CN101230087A

CN101230087A - 一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料的水蛭素生产工艺

Info

Publication number: CN101230087A
Application number: CNA2007100264620A
Authority: CN
Inventors: 苗艳丽; 宋文东; 方富永; 李思东; 彭少伟; 范润珍; 黄甫; 谷长生; 林宏图; 覃亮
Original assignee: Guangdong Ocean University
Current assignee: Guangdong Ocean University
Priority date: 2007-01-22
Filing date: 2007-01-22
Publication date: 2008-07-30

Abstract

一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料的水蛭素生产工艺，属于中药制药领域，涉及动物有效成分的提取，目的是解决传统水蛭素提取工艺难以工业化生产的问题。该工艺采用从整体菲牛蛭中提取水蛭素，可以工业化生产。先把菲牛蛭匀浆，浆状物用生理盐水提取三次，过滤。滤液煮沸、过滤除杂蛋白。收集滤液，经冷冻浓缩，醇沉后得水蛭素粗品。再用生理盐水洗涤水蛭素粗品，然后浓缩洗涤液，最后冷冻干燥得到产品。本水蛭素生产工艺方法简单，成品质量合格。药理实验结果表明，用本工艺提取的水蛭素有很好的药理作用。

Description

一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料的水蛭素生产工艺

技术领域

本工艺涉及中药制药领域，具体涉及一种从冷冻新鲜体的菲牛蛭中提取水蛭素的生产工艺。

背景技术

我国有丰富的水蛭资源可以利用。水蛭在传统的中医药学中是一种常用的活血化瘀药物，以水蛭药材为主的许多中成药在市场流行。但这类药使用不方便，疗效不明显。

该工艺所应用的水蛭是菲牛蛭，为医蛭科牛蛭属的吸血水蛭，广泛分布在我国的海南、广东、广西、福建及云南等地，是当地稻田的害虫之一。菲牛蛭的临床应用，不仅为临床提供有效的预防和治疗心血管疾病的药物，而且除害为利，保护农作物生产。菲牛蛭生物活性物质的研究，BIOPHARM公司(EP6373767，1990)纯化出抗凝血酶的水蛭素累物质；但该发明水蛭素累物质使用有机溶剂丙酮提取，分离，纯化工艺复杂，为单一活性，活性虽然较高，但收率极低，难以工业化生产。HOFMAN等(WO007221，2001)纯化出透明质酸酶；该发明物质也为单一活性成分，制备工艺复杂，含量极低，无法进行工业化生产。周维海(03113566，2003)以菲牛蛭的唾液为原料，对其唾液进一步分离过滤得到水蛭素粗品，再将水蛭素粗品进行深加工得到符合医用的水蛭素。该方法得到的水蛭素活性高，药用效果好，提取水蛭素方法简单，但收率极低。康强(02116727.3，2003)采用菲牛蛭活体生理盐水提取，或活体冷冻融溶后生理盐水提取的方法，得到具有生物活性的冻干固体提取物。

发明内容

本工艺提取的水蛭素以冷冻新鲜体菲牛蛭活体为原料，目的在于提供一种由菲牛蛭生产的、用于预防和治疗血栓引起的心脑血管疾病的提取物及其生产方法。该生产方法工艺简单，成本较低，可工业化生产。本提取物使用方便，疗效明显。

附图说明

图1是本发明水蛭素生产工艺流程图。

具体实施方式

本发明通过以下措施实现：

1)把冷冻(-18℃)的菲牛蛭新鲜体解冻后，放入组织捣碎机内打成浆状。按浆状物的质量加入2倍0.15mol/L的氯化钠溶液，240r/min搅拌1小时。120目尼龙网过滤，收集滤液。固形物放入组织捣碎机中捣成浆状，按前面的操作再提取二次后过滤。弃去固形物，收集滤液。合并三次滤液，煮沸后迅速冷却至室温，得混悬液1。

