CN101137391B - 重组高效复合干扰素的用途 - Google Patents

重组高效复合干扰素的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN101137391B
CN101137391B CN2006800077331A CN200680007733A CN101137391B CN 101137391 B CN101137391 B CN 101137391B CN 2006800077331 A CN2006800077331 A CN 2006800077331A CN 200680007733 A CN200680007733 A CN 200680007733A CN 101137391 B CN101137391 B CN 101137391B
Authority
CN
China
Prior art keywords
rsifn
interferon
virus
equivalent
provides
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN2006800077331A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101137391A (zh
Inventor
魏光文
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Superlab Far East Ltd
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Publication of CN101137391A publication Critical patent/CN101137391A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101137391B publication Critical patent/CN101137391B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/06—Anti-spasmodics, e.g. drugs for colics, esophagic dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明提供了具有改变的立体构型、高功效和低副作用的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)及其等效物的不同用途。因此，rSIFN-co可以以高剂量使用。rSIFN-co的一个特性是其在体外药效学研究中显示它不仅能抑制HBV的DNA复制，而且能抑制HBsAg和HBeAg的分泌。rSIFN-co的细胞毒性作用仅是目前临床应用的干扰素的八分之一(1/8)，但是其抗病毒作用比临床先用干扰素要高约5-20(5-20)倍。当在体内使用时，其具有更广泛临床应用范围以及更长的生物应答效应。本发明还提供了高效复合干扰素或其等效物，带有编码所述rSIFN-co及其等效物的密码子偏好的人工基因的合成，包含所述基因的载体以及用于表达所述rSIFN-co的适合的表达体系。最后，本发明提供了高效复合干扰素(rSIFN-co)及其等效物、生产方法和用途。

Description

重组高效复合干扰素的用途
本申请是2005年3月9日提交的第60/659,925号美国专利申请的部分继续申请案；本申请引用其全文作为参考。 
在整个本申请中，各种出版物均注明了出处。本申请引用这些出版物所揭示的全部内容作为参考，其目的在于更充分地阐述本发明所涉及的技术的情况。 
发明领域
本发明涉及生物工程学领域。具体而言本发明涉及一种具有改变的立体构型、高功效和低副作用的重组高效复合(super-compound)干扰素(rSIFN-co)或其等效物。因此，rSIFN-co可以以高剂量应用。本发明还涉及一种制备所述高效复合干扰素(rSIFN-co)或含有所述高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物的药物组合物的方法，以及所述干扰素或组合物在抗病毒和抗肿瘤治疗中的应用。 
发明背景 
IFN-con是一种利用基因工程方法，根据天然人类干扰素α亚型中存在的最常见的保守性氨基酸构建的新型干扰素分子。第4,695,623号以及第4,897,471号美国专利对其进行了说明。经证实，IFN-con具有广谱的干扰素活性，抑制病毒和肿瘤以及天然的杀伤细胞活性。安进公司(Amgen Inc.)的第5,372,808号美国专利公开了治疗性 
Figure G200680007733120070912D000011
(复合干扰素α-1，interferon alfacon-1)。安进公司(Amgen Inc.)的第97193506.8号中国专利公开了 
Figure G200680007733120070912D000012
(复合干扰素α-1，interferon alfacon-1)对丙型肝炎的再治疗。深圳九先生物工程有限公司的第98114663.5号中国专利公开了重组人α型复合干扰素治疗乙型肝炎和丙型肝炎。 
美国食品及药品管理局(FDA)于1997年底批准安进公司使用大肠杆菌(E.coli.)制备用于丙型肝炎临床治疗的 
Figure G200680007733120070912D000013
(复合干扰素α-1，interferon alfacon-1)。 
通过检测HBsAg和HBeAg能够诊断出乙型肝炎病人。α干扰素通常被用于临床治疗乙型肝炎。α干扰素与细胞膜表面受体结合，从而抑制DNA和RNA(核糖核酸)复制，诱导某些酶阻碍肝炎感染的细胞中的病毒复制。所有的干扰素都能够抑制病毒的DNA复制，但是它们不能抑制e和s抗原的表达。 
