CN101185713A - 一种用于治疗跌仆损伤的药物制剂及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药制剂，尤其是一种用于治疗跌仆损伤、血瘀疼痛的新的液体药物制剂，属中药领域。该制剂是按如下方法制得的：取血竭、制乳香、制没药、冰片、儿茶、红花、人工麝香、朱砂等药味，常规粉碎后加倍量适宜的液体分散介质，于超微粉碎机中粉碎混合，粉碎物再经制剂而得。应用该方法可以有效提高原料的粉碎效率，节约药材并方便制剂。

Description

一种用于治疗跌仆损伤的药物制剂及其制备方法和质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂，尤其是一种用于治疗跌打损伤的新的液体药物制剂，属中药领域。

背景技术

骨折是骨伤科临床常见病、多发病，随着社会经济和文明的发展，机动车已经逐步取代了传统的非动力交通工具，随着交通事故发生率的提高，骨折的发病率也不断提高。现代医学治疗骨折主要以手术治疗为主，术后主要以抗感染止痛等治疗，缺乏促进骨折的治疗方法。中医治疗骨折的历史源远流长，方法多种多样，除手法整复，夹板固定以外，多配合活血消肿，续筋接骨等中药治疗，疗效确切。但是目前临床上应用的此类药物大多含有贵稀类药材，因此销售价格均较高，普通患者较难接受，妨碍了此类药物的普及。如七厘方，其中包括血竭、制乳香、制没药、红花、儿茶、冰片、麝香(人工)、朱砂等药物，具有化瘀消肿，止痛止血之功效，多用于跌扑损伤，血瘀疼痛，外伤出血。可见，探索一种治疗该类疾病的低成本、疗效高的药物非常必要，将具有广阔的发展前景。

中药超微粉碎给中药剂型改革和中药现代化带来了一场革命，提高了细胞破壁率、比表面积、有效成分溶出度、生物利用度，能增强药理作用、减少用药量、节省药材和保护药材资源，同时还可改善气味、口感，提高药品质量，相对目前常规粉碎、水煎煮或有机溶剂提取等方法具有无可比拟的优势。尤其对于树脂类药材、动物药及贵重药材如血竭、水蛭、麝香、牛黄等，由于这些药材中成分不明确，不宜提取，大多经常规粉碎后入丸散应用，而引入超微粉碎技术后，将对传统的制剂工艺带来产生的影响，使原有物料处于一种超微细粉末的“新的状态”，充分发挥超微细粉独特的理化性质，中药的有效成分不但不会丢失或减少，而且还会被人体充分吸收利用，中医药的特色将得到更大的发挥。

但是，目前的超微粉碎技术由于受到传统粉碎概念的影响，变化仅仅体现于粉碎设备的改变上，并没有给中药制剂产业带来革命性的影响，主要问题表现在：①在药材粉碎过程中，随着颗粒粒径的减小，所需进一步粉碎的能量不断增大，当颗粒粒径达到一定程度后，粉碎效率明显降低；②既便在粉碎完成后，由于粒径的减小仍然容易导致：表面能增加，使颗粒处于不稳定状态；流动性差，易聚集形成假大颗粒；可湿性增加，易吸潮；吸附性增加，易吸附空气中的杂质；③由于以上问题的存在，导致中药微粉在制剂过程中出现粉体流动性差、分剂量不准确、易吸潮、片剂不易成型等技术问题，严重影响了中药微粉的实际应用，成为中药超微粉碎技术或中药超微粉与中药制剂相衔接的瓶颈。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的粉碎方法，同时提供应用这种方法得到的药物制剂，该制剂相比传统工艺下得到的产品稳定性增强，生物利用度大大提高，节约了药材，降低了生产成本，而且其疗效确切，有效成分明确，质量可控。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

取朱砂12～20重量份水飞至极细粉，备用；取血竭120～150重量份、乳香(制)15～25重量份、没药(制)15～25重量份、儿茶26～36重量份、红花15～25重量份粉碎成粗粉，过2号筛；取人工麝香1.5～2.0重量份、冰片1.5～2.0重量份，与上述五味药的粉碎物混合后，加1～3倍量适宜的液体分散介质，于超微粉碎机中粉碎混合10～50分钟，加入朱砂水飞粉，继续粉碎混合10分钟，出料，制成所需剂型。

上述方法中所用液体分散介质可以选自但不限于如下的一种或几种的组合：大豆油、花生油、菜子油、玉米油、芝麻油、红花油、油酸乙酯、椰子油酯类、向日葵油单甘油酯、蜂蜡、液体聚乙二醇、甘油、丙二醇、山梨醇、磷脂、胆固醇、吐温、司盘、泊洛沙姆。优选为聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐温中任意一种或几种的组合物，且其比例最发控制在6～9∶1～3∶0～3∶0～3。

经过多次试验后，得到最优的技术方案：取朱砂16.36重量份，水飞至极细粉，备用；取血竭136.31重量份、乳香(制)20.45重量份、没药(制)20.45重量份、儿茶32.72重量份、红花20.45重量份粉碎成粗粉，过2号筛；取冰片1.64重量份、人工麝香1.64重量份与上述五味药的粉碎物混合后，加入聚乙二醇315重量份和丙二醇35重量份，混合均匀，置于振动式超微粉碎机中粉碎混合50分钟，加入朱砂水飞粉，继续粉碎混合10分钟，出料，制成软胶囊，即得。

这里所说的2号筛，是中国药典中规定的药筛的规格，即筛孔平均内径为850±29μm。

本发明的技术方案，可以在制备中药软胶囊剂、液体硬胶囊剂、口服乳剂及相关原料药时得到广泛应用。

以下是本发明的主要研究过程：

1.药材粉碎的研究

由超微粉碎的粉碎原理(在外界激荡力的作用下，磨介时而散开，物料得以进入磨介之间；时而聚合，激烈地冲撞、挤压剪切物料，同时内外磨介不断交换位置，使得物料在正向压力和切向剪切力地的作用下被彻底撕裂、粉碎)可知，进入振荡式超微粉碎机的物料粗细程度必须适中，物料粒度太大，则不易进入磨介之间，影响粉碎效率和粉碎效果；粒度太小，则失去了超微粉碎的意义。因此本方湿法超微粉碎前，乳香、没药、血竭、红花、儿茶药材必须进行初步粗粉碎，否则严重影响湿法超微粉碎的效率和粉碎效果。

由处方得知，本处方中含有树脂类药材：乳香、没药、血竭、儿茶，硼砂、矿物药类药材：朱砂，贵细类药材：人工麝香、冰片。朱砂可以单独水飞加工；人工麝香、冰片已经为贵细类药材，不必再粉碎；但是乳香、没药、血竭、儿茶四味树脂类药材单独粗粉均较困难，故采用串料粉碎的办法，按照处方比例取植物药材(红花)与乳香、没药、血竭、儿茶进行串料粉碎，得到粗粉。

1.1朱砂的粉碎研究

中国药典2005年版一部明确规定：朱砂属于毒剧类药材，每次服用量为0.1～0.5g，不宜大量服用，也不宜少量久服，肝肾功能不全者禁服。现代研究也证实，朱砂对人体有全面的损害，包括能引起人类胎儿畸形，其主要毒性成分为游离汞和可溶性汞盐。并且汞的排泄速度很慢，在体内有蓄积性，在脑中t_1/2为240天，其他组织中70天，故会积蓄中毒。

