 분화 및 이용방법
TWI707040B (zh) * 2014-09-11 2020-10-11 台灣粒線體應用技術股份有限公司 一種用於治療退化性神經疾病的細胞、含有該細胞的醫藥組合物及其應用
CA2968048A1 (en) 2014-10-29 2016-05-06 R Bio Co., Ltd. Medium composition for culturing stem cells
CN104673745A (zh) * 2015-02-05 2015-06-03 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种猪脂肪干细胞的分离培养方法
CA2986702C (en) 2015-05-21 2023-04-04 David Wang Modified demineralized cortical bone fibers
US10912864B2 (en) 2015-07-24 2021-02-09 Musculoskeletal Transplant Foundation Acellular soft tissue-derived matrices and methods for preparing same
US11052175B2 (en) 2015-08-19 2021-07-06 Musculoskeletal Transplant Foundation Cartilage-derived implants and methods of making and using same
WO2017094260A1 (ja) * 2015-12-01 2017-06-08 学校法人 慶應義塾 脊椎動物の脂肪組織由来間葉系細胞株の製造方法
US10959425B2 (en) 2016-04-29 2021-03-30 Hope Biosciences, Llc Method of banking stem cells
US10894947B1 (en) 2016-04-29 2021-01-19 Hope Biosciences, Llc Method for generating protein rich conditioned medium
US11111480B2 (en) 2016-04-29 2021-09-07 Hope Biosctences, Llc Culture media for multipotent stem cells
US10988731B2 (en) 2016-04-29 2021-04-27 Hope Biosciences, Llc Formulation for storage, transportation, and delivery of protein rich conditioned medium
US10513689B2 (en) 2016-04-29 2019-12-24 Hope Biosciences, Llc Culture media for multipotent stem cells
CN106047804B (zh) * 2016-05-30 2019-11-12 浙江大学 一种脂肪干细胞的纯化方法及干细胞在成骨诱导及成软骨诱导上的应用
RU2653779C1 (ru) * 2016-12-26 2018-05-14 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) Способ стимуляции сперматогенеза
RU2652902C1 (ru) * 2016-12-26 2018-05-03 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) Способ стимуляции сперматогенеза
CN108690828A (zh) * 2017-04-12 2018-10-23 上海聚仁生物科技有限公司 一种脂肪多能细胞的分离及其培养方法
USD848022S1 (en) 2017-07-14 2019-05-07 Hope Biosciences, Llc Container for storing biological material
USD875967S1 (en) 2017-07-14 2020-02-18 Hope Biosciences, Llc Container for storing biological material
WO2019022451A2 (ko) 2017-07-24 2019-01-31 한양대학교 에리카산학협력단 줄기세포로부터 추출된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 조성물
KR20190011213A (ko) 2017-07-24 2019-02-01 한양대학교 에리카산학협력단 줄기세포로부터 추출된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 조성물
EP3817753A1 (en) * 2018-07-03 2021-05-12 Universidad del País Vasco - Euskal Herriko Unibertsitatea Cellular aggregates for use in vascularisation therapy
CN111218423A (zh) * 2018-11-26 2020-06-02 上海泉眼生物科技有限公司 脂肪干细胞来源的神经元前体细胞及其制备方法和应用
EP3923718A1 (en) * 2019-02-13 2021-12-22 TiGenix, S.A.U. Cryopreservation of stem cells
TWI832070B (zh) * 2021-07-15 2024-02-11 國璽幹細胞應用技術股份有限公司 幹細胞製劑用於治療關節炎的用途及用於製備幹細胞製劑的方法
CN116076484A (zh) * 2022-11-30 2023-05-09 武汉大学 一种修复肾脏损伤的低温携氧机械灌注液及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1352696A (zh) * 1999-03-10 2002-06-05 匹兹堡大学联邦制高等教育 脂肪来源的干细胞和网格

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6777231B1 (en) 1999-03-10 2004-08-17 The Regents Of The University Of California Adipose-derived stem cells and lattices
PT1261694E (pt) 2000-02-26 2008-04-03 Artecel Inc Células estaminais pluripotentes produzidas a partir de células estromais derivadas de tecido adiposo e suas utilizações.
FR2815042B1 (fr) 2000-10-06 2005-01-07 Haguenauer Odile Cohen Utilisation d'une composition a activite antioxydante pour le conditionnement de cellules souches
KR20040094910A (ko) * 2002-04-03 2004-11-10 아르테셀 사이언스, 인크. 개선된 지방세포 분화된 지방 유래 성체 줄기세포 및 이의용도
US20050260748A1 (en) * 2004-02-27 2005-11-24 Michigan State University Adult stem cells and uses thereof
JP2005287479A (ja) * 2004-03-31 2005-10-20 Kazuhisa Maeda 組織幹細胞採取方法及びそれを利用した装置
KR100679642B1 (ko) * 2005-11-16 2007-02-06 주식회사 알앤엘바이오 인간 지방조직 유래 다분화능 줄기세포 및 이를 함유하는세포치료제