非典型肺炎，又称为严重急性呼吸道综合征(SARS)，其在中国广东省被首次发现，爆发并扩散至几个国家。从2003年2月和3月起，在香港、越南和加拿大的病人中检测到相似的病例。世界卫生组织(WHO)针对该病发布了全球性警报。在2003年3月中旬，SARS出现在远东的护理过具有严重呼吸疾病的病人的医务工作者和家庭成员中。这些病例中的许多都可通过多个传播链条追溯到一名来自广东省并且曾到香港参观的医务工作者，该人因肺炎在香港住院并死亡。截至2003年4月底，全世界超过25个国家向WHO报告了数千例SARS病例和数百例SARS相关的死亡。这些病例中的大多数是通过与在家中的或医疗场所的SARS病人接触而发生的。本发明提供了一种预防和/或治疗SARS的方法。 
本发明公开了重组高效复合干扰素(rSIFN-co)，及其制备方法和用途。特别是，本发明公开的高效复合干扰素能够抑制、预防和/或治疗肝炎病毒、SARS病毒、或者病毒诱发的上呼吸道疾病、例如禽流感病毒的流感病毒以及埃博拉病毒(Ebola virus)。 
此外，与其它可用的干扰素相比，rSIFN-co能以较小的副作用有效地预防和/或治疗病毒性疾病和肿瘤。 
发明概述 
本发明提供一种具有改变的立体构型、高功效和低副作用的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)及其等效物。因此，rSIFN-co可以以高剂量应用。 
本发明提供一种包含载体的表达体系，该载体包含编码高效复合干扰素或其等效物的基因。本发明还提供了一种包含载体的宿主细胞，该载体包含编码重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物的基因。所述宿主细胞可以是真核的或原核的，例如大肠杆菌。 
本发明提供一种抑制、预防或治疗受试者的病毒性疾病，或者抑制或治疗受试者的肿瘤的方法，其包括向受试者给予有效量的高效复合干扰素或其等效物。 
在本发明提供的上述方法中，高效复合干扰素以口服、经静脉注射、肌 肉注射、腹膜内注射、皮下注射、鼻或粘膜给药、或者经呼吸器吸入的方式给药。 
本发明提供预防或治疗病毒性疾病的方法，其中病毒性疾病是甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、其它类型的肝炎、由Epstein-Barr病毒、人体免疫缺陷病毒(HIV)、埃博拉病毒(Ebola virus)、严重急性呼吸道综合征病毒(SARS)、流感病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、或其它类型的疱疹病毒、乳头多瘤空泡病毒(papovaviruses)、痘病毒、小核糖核酸病毒、腺病毒、鼻病毒、I型人类T细胞白血病病毒、或者II型人类T细胞白血病病毒，或者III型人类T细胞白血病病毒引起的病毒感染。 
本发明提供预防或治疗病毒性疾病的方法，其中病毒性疾病是人类免疫缺陷病毒(HIV)和埃博拉病毒(Ebola virus)。 
本发明提供一种具有抗肝炎活性的方法。它能够抑制HBV-DNA复制，HBsAg和HBeAg的生成。 
本发明提供一种预防或治疗上呼吸道感染疾病的方法。 
本发明提供一种预防或治疗肿瘤或癌症的方法，其中肿瘤是皮肤癌、基细胞癌以及恶性黑色素瘤、肾细胞癌、肝癌、甲状腺癌、鼻咽癌、实体癌、前列腺癌、胃/腹部癌、食道癌、直肠癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、以及浅表性膀胱癌、血管瘤、扁平上皮癌、宫颈癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、神经胶质瘤、白血病、急性白血病和慢性白血病、慢性粒细胞白血病、毛细胞白血病、淋巴腺瘤、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、或者卡波西氏肉瘤(Kaposi′s sarcoma)。 
本发明提供一种预防或治疗受试者的由病毒诱发的疾病的方法，包括向受试者给予有效量的重组高效复合干扰素或其功能上的等效物。 
高效复合干扰素(rSIFN-co)可以以口服、经静脉注射、肌肉注射、腹膜内注射、皮下注射、鼻或粘膜给药、或者经呼吸器吸入的方式给药。 
本发明提供一种抑制病毒诱发的疾病的病原体的方法，包括将病原体与有效量的高效复合干扰素或其等效物接触。 
本发明还提供一种抑制病毒诱发的疾病的方法，包括将有效量的高效复合干扰素与所述病毒或细胞接触。这种接触可以是直接的或间接的。 
本发明提供一种组合物，其包含有效量的能够抑制、预防或治疗病毒诱发的疾病的高效复合干扰素，以及适合的载体。 
本发明提供一种药物组合物，其包含有效量的能够抑制、预防或治疗受 试者的由病毒诱发的疾病的重组高效复合干扰素，以及药学上可接受的载体。 
本发明提供一种预防或治疗受试者的肿瘤的方法，其包括给予受试者有效量的重组高效复合干扰素或其功能上的等效物。 
本发明提供一种抑制肿瘤的方法，其包括将病原体与有效量的高效复合干扰素或其等效物接触。 
本发明还提供一种抑制肿瘤的方法，其包括将有效量的高效复合干扰素与所述病毒或细胞接触。这种接触可以是直接的或间接的。 
本发明提供一种组合物，其包含有效量的能够抑制、预防或治疗肿瘤的高效复合干扰素，以及适合的载体。 
本发明提供一种药物组合物，其包含有效量的能够抑制、预防或治疗受试者的肿瘤的重组高效复合干扰素，以及药学上可接受的载体。 
附图的详细说明 
图1.根据大肠杆菌密码子选择设计的rSIFN-co的cDNA序列以及推导的rSIFN-co的氨基酸序列。 
图2A-B.另一种高效复合干扰素的序列。 
图3.使用EXCEL程序设计的rSIFN-co抑制野生型HIV的图，其中荧光素酶作为Y轴，rSIFN-co的浓度作为X轴。图中表现出清晰的反向剂量依赖关系。 
图4.使用EXCEL程序设计的rSIFN-co抑制抗药性HIV的图，其中荧光素酶作为Y轴，rSIFN-co的浓度作为X轴。图中表现出清晰的反向剂量依赖关系。 
图5.rSIFN-co对流感病毒的抑制：左边显示对照孔，其中加入流感病毒，不加干扰素，细胞具有明显的细胞病变(CPE)，例如细胞呈圆形，细胞坏死，反射光减少和出现脱落现象。右边显示实验孔，其中包含流感病毒和浓度为每毫升10纳克(ng/ml)的rSIFN-co，并具有与正常细胞类似的形态。 