原制剂(七厘散)中朱砂的粉碎方式为：朱砂水飞成极细粉。该方法是祖国医学长期积累得出的经验，因此本制剂中朱砂的粉碎方式仍然采用水飞法。

1.2其余药材的粉碎研究

由于本方含有大量的树脂类药材(约占本处方的84％)，单独粉碎根本不能进行，必须采取串料粉碎的方式。同时为保证良好的湿法粉碎效果，拟将串料药材(乳香、没药、血竭、儿茶、红花)粉碎至24目。为进一步考察药材粗粉碎程度对湿法超微粉效果的影响，进行了如下试验：

试验目的：考察药材粗粉碎程度对湿法超微粉碎的影响

试验设计：①原饮片投料，进行湿法超微粉碎

②上述五味药材粗粉碎至24目后进行湿法超微粉碎

试验设备：摇摆式高度中药粉碎机(型号：DFY-500；厂家：温岭市大德中药机械有限公司)振动式超微粉碎机(型号：BFM-6；振幅：5.5mm；总容量：6.3L；厂家：济南贝利粉技术工程有限公司)

试验过程：按照处方比例取1倍处方量的乳香、没药、血竭、儿茶和红花药材，共2份，分别不粗粉和粗粉碎至24目，然后于振荡式超微粉碎机中加液粉碎40分钟。

试验结果：试验结果总结见下表。

表  粗粉碎的粉碎程度考察结果表

试验结论：事先粗粉至24目的湿法超微粉碎效果好，物料高度混匀，稳定性好；而未经粗粉碎得到的物料较粗糙，仍可见部分药材碎片，长期放置有分层现象，因此选择将上述五位药材粗粉碎至24目后再进行湿法超微粉碎。

为了计算损耗，方便投料，对上述药材粗粉碎(过2号筛)的粉碎得率进行了考察。具体试验如下：

试验目的：考察药材粗粉碎的粉碎得率

试验方法：按照处方比例分别取1、2、3倍处方量的药材，进行粗粉碎，过24目筛，计算粉碎得率。

试验结果：考察结果见下表。

表  药材粗粉碎得率的考察结果表

注1：粉碎设备  摇摆式高度中药粉碎机型号为DFY-500，厂家为温岭市大德中药机械有限公司。

试验结论：上述结果表明，投料药材粗粉碎的粉碎收率约为95～97％，物料损耗并不大，可见上述五味药材串料粉碎是合理的。

2.超微粉碎工艺的研究

众所周知，固体药物(尤其那些难溶性药物)的体内释放与吸收与其分散状态大有关系。随着药物粉碎技术的不断改进，科研人员发现：如能设法将难溶药物、蛋白质/多肽类药物以及其它一些药物在不破坏其分子结构的情况下加工成为微粉则能大大改善这些药物的体内生物利用度。

本方为小剂量贵重处方，含有大量的贵重药材(血竭、人工麝香)临床疗效确切，需求量大，但药材贵重，患者负担大，而且由于儿茶、血竭、乳香、没药等树脂类药材的存在，导致散剂易吸附、板结，吸潮，加上散剂味苦，口服有明显的颗粒感等缺点使得患者服用不便，虽然目前也有简单的改剂型品种，粉碎后直接填充胶囊或制粒压片(但流动性差，需要制粒甚至加粘合剂制粒，此时树脂类药材受热团聚、融合，明显延长了崩解时间，甚至不符合规定)以掩味、增加稳定性，但均没有实质性进步。为此我们对本方进行了微粉化研究，以期提高药物生物利用度，减量应用，降低成本。

试验目的：考察原工艺与超微粉碎工艺的区别

试验设计：①原工艺考察

②本方超微粉碎后压制片剂

③本方超微粉碎后充填胶囊

试验设备：振动式超微粉机(型号：BFM-6；振幅：5.5mm；总容量：6.3L；厂家：济南贝利粉技术工程有限公司)；摇摆式高度中药粉碎机(型号：DFY-1000；厂家：温岭市大德中药机械有限公司)

试验过程：①原工艺：按照处方比例，取1倍处方量药材，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞成极细粉；其余血竭等五味粉碎成细粉；将人工麝香、冰片研细，与上述粉末配研，过筛，混匀，即得。

②超微粉碎工艺：按照处方比例，取2倍处方量药材，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞成500目的极细粉；其余血竭等五味粉碎成粗粉，过2号筛。取人工麝香、冰片、上述朱砂水飞粉和血竭等五味药粗粉，于振动式超微粉机(型号：BFM-6；振幅：5.5mm；总容量：6.3L)中粉碎40分钟，出料，即得。

③超微粉碎+压片或充填胶囊：取上述药物超微粉各100g，分别加入适量的辅料(硬脂酸镁等)手工压片和充填胶囊。

试验结果：试验结果总结见下表。

表  原工艺与超微粉碎工艺的考察结果表

试验结论：由于本方所含药材的特殊性(树脂类药物占84％左右，细粉易吸附聚集，制粒烘干等受热易融合、团聚；矿物药(朱砂)和动物药(人工麝香)无粘性，制粒需借助粘合剂完成)使得本方经超微粉碎后压片和充填胶囊均难以进行，加水或醇制粒后烘干时，树脂类药物融合、结块，颗粒不均一，流动性差，不便充填胶囊；压片时，在外加压力的作用下树脂类药物出现部分融合，色块加深，药片困难。

3.湿法超微粉碎工艺的研究

上述研究表明，本方药材经超微粉碎后表面积增大，具有强大的表面能，稳定性差，不便于制剂。但是初步药效学证实其疗效得到了不小提高，本方超微粉减少1/3药材组与散剂组具有几乎相同的疗效，可见微粉化对本方生物利用度的提高是有帮助的。

为了充分利用超微粉碎技术的先进性，同时解决微粉化药物吸附、聚集、挥发、吸湿等问题，我们仿照固体分散技术联系到了液态基质分散技术，即微粉化药物与液态基质高度混合，达到高度均质化的液态分散体系，一方面有效地避免了药物微粉的吸附、聚集、板结；另一方面，得到了均匀的液态分散体系，为口服制剂中生物利用度最高的形态之一，大大提高了本方的疗效。

又文献及试验表明，朱砂应忌热，避免大量游离汞的产生，因此首先对本方超微粉碎工艺中朱砂的加入方式进行了考察(一方面，尽量缩短粉碎时间，避免物料长时间受热；另一方面，必须保证良好的粉碎和混合效果)，然后对不同的液态分散技术进行了考察，具体研究内容如下：

试验1：本方湿法超微粉碎工艺中朱砂加入方式的考察

试验目的：对本方湿法超微粉碎工艺中朱砂的加入方式进行考察

试验设备：振动式超微粉机(型号：BFM-6；振幅：5.5mm；总容量：6.3L；厂家：济南贝利粉技术工程有限公司)

试验过程：①取朱砂粗粉16.36g，按照上述优选好的水飞法进行水飞，得到朱砂水飞极细粉(500目)。

②按照处方比例取除朱砂外的各味药材，除人工麝香、冰片外，其余药材粗粉碎后过2号筛，备用。取上述药物粗粉、人工麝香、冰片和PEG400(按照药物：PEG400＝1∶1.5的比例加入)于振动式超微粉机中粉碎30分钟，然后加入上述朱砂水飞粉，每隔1分钟取样，继续粉碎10分钟，即得。

