CN101285803A - 降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法 - Google Patents
降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101285803A CN101285803A CNA2008100850689A CN200810085068A CN101285803A CN 101285803 A CN101285803 A CN 101285803A CN A2008100850689 A CNA2008100850689 A CN A2008100850689A CN 200810085068 A CN200810085068 A CN 200810085068A CN 101285803 A CN101285803 A CN 101285803A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- hypoglycemic
- detection method
- qualitative analysis
- low polarity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了检测降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法。本发明所提供的检测降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法，包括如下步骤1)高效液相色谱条件：使用醋酸胺－三乙胺－乙腈流动相体系，一定规格的C18色谱柱，紫外检测波长，流速为1.0ml/min。2)分析结果：格列本脲、格列吡嗪、格列齐特、格列美脲、格列喹酮、瑞格列奈、那格列奈、罗格列酮、盐酸吡格列酮可实现完全分离。3)结果判断：当降糖中药类产品中色谱峰的保留时间和2)中降糖化药的保留时间一致且有明显吸收时，说明待测样品中含有该种降糖化药。本发明具有快速、简便、灵敏度高、专属性强、覆盖面广等优点。
Description
技术领域
本发明提供了一种降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法，属于药物质量检测体系。
背景技术
糖尿病已成为当前世界性卫生问题，我国糖尿病患病率也逐年增加，新增的患者主要为2型糖尿病，口服降糖药在这类患者的治疗中占有重要的地位。近年来，临床常用的降糖药物有双胍类和α-葡萄糖苷酶抑制剂等，民间也出现一些中药降糖制剂，其中有些中药制剂擅自添加西药成分，随意夸大疗效，有的病人误认为这些民间中药制剂是纯中药制剂，副作用小，可以大量服用，临床出现服用这些中药降糖药中毒的病人。因此，有必要建立灵敏、可靠的分析方法对中药降糖制剂中非法掺入的降糖药进行鉴定。
降糖化学药物一般可以分为磺酰脲类药物、双胍类药物、α-糖苷酶抑制剂、噻唑烷二酮类药物、非磺酰脲类的胰岛素促进分泌剂等几大类，其中磺酰脲类药物、非磺酰脲类的胰岛素促进分泌剂和噻唑烷二酮类药物有较低的水溶性，极性较低，为低极性降糖化学药物，与其它几大类的极性有明显差异。磺酰脲类药物的典型代表为格列本脲、格列吡嗪、格列齐特、格列美脲和格列喹酮；非磺酰脲类的胰岛素促进分泌剂的典型代表为瑞格列奈、那格列奈；噻唑烷二酮类药物的典型代表为罗格列酮、盐酸吡格列酮。
目前，已有采用高效液相色谱技术检测降糖中药类产品中掺杂的降糖化学药物，如申请号为200610016419.1的中国专利，用高效液相色谱方法测定盐酸甲基丙炔苄胺的含量，色谱条件与系统适用性试验为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾(10％磷酸调pH＝3)15∶85为流动相；检测波长为217nm；柱温40℃，理论塔板数按盐酸甲基丙炔苄胺锋计算，应不低于5000。但是该专利方法适用范围狭窄，仅能检测盐酸甲基丙炔苄胺一种降糖化学药物。
《6种口服降糖药的液相色谱-质谱分析》(分析测试学报，第19卷第6期，2000年11月，Page 5-8)一文中采用以下高效液相色谱条件对二甲双胍、盐酸苯乙双胍进行检测：流动相为体积比为65∶35的甲醇-5mmol/L醋酸铵缓冲液(pH3.5)，流速0.5ml/min；柱温为室温；进样量为20μL；
《RP-HPLC检测中药保健品中的西药降糖成分》(中国药学杂志第40卷第4期，Page 316-317)一文中采用RP-HPLC法对双胍类药物进行检测；色谱条件为：C18色谱柱(伊立特4.6mm×250mm，5μm；流动相：甲醇-离子对试液(庚烷磺酸钠0.5056g，加三乙胺1.4mL，加水至1000mL，用磷酸调节pH值至3.5±0.05)(30∶70)；流速：1.0mL·min-1；进样量为：10μL，40μg·mL-1，二极管阵列检测器及UV检测波长233nm；柱温为室温；理论板数按两个对照品峰计算应均不低于2000；