发明详述 
重组高效复合干扰素(rSIFN-co)
本发明提供一种具有改变的立体构型的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物。本发明公开了具有相同一级序列的蛋白质可能具 有不同的生物活性。如本申请所述，具有相同氨基酸序列的蛋白质可以具有不同活性。这些蛋白质的功效有时可以提高，或有时由于立体构型的改变表现出新的功能。Wei(2005；公开号WO2005/02177A2；国际申请号为PCT/US2004/028068)提供了一系列调整蛋白质立体构型的方法。 
本申请定义，等效物是指与复合干扰素功能相近的分子。等效物可以是原始序列的缺失突变体、取代突变体或置换突变体。可选择的是，本发明也试图涵盖重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的模拟分子。模拟分子可以是肽、多肽或小的化学实体。 
本申请记载的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)包括但不限于干扰素α、β、γ或ω。在一个实施方案中，它是指IFN-1α、IFN-2β或其它突变体。 
在另一个实施方案中，公开的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)与干扰素α、β、γ、ω或其组合、以及第4,695,623和4,897,471号美国专利公开的干扰素相比具有更高的功效。该重组高效复合干扰素(rSIFN-co)被认为具有独特的二级或三级结构，其制备过程中的变化导致其三维结构的改变。Wei(2004；US2004/0202641 A1；美国申请第10/650,365号)也记载了这种重组高效复合物。 
本申请记载的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的空间结构的改变是源于其生产工艺的改变。 
较低副作用 
与其它干扰素相比，重组高效复合干扰素(rSIFN-co)具有较小的副作用。这样较低的副作用使之能够以较高剂量应用于需要干扰素治疗的病人。这样较低的副作用使应用rSIFN-co来预防和/或治疗其它疾病成为可能。相应地，本发明提供了向受试者给药时具有较小副作用的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)。 
本发明提供与所有目前可用的干扰素相比具有较小副作用的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)。 
本发明进一步提供一种治疗或预防受试者的病毒性疾病或肿瘤的方法，其包括给予受试者有效量的rSIFN-co，rSIFN-co与所有目前可用的干扰素相比具有较小副作用。因此，rSIFN-co可以以高剂量使用。在一个实施方案中，重组高效复合干扰素的有效量是纳克级的。 
rSIFN-co的生产工艺
人工基因
本发明还提供编码高效复合干扰素或其等效物的人工基因。设计人工基因是常规的技术。许多生成核苷酸序列的方法以及其它分子生物学技术先前已经有记载。参见，例如，Joseph Sambrook和David W.Russell，分子克隆：实验手册(Molecular Cloning：A laboratory Manual)，2000年12月，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)出版。 
重组高效复合干扰素(rSIFN-co)还可以利用其基因来制备，即根据大肠杆菌的密码子偏好性对野生序列进行调整并人工合成cDNA。关于所述密码子选择(偏好)的广泛讨论见第4,695,623号美国专利。参见，例如第6栏第41行至第7栏第35行。 
载体 
本发明提供一种包含基因的载体，该基因编码高效复合干扰素或其等效物。本发明提供一种包含载体的表达体系，该载体包含编码高效复合干扰素或其等效物的基因。细胞包括但不限于原核或真核细胞。本发明还提供一种包含载体的宿主细胞，该载体包含编码重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物的基因。 
本发明提供一种制备具有改变的立体构型和增强的抗病毒活性的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的方法，其包括以下步骤： 
(a)将带有用于表达的偏好密码子的编码所述干扰素的核酸分子插入适合的宿主；以及 
(b)将经过插入的宿主置于适合所述干扰素表达的条件中。 
本发明提供制备重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的方法，其进一步包括收获表达的干扰素。 
表达体系 
上述重组高效复合干扰素(rSIFN-co)可以通过使用特定的启动子、强化剂或其它调节元件的高效表达体系来制备。在一个实施方案中，启动子是可诱导的。所述可诱导的启动子包括但不限于PBAD，热休克启动子或者重金属可诱导的启动子。热休克启动子经物理手段活化，而其它启动子经化学手段活化，例如IPTG或四环素。将IPTG加入细胞以激活下游基因或将其移去 以钝化基因。四环素可用于诱导启动子或调节启动子的强度。参见，http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/plasmid_inducible.html。 
在一个实施方案中，启动子是PBAD。自九十年代早期，通过AraC控制PBAD的表达和抑制机制的特性已经被广泛地研究，并且已经在分子水平上对它们的相互作用进行了剖析。参见，Schleif，R.S.1992 DNA环化(looping).Annu.Rev.Biochem.61：199-223。AraC蛋白既是正调节物又是负调节物，当其存在时，它从PBAD启动子启动转录，当其不存在时，转录以很低的速率发生。参见，Guzman，L.M.et al.(1995) J.Bact.177：4121-4130。PBAD启动子的功效和机制是其他普通技术人员熟知的，也是商业上可以得到的。参见， http://www.invitrogen.com/content/sfs/brochures/710_01619_pBAD_bro.pdf。 