③分别测定上述所取小样的硫化汞含量，并进行分析。

试验方法：硫化汞的含量测定方法如下(参照中国药典2005年版一部92页朱砂的含量测定方法进行)

取上述小样约3g，精密称定，置250ml凯氏烧瓶中，加硫酸40ml与硝酸钾4g，加热俟溶液至近无色，放冷，转入250ml锥形瓶中，用水50ml分次洗涤烧瓶，洗液并入溶液中，加1％高锰酸钾溶液至显粉红色，两分钟内不消失，再滴加2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵液(0.05mol/L)滴定。每1ml硫氰酸铵液(0.05mol/L)相当于5.816mg的硫化汞(HgS)。

试验结果：具体结果见下表。

表  各药材投料记录表

表  所取小样硫化汞含量结果表

参见附图：不同时间所取超微物料中硫化汞含量变化趋势图

试验结论：上述试验结果表明，所取小样中硫化汞的含量自第5号样品起，开始稳定，基本稳定在98％左右，可见，水飞朱砂自加入起5分钟后混合已经非常均匀，考虑到大生产设备效率相对较低，为保证朱砂在物料中混合均匀，确定本方在进行湿法超微粉碎时水飞朱砂的加入方式为：在出料前10分钟加入水飞朱砂。

试验2：选用PGE400作为液态基质对不同液态分散技术的考察

试验目的：考察不同液态分散技术的差异性

试验设计：①微粉化药物+PEG400→胶体磨研磨→液态分散体系

②药物、PEG400→超微振动粉碎→液态分散体系

试验设备：振动式超微粉机(型号：BFM-6；振幅：5.5mm；总容量：6.3L；厂家：济南贝利粉技术工程有限公司)；胶体磨(型号：JM-LB50C；厂家：温州市七星乳品设备厂)

试验过程：①胶体磨研磨制备液态分散体系：取试验1项下事先制备好的药物微粉200g，加入300g聚乙二醇400于胶体磨中研磨40分钟，即得。

②加液超微粉碎制备液态分散体系：按照处方比例，取2倍处方量药材，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞至极细粉；其余血竭等五味粉碎成粗粉，过2号筛。取人工麝香、冰片和血竭等五味药材粗粉，并加入PEG400(按照药物：PEG400＝1∶1.5的比例加入)，于振动式超微粉机(型号：BFM-6；振幅：5.5mm；总容量：6.3L)中粉碎30分钟，加入上述朱砂水飞粉，继续粉碎10分钟，出料，即得。

试验结果：试验结果总结见下表。

表  不同液态分散技术效果比较表

注：离心试验取5g样品置离心管中，以3000rpm离心5min，观察有无分层现象，及分层得程度(以+的个数表示分层程度)。

试验结论：上述试验表明，两种液体分散技术：胶体磨研磨与加液湿法超微分散技术具有完全不同的分散效果，胶体磨研磨等简单搅拌混合无法将具有极大表面积大药物微粉分散均匀，得到的物料极不稳定，室温放置几天即分层、沉降；而加液超微分散技术在高频振动及强大机械力作用下可以克服药物微粉巨大的表面能，将微分药物充分分散，且达到了高度混匀的状态，料液极细腻，稳定性好。

加液超微粉碎技术相对于简单分散技术具有显著优势，主要有如下几点：

①加液超微振荡粉碎，一方面得到了粒度理想的药物微粉，；另一方面高频振动及强大机械力克服了药物微粉巨大的表面能，使得液态基质与药物高度混合、分散，达到了高度均质化状态，是集粉碎、分散、混合于一体的高新技术。

②加液超微粉碎与常规超微粉碎相比，粉碎效果更好，得到的物料粒度更细，比表面积更大，对肠壁的吸附作用增强，在胃肠内的停留时间延长，生物利用度更高。

③具有表面活性介质的加入，改变了物料的表面性质(中和电荷、消除气膜、减小微粉表面能等)，起到了增溶、乳化、助悬的作用，使得药物微粉与基质充分混匀，从而高度分散得到高度均质化的液态分散体系。

④得到的液态分散体系是口服制剂中生物利用度最高的制剂形式之一，大大提高了药物的利用率，且具有极好的稳定性、均匀度及流动性便于制剂。

⑤部分液态基质(如：PEG400)对多肽、蛋白类药物具有物理或(和)化学修饰作用，能明显改善它们的体内药动学性质，减弱或消除免疫反应等，可以将其充分利用。

综上所述，加液超微粉碎技术是集加液分散技术与超微粉碎技术于一体的高新技术，是对超微分散技术的改进，粉碎的同时兼有高度分散和药物表面改性，与先超微粉碎再分散的工艺相比，不但分散效果好，而且简化了工艺流程，节约了能源，因此我们选择了加液超微粉碎技术进行重点研究，具体研究内容如下：

3.1湿法超微粉碎基质的优选

目前常用于提高药物生物利用度的常用药用辅料有：PVP、PEG、卵磷脂等，由于PVP是固体，难以进行湿法超微粉碎，因此我们选择了水、乙醇、软磷脂、聚乙二醇400作为分散介质，考察它们对湿法超微粉碎效果的影响，具体研究如下：

试验目的：优选最优的湿法超微粉碎基质

试验设备：振动式超微粉碎机(振幅：5.5mm；型号：BFM-6：总容量：6.3L)

试验设计：按照处方比例，取1倍处方量药材，共4份。除人工麝香、冰片外，朱砂水飞至极细粉；其余血竭等五味粉碎成粗粉，过2号筛。取人工麝香、冰片和血竭等五味药材粗粉，并按照1∶1.5的药物与基质的比例分别加入水、乙醇、卵磷脂、聚乙二醇400，于振动式超微粉机(型号：BFM-6；振幅：5.5mm；总容量：6.3L)中粉碎30分钟，加入上述朱砂水飞粉，继续粉碎10分钟，考察不同基质的差异性，以优选合适的湿法超微粉碎介质。

试验结果：具体考察试验结果见下表。

表  不同液态分散介质考察结果表

注1：离心试验  取5g样品置离心管中，以3000rpm离心5min，观察有无分层现象，及分层得程度(以+的个数表示分层程度)。

试验结论：上述结果表明，水、乙醇性质相似，与药材润湿性差，粉碎效果不理想，表面活性剂的加入仍得不到有利的改善；而卵磷脂为高效乳化剂，在超微振动的高度能量作用下，产生大量泡沫，使得粉碎难以进行；而聚乙二醇400稠度适中，本身具有一定的表面活性剂作用，可润湿药物表面，使得固(药物)-液(基质)高度混合，得到高度均质化的液态分散体系，因此暂选择聚乙二醇400作为本湿法超微粉碎的基质。

同时，聚乙二醇400作为美国药典推荐用软胶囊冲填辅料，具有许多独特的优点：①能够明显改善药物的表面性质(减少表面电荷，消除表面气膜，充分润湿药物表面)，与药物高度混合，形成高度均质化的液态分散体系，延长了药物的沉降时间，增加了制剂的稳定性；②对多肽、蛋白质类药物的物理或(和)化学的修饰作用，能够增加此类药物的溶解度和稳定性，减弱或消除免疫反应，改善药物的体内药动学性质；③作为表面活性剂，能降低油、水界面的表面张力，充分润湿药物表面，对肠壁的吸附作用增强，明显提高药物的生物利用度。