《反相液相色谱法同时测定六种降糖药西药成分》(现代科学仪器2006，6，Page89-91)一文中采用反相液相色谱法同时测定降糖样品中的盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、格列吡嗪、格列齐特、格列本脲、格列美脲等六种降血糖西药成分。色谱柱为Agilent C18柱，流动相为乙腈-0.02％磷酸溶液，梯度洗脱，波长229nm，流速1.0mL/min。17分钟可实现六组分的完全分离，各组分在一定范围内有良好的线性关系；
《液相色谱-串联四极杆质谱联用法测定中药降糖制剂中非法掺入苯乙双胍和格列齐特的研究》(药物分析杂志200525，Page 1453-1455)提供了一种检测非法掺入的苯乙双胍和格列奇特的专属性方法，HPLC条件为：色谱柱：ODS C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-醋酸盐缓冲液(pH4.2)(50∶50)；流速：1.0mL min-1；柱温30℃；进样量：20μL；检测波长：240nm；
《液相色谱-质谱联用法测定中药制剂中双胍类化学药物》(药物鉴定第16卷第17期，Page 15-16)用液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用法测定纯中药降糖制剂中非法掺入的双胍类化学药物，色谱条件为：色谱柱：Agelent C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：0.02mol/L醋酸铵溶液(将醋酸pH调至3.5)-甲醇(70∶30)；流速0.3ml/min；柱温30℃；进样量：10μL；检测波长：235nm；
《反相高效液相色谱法-二极管阵列检测器测定降糖中药制剂中的化学药品》(中国药师，2005年第8卷第10期，Page 827-829)应用反相高效液相色谱法一二极管阵列检测(RP-HPLC——DAD)测定中药降糖制剂中可能存在的3种化学药品-苯乙双胍、阿卡波糖、格列本脲，色谱条件为：Agilent ZORB-AX ODS C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：醋酸盐缓冲液(10mmol/L醋酸铵，20mmol/L三乙胺，用醋酸调节pH5.5)与乙腈，梯度洗脱，流速：0.6mL min-1；检测波长：230nm。但是该工艺需要梯度洗脱，略显复杂，而且分离时间较长，不利于快速鉴定。
但是上述方法仅能检测降糖化学药物中的一类或两类，检测药物的品种参差不齐，没有根据药物本身的性质进行系统分类研究。
有鉴于此，本发明从降糖化学药物的极性高低着手，针对磺酰脲类药物、非磺酰脲类的胰岛素促进分泌剂和噻唑烷二酮类药物极性低的特点，提出了一种降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法，格列本脲、格列吡嗪、格列齐特、格列美脲、格列喹酮、瑞格列奈、那格列奈、罗格列酮、盐酸吡格列酮可实现完全分离，具有快速、简便、灵敏度高、专属性强、覆盖面广等优点。
发明内容
本发明的目的在于提供降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法。
简单的说，本发明提供的降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法，包括：
(1)方法：高效液相色谱
(2)流动相：醋酸铵-三乙胺-乙腈流动相体系，由A和B组成；A：为0.0lmol/L醋酸铵和0.02mol/L三乙胺的混合溶液，并用醋酸调pH到5.5，B为乙腈；A∶B的体积比为61∶39；流速为0.8-1.2ml/min；
(3)色谱柱：色谱柱为C18色谱柱；柱温20-45℃；。
(4)紫外检测波长：紫外检测波长为210nm。
(5)将多种低极性降糖化学药物混合，制成对照品溶液，然后进行色谱分析，得到各种低极性降糖化学药物的保留时间；
(6)将待分析的降糖中药类产品制成供试品溶液，然后进行色谱分析；
当降糖中药类产品中色谱峰的保留时间和所述低极性降糖化学药物的保留时间一致时，且有明显吸收时，说明待测样品中含有该种降糖化学药物；否则则无。
其中，所述的流动相流速优选为1.0ml/min，所述的色谱柱柱温优选为30℃，色谱柱规格为5μm，4.6mm×150mm。
所述的低极性降糖化学药物为格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮、瑞格列奈和格列喹酮。