商业上可获得的Invitrogen表达试剂盒包含被设计成对表达水平进行精确控制的pBAD载体。araBAD启动子启动基因表达。通过araC基因的产物进行正向和反向的调节，所述araC基因的产物是与L-阿拉伯糖形成复合物的转录调节子。当阿拉伯糖不存在时，AraC二聚体接触araBAD操纵子的O2和I1半位点，形成210bp的DNA环。为了达到最大的转录激活，需要两个条件：第一，阿拉伯糖与AraC结合。蛋白释放O2位点，结合与I1位点相邻的I2位点。这样使DNA环释放，转录开始。第二，cAMP激活蛋白(CAP)-cAMP复合物与DNA结合，刺激AraC与I1和I2结合。向生长培养基中加入葡萄糖能够抑制基础表达的水平。葡萄糖通过降低cAMP水平发挥作用，随之降低了CAP的结合。当cAMP的水平降低时，转录激活减少。Invitrogen的pBAD载体是经特别设计用于最高表达和简便应用的。 
目前可以使用9种pBAD载体： 
Figure G200680007733120070912D000072
pBAD/His、pBAD/Myc-His、pBAD-DEST49、pBAD/gIII和pBAD/Thio-E。所有的pBAD载体都具有下述特征： 
1.用于剂量依赖性调节的araBAD启动子； 
2.用于araBAD启动子严格控制的araC基因； 
3.用于提高翻译效率的最适宜的核糖体结合位点； 
4.用于有效转录的rrnB转录终止区。 
可诱导的启动子包括但不限于热休克启动子或重金属可诱导的启动子。 
本发明提供一种制备重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的方法，其包括将含有由优选密码子的合成的人工基因插入适合的宿主，在适合所述复合干扰素表达的条件下培养所述经插入的宿主，以及收集表达的复合干扰素。 
该方法可以包括从发酵液中提取重组高效复合干扰素(rSIFN-co)，收集包涵体，对收集的蛋白质进行变性和复性。 
即使当重组高效复合干扰素(rSIFN-co)与试剂一起并且以特定的浓度使用时，该方法仍可以保持高效率。该方法还包括重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的分离和纯化。该方法进一步包括纯化的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的冻干。该方法包括重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的注射液的制备。 
在一个实施方案中，运用重组技术制备重组高效复合干扰素(rSIFN-co)。在氨基酸序列确定的条件下，根据大肠杆菌的密码子选择来重新设计干扰素的DNA，然后人工合成rSIFN-co基因。通过DNA重组技术将rSIFN-co的cDNA克隆到大肠杆菌的高表达载体中，通过利用L-阿拉伯糖激活PBAD启动子转录的诱导/激活机制来获得rSIFN-co的高表达。 
与通常的热诱导、pH诱导以及基因工程的IPTG诱导体系相比，阿拉伯糖诱导/激活体系具有这些优点：(1)通常的体系通过建立“去抑制”模式来解除启动子功能。启动子随后诱导下游基因表达。温度和pH的变化以及加入IPTG不能直接激活启动子。在本发明公开的体系中，L-阿拉伯糖不仅使PBAD启动子的转录去活化和被抑制，而且使其活化，而pBAD启动子的转录诱导了rSIFN-co的高表达。因此，阿拉伯糖诱导/激活体系是一种更有效的表达体系。(2)“外源性”与阿拉伯糖的剂量之间的关系是线性的。这就意味着可以改变阿拉伯糖的浓度以调节外源性基因的表达水平。因此，通过阿拉伯糖控制大肠杆菌中外源性基因表达水平要比通过改变温度和pH来控制更容易。这种特性对于包涵体的形成很重要。(3)L-阿拉伯糖来源丰富、便宜而且安全，相反，这些是其它诱导剂例如IPTG的缺点。 
这个实施方案制备了一种带有L-阿拉伯糖诱导/激活体系的表达有效的并具有抗性的rSIFN-co的大肠杆菌工程菌株。在适宜的条件下，培养和发酵该菌株，收集菌体。破碎细菌并反复洗涤之后纯化包涵体。经过包涵体变性和复性以及一系列纯化步骤，最终得到了大量用于本发明和临床治疗的高纯度、立体构型改变的rSIFN-co蛋白质。所述的纯化不会影响纯化的蛋白质的生物活性。 
上述重组高效复合干扰素(rSIFN-co)具有抗病毒或抗肿瘤活性；因此可用于抑制、预防或治疗病毒性疾病，抑制或治疗肿瘤或癌症。 
病毒性疾病
本发明提供一种用于治疗或预防受试者的病毒性疾病或肿瘤的方法，其包括给予受试者有效量的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物。Wei(2005；国际公布号WO2005/034853A2)提供了一种预防或治疗受试者的严重急性呼吸道综合征的方法。 
本发明所述病毒性疾病包括但不限于，甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、其它类型肝炎、由Epstein-Barr病毒、人体免疫缺陷病毒(HIV)、埃博拉病毒(Ebola virus)、严重急性呼吸道综合征病毒(SARS)、流感病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、或其它疱疹病毒、乳头多瘤空泡病毒(papovaviruses)、痘病毒、小核糖核酸病毒、腺病毒、鼻病毒、I型人类T细胞白血病病毒、II型人类T细胞白血病病毒，或者III型人类T细胞白血病病毒引起的感染。 
在一个实施方案中，有效量是纳克级的。在另一个实施方案中，病毒是人体免疫缺陷病毒，有效量低至每毫升4纳克。在另一个实施方案中，病毒是流感病毒，有效量低至每毫升10纳克。 
抑制乙型肝炎病毒的DNA复制以及HBsAg和HBeAg的分泌 
重组高效复合干扰素(rSIFN-co)抑制乙型肝炎病毒的DNA复制以及HBsAg和HBeAg的分泌。 