参考上述优选试验结果，同时为了充分利用聚乙二醇400对药物的特性，最终决定采用聚乙二醇400作为加液超微粉碎的主要基质。

3.2基质比例的优选

在湿法超微粉碎中，“加液量”的多少对粉碎结果影响极大，而且直接关系到制剂的稳定性好坏，为此，我们对基质与药物的最佳比例进行了考察，主要研究如下：

试验目的：对液态基质的用量进行优选

试验过程：按照处方比例，取1倍处方量药材，共5份，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞至极细粉；其余血竭等五味粉碎成粗粉，过2号筛。取人工麝香、冰片和血竭等五味药材粗粉，并按照下面的物料比例加入基质(聚乙二醇400∶丙二醇＝9∶1；因聚乙二醇400具强的吸水性，在软胶囊的内容物中通常需要加入10％左右的甘油或丙二醇保持内容物中的水分，避免胶囊皮中水分的“游走”，因此加入了10％丙二醇)，于振动式超微粉机(型号：BFM-6；振幅：5.5mm；总容量：6.3L)中粉碎30分钟，加入上述朱砂水飞粉，继续粉碎10分钟，出料，即得。

试验结果：最优基质比例优选结果见下表。

表  最优基质比例优选结果表

注1：超微粉碎设备振动式超微粉碎机型号为BFM-6，振幅为5.5mm，总容量为6.3L，厂家为济南贝利粉技术工程有限公司。

注2：离心试验取5g样品置离心管中，以3000rpm离心5min，观察有无分层现象，及分层得程度(以+的个数表示分层程度)。

通过上述试验发现，药物与基质的比例为1∶1.5～1∶2时，粉碎效果较好，D₅₀在7μm左右，料液流动性好，方便出料和灌装软胶囊，同时稳定性较好，未见有明显分层现象。但是，基质的比例越大，制剂的服用量越大，增加了成本，且不便于制剂，同时考虑到后续成品装量的可控性，因此综合考虑，最终确定药物与基质的比例为1∶1.4。

3.3湿法超微粉碎时间的优选

虽然加液超微粉碎的粉碎效率高，粉碎效果好，但是过短的粉碎时间不会达到理想的效果，而且不能保证物料彻底混合，达不到高度混合的程度，并且不同的物料对应的最佳粉碎时间不同，可见粉碎时间是影响加液超微粉碎的重要因素之一，故对本工艺的粉碎时间进行了仔细考察，以确定最优粉碎时间，既达到理想的粉碎效果，又尽量避免过度消耗。

试验目的：对本方最优湿法超微粉碎时间进行优选

试验过程：按照处方比例，取1倍处方量药材，共6份，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞至极细粉；其余血竭等五味粉碎成粗粉，过2号筛。取人工麝香、冰片和血竭等五味药材粗粉，并按照1∶1.4的药物与基质的比例加入基质(聚乙二醇400∶丙二醇＝9∶1)，分别于振动式超微粉机(型号：BFM-6；振幅：5.5mm；总容量：6.3L)中粉碎10、20、30、40、50、60分钟，并分别在出料前10分钟加入上述朱砂水飞粉，继续粉碎10分钟，出料，即得。

试验结果：最优粉碎时间优选结果见下表。

表  最优粉碎时间优选结果表

注1：超微粉碎设备振动式超微粉碎机型号为BFM-6，振幅为5.5mm，总容量为6.3L，厂家为济南贝利粉技术工程有限公司。

注2：离心试验取5g样品置离心管中，以3000rpm离心5min，观察有无分层现象，及分层得程度(以+的个数表示分层程度)。

试验结论：本方药材加液超微粉碎40～60分钟均可达到理想的高度均质化的液态分散体系。

上述试验采用的粉碎设备为BFM-6型小型设备，考虑到大生产设备与小型设备的差异性，特补充了下面的试验，以优选适合大生产的合适的湿法超微粉碎时间。

试验目的：考察大生产设备与小型设备粉碎效果的差异性

试验设备：小型振动式超微粉碎机(BFM-6，总容量为6.3L)；大型振动式超微粉碎机(BFM-100，总容量为100L)

试验设计：按照处方比例，取1倍处方量药材，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞成极细粉；其余血竭等五味粉碎成粗粉，过2号筛。取人工麝香、冰片和血竭等五味药材粗粉，并按照1∶1.4的药物与基质的比例加入基质(聚乙二醇400∶丙二醇＝9∶1)，于小型振动式超微粉机中粉碎30分钟，加入上述朱砂水飞粉，继续粉碎10分钟；另取5倍处方量药材，共3份，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞成极细粉；其余血竭等五味粉碎成粗粉，过2号筛。取人工麝香、冰片和血竭等五味药材粗粉，并按照1∶1.4的药物与基质的比例加入基质(聚乙二醇400∶丙二醇＝9∶1)，分别于大型振动式超微粉机中粉碎40、50、60分钟，并分别在出料前10分钟加入上述朱砂水飞粉，继续粉碎10分钟，即得。

试验结果：具体试验结果见下表。

表  两种设备粉碎效果的差异性考察结果表

注1：离心试验取5g样品置离心管中，以3000rpm离心5min，观察有无分层现象，及分层得程度(以+的个数表示分层程度)。

试验结论：大型超微粉碎设备的空间较大，可能存在死角，粉碎率较小型设备低，其粉碎50～60分钟左右的效果与小型超微粉碎设备粉碎40分钟的相当。

由上述考察结果知，超微粉碎大生产设备(BFM-100)的效率相对较低，为保证理想的粉碎效果，同时考虑到大生产生产效率、能源消耗、生产成本等因素，确定本方加液超微粉碎的最适宜粉碎时间为60min。

通过上述试验考察，得出本方加液超微粉碎的最佳工艺为：以上八味，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞至极细粉，备用。其余五味粉碎成粗粉，过2号筛，与上述人工麝香、冰片混匀，所得药粉与朱砂水飞粉分别以⁶⁰Co-γ射线辐射灭菌(4～6kGy)。取上述药物粉末与基质350g(聚乙二醇400 315g和丙二醇35g，混合均匀)于振动式超微粉碎机中粉碎50分钟后，加入朱砂水飞粉，继续粉碎10分钟，即得高度均质化的液态分散体系。

为了控制产品质量，发明人还提出了一套质量控制方法，其中包含定性鉴别、含量测定和粒度检查等内容。

首先，定性鉴别包括如下项目：

(1)、取本发明药物制剂2～5g，加硅藻土3g，研匀，加乙醚30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取血竭对照药材0.1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液1μl及对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)、取乳香对照药材0.5g，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取【鉴别】(1)项下的供试品溶液与上述对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(10∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)、取本发明药物制剂2～8g，置圆底烧瓶中，加10％氯化钠溶液200ml与玻璃珠数粒，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，再加乙酸乙酯2ml，加热回流1小时，将挥发油测定器中的液体移至分液漏斗中，分取乙酸乙酯层，作为供试品溶液。另取冰片对照品适量，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液2～4μl及对照品溶液2μl，分别点于同-硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-三氯甲烷(4∶7)为展开剂，展开，取出，晾干；再以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

其次，含量测定包括如下步骤和条件：

(1)、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(1000ml中含磷酸1ml)(35∶65)为流动相；检测波长为440nm；柱温40℃。理论板数按血竭素峰计算应不低于2000；

(2)、对照品溶液的制备：取血竭素高氯酸盐对照品适量，精密称定，加3％磷酸甲醇溶液制成每1ml血竭素高氯酸盐30μg的溶液(相当于21.79μg的血竭素)，即得；