所述的对照品溶液和供试品溶液溶剂为甲醇。
所述对照品溶液含格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮、瑞格列奈和格列喹酮的一种或多种，优选含全部九种，其中，格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮浓度为20μg/ml，瑞格列奈、格列喹酮的浓度为30μg/ml。
所述供试品溶液制备过程为：胶囊和片剂均取5粒或5片，胶囊去掉胶囊壳，大蜜丸取半粒，研细或切成小块，将药品粉末或小块转入25ml容量瓶中，加入20ml甲醇，超声处理15分钟，冷至室温，加甲醇定容，摇匀，过滤，滤液过0.45μm滤膜，即得供试品溶液。
色谱分析时进样量为20μl。
本发明的详细描述如下：
鉴于目前检测降糖中药类产品中非法掺入降糖化学药物的方法复杂，分离时间较长，不利于快速检测等缺点，申请人经过长期实践，从降糖化学药物的极性高低着手，对色谱柱和流动相等条件进行了改进，提供了一种快速、简便、灵敏度高的检测降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法。
本发明采用高效液相色谱法作为检测降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法，流动相为醋酸铵-三乙胺-乙腈流动相体系，A：为0.01mol/L醋酸铵和0.02mol/L三乙胺的混合溶液，并用醋酸调pH到5.5，B为乙腈；A∶B的体积比为61∶39；流速为0.8-1.2ml/min；优选1.0ml/min。色谱柱采用C18色谱柱，柱温20-45℃，优选30℃。可根据实际需要选择C18色谱柱的规格，如粒径5μm，4.6mm×150mm。紫外检测波长为210nm。进样量为20μl。
操作时，首先需要将各种低极性降糖化学药物混合，以得到对照品溶液，然后进行色谱分析，得到各种低极性降糖化学药物的保留时间；所谓的低极性降糖化学药物，这里主要是指格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮、瑞格列奈和格列喹酮。为了方便一次性的检测出降糖中药类产品中非法掺入的所有低极性降糖化学药物，也为了保持实验条件的一致性，避免其它因素对实验结果的影响，通常将所有低极性降糖化学药物混合，以得到对照品溶液，对照品溶液溶剂为甲醇。如将上述糖化学药物溶解在甲醇中，格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮浓度为20μg/ml，瑞格列奈、格列喹酮的浓度为30μg/ml。当然也可根据实际情况选择低极性降糖化学药物中的一种或多种。将对照品溶液进行色谱分析，得到色谱图，得到各种低极性降糖化学药物的保留时间。保留时间视所用仪器不同会略有差异，如表1所示，但只要对照品溶液和供试品溶液色谱条件完全一致，并不会影响最终结果的灵敏度。
表1低极性混合样品由不同高效液相色谱仪分析的保留时间
然后将待分析的降糖中药类产品制成供试品溶液，以供色谱分析。供试品溶液的溶剂同样为甲醇，其制备过程为：囊和片剂均取5粒或5片，胶囊去掉胶囊壳，大蜜丸取半粒，研细或切成小块，将药品粉末或小块转入25ml容量瓶中，加入20ml甲醇，超声处理15分钟，冷至室温，加甲醇定容，摇匀，过滤，滤液过0.45μm滤膜，即得供试品溶液。
比对对照品溶液和供试品溶液的色谱图，当当降糖中药类产品色谱峰的保留时间和低极性降糖化学药物的保留时间一致时，而且有明显的吸收，说明待测样品中含有该种降糖化药；否则则无。
本发明降糖化学药物的定性分析检测方法，可检测出降糖中药类产品中非法掺入的低极性降糖化学药物，酰脲类药物、非磺酰脲类的胰岛素促进分泌剂和噻唑烷二酮类药物低极性药物鉴定灵敏度高；格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮、瑞格列奈和格列喹酮可实现完全分离，具有快速、简便、灵敏度高、专属性强、覆盖面广等优点。
附图说明
图1低极性降糖化药对照品溶液分析色谱图
1、格列吡嗪 2、那格列奈 3、格列齐特
4、罗格列酮 5、盐酸吡格列酮 6、格列本脲
7、格列美脲 8、瑞格列奈 9、格列喹酮
图2低极性降糖化学药物的标准曲线
图2-1格列本脲溶液标准曲线
图2-2格列喹酮溶液标准曲线
图2-3瑞格列奈溶液标准曲线
图2-4格列美脲溶液标准曲线
图2-5罗格列酮溶液标准曲线
图2-6盐酸吡格列酮溶液标准曲线
图2-7格列齐特溶液标准曲线
图2-8格列吡嗪溶液标准曲线
图2-9那格列奈溶液标准曲线
具体实施方式
实施例1
1、高效液相色谱条件