严重急性呼吸道综合征病毒(SARS) 
本发明提供一种预防或治疗受试者的严重急性呼吸道综合征，或者病毒诱导的上呼吸道疾病的方法，其包括给予受试者有效量的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其功能上的等效物。在上述方法的一个实施方案中，干扰素是α、β、γ、ω或其组合。 
重组高效复合干扰素(rSIFN-co)可以以口服、经静脉注射、肌肉注射、腹膜内注射、皮下注射、鼻或粘膜给药、或者经喷雾器或呼吸器吸入的方式给予。在一个实施方案中，rSIFN-co皮下或肌肉内给药的剂量高于或等于每平方米表面积107国际单位。在另一个实施方案中，rSIFN-co皮下或肌肉内 给药剂量高于或等于每平方米表面积2×107国际单位。在一个实施方案中，干扰素经喷雾装置输送。在一个特定的实施方案中，装置如图11所示。在一个实施方案中，干扰素经冷冻干燥的。 
本发明提供一种抑制严重急性呼吸道综合征或者病毒诱发的上呼吸道疾病的病原体的方法，其包括将病原体与有效量的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物接触。 
已经明确SARS的病原体是病毒。参见例如，Rota et al(2003)，一种与严重急性呼吸道综合征相关的新型冠状病毒的表征(Characterization of aNovel Coronavirus Associated with Severe Acute Respiratory Syndrome)，科学(Science)1085952www.sciencexpress.org以及Marra，et al.(2003)，SARS相关的冠状病毒的基因组序列(The Genome Sequence of theSARS-Associated Coronavirus)，科学(Science)1085853 www.sciencexpress.org。 
本发明还提供一种抑制严重急性呼吸道综合征病毒或严重急性呼吸道综合征病毒感染的细胞，或者病毒诱导的上呼吸道疾病，或者能够诱导上呼吸道疾病的病毒感染的细胞的方法，其包括将有效量的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)与所述病毒或细胞接触。这种接触可以是直接的或间接的。 
本发明提供一种包含有效量的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)以及适合的载体的组合物，所述重组高效复合干扰素(rSIFN-co)能够抑制严重急性呼吸道综合征病毒或严重急性呼吸道综合征病毒感染的细胞，或者病毒诱导的上呼吸道疾病，或者能够诱导上呼吸道疾病的病毒感染的细胞。 
本发明提供一种组合物，其包含有效量的能够预防或治疗受试者的严重急性呼吸道综合征或病毒诱导的上呼吸道疾病的高效复合干扰素和适合的载体。 
本发明提供一种药物组合物，其包含有效量的能够抑制严重急性呼吸道综合征病毒或严重急性呼吸道综合征病毒感染的细胞，或者病毒诱导的上呼吸道疾病的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)，以及药学上可接受的载体。 
本发明提供一种药物组合物，其包含有效量的能够预防或治疗受试者的严重急性呼吸道综合征或病毒诱导的上呼吸道疾病的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)和药学上的可接受的载体。 
本发明提供一种输送上述药物组合物的装置。 
在一个优选的实施方案中，受试者是人。很容易理解，高效复合干扰素 能够用于其它动物或哺乳动物。 
本发明提供一种预防人类严重急性呼吸道综合征或病毒诱导的上呼吸道疾病的方法，其包括通过喷雾器每天三次应用高效复合干扰素，该喷雾器中含有20微克干扰素，相当于每3毫升中107活性单位。 
病毒性上呼吸道感染(VURI) 
病毒性上呼吸道感染，又名普通感冒、感冒。这是一种传染性的上呼吸道病毒感染，其特征是粘膜发炎、打喷嚏、以及喉咙痛。它通常由超过200种称之为鼻病毒的不同病毒引起。引发流感的同种病毒不会造成感冒。感冒通过患有感冒的人咳嗽或打喷嚏产生的飞沫或者手接触被患有感冒的人污染的物体来传播。儿童患感冒的机率最高，随着年龄增长机率降低，这是由于发病后产生了对引发感冒的病毒的免疫性。逐渐地，成人体内形成了对引起感冒的多种病毒的免疫性。儿童一年中可能患10次感冒，成人一年中可能患3次感冒。 
如果病人患有病毒性上呼吸道感染，其治疗手段多种多样。由于绝大多数此类感染是自限的，临床医生通常建议休息和流质饮食，但是其它的治疗包括环境疗法和营养疗法、非处方和经处方开出的解充血药和抗组胺产品，新型抗组胺和抗胆碱能的鼻用制剂，以及抗生素。参见， http://www.physsportsmed.com/issues/1998/02feb/swain.htm(2005)。 
上呼吸道感染(URI)的预防和治疗 
将近70-80％的上呼吸道感染是由病毒引起的，所述病毒是例如呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒及其变异体、A型流感病毒及其变异体、B型流感病毒及其变异体、副流感病毒及其变异体，或者肠道病毒及其变异体。成人患上呼吸道感染的主要原因是鼻病毒。对于儿童而言，呼吸道合胞病毒和副流感病毒是导致上呼吸道感染的两个主要原因。 
重组高效复合干扰素(rSIFN-co)在对抗引起上呼吸道感染的病毒中起着重要的作用。高效复合干扰素主要通过以下两种机制获得抗病毒效果： 
1.附着在敏感细胞表面并诱使它们产生抗病毒蛋白，然后阻断体内病毒复制和繁殖。 
2.重组高效复合干扰素(rSIFN-co)能够调节免疫反应，包括T细胞免疫反应、天然杀伤细胞的活性、单核体的噬菌作用，甚至体内某些抗体的形 成。 
在上呼吸道感染的治疗中，重组高效复合干扰素(rSIFN-co)能够经喷雾器或呼吸器直接作用于感染的部位。这种治疗方法使得干扰素直接到达靶细胞。因此，对于干扰素的给予，市售时采用喷雾器的形式要比经口服或注射更安全、更有效。 