(3)、供试品溶液的制备：取本发明药物制剂0.5～2g，研匀，取约0.5g，精密称定，精密加入3％磷酸甲醇溶液50ml，称定重量，水浴回流30分钟，放冷，再称定重量，用3％磷酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本组合物制剂每单位量含血竭以血竭素(C₁₇H₁₄O₃)计，不得少于1.4mg。

上述单位量是指含相当0.25g原药材的成品药剂量。

下面通过主要药效学实验和实施例对本发明作进一步说明。

一、镇痛作用

1、对小鼠因热板所致痛阈值的影响

【试验目的】观察七厘软胶囊对小鼠因热板所致痛阈值的影响。

【受试药物】

七厘软胶囊(内容物按发明技术方案最佳配比的药材粗粉与PEG-400等基质混合，经超微湿法粉碎制得；处方药材量250g，制成软胶囊内容物600g；采用了新的制备工艺，内容物粒度达到10μm以下，提高了药物的有效利用度；在药效学预试验基础上，制备了较原散剂日服生药量减半的七厘软胶囊，即处方生药量减半，服用量不变)：自制，批号：20061101；规格为0.6g/粒，每粒含生药量为0.25g。

配制使用方法：用0.5％CMC-Na生理盐水溶液稀释到所需浓度给药，4℃冰箱保存；设置小鼠大、中、小三个给药剂量。大剂量组：取9g软胶囊内容物(含生药量3.75g)，加0.5％CMC-Na生理盐水溶液稀释至100ml，得药物浓度为0.0375g生药/ml。按小鼠灌胃0.2ml/10g(20ml/kg)计算，小鼠的日服用量为0.75g生药/kg，相当于临床拟用量的20倍(本品的拟服用生药量为原标准的一半，原标准为1.5g/次×3次/日＝4.5g/日，则本品的临床拟用量应为4.5g/日×(1/2)/60kg＝0.0375g生药/kg)；中剂量组：取4.5g软胶囊内容物(含生药量1.875g)，加0.5％CMC-Na生理盐水溶液稀释至100ml，得药物浓度为0.01875g生药/ml，小鼠的日服用量为0.375g生药/kg，相当于临床拟用量的10倍；小剂量组：取2.25g软胶囊内容物(含生药量0.9375g)，加0.5％CMC-Na生理盐水溶液稀释至100ml，得药物浓度为0.00937g生药/ml，小鼠的日服用量为0.188g生药/kg，相当于临床拟用量的5倍。

空白对照：0.5％CMC-Na生理盐水溶液。

阳性对照药：七厘散(原剂型，为药材经普通粉碎制得，药物粒度约为100目，折合为150μm左右)，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产，批号6100011，服用一次1.0～1.5g，一日1～3次，成人临床日服用最大生药量为4.5g，按体重计算为0.075g生药/kg。小鼠试验采用散剂临床用量的20倍，即1.5g生药/kg，用0.5％的CMC-Na生理盐水溶液配成浓度为7.5％(取粉末7.5g，稀释至100ml)，按20ml/kg给药符合要求。

七厘干法超微粉(自制，为药材粗粉加适量辅料经干法超微粉碎制得，药物粒度达13μm左右；含生药量为95％，加入了5％的辅料)。配制方法同七厘散，给药剂量及计算同七厘软胶囊，小鼠试验采用软胶囊拟临床用量的26.7倍，即1.0g生药/kg，用0.5％的CMC-Na生理盐水溶液配成浓度为5.0％，按20ml/kg给药符合要求，取5.26g七厘干法超微粉(相当于生药量为5g)到100ml符合灌胃给药要求。

【试验动物】

来源，种属，品系，合格证：安徽省实验动物中心提供，SPF级，昆明种小鼠，许可证号：SCXK(皖)2005-0001号。

体重：18～22g。

动物数：♀；60只，每组10只(筛选后每组取9只)。

实验环境：实验室温度为18～28℃，相对湿度为40～70％。

颗粒饲料：由南京安立默科技有限公司提供。

【试剂及仪器】

热板仪：自制；

电热恒温水浴锅：上海医疗器械厂产品。

【试验方法】

参照文献方法^【1】，取♀性昆明种小鼠60只，给药前将小鼠放入热板上(将恒温水浴调节至55±0.5℃，放入1000ml的薄铁皮烧杯，底部接触水面)，用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间(s)作为该鼠的给药前痛阈值，应挑选5～30s以内者为合格。取测痛阈值后筛选出痛阈值符合要求的小鼠54只，按痛阈值和体重随机分成6组。分别为空白对照组；七厘散组(1.5g生药/kg，相当于散剂临床用量的20倍)；干法超微粉组(1.0g生药/kg，相当于软胶囊拟临床用量的26.7倍)；七厘软胶囊大、中、小剂量组(0.750、0.375、0.188g生药/kg，分别相当于软胶囊拟临床拟用量的20、10、5倍)。连续给药5天，于末次给药后30min、60min将小鼠放入热板上，测定痛阈值以及痛阈值提高百分率，并作t检验，比较组间差异显著性。

【试验结果】

试验表明，七厘软胶囊大、中、小剂量(0.750、0.375、0.188g生药/kg，分别相当于临床用量的20、10、5倍)灌胃给予小鼠5天后，可明显提高因热板所致小鼠的痛阈值和痛阈值提高百分率，经统计学分析，在给药后30min和60min时七厘软胶囊与空白对照组相比具有显著意义(分别为P＜0.05～P＜0.001)，且呈一定的量效关系；并且，七厘软胶囊的药理作用优于七厘散，在同样的临床剂量时(20倍)七厘软胶囊的生药量虽只有七厘散的一半，但其药理作用软胶囊还略优于散剂；同时，湿法超微粉碎制成的七厘软胶囊药理作用优于干法超微粉，在软胶囊临床剂量比干法超微粉低的情况下(软胶囊为20倍，干法超微粉为26.7倍)，其药理作用软胶囊还略优于干法超微粉；提示七厘散在采用新工艺制成七厘软胶囊后，在生药量减半的情况下药理作用不低于原剂型，同时提示七厘软胶囊对超温度热痛具有一定的镇痛作用。结果见下表。

表  七厘软胶囊对小鼠因热板所致痛阈值的影响(x±SD，n＝9)

注：经t检验，各组与空白对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，**P＜0.001。

2、对小鼠因醋酸所致扭体次数的影响

【试验目的】观察七厘软胶囊对小鼠因醋酸所致扭体次数的影响。

【受试药物】同前。

【动物】同前。

【试剂及仪器】

醋酸：淮南化学试剂厂出品，批号：031013。

【试验方法】

参照文献方法^【1】，取小鼠60只，随机分成6组，分组及给药剂量同前，分别灌胃给予0.2ml/10g相应供试液，连续6天，末次给药后30min腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，记录注射致痛剂后15～25min(共10min)内各鼠扭体次数，比较组间差异，结果进行统计分析(t检验)。

