CN101220335A

CN101220335A - 一种防治烟草黑胫病的菌株及其菌剂

Info

Publication number: CN101220335A
Application number: CNA2007103000874A
Authority: CN
Inventors: 奚家勤; 尹启生; 宋纪真; 魏春阳; 周汉平; 薛超群; 蔡宪杰; 杨军; 王广山
Original assignee: Zhengzhou Tobacco Research Institute of CNTC
Current assignee: Zhengzhou Tobacco Research Institute of CNTC
Priority date: 2007-12-28
Filing date: 2007-12-28
Publication date: 2008-07-16
Anticipated expiration: 2027-12-28
Also published as: CN101220335B

Abstract

一种防治烟草黑胫病的菌株及其菌剂，其特征是：采用淡紫拟青霉ZY－19－2，保藏编号：CCTCCNO：M207196为原菌种通过发酵工艺而制成菌剂，发酵条件如下：以0.8～2.0％胶体几丁质为碳源，发酵液初始pH值为5.5～7.0，以0.8～1.5％蛋白胨为氮源，0.1％吐温80作为表面活性剂，发酵时间为48～72h，接种量为0.8～2％，摇床转速为100～180r/min。本发明具有如下优点：1.菌株淡紫拟青霉生长快，产几丁质酶能力强；2.能分解蝇蛆的体壁，可在蝇蛆体壁或体壁降解产物和水配制的培养基上生长；3.可定殖在烟草植株的根际，抵抗烟草黑胫病的侵染；4.能有效地克服土壤的抑菌作用，长期保持抑制烟草黑胫病的能力。

Description

一种防治烟草黑胫病的菌株及其菌剂

技术领域

本发明涉及微生物领域，更确切的说，涉及用于植物根部病害，特别是一种用于防治烟草黑胫病的菌株及菌剂。

背景技术

烟草黑胫病菌最早是由Breda de Haan于1896年在印度尼西亚的爪哇首次发现和描述的，并将其命名为烟草疫霉(Phytophthroa parasiticavar.nicotianae(Breda de Haan)Tucker)，由该病菌引起的烟草黑胫病是一种分布广泛，为害严重的世界性烟草主要病害之一。烟草黑胫病可以在烟草的任何生育阶段侵染为害，但主要为害大田烟株。苗期发病往往造成烟苗成片死亡，成猝倒状；大田期发病则可以造成整个烟株突然凋萎并伴有根部或茎基部变黑症状，造成无法挽救的损失。我国20世纪80年代以后随着烟草种植面积的扩大，烟草黑胫病迅速发展。据1989-1991年全国16个省市主要烟区调查，除黑龙江尚未发生外，其余各烟区均有发生，以河南、山东、安徽、云南等省发生较重，一般发生率为5％-15％，重者达30％以上，给烟草生产造成很大损失。长期以来，主要用化学农药-甲霜灵。随着甲霜灵在烟草生产上的大量使用，烟草黑胫病逐步产生抗药性。20世纪60年后，由于化学农药“3R”(residue，resistance，resurgence)问题严重及人类对环境保护及自身健康意识的增强，生物防治已经成为人们研究的热点。生物防治的优点是对人畜安全，对环境没有或极少污染，使用成本较低，便于利用。利用微生物对烟草黑胫病进行防治是生物防治一个重要的例子。

发明内容

本发明的目的正是针对上述现有技术所存在问题而的提供的一种防治烟草黑胫病的菌株及其菌剂，该菌株对烟草黑胫病有较好的抑制作用。

本案发明人从福建、河南、安徽、云南、湖北采集了烟草根际土样100份，用几丁质选择培养基法共分离出产几丁质酶菌株62株，其中：真菌32株、细菌22株、放线菌8株。通过透明圈法和还原糖法对分离的菌株进行了筛选，得到一株几丁质酶高产菌株。经过鉴定，该菌株为淡紫拟青霉(Pacilomyceslilacinus。该菌株被送往位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心保藏，保藏日期为：2007年12月10日，保藏号为CCTCCNO：M207196；其名称为淡紫拟青霉ZY-19-2。经试验该菌株对烟草黑胫病菌(Phytophthroa parasitica Dastvar.nicotianae)有较强的抑制作用(见附图)。由附图看出：随着黑胫病菌丝的不断生长，当遇到牛津杯中的菌株发酵液时，黑胫病菌丝停止扩散，而向没有菌株发酵液的地方延伸，表明菌株发酵液对黑胫病菌有抑制作用。

本发明的防治烟草黑胫病的菌株是淡紫拟青霉ZY-19-2(Pacilomyceslilacinus ZY-19-2)，保藏编号为：CCTCCNO：M207196。

本发明的防治烟草黑胫病的菌剂是采用淡紫拟青霉CCTCCNO：M207196为原菌种通过发酵工艺而制成，最佳发酵条件如下：以0.8～2.0％胶体几丁质为碳源，发酵液初始pH值为5.5～7.0，以0.8～1.5％蛋白胨为氮源，0.05％～0.2％吐温80作为表面活性剂，发酵时间为48～72h，接种量为0.8～2％，摇床转速为100～180r/min。