2)混悬液1用200目尼龙网过滤，收集滤液。固形物按菲牛蛭冷冻新鲜体的质量加入等量的0.15mol/L氯化钠溶液，180r/min搅拌1小时。200目尼龙网过滤，收集滤液。固形物重复上述操作再提取二次，弃去固形物，收集滤液。合并3)的全部滤液，煮沸后迅速冷却至室温，得混悬液2。冷藏过夜。

3)冷藏过夜的混悬液2用200目尼龙网过滤，弃去固形物，收集滤液。滤液冷冻凝固后，取出搁在不锈钢网架上，使之自然融化。当未融化的部分相当于滤液总量的10％左右时，去掉尚未融化的部分。融化后的滤液再冷冻凝固。重复上述操作，直到剩下相当于冷冻凝固前滤液总量的30％左右，得滤液的浓缩液。

4)浓缩液用0.5mol/LHCl调至PH5.5。加入95％乙醇使浓度达到81％(v/v)，冷藏过夜。4800r/min离心10分钟，上清液回收乙醇后去掉。沉淀为水蛭素粗品。

5)按水蛭素粗品的质量加入5倍0.5mol/L的氯化钠溶液，调成悬浮液后120r/min搅拌40分钟。4800r/min离心10分钟，收集上清液。沉淀重复前面的操作5次后去掉。合并6次上清液，煮沸后迅速冷却到室温。用减压旋转蒸发器在55℃浓缩至60AIU/ml，冷冻干燥成冻干粉即可。

Claims

1.一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料水蛭素生产工艺其特征在于：

所用原料为菲牛蛭冷冻新鲜体，是指人工养殖并经喂饲猪血后捞起马上放在-18℃的条件下冷冻保存的菲牛蛭个体。

2.一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料水蛭素生产工艺其特征在于：

该工艺采用菲牛蛭活体冷冻融溶后生理盐水提取的方法生产的具有生物活性的冻干提取物。

3.按照权利2所述，采用菲牛蛭为原料，通过提取、醇沉、浓缩、冷冻干燥制得本品，其特征采用如下步骤和方法：

1)把冷冻(-18℃)的菲牛蛭新鲜体解冻后，放入组织捣碎机内打成浆状。

2)按浆状物的质量加入2倍0.15mol/L的氯化钠溶液，240r/min搅拌1小时。120目尼龙网过滤，收集滤液。固形物放入组织捣碎机中捣成浆状，按前面的操作再提取二次后过滤。弃去固形物，收集滤液。合并三次滤液，煮沸后迅速冷却至室温，得混悬液1。

3)混悬液1用200目尼龙网过滤，收集滤液。固形物按菲牛蛭冷冻新鲜体的质量加入等量的0.15mol/L氯化钠溶液，180r/min搅拌1小时。200目尼龙网过滤，收集滤液。固形物重复上述操作再提取二次，弃去固形物，收集滤液。合并3)的全部滤液，煮沸后迅速冷却至室温，得混悬液2。冷藏过夜。

4)冷藏过夜的混悬液2用200目尼龙网过滤，弃去固形物，收集滤液。滤液冷冻凝固后，取出搁在不锈钢网架上，使之自然融化。当未融化的部分相当于滤液总量的10％左右时，去掉尚未融化的部分。融化后的滤液再冷冻凝固。重复上述操作，直到剩下相当于冷冻凝固前滤液总量的30％左右，得滤液的浓缩液。

5)浓缩液用0.5mol/LHCl调至PH5.5。加入95％乙醇使浓度达到81％(v/v)，冷藏过夜。4800r/min离心10分钟，上清液回收乙醇后去掉。沉淀为水蛭素粗品。

6)按水蛭素粗品的质量加入5倍0.5mol/L的氯化钠溶液，调成悬浮液后120r/min搅拌40分钟。4800r/min离心10分钟，收集上清液。沉淀重复前面的操作5次后去掉。合并6次上清液，煮沸后迅速冷却到室温。用减压旋转蒸发器在55℃浓缩至60AIU/ml，冷冻干燥成冻干粉即可。