【试验结果】

试验表明，七厘软胶囊大、中剂量灌胃给予小鼠，可减少0.6％醋酸所致小鼠的扭体次数，与空白对照组相比具有统计学差异(分别为P＜0.01和P＜0.01)，呈一定的量效趋势。并且，七厘软胶囊的药理作用优于七厘散，在同样的临床剂量时(20倍)七厘软胶囊的生药量虽只有七厘散的一半，但其药理作用软胶囊还略优于散剂；同时，湿法超微粉碎制成的七厘软胶囊药理作用优于干法超微粉，在软胶囊临床剂量比干法超微粉低的情况下(软胶囊为20倍，干法超微粉为26.7倍)，其药理作用软胶囊还略优于干法超微粉；提示七厘散在采用新工艺制成七厘软胶囊后，在生药量减半的情况下药理作用不低于原剂型，同时表明七厘软胶囊对醋酸腹腔注射引起的大面积深部疼痛有一定的对抗作用。结果见下表。

表  七厘软胶囊对因醋酸所致小鼠扭体次数的影响(x±SD)

注：经t检验，各组与空白对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

二、抗炎作用

1、对小鼠因二甲苯所致耳廓肿胀度的影响

【试验目的】观察七厘软胶囊对小鼠因二甲苯所致耳廓肿胀度的影响。

【受试药物】同前

【试验动物】同前

【试剂及仪器】

二甲苯：无锡医药采购供应站经销，东湖塘化工厂出品；

JNB型精密扭力天平：上海第二天平仪器厂产品。

【试验方法】

参照文献方法^【1】，取昆明种小鼠60只，随机分成6组，分组及给药剂量同前，分别灌胃给予0.2ml/10g相应供试液，连续7天，末次给完药后30min时做试验。末次给药后30min每鼠用乙醚麻醉，将二甲苯致炎液涂在小鼠左耳前后两面，每面约0.025ml，共0.05ml/每耳，右耳作对照，1h后，将小鼠断头处死，沿耳廓基线剪下两耳，用9mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，用扭力天平称重。每鼠的左耳片重量减去右耳片重量的增加百分率即为肿胀程度。计算各组肿胀度之均值与标准差，并作t检验，比较组间差异显著性。

【试验结果】

试验表明，小鼠耳廓给予二甲苯后，可以造成耳廓肿胀炎症模型。给予七厘软胶囊后，肿胀度降低；其中七厘软胶囊中、大剂量组与空白对照组相比，有显著意义(P＜0.05和P＜0.01)，但量效关系不明显。并且，七厘软胶囊的药理作用优于七厘散，在同样的临床剂量时(20倍)七厘软胶囊的生药量虽只有七厘散的一半，但其药理作用软胶囊还略优于散剂；同时，湿法超微粉碎制成的七厘软胶囊药理作用优于干法超微粉，在软胶囊临床剂量比干法超微粉低的情况下(软胶囊为20倍，干法超微粉为26.7倍)，其药理作用软胶囊还略优于干法超微粉；提示七厘散在采用新工艺制成七厘软胶囊后，在生药量减半的情况下药理作用不低于原剂型，同时表明七厘软胶囊对化学物质刺激所致急性炎症模型具有一定的对抗作用。结果见下表。

表  七厘软胶囊对小鼠因二甲苯所致耳廓肿胀度的影响(x±SD)

注：经t检验，各组与空白对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

2、对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

【试验目的】观察七厘软胶囊对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响。

【受试药物】

七厘软胶囊：自制，批号：20061101；规格为0.6g/粒，每粒含生药量为0.25g。

配制使用方法：用0.5％CMC-Na生理盐水溶液稀释到所需浓度给药，4℃冰箱保存；设置小鼠大、中、小三个给药剂量。大剂量组：取9g软胶囊内容物(含生药量3.75g)，加0.5％CMC-Na生理盐水溶液稀释至100ml，得药物浓度为0.0375g生药/mi。按小鼠灌胃0.2ml/10g(20ml/kg)计算，小鼠的日服用量为0.75g生药/kg，相当于临床拟用量的20倍(本品的拟服用生药量为原标准的一半，原标准为1.5g/次×3次/日＝4.5g/日，则本品的临床拟用量应为4.5g/日×(1/2)/60kg＝0.0375g生药/kg)；中、小剂量类推，分别相当于临床拟用量的10、5倍。

空白对照：0.5％CMC-Na生理盐水溶液。

阳性对照药：七厘散(原剂型，为药材经普通粉碎制得，药物粒度约为100目，折合为150μm左右)，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产，批号6100011，服用一次1.0～1.5g，一日1～3次，成人临床日服用最大生药量为4.5g，按体重计算为0.075g生药/kg。小鼠试验采用散剂临床用量的20倍，即1.5g生药/kg，用0.5％的CMC-Na生理盐水溶液配成浓度为7.5％(取粉末7.5g，稀释至100ml)，按20ml/kg给药符合要求。

【试验动物】

来源，种属，品系，合格证：安徽省实验动物中心提供，SPF级，昆明种小鼠，许可证号：SCXK(皖)2005-0001号。

体重：18～22g。

动物数：♂♀各半；50只，每组10只。

实验环境：实验室温度为18～28℃，相对湿度为40～70％。

颗粒饲料：由南京安立默科技有限公司提供。

【试剂及仪器】

依文思蓝，上海化学试剂采购供应站行知校办厂分装，批号：881102。

醋酸：天津市东丽区天大化学试剂厂出品，批号：020215。

UV-240紫外分光光度计：日本Shimadzu公司生产。

80-2沉淀离心机，上海手术器械厂产品。

TG 328B型电光分析天平，上海天平仪器厂产品。

【试验方法】

参照文献方法，取小鼠50只，随机分成5组，分别为空白对照组；七厘散组(1.5g生药/kg，相当于临床用量的20倍)；七厘软胶囊大、中、小剂量组(0.750、0.375、0.188g生药/kg，分别相当于临床用量的20、10、5倍)，分别灌胃给予0.2ml/10g相应供试液，连续7天。于末次药后30min尾静脉注射依文思兰生理盐水溶液0.1ml/10g，然后立即腹腔注射0.6％醋酸0.1ml/10g，20min后处死动物，用生理盐水每次约2-3ml清洗腹腔3次，合并腹腔洗液，加生理盐水至10ml，混匀后，3000r/min离心15min，取上清液加入0.1M的NaOH溶液0.1ml，于590nm在721分光光度计上比色，测定光密度，结果进行统计分析(t检验)。

【试验结果】

试验表明，七厘软胶囊可明显抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增加，与空白对照组相比较，有非常显著意义，其中七厘软胶囊小、中、大剂量组经统计分析与空白对照组相比分别为P＜0.01、P＜0.05和P＜0.001，但量效关系不明显，只呈一定的量效趋势。七厘软胶囊的药理作用优于七厘散，在同样的临床剂量时(20倍)七厘软胶囊的生药量虽只有七厘散的一半，但其药理作用软胶囊还略优于散剂。提示七厘软胶囊具有一定的抗急性深部炎症作用。见下表。

表  七厘软胶囊对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(x±SD)

注：经t检验，各组与空白对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

3、对因角叉菜胶所致大鼠足肿胀度的影响

【试验目的】观察七厘软胶囊对大鼠因角叉菜胶所致足肿胀度及血清和足组织中MDA、PGE₂含量的影响

【受试药物】

七厘软胶囊：自制，批号：20061101；规格为0.6g/粒，每粒含生药量为0.25g。

配制使用方法：用0.5％CMC-Na生理盐水溶液稀释到所需浓度给药，4℃冰箱保存；试验大鼠大剂量相当于临床拟用量的10倍，用量为0.375g生药/kg，大鼠给药1.0ml/100g(10ml/kg)，需所配浓度为：0.0375g生药/ml，每0.6g软胶囊内容物相当于0.25g生药，因此取9g软胶囊内容物(3.75g生药)配到100ml符合灌胃给药要求，中、小剂量类推，分别相当于临床拟用量的5、2.5倍。