流动相为醋酸铵-三乙胺-乙腈流动相体系，由A和B组成；A：为0.01mol/L醋酸铵和0.02mol/L三乙胺的混合溶液，并用醋酸调pH到5.5，B为乙腈；A∶B的体积比为61∶39；流速为0.8-1.2ml/min；流动相的流速为1.0ml/min。色谱柱采用C18色谱柱，柱温30℃，规格为5μm，4.6mm×150mm。紫外检测波长为210nm。进样量为20μl。
2.对照品溶液的分析。
将低极性降糖药物混合在一起，格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮浓度为20μg/ml，瑞格列奈、格列喹酮的浓度为30μg/ml，在优化后的低极性降糖药物分析条件下进行分析，分析对照品溶液的分析图谱见图1。
3、待分析的降糖中药类产品分析
将待分析的降糖中药类产品制成供试品甲醇溶液，制备过程为：囊和片剂均取5粒或5片，胶囊去掉胶囊壳，大蜜丸取半粒，研细或切成小块，将药品粉末或小块转入25ml容量瓶中，加入20ml甲醇，超声处理15分钟，冷至室温，加甲醇定容，摇匀，过滤，滤液过0.45μm滤膜，即得供试品溶液。然后将供试品溶液进行色谱分析。
4、比对
比对供试品溶液和对照品溶液的色谱图，当当降糖中药类产品色谱峰的保留时间和低极性降糖化学药物的保留时间一致时，而且有明显的吸收，说明待测样品中含有该种降糖化药；否则则无。
实施例2
高效液相色谱条件中流动相流速为0.8ml/min，柱温20℃，其余同实施例1。
实施例3
高效液相色谱条件中流动相流速为1.2ml/min，柱温45℃，其余同实施例1。
实施例4
高效液相色谱条件中流动相流速为0.9ml/min，柱温25℃，其余同实施例1。
实验例1
本实验例是对本发明方法灵敏度、线性范围、精密度、回收率等的考察。
1、溶液的配制
对照品溶液的制备：精密称取对照品，置于一定刻度的容量瓶中，用甲醇溶解后，用甲醇定容至刻度，配成指定浓度的贮备液。
标准系列溶液：使用微量取样器，分别向容量瓶中加入所需体积的贮备液，用甲醇稀释至刻度，配成所需的标准系列溶液。
供试品溶液的制备：胶囊和片剂均取5粒或5片，胶囊去掉胶囊壳，大蜜丸取半粒，研细或切成小块，将药品粉末或小块转入25ml容量瓶中，加入20ml甲醇，超声处理15分钟，冷至室温，加甲醇定容，摇匀，过滤，将滤液过0.45μm滤膜后，转入高效液相样品瓶中，由高效液相色谱仪进行分析。
流动相的制备：称取所需药品的质量，溶于一定量的纯水中，用指定的酸或碱调节pH(需要时)，定容，过0.45μm滤膜抽滤，超声脱气。
2、积分条件
色谱图谱分析软件为Class-VP version 6.1。积分参数width为5，slope为200，drift为1000。
3、检测限测定
使用微量取样器，按1的操作将精确制备的对照品溶液进行稀释，配成浓度不同的系列溶液，由高效液相色谱仪分别按实施例1的色谱测定条件进行测定，确定不同样品的检测限。检测限测定结果见表2。
表2降糖药物的检测限测定结果
4、标准曲线的绘制
按1的操作精确制备对照品溶液和标准系列溶液，制备的样品溶液由高效液相色谱仪在色谱测定条件下进行，测定结果按2项积分。以测试物浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。不同降糖药物的线性范围、标准曲线方程和相关系数(r2)见表3。标准曲线见图2。
表3降糖化药溶液的标准曲线方程
5、精密度测定
按1的操作精确制备对照品低、中、高三个浓度的溶液，制备的对照品溶液由高效液相色谱仪色谱测定条件下进行，测定结果按2项积分。以各样品测定的峰面积代入相应线性回归方程，计算浓度。
5.1、日内精密度
在1日内分别进样5次，计算日内精密度。处理结果见表4。
表4日内精密度(n＝5)(一)
表4日内精密度(n＝5)(二)
表4日内精密度(n＝5)(三)
5.2、日间精密度
在1日内每一样品分析1次，连续测定5天，计算日间精密度。处理结果见表5。
表5日间精密度(n＝5)(一)
表5日间精密度(n＝5)(二)
表5日间精密度(n＝5)(三)
6、回收率测定
将降糖中成药及其它中成药分别按供试品溶液的制备进行处理，在降糖药物高效液相色谱条件下进行分析，选择对测定降糖药物没有干扰的中成药作为供试品样品，供试品胶囊和片剂均取5粒或5片，胶囊去掉胶囊壳，大蜜丸取半粒，供试品被研细或切成小块，将药品粉末或小块转入25ml容量瓶中，加入一定量的甲醇，精确加入降糖对照品贮备液或对照品，配成终浓度和精密度测定浓度一致的低、中、高三个浓度的加样样品，超声处理15分钟，冷至室温，加甲醇定容，摇匀，过滤，将滤液过0.45μm滤膜后，转入高效液相样品瓶中，由高效液相色谱仪进行分析。每份样品测定1次，测定结果按2积分条件积分，将所测定的峰面积代入线性回归方程，通过计算浓度，考察回收率。测定结果见表6。除个别化药在低浓度时加样回收率偏低和相对偏差较大外，不同的降糖化药在不同的样品中加样回收率均保持了一个较高的水平，而且在不同中成药中的回收率的相对偏差也较小。