本发明的制备该菌剂的发酵工艺按三角摇瓶→种子罐→发酵罐的三级工艺培养。

本发明的菌剂可为液体制剂，即通过三级发酵工艺培养后的培养液直接作为液体杀菌剂使用，制成的培养液中的孢子量约为1.0×10⁵个/ml。

本发明的菌剂也可为固体制剂，即用硅藻土和草木灰吸附已制成的培养液，自然晾干后制成孢子量为2×10⁸个/g固体杀菌制剂。

本发明的液体菌剂的使用方法如下：用量为50L/亩，烟草植株大田移栽后10～15天第一次施药，移栽后25～30天第二次施药，移栽后40～45天第三次施药，移栽后55～60天第四次施药。

此外，还可以采用其它后处理工艺，例如将液体菌剂浓缩后复配，或将其发酵过滤，将固、液分别处理包装，待混合后施用或者用固体载体(硅藻土+草炭)作液体菌剂的吸附剂，晾干后施用。

与现有的技术化学农药或类似生物农药相比，本发明用于防治烟草黑胫病的菌株及其制剂具有如下优点：1.菌株淡紫拟青霉生长快，产几丁质酶能力强等优点；2.能分解蝇蛆的体壁，可以在蝇蛆体壁或体壁降解产物和水配制的培养基上生长；3.可定殖在烟草植株的根际，抵抗烟草黑胫病的侵染；4.能有效地克服土壤的抑菌作用，可以长期保持淡紫拟青霉的抑制烟草黑胫病的能力。

附图说明

附图：菌株ZY-19-2对黑胫病的抑菌效果。

具体实施方式

本发明下面通过具体实施例来进一步说明，但并不是限制本发明。

实施例1液体制剂

采用试管培养的淡紫拟青霉(ZY-19-2)原种，再按三角摇瓶→种子罐→发酵罐的三级工艺培养。在50L发酵罐中，装入30L的2％胶态几丁质液体培养基，发酵液初始pH值为6.5，以1.0％蛋白胨为氮源，0.1％吐温80作为表面活性剂，经0.05mpa灭菌30分钟，冷却至室温后，接入2.0L菌株ZY-19-2液体种子，培养温度28℃，通气量为1.5M²/h，搅拌速度为120r/min，经48小时后，培养液可以直接作为液体杀菌剂，供大田生产使用。

淡紫拟青霉(ZY-19-2)液体杀菌剂使用方法：用量为50L/亩，在襄县汾陈乡，对曾经有黑胫病发生的大田期烟草植株施药四次：第一次，大田移栽15天，喷淋烟草幼苗的根和茎；第二次，大田移栽后30天，喷淋烟草植株的根和茎；第三次，大田移栽后45天，喷淋烟草植株的根、茎和发病烟叶的基部；第四次，大田移栽后60天，喷淋烟草植株的根、茎和发病烟叶的基部。

实施例2固体制剂

用硅藻土和草炭配制成发酵菌液的载体吸附剂。载体吸附剂的制备方法是，按每升培养液用1kg的硅藻土(60％)和草炭(40％)作为载体吸附，自然晾干后成为孢子量为2×10⁸个/g固体杀菌制剂，再包装成为产品，供大田生产使用。

淡紫拟青霉(ZY-19-2)固体杀菌剂使用方法：1、于烟草幼苗移栽前，将固体杀菌剂撒施在种植穴内，每穴施固体杀菌剂15g，然后将烟草幼苗移栽于穴内定植。2、在烟草幼苗移栽黑胫病发生前，将固体杀菌剂(15g)撒播在烟草茎根处的土壤表面，浇300mL清水。

结果表明，在使用本发明制剂的河南省襄城县3亩烟田中，黑胫病症状明显减轻，较对照减少50％，烟叶平均亩产要比未使用本发明制剂的平均亩产高出15％左右。

Claims

1.一种防治烟草黑胫病的菌株，其特征在于：它是淡紫拟青霉，保藏编号为：CCTCCNO：M207196。

2.一种利用权利要求1所述的菌株制备防治烟草黑胫病的菌剂，其特征在于：它是采用淡紫拟青霉CCTCCNO：M207196为原菌种通过发酵工艺而制成，发酵条件如下：以0.8～2.0％胶体几丁质为碳源，发酵液初始pH值为5.5～7.0，以0.8～1.5％蛋白胨为氮源，0.05％～0.2％吐温80作为表面活性剂，发酵时间为48～72h，接种量为0.8～2％，摇床转速为100～180r/min。

3.根据权利要求2所述的防治烟草黑胫病的菌剂，其特征在于：制备该菌剂的发酵工艺按三角摇瓶→种子罐→发酵罐的三级工艺培养。

4.根据权利要求2所述的防治烟草黑胫病的菌剂，其特征在于：该菌剂为液体制剂。

5.根据权利要求2所述的防治烟草黑胫病的菌剂，其特征在于：该菌剂为固体制剂。