空白对照：0.5％CMC-Na生理盐水溶液。

模型组：0.5％CMC-Na生理盐水溶液。

阳性对照药：七厘散，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产，批号6100011，服用量一次1.0～1.5g，一日1～3次，成人临床日服用最大生药量为4.5g。按体重计算为0.075g生药/kg。大鼠试验采用临床用量的10倍，即0.75g生药/kg，用0.5％的CMC-Na生理盐水溶液配成浓度为7.5％(取7.5g散剂，稀释至100ml)，按10ml/kg给药符合要求。

七厘干法超微粉：自制，加5％的辅料，即生药含量为95％，配制方法同七厘散，给药剂量及计算同七厘软胶囊，大鼠试验采用软胶囊临床拟用量的13.3倍，即0.50g生药/kg，用0.5％的CMC-Na生理盐水溶液配成浓度为5.0％，按10ml/kg给药符合要求，取5.26g七厘干法超微粉(相当于生药量为5.0g)到100ml符合灌胃给药要求。

【试验动物】

来源，种属，品系，合格证：上海西普尔-必凯实验动物有限公司，清洁级，SD大鼠，远交封闭系，沪动合证字2003-0002号。

体重：220～250g。

性别：♂。

动物数：56只，每组8只。

实验环境：实验室温度为18~28℃，相对湿度为40~70％。

颗粒饲料：由南京安立默科技有限公司提供。

【试剂及仪器】

丙二醛(malondialdehyde，MDA)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所产品，批号：20070110。

考马斯亮兰测定试剂盒，南京建成生物工程研究所产品，批号：20070212。

前列腺素E₂放射免疫分析试剂盒，苏州大学血液研究所提供，生产日期：2007.2.10。

角叉菜胶：辽宁省药物研究所分装。

GC-9nγ放射免疫计数仪，美国产。

大鼠足爪测量仪：安徽省药物研究所自制

80-2沉淀离心机，上海手术器械厂产品。

UV-240紫外分光光度计：日本Shimadzu公司生产。

手术器械若干。

【试验方法】

参照文献【2】方法，选用体重200~220g的雄性大鼠56只，随机分成7组，分别为为空白对照组；模型组；七厘散组(0.75g生药/kg，相当于散剂临床用量的10倍)；干法超微粉组(0.50g生药/kg，相当于软胶囊拟临床用量的13.3倍)；七厘软胶囊大、中、小剂量组(0.375、0.188、0.094g生药/kg，分别相当于软胶囊拟临床用量的10、5、2.5倍)。连续灌胃给药7天，第7天给药1小时后，于每只大鼠右后足皮下注射1％的角叉菜胶生理盐水溶液0.1ml致炎，分别在致炎前和致炎后1、2、3、4小时用自制足爪容积测量仪测量致炎侧足爪容积，以致炎前后足爪容积差值表示肿胀度。比较各组与模型组的差异，并进行统计学处理(t检验)。

4小时后于股动脉放血处死大鼠，血标本3000转/分钟离心15分种，取上清液于-20℃冰箱保存待测生化指标。从踝关节0.5cm处剪下炎性肿胀足爪，称重，剪碎，加入生理盐水4ml浸泡1小时，按重量调整浓度，离心浸泡液，取上清液于-20℃冰箱保存待测以下各种指标。

1、血清和足组织中MDA含量的测定

吸取大鼠足肿胀法项下已配制好的上清液或血清0.1ml，严格按照试剂盒步骤进行。

2、足组织中PGE₂含量的测定

吸取大鼠足肿胀法项下已配制好的上清液按放免试剂盒的要求进行测量。

【试验结果】

试验表明，七厘软胶囊可明显抑制大鼠因角叉菜胶所致足肿胀度，不同时间的肿胀度与模型对照组相比较有非常显著意义，其中七厘软胶囊小、中、大剂量组经统计分析与模型对照组相比分别为P＜0.05~P＜0.001，提示七厘软胶囊具有一定的抗炎作用。见表5。

同时，模型大鼠足爪给予角叉菜胶后，足组织中PGE₂的含量升高，七厘软胶囊三剂量可抑制大鼠因角叉菜胶所致足组织中PGE₂的含量的升高，与模型对照组相比较，其中七厘软胶囊大剂量组经统计分析为P＜0.01，提示七厘软胶囊具有一定的抗炎症介质作用。见表6。

同时，模型大鼠足爪给予角叉菜胶后，足爪组织及血清中MDA的含量升高，七厘软胶囊三剂量可抑制大鼠因角叉菜胶所致足组织和血清中MDA的含量的升高，与模型对照组相比较，足组织中MDA含量的升高七厘软胶囊中、大剂量组经统计分析分别为P＜0.01和P＜0.001，而血清中MDA含量与模型对照组相比无统计学意义，只有一定的降低趋势。提示七厘软胶囊具有一定的抗炎作用；见表7。

另外，七厘软胶囊的药理作用优于七厘散，在同样的临床剂量时(10倍)七厘软胶囊的生药量虽只有七厘散的一半，但其药理作用软胶囊还略优于散剂；同时，湿法超微粉碎制成的七厘软胶囊药理作用优于干法超微粉，在软胶囊临床剂量比干法超微粉低的情况下(软胶囊为10倍，干法超微粉为13.3倍)，其药理作用软胶囊还略优于干法超微粉；提示七厘散在采用新工艺制成七厘软胶囊后，在生药量减半的情况下药理作用不低于原剂型。

表明七厘软胶囊对角叉菜胶刺激所致大鼠急性炎症模型具有一定的对抗作用，并可降低炎症组织中炎症介质PGE₂、MDA的含量。结果见下表。

表  对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀的影响(x±SD，n＝8)

注：经t检验，模型组与空白组相比，各给药组与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

表对炎症大鼠足爪组织中PGE₂含量的影响

注：经t检验，模型组与空白组相比，各给药组与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

表  对炎症大鼠血清和足爪组织中MDA含量的影响(x±s，n＝8)

注：经t检验，模型组与空白组相比，各给药组与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

结论：七厘软胶囊具有化瘀消肿，止痛止血之功能，用于跌扑损伤，血瘀疼痛，外伤出血证。药效学试验结果表明，七厘软胶囊的药理作用优于七厘散，在同样的临床剂量时七厘软胶囊的生药量虽只有七厘散的一半，但其药理作用软胶囊还略优于散剂；同时，超微湿法制成的七厘软胶囊药理作用优于干法超微粉，在软胶囊临床剂量比干法超微粉低的情况下，其药理作用软胶囊略优于干法超微粉；提示七厘散在采用新工艺制成七厘软胶囊后，在生药量减半的情况下药理作用不低于原剂型。为临床使用该药治疗急性软组织损伤提供了理论依据。

附图说明

附图为不同时间所取超微物料中硫化汞含量变化趋势图。

具体实施方式：

实施例一：

【处方】血竭    12kg        乳香(制)1.5kg  没药(制)1.5kg

        红花    1.5kg       儿茶    2.6kg  冰片    0.15kg

        人工麝香0.15kg      朱砂    1.2kg

【制法】以上八味，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞至极细粉，备用；其余五味粉碎成粗粉，过2号筛，与上述人工麝香、冰片混匀，所得药粉与朱砂水飞粉分别以⁶⁰Co-γ射线辐射灭菌(4～6kGy)。取上述药粉与基质20.6kg(聚乙二醇18.54kg和丙二醇2.06g，混合均匀)于振动式超微粉碎机中粉碎混合20分钟后，加入朱砂水飞粉，继续粉碎混合10分钟，出料，制成软胶囊100000粒，即得。