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1352696A (zh) * 1999-03-10 2002-06-05 匹兹堡大学联邦制高等教育 脂肪来源的干细胞和网格

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Karsten Hemmrich et al..Implantation of preadipocyte-loaded hyaluronic acid-based scaffolds into nude mice to evaluate potential for soft tissue engineering.Biomaterials.2005,267025-7037. *
Kristine M.Safford et al..Neurogenic differentiation of murine and human adipose-derived stromal cells.Biochemical and Biophysical Research Communications.2002,294371-379. *
Rei Ogawa et al..Osteogenic and chondrogenic differentiation by adipose-derived stem cells harvested from GFP transgenic mice.Biochemical and Biophysical Research Communications.2004,313871-877. *
TSAI-MING LIN et al..Accelerated Growth and Prolonged Lifespan of Adipose Tissue-derived Human Mesenchymal Stem Cells in a Medium Using Reduced Calcium and Antioxidants.STEM CELLS AND DEVELOPMENT.2005,14(1),92-102. *

Also Published As

Publication number Publication date
EP1948786B1 (en) 2011-05-18
DE112005003001T5 (de) 2007-10-18
EP1948786A1 (en) 2008-07-30
WO2007058404A1 (en) 2007-05-24
JP2009527221A (ja) 2009-07-30
ATE510007T1 (de) 2011-06-15
EP1948786A4 (en) 2008-11-26
RU2409665C2 (ru) 2011-01-20
US20110171726A1 (en) 2011-07-14
BRPI0520725A2 (pt) 2010-08-17
GB2434801A (en) 2007-08-08
US20070110729A1 (en) 2007-05-17
KR100679642B1 (ko) 2007-02-06
GB0706021D0 (en) 2007-05-09
JP4862046B2 (ja) 2012-01-25
CN101300343A (zh) 2008-11-05
DE112005003001B4 (de) 2009-03-19
US7807461B2 (en) 2010-10-05
GB2434801B (en) 2011-04-27
AU2005338370A1 (en) 2007-05-24
AU2005338370B2 (en) 2011-06-09
RU2008116175A (ru) 2009-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101300343B (zh) 来自人类脂肪组织的多能干细胞和包含该多能干细胞的细胞治疗剂
US10669526B2 (en) Stem cells derived from pure chorionic trophoblast layer and cell therapy comprising same
EP2374871B1 (en) Pluripotent stem cells, method for preparation thereof and uses thereof
US20070243172A1 (en) Multipotent stem cells derived from placenta tissue and cellular therapeutic agents comprising the same
KR100871984B1 (ko) 태반 조직 유래 다능성 줄기세포 및 이를 함유하는세포치료제
CN101331225B (zh) 来自脐带血的具有Oct4表达能力的多能成体干细胞及其制备方法
US20060030039A1 (en) Placental stem cell and methods thereof
JP6545690B2 (ja) 栄養膜基底層から由来した幹細胞及びそれを含む細胞治療剤
US20090162326A1 (en) Method for isolating stem cells and stem cells derived from a pad-like tissue of teeth
CN104946590A (zh) 成人骨髓中Muse细胞诱导为神经前体细胞的方法
EP2615166B1 (en) Equine amniotic fluid derived multipotent stem cells and a production method therefor
Qin et al. Chromosomal instability of murine adipose tissue-derived mesenchymal stem cells in long-term culture and development of cloned embryos
KR20140016841A (ko) 태아연골조직유래 줄기세포원 및 이를 포함하는 세포치료제
KR100818216B1 (ko) Ｃｒｉｐｔｏ－１ 및 Ｏｃｔ４를 동시 발현하는 인간 지방조직 유래 다분화능 줄기세포 또는 종양 줄기세포 및 그 확인방법
TWI307717B (en) Placental stem cell and methods thereof
Kuehn Characterization of Embryonic Stem Cell-Differentiated Cells as Mesenchymal Stem Cells
KR101005282B1 (ko) 인간 견봉하 점액낭 유래 성체 줄기세포 및 이를 함유하는세포치료제
KR20090008652A (ko) 옥트(Ｏｃｔ)-4 발현능을 가지는 피부 유래 다분화능 성체줄기세포 및 그의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20110622

Termination date: 20121220