表6(一)格列本脲回收率
表6(二)格列喹酮回收率
表6(三)格列奇特回收率
表6(四)瑞格列奈回收率
表6(五)格列美脲回收率
表6(六)罗格列酮回收率
表6(七)盐酸吡格列酮回收率
表6(八)格列吡嗪回收率
表6(九)那格列奈回收率
7、实际样品的分析
将市场上购买到的降糖中成药和保健品及部分非降糖中成药按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，将对照品溶液按对照品溶液的制备方法制成混合溶液，低极性降糖化药对照品混合溶液的浓度如下：格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮浓度为20μg/ml，瑞格列奈、格列喹酮的浓度为30μg/ml。将供试品溶液在低极性降糖药物分析条件下进行分析，每分析5个低极性供试品溶液分析一次低极性对照品混合溶液，分析结束后，比较供试品溶液和对照品溶液的色谱峰的保留时间，色谱峰保留时间一致，而且有明显的吸收，就可以基本判定该供试品中含有相应的对照品化学添加物。分析结果见表7。
表7实际样品分析结果
8、实际样品的比对分析
8.1不同仪器的比对分析
使用不同的高效液相色谱仪，按7的处理条件处理后按低极性分析条件分析实际样品，分析结果见表8。
表8不同仪器对实际样品的分析结果
8.2、不同药检所对实际样品的比对分析
将样品标号以盲样的形式分发给不同的药检所，不同的药检所使用高效液相色谱仪，按7的处理条件处理后按低极性分析条件分析实际样品，分析结果见表9。
表十二不同药检所对实际样品的分析结果
| C药检所 | D药检所X | F药检所 | H药检所 | X药检所 | |
| 样品1 | |||||
| 样品2 | |||||
| 样品3 | |||||
| 样品4 | |||||
| 样品5 | |||||
| 样品6 |
| 样品7 | |||||
| 样品8 | |||||
| 样品9 | |||||
| 样品10 | |||||
| 样品11 | |||||
| 样品12 | |||||
| 样品13 | |||||
| 样品14 | |||||
| 样品15 | |||||
| 样品16 | |||||
| 样品17 | |||||
| 样品18 | |||||
| 样品19 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 |
| 样品20 | |||||
| 样品21 | |||||
| 样品22 | |||||
| 样品23 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 |
| 样品24 | |||||
| 样品25 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 |
| 样品26 | |||||
| 样品27 | |||||
| 样品28 | |||||
| 样品29 | |||||
| 样品30 | |||||
| 样品31 | |||||
| 样品32 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 |
| 样品33 | |||||
| 样品34 | |||||
| 样品35 | |||||
| 样品36 | |||||
| 样品37 | |||||
| 样品38 | |||||
| 样品39 | |||||
| 样品40 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 |
| 样品41 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 | 格列本脲 |
| 样品42 | 罗格列酮 | 罗格列酮 | 罗格列酮 | 罗格列酮 | 罗格列酮 |
| 样品43 | |||||
| 样品44 | |||||
| 样品45 | 格列齐特 | 格列齐特 | 格列齐特 | 格列齐特 | 格列齐特 |
| 样品46 | |||||
| 样品47 | 格列美脲 | 格列美脲 | 格列美脲 | 格列美脲 | 格列美脲 |
| 样品48 | |||||
| 样品49 | |||||
| 样品50 | 瑞格列奈 | 瑞格列奈 | 瑞格列奈 | 瑞格列奈 | 瑞格列奈 |
9、分析结果的验证
使用液相色谱-质谱联用法(HPLC/MS)对分析结果进行测定。
9.1、液质联用条件
使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，梯度洗脱，流动相A为0.1％甲酸溶液，氨水调pH至3.5，流动相B为乙腈，梯度洗脱表见表10。