SARS的预防和治疗 
经过四川(中国的一个省)SARS预防和控制工作组的许可，2003年5月开始分发重组高效复合干扰素(rSIFN-co)。高效复合干扰素喷雾器被配发给具有高SARS风险居住区的医院的医生和护士，以及国家SARS预防与控制研究组。截止2003年12月19日，在3000名使用者中，没有发现与使用喷雾器有关的任何副作用的报道。此外，四川省的医生和护士、居民或其它使用过高效复合干扰素喷雾剂的机构中无人感染SARS。 
因此，本发明提供一种抑制、预防或治疗病毒复制或病毒感染的细胞的方法，该方法是将所述病毒或感染的细胞与有效量的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物接触。 
肿瘤的预防和治疗
这种重组高效复合干扰素(rSIFN-co)可用于抑制、预防或治疗下述癌症或肿瘤： 
Figure G200680007733120070912D000121
Figure G200680007733120070912D000131
相应地，本发明提供一种通过将重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物与肿瘤或癌细胞相接触来抑制所述肿瘤或癌细胞生长的方法。 
制剂和给药途径
本发明还提供了通过上述方法制备的高效复合干扰素。 
本发明提供一种包含重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物以及适合的载体的组合物。 
本发明提供一种包含重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物以及药学上可接受的载体的药物组合物。 
本发明提供的上述方法中，重组高效复合干扰素(rSIFN-co)以口服、经静脉注射、肌肉注射、腹膜内注射、皮下注射、鼻或粘膜给药、或者经喷雾器或呼吸器吸入的方式给药。 
本发明提供的上述方法中，重组高效复合干扰素(rSIFN-co)按照每两天注射9μg、15μg或24μg、一周三次，持续24周的方案给药。 
令人惊奇地发现，立体结构已经改变的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)是不仅抑制乙型肝炎DNA复制，还抑制2.2.15细胞的HBsAg和HBeAg分泌的制剂。 
本发明的一个目的是提供一种直接抑制乙型肝炎病毒的DNA复制，以及乙型肝炎的HBsAg和HBeAg分泌，将其降至正常水平的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)制剂。 
制剂
以下是一些rSIFN-co的制剂：片剂、胶囊、口服液、糊剂、注射剂、喷雾剂、栓剂以及溶液。推荐使用注射剂。通常是皮下注射或静脉注射给药。药物载体可以是任何可接受的药物载体，包括糖类、纤维素、粘合剂、崩解剂、软化剂、填充剂、助溶剂、缓冲剂、防腐剂、增稠剂、调配剂等。 
本发明还提供一种包含上述组合物和药学上可接受的载体的药物组合物。 
就本发明的目的而言，“药学上可接受的载体”是指任何标准的药用载体。适合的载体的例子是本领域中熟知的，可以包括但不限于任何标准的药用载体，例如磷酸盐缓冲盐溶液和各种润湿剂。其它的载体可以包括用于片剂、颗粒剂、胶囊等的添加剂。典型地这些载体包含赋形剂，例如淀粉、乳、糖、某些类型的粘土、明胶、硬脂酸或其盐、硬脂酸镁或硬脂酸钙、滑石、植物脂肪或油、胶质、乙二醇或其它已知的赋形剂。这些载体还可以包括香味添加剂和着色剂或其它成分。包含这些载体的组合物用熟知的常规方法进行配制。 
重组高效复合干扰素(rSIFN-co)半衰期的延长
聚乙二醇化(Peglytion) 
聚乙二醇化是指将聚乙二醇链与蛋白质和肽类药物连接，通过使这些蛋白和肽类药物避开水解酶从而提高药物代谢动力学指标的过程。参见Harris和Chess，聚乙二醇化对药物的影响(Effect of pegylation onpharmaceuticals)，Nat Rev Drug Discov.2003 Mar；2(3)：214-21. 
聚乙二醇化是一种基于聚乙二醇的大流体力学体积来提高蛋白质和脂质体药物的循环半衰期的成熟方法。这些聚乙二醇使蛋白质和肽类药物避开肾脏的清除、酶降解和免疫系统的识别，由此形成的半衰期使得它们更易于 被患者接受。参见Molineux，聚乙二醇化：用于加强治疗的以工程手段完善的药物(Pegylation：engineering improved pharmaceuticals forenhanced therapy)，Cancer Treat Rev.2002 Apr；28 Suppl A：13-6.作者得出结论：聚乙二醇化对于癌症患者的生存质量有有益效果。 
干扰素的聚乙二醇化提高了干扰素在体内保存的时间，这是通过增加干扰素分子的尺寸从而使干扰素的吸收率降低、半衰期延长和清除率降低而实现的。这样，聚乙二醇化的干扰素与非聚乙二醇化的干扰素相比，其生物活性的持续期间增加了，因此具有了非聚乙二醇化干扰素所不具备的给药频率较少和顺应性较好的优点。作者指出，在某些病人中用聚乙二醇化的干扰素进行单独治疗要比用非聚乙二醇化制剂进行单独治疗产生更好的反应。参见Baker，聚乙二醇化干扰素(Pegylated Interferons)，Rev GastroenterolDisord.2001；1(2)：87-99。 
缓释或控制释放 
缓释输送基质和脂质体可以与rSIFN-co一起用来制造缓释和控制释放制剂。参见Robinson和Talmadge，生长因子的缓释(Sustained Release ofGrowth Factors)，体内(In Vivo)2002 Nov-Dec；16(6)：535-40。作者指出，聚乙二醇化和缓释输送基质和脂质体改善了重组分子的药物代谢动力学和药效学特征，因此这些方法通过改善临床功效提高了病人的顺应性。 
本发明提供了包含试剂或被试剂包封的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)，该试剂能够影响所述干扰素的半衰期或输送。在一个实施方案中，该试剂是聚乙二醇(PEG)。 