实施例二：

【处方】血竭    15kg      乳香(制)2.5kg    没药(制)2.5kg

        红花    2.5kg     儿茶    3.6kg    冰片    0.2kg

        人工麝香0.2kg     朱砂    2kg

【制法】以上八味，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞至极细粉，备用；其余五味粉碎成粗粉，过2号筛，与上述人工麝香、冰片混匀，所得药粉与朱砂水飞粉分别以⁶⁰Co-γ射线辐射灭菌(4～6kGy)。取上述药粉与基质85.5kg(聚乙二醇57kg和丙二醇28.5kg，混合均匀)于振动式超微粉碎机中粉碎混合40分钟后，加入朱砂水飞粉，继续粉碎混合10分钟，出料，制成液体硬胶囊100000粒，即得。

实施例三：

【处方】血竭1363.1g  乳香(制)204.5g    没药(制)204.5g

红花    204.5g  儿茶327.2g    冰片16.4g

人工麝香16.4g   朱砂163.6g

【制法】以上八味，除人工麝香、冰片外，朱砂水飞至极细粉，备用；其余五味粉碎成粗粉，过2号筛，与上述人工麝香、冰片混匀，所得药粉与朱砂水飞粉分别以⁶⁰Co-γ射线辐射灭菌(4～6kGy)。取上述药粉与基质3500g(聚乙二醇3150g和丙二醇350g，混合均匀)于振动式超微粉碎机中粉碎混合50分钟后，加入朱砂水飞粉，继续粉碎混合10分钟，出料，制成软胶囊10000粒，即得。

实施例四：

对实施例三的产品进行质量检查：

定性鉴别：

(1)取本品4粒的内容物，加硅藻土3g，研匀，加乙醚30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取血竭对照药材0.1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液1μl及对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(2)取乳香对照药材0.5g，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取【鉴别】(1)项下的供试品溶液与上述对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(10∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)取本品8粒的内容物，置圆底烧瓶中，加10％氯化钠溶液200ml与玻璃珠数粒，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，再加乙酸乙酯2ml，加热回流1小时，将挥发油测定器中的液体移至分液漏斗中，分取乙酸乙酯层，作为供试品溶液。另取冰片对照品适量，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液2～4μl及对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-三氯甲烷(4∶7)为展开剂，展开，取出，晾干；再以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

粒度检查：

取10粒胶囊的内容物，混匀，取适量，以乙醇作分散介质，采用激光粒度分析仪湿法测定，D₅₀不得大于25μm。

含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(1000ml中含磷酸1ml)(35∶65)为流动相；检测波长为440nm；柱温40℃。理论板数按血竭素峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  取血竭素高氯酸盐对照品适量，精密称定，加3％磷酸甲醇溶液制成每1ml血竭素高氯酸盐30μg的溶液(相当于21.79μg的血竭素)，即得。

供试品溶液的制备  取本品内容物，研匀，取约0.5g，精密称定，精密加入3％磷酸甲醇溶液50ml，称定重量，水浴回流30分钟，放冷，再称定重量，用3％磷酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每粒含血竭以血竭素(C₁₇H₁₄O₃)计，不得少于1.4mg。每粒胶囊为0.6g，相当于原药材0.25g。

Claims (9)

1.一种新的中药制剂，其特征在于该制剂是按如下方法制得的：取朱砂12～20重量份水飞至极细粉，备用；取血竭120～150重量份、制乳香15～25重量份、制没药15～25重量份、儿茶26～36重量份、红花15～25重量份粉碎成粗粉，过2号筛；取人工麝香1.5～2.0重量份、冰片1.5～2.0重量份，与上述五味药的粉碎物混合后，加1～3倍量适宜的液体分散介质，于超微粉碎机中粉碎混合10～50分钟，加入朱砂水飞粉，继续粉碎混合10分钟，出料，制成所需剂型。

2.如权利要求1所述的药物制剂，其特征在于所用液体分散介质可以选自但不限于如下的一种或几种的组合：大豆油、花生油、菜子油、玉米油、芝麻油、红花油、油酸乙酯、椰子油酯类、向日葵油单甘油酯、蜂蜡、液体聚乙二醇、甘油、丙二醇、山梨醇、磷脂、胆固醇、吐温、司盘、泊洛沙姆。

3.如权利要求2所述的药物制剂，其特征在于分散介质优选为：聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐温中任意一种或几种的组合物。

4.如权利要求3所述的药物制剂，其特征在于聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐温的比例为6～9∶1～3∶0～3∶0～3。

5.如权利要求4所述药物制剂，其特征在于该制剂是按如下方法制得的：取朱砂16.36重量份，水飞至极细粉，备用；取血竭136.31重量份、制乳香20.45重量份、制没药20.45重量份、儿茶32.72重量份、红花20.45重量份粉碎成粗粉，过2号筛；取冰片1.64重量份、人工麝香1.64重量份与上述五味药的粉碎物混合后，加入聚乙二醇315重量份和丙二醇35重量份，混合均匀，置于振动式超微粉碎机中粉碎混合50分钟，加入朱砂水飞粉，继续粉碎混合10分钟，出料，制成软胶囊，即得。

6.权利要求1至5中任一项所述制剂的制备方法。

7.权利要求6所述制备方法在制备中药软胶囊剂、液体硬胶囊剂、口服乳剂及相关原料药中的应用。

8.权利要求1至5中任一项所述药物制剂的质量控制方法，该方法含有定性鉴别和含量测定内容，其特征在于定性鉴别含有以下项目：

a、取本发明药物制剂2～5g，加硅藻土3g，研匀，加乙醚30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取血竭对照药材0.1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液1μl及对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶0.1的三氯甲烷-甲醇混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b、取本发明药物制剂2～5g，加硅藻土3g，研匀，加乙醚30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取乳香对照药材0.5g，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶0.3的石油醚-乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c、取本发明药物制剂2～8g，置圆底烧瓶中，加10％氯化钠溶液200ml与玻璃珠数粒，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，再加乙酸乙酯2ml，加热回流1小时，将挥发油测定器中的液体移至分液漏斗中，分取乙酸乙酯层，作为供试品溶液；另取冰片对照品适量，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2～4μl及对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4∶7的石油醚-三氯甲烷混合液为展开剂，展开，取出，晾干；再以体积比为10∶1石油醚-乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

9.如权利要求8所述的质量控制方法，其特征在于其定量方法包括如下条件和步骤：

a、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为35∶65的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液混合液为流动相；检测波长为440nm；柱温40℃；理论板数按血竭素峰计算应不低于2000；

b、对照品溶液的制备：取血竭素高氯酸盐对照品适量，精密称定，加3％磷酸甲醇溶液制成每1ml血竭素高氯酸盐30μg的溶液，即得；

c、供试品溶液的制备：取本发明药物制剂0.5～2g，研匀，取约0.5g，精密称定，精密加入3％磷酸甲醇溶液50ml，称定重量，水浴回流30分钟，放冷，再称定重量，用3％磷酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

d、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。