表10液-质联用液相梯度洗脱表
检测波长：230nm，流速：0.2ml/min。质谱条件：ESI源，源电压4.5KV，毛细管温度270℃，毛细管电压20V，鞘气流速50arb，正离子检测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱(MS2)，质量数范围100～1000。
对照品溶液的制备：精密称取对照品10mg，置于100ml的容量瓶中，加甲醇适量溶解后，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置于50ml的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。(每1ml中含对照品10μg)。
供试品溶液的制备：丸剂和片剂均取5粒或5片，胶囊去掉胶囊壳，大蜜丸取半粒，研细或切成小块，将药品粉末或小块转入100ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理15分钟，冷至室温，加甲醇定容，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置50ml的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取上述两种溶液各10μl注入液相色谱-质谱联用仪，进行液质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱图，通过与对照品液相色谱图保留时间、一级质谱及二级质谱图的对比，确定供试品中是否含有对照品物质。分析结果见表十四。
10、高效液相色谱分析结果的判定
将不同仪器、不同药检所的分析结果和液-质联用技术进行比较发现，无论使用何种型号的高效液相色谱仪，也不管由那个药检所进行分析，凡是液-质联用技术检出有掺入化学降糖药的样品，其它的液相分析结果都显示有该物质明显的吸收。由于液-质联用技术在检测掺杂使假方面是公认的最有说服力的技术，也是国家承认的分析检测结果，通过和液-质联用技术比较，可验证所建立的方法的准确性。通过比较发现，如果降糖中成药或降糖保健品样品中，有和化学降糖对照品保留时间一致的吸收峰，而且吸收峰明显，就可以确定该样品中含有掺入的降糖化药。
表十四液-质联用法对实际样品的分析结果
11、结论
使用所建立的高效液相法可用于降糖中成药中的降糖化药的定性分析。用于定性分析可很好的确定中成药中掺入的降糖化药的种类。实际样品也确实在一些降糖中成药及降糖保健品中检出了格列本脲、罗格列酮、瑞格列奈、格列美脲和格列齐特，而且含量很高，使用这些药物将极大的损害糖尿病患者的身体健康。
本项目所建立的方法考察了所建立的方法灵敏度、线性范围、精密度、回收率，结果显示该方法有良好的重现性，灵敏度、回收率能够满足分析检测的要求，这些因素可使该类方法很好地用于研究降糖中成药及降糖保健品中掺入的低极性降糖化药。
Claims (8)
1、降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法，其特征在于，包括：
(1)方法：高效液相色谱；
(2)流动相：醋酸铵-三乙胺-乙腈流动相体系，由A和B组成；A：为0.01mol/L醋酸铵和0.02mol/L三乙胺的混合溶液，并用醋酸调pH到5.5，B为乙腈；A∶B的体积比为61∶39；流速为0.8-1.2ml/min；
(3)色谱柱：色谱柱为C18色谱柱；柱温20-45℃；
(4)紫外检测波长：紫外检测波长为210nm；
(5)将多种低极性降糖化学药物混合，制成对照品溶液，然后进行色谱分析，得到各种低极性降糖化学药物的保留时间；
(6)将待分析的降糖中药类产品制成供试品溶液，然后进行色谱分析；
当降糖中药类产品中色谱峰的保留时间和所述低极性降糖化学药物的保留时间一致时，且有明显吸收时，说明待测样品中含有该种降糖化学药物；否则则无。
2、根据权利要求1所述的定性分析检测方法，其特征在于，所述的流动相流速为1.0ml/min，所述的色谱柱柱温为30℃。
3、根据权利要求1所述的定性分析检测方法，其特征在于，所述的C18色谱柱规格为5μm，4.6mm×150mm。
4、权利要求1所述的定性分析检测方法，其特征在于，所述的低极性降糖化学药物为格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮、瑞格列奈和格列喹酮。
5、根据权利要求1所述的定性分析检测方法，其特征在于，所述的对照品溶液和供试品溶液溶剂为甲醇。