本发明进一步提供一种治疗或预防受试者的病毒性疾病或肿瘤的方法，其包括给予受试者有效量的包含试剂或被试剂包封的重组高效复合干扰素(rSIFN-co)或其等效物，该试剂能够影响所述干扰素的半衰期或输送。在一个实施方案中，该试剂是聚乙二醇(PEG)。 
通过以下实例将会更好地理解本发明。然而，本领域技术人员很容易理解，所讨论的特定方法和结果仅仅是对本发明的说明，之后的权利要求对本发明有更全面的描述。 
实验细节 
IFN-con是一种根据人类α干扰素亚型的保守性氨基酸，利用基因工程 的方法构建的新型干扰素分子。已经证实，IFN-con具有广谱的干扰素活性，例如高抗病毒和肿瘤抑制活性，特别是用于有效治疗丙型肝炎。 
大肠杆菌密码子被用来重新设计rSIFN-co的cDNA，然后根据公开的 
Figure G200680007733120070912D000161
(复合干扰素α-1)的DNA序列和推导出的氨基酸序列(图1)人工合成rSIFN-co的cDNA。 
为了得到纯rSIFN-co蛋白，rSIFN-co的cDNA被克隆到大肠杆菌高表达载体中，能够激活载体中的强效PBAD启动子的L-阿拉伯糖被用于诱导rSIFN-co基因的高表达。 
实例1 
重组高效复合干扰素(rSIFN-co)对埃博拉病毒的作用 
背景：埃博拉病毒是一种众所周知可导致可怕的症状的致命性病毒，最显著的症状是高烧和大范围内出血。埃博拉病毒感染人群致死率达90％。它是能够引起出血性(流血的)发烧的病毒之一。没有治疗这种疾病特效方法。目前，病人只能接受支持性治疗。这包括平衡病人的体液和电解质，维持他们的氧水平和血压，治疗他们的任何并发感染。症状发作10天内可导致死亡。 
1.材料 
1.1药物：rSIFN-co，由四川生物技术研究中心提供。 
1.2病毒：埃博拉病毒，由军事医学科学院微生物流行病研究所提供。 
1.3实验安全水平：在生物实验室3级安全体系下进行病毒实验。 
1.4动物：60只BALB/c小鼠 
2.方法 
2.1 60只小鼠被随机分成6组，每组包括10只小鼠。第1组在埃博拉病毒接种的当天用1μg rSIFN-co治疗。第2组在埃博拉病毒接种后1(1)天用1μg rSIFN-co治疗。第3组在埃博拉病毒接种后2(2)天用1μg rSIFN-co治疗。第4组在埃博拉病毒接种后3(3)天用1μg rSIFN-co治疗。第5组在埃博拉病毒接种后4(4)天用1μg rSIFN-co治疗。第6组不用rSIFN-co治疗，其被指定为对照组。 
2.2给药：1μg的rSIFN-co每天给药1次，连续6天。 
3.结果 
第6组(对照组)的所有10(10)只小鼠死亡。第1(1)组、第2(2)组和第3(3)组中的所有小鼠存活，没有观察到毒性作用。第4(4)组和第5(5)组显示出一定毒性作用。 
4.结论 
这些结果清楚地显示了rSIFN-co对抗埃博拉病毒的效力。 
实例2 
重组超复合干扰素(rSIFN-co)的艾滋病毒(HIV)抑制作用 
1.材料 
1.1野生型HIV 
1.2抗药性HIV 
1.3 293-CD4-CCRS细胞 
1.4DEME，Gibco公司 
1.5胎牛血清，Gibco公司 
1.6rSIFN-co，四川生物技术研究中心提供 
1.7 96孔板，NUNC 
1.8二氧化碳培养箱 
1.9层流净化罩 
1.10荧光计 
1.11紫外吸收仪 
1.12其它 
2.方法 
2.1获得对数生长期(log)的293-CD4-CCR5细胞，用0.25％的胰酶消化，以苔盼兰染色确定细胞数量，并且以DMEM稀释至细胞浓度为每毫升2.0×105个(细胞/ml)。 
2.2 96孔板的每个孔加入100μl(微升)的293-CD4-CCR5的DMEM悬浮液。将孔板置于37℃的5％的二氧化碳培养箱中，第二天可以观察到百分之七十(70％)的孔板底面被恢复。 
2.3移去上清液，向每个孔中加入100μl(微升)不同浓度的rSIFN-co。使用两种对照组：磷酸缓冲盐溶液(PBS)和生长培养基。 
2.4将板置于37℃的二氧化碳培养箱中约18至20个小时。 
2.5实验孔：以每板100μl(微升)的量将不同浓度的野生型HIV和抗药性HIV病毒加入每个孔中。 
对照孔：不加入病毒，每孔中仅加入100μl(微升)DMEM。 
2.6将板置于37℃的二氧化碳培养箱中约24小时。 
2.7进行常规荧光素酶检测。同时测定上清的蛋白浓度。荧光素酶活性以RLU/mg单位表征。 
3.结果 
rSIFN-co能够以≥每毫升4纳克(ng/ml)的水平抑制HIV。参见表4和图3-4。以荧光素酶作为Y轴，rSIFN-co的浓度作为X轴，使用EXCEL程序作图，其清楚地显示出在rSIFN-co≥每毫升4纳克(ng/ml)的水平下，荧光素酶活性水平明显低于PBS和培养基对照组。已经表现出明显的反向剂量依赖关系。 
表4 
rSIFN-co抑制野生型HIV和抗药性HIV的对比 
Figure DEST_PATH_G20511363150138000D000011
4.结论：rSIFN-co能有效对抗野生型HIV和抗药性HIV。 
实例3 
重组高效复合干扰素(rSIFN-co)的抗流感作用 
1.材料 
1.1 10天龄鸡胚膜细胞 
1.2rSIFN-co，四川生物技术研究中心提供 
1.3流感病毒，由军事医学科学院微生物流行病研究所分子生物学研究室提供。 
1.4DMEM，Gibco公司 
1.5新生小牛血清 
1.6 96孔板，NUNC 
1.7二氧化碳培养箱 
1.8层流净化罩 
1.9倒置显微镜 
1.10其它 
2.方法 
2.1取10天龄的对数(log)生长期的鸡胚膜细胞，用0.25％的胰酶消化，以苔盼兰染色确定细胞数量，并且以DMEM稀释至细胞浓度为每毫升2.0×105个(细胞/ml)。 
2.2 96孔板的每个孔中加入100μl(微升)的293-CD4-CCR5的DMEM悬浮液。将孔板置于37℃的二氧化碳培养箱中。第二天细胞形成单层。 
2.3移去上清液，向每个孔中加入100μl(微升)不同浓度的rSIFN-co。两个对照孔：不加入rSIFN-co。 