6、根据权利要求1所述的定性分析检测方法，其特征在于，所述对照品溶液含格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮、瑞格列奈、格列喹酮的一种或多种，优选含全部九种，其中，格列吡嗪、格列本脲、罗格列酮、格列美脲、那格列奈、格列齐特、盐酸吡格列酮浓度为20μg/ml，瑞格列奈、格列喹酮的浓度为30μg/ml。
7、根据权利要求1所述的定性分析检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备过程为：胶囊和片剂均取5粒或5片，胶囊去掉胶囊壳，大蜜丸取半粒，研细或切成小块，将药品粉末或小块转入25ml容量瓶中，加入20ml甲醇，超声处理15分钟，冷至室温，加甲醇定容，摇匀，过滤，滤液过0.45μm滤膜，即得供试品溶液。
8、权利要求1所述的定性分析检测方法，其特征在于，色谱分析时进样量为20μl。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2008100850689A CN101285803B (zh) | 2008-03-17 | 2008-03-17 | 降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2008100850689A CN101285803B (zh) | 2008-03-17 | 2008-03-17 | 降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101285803A true CN101285803A (zh) | 2008-10-15 |
| CN101285803B CN101285803B (zh) | 2011-06-08 |
Family
ID=40058118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2008100850689A Expired - Fee Related CN101285803B (zh) | 2008-03-17 | 2008-03-17 | 降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101285803B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101929987A (zh) * | 2009-06-26 | 2010-12-29 | 北京德众万全药物技术开发有限公司 | 一种用高效液相色谱法测定瑞格列奈中间体有关物质的方法 |
| CN110412284A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-11-05 | 广东省食品检验所(广东省酒类检测中心) | 一种吡格列酮检测装置及其应用 |
| CN110514753A (zh) * | 2019-07-31 | 2019-11-29 | 广东药科大学 | 一种利用多元多维色谱指纹图谱筛查降糖保健品中的非法添加物的方法 |
| CN112858512A (zh) * | 2021-01-15 | 2021-05-28 | 北京万辉双鹤药业有限责任公司 | 一种确认降糖药物杂质测定的方法 |
| CN117825436A (zh) * | 2023-12-30 | 2024-04-05 | 上海新泊地化工技术服务有限公司 | 一种普适性的中药中未知西药成分的分析方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1562034A (zh) * | 2004-03-26 | 2005-01-12 | 海南国栋药物研究所有限公司 | 格列吡嗪盐酸二甲双胍肠溶制剂及其药物释放度的测定方法 |
-
2008
- 2008-03-17 CN CN2008100850689A patent/CN101285803B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101929987A (zh) * | 2009-06-26 | 2010-12-29 | 北京德众万全药物技术开发有限公司 | 一种用高效液相色谱法测定瑞格列奈中间体有关物质的方法 |
| CN101929987B (zh) * | 2009-06-26 | 2014-12-17 | 万特制药(海南)有限公司 | 一种用高效液相色谱法测定瑞格列奈中间体有关物质的方法 |
| CN110412284A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-11-05 | 广东省食品检验所(广东省酒类检测中心) | 一种吡格列酮检测装置及其应用 |
| CN110412284B (zh) * | 2019-07-03 | 2024-05-24 | 广东省食品检验所(广东省酒类检测中心) | 一种吡格列酮检测装置及其应用 |
| CN110514753A (zh) * | 2019-07-31 | 2019-11-29 | 广东药科大学 | 一种利用多元多维色谱指纹图谱筛查降糖保健品中的非法添加物的方法 |
| CN112858512A (zh) * | 2021-01-15 | 2021-05-28 | 北京万辉双鹤药业有限责任公司 | 一种确认降糖药物杂质测定的方法 |
| CN117825436A (zh) * | 2023-12-30 | 2024-04-05 | 上海新泊地化工技术服务有限公司 | 一种普适性的中药中未知西药成分的分析方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101285803B (zh) | 2011-06-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Siddiqui et al. | Analytical techniques in pharmaceutical analysis: A review | |
| CN101339178A (zh) | 盐酸二甲双胍肠溶片的质量控制方法 | |
| CN101285803B (zh) | 降糖中药类产品中非法掺入低极性降糖化学药物的定性分析检测方法 | |
| CN101502616B (zh) | 白及药材的含量测定方法 | |
| CN105699547A (zh) | 一种测定琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的方法 | |
| CN101285802B (zh) | 降糖中药类产品中非法掺入高极性降糖化学药物的定性分析检测方法 | |
| CN106248853A (zh) | 测定复方氨基酸注射液的降解杂质蛋氨酸亚砜的含量的方法 | |
| CN102375033A (zh) | 盐酸苯达莫司汀及其有关物质的高效液相色谱分析方法 | |
| CN107315059A (zh) | 一种利福平胶囊中利福平及其杂质的含量测定方法 | |
| CN113009003A (zh) | 一种盐酸伊托必利制剂中有关物质的检测方法 | |
| CN112730674B (zh) | 一种罗汉茶的质量检测方法 | |
| CN109613128A (zh) | 一种法莫替丁胶囊中主药含量的测定方法 | |
| CN111208249B (zh) | 利用高效液相色谱法测定驱虫药有效成分含量的方法 | |
| CN109709222B (zh) | 一种感冒灵和复方感冒灵的成分检测方法 | |
| CN110596274B (zh) | 一种头孢曲松钠中2-巯基苯并噻唑的检测方法 | |
| CN104483404A (zh) | 一种开喉剑喷雾剂中岩白菜素的含量测定方法 | |
| CN103543222A (zh) | 一种热毒宁注射液中糖类成分含量的检测方法 | |
| Mansour et al. | Validation of a specific Reversed-Phase HPLC method for the quantification of three racetams; Piracetam, Levetiracetam, and brivaracetam in the presence of Co-administered drugs in their pharmaceuticals; greenness assessment and application to biological fluid and in-vitro dissolution testing | |
| CN102707006A (zh) | 穿破石配方颗粒的质量检测方法 | |
| CN101181357A (zh) | 咳特灵含片的质量控制方法 | |
| CN106525994A (zh) | 一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法 | |
| CN100480698C (zh) | 一种降压药物的检测方法 | |
| CN102608231A (zh) | Hplc法测定维生素c泡腾片中维生素c含量的方法 | |
| CN111948331B (zh) | 一种无糖型清肝颗粒的质量检测方法 | |
| CN101819191B (zh) | 二甲双胍格列吡嗪制剂的质量检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110608 Termination date: 20140317 |