2.4将孔板置于37℃的二氧化碳培养箱中约18-20小时。 
2.5实验孔：以每孔100微升(μl)的量将不同浓度的流感病毒加入到每个孔中。 
对照孔：不加入流感病毒，每孔中仅加入100μl(微升)DMEM。 
2.6将孔板置于37℃的二氧化碳培养箱中约24小时。 
2.7在倒置显微镜下观察细胞。 
3.结果 
3.1在倒置显微镜下，加入流感病毒且不含有干扰素的对照孔中的细胞具有明显的细胞病变(CPE)，例如细胞变圆、细胞坏死、反射光减少和脱落。 
3.2含有浓度≥每毫升10纳克(ng/ml)的rSIFN-co的实验孔中的细胞没有细胞病变(CPE)，形态与正常细胞相似。参见图5。 
3.3没有加入流感病毒且不含有干扰素的对照孔没有出现任何细胞病变(CPE) 
4.结论 
浓度≥每毫升10纳克(ng/ml)的rSIFN-co能有效对抗流感病毒。 
实例4 
肺癌病人的临床观察 
一名病人于2005年10月7日因非小细胞肺癌入院。经过一个月的化疗后，2005年10月22日和2005年10月25日进行的影像检查没有发现好转。2006年1月4日进行的检查也没有发现好转。病人接受超复合干扰素治疗一个月。方案如下：病人每隔一天接受注射。第一次，病人接受的剂量为9微克。在随后的所有注射中，剂量加倍至18微克。2006年2月23日进行的检查表明有迅速的好转。 

Claims (6)

1.重组干扰素用于制造治疗由人类免疫缺陷病毒、埃博拉病毒或流感病毒引起的病毒性疾病的药物的用途，其中干扰素的氨基酸序列如图1所示并由图1所示的核苷酸序列编码而成。
2.权利要求1的用途，其中干扰素可被口服、通过静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射、鼻腔或粘膜给予或吸入。
3.权利要求1的用途，其中干扰素和一种能影响干扰素的半衰期或传递的物质所联结。
4.权利要求3的用途，其中该物质为聚乙二醇(PEG)。
5.权利要求1的用途，其中当病毒性疾病是由人类免疫缺陷病毒引起时，干扰素可在剂量低至4钠克每毫升时被使用。
6.权利要求1的用途，其中当病毒性疾病是由流感病毒引起时，干扰素可在剂量低至10钠克每毫升时被使用。
CN2006800077331A 2005-03-09 2006-03-09 重组高效复合干扰素的用途 Active CN101137391B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US65992505P 2005-03-09 2005-03-09
US60/659,925 2005-03-09
PCT/IB2006/002340 WO2006134497A2 (en) 2005-03-09 2006-03-09 Uses of recombinant super-compound interferons

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101137391A CN101137391A (zh) 2008-03-05
CN101137391B true CN101137391B (zh) 2012-07-18

Family

ID=37532680

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2006800077331A Active CN101137391B (zh) 2005-03-09 2006-03-09 重组高效复合干扰素的用途

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20080124302A1 (zh)
EP (3) EP2537527A3 (zh)
JP (1) JP5209462B2 (zh)
KR (1) KR101329878B1 (zh)
CN (1) CN101137391B (zh)
AU (1) AU2006257286B2 (zh)
CA (1) CA2597317C (zh)
MY (1) MY167668A (zh)
TW (1) TWI380993B (zh)
WO (1) WO2006134497A2 (zh)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1245215C (zh) 2001-02-28 2006-03-15 四川省生物工程研究中心 重组高效复合干扰素用作乙型肝炎表面抗原和e抗原抑制剂
US8551469B2 (en) 2001-02-28 2013-10-08 Superlab Far East Limited Treatment of tumors and viral diseases with recombinant interferon alpha
US7585647B2 (en) 2003-08-28 2009-09-08 Guangwen Wei Nucleic acid encoding recombinant interferon
CN101525381B (zh) * 2008-03-04 2012-04-18 北京百川飞虹生物科技有限公司 一种重组复合干扰素及其表达载体的构建和表达
CN102101886A (zh) * 2009-12-18 2011-06-22 四川辉阳生命工程股份有限公司 构象改变的重组干扰素晶体、其三维结构及应用
KR101871851B1 (ko) 2011-12-22 2018-06-28 두산공작기계 주식회사 공작기계용 도어의 이탈 방지장치
TWI718086B (zh) * 2013-01-07 2021-02-11 英屬維爾京群島商遠東超級實驗室有限公司 通過干擾素的經皮和/或經粘膜給藥治療骨癌、皮膚癌、皮下癌、粘膜癌和/或粘膜下癌的方法和組合物
CN104415325A (zh) * 2013-08-27 2015-03-18 天士力制药集团股份有限公司 一种重组人干扰素β-1b冻干制剂及其制备方法
EP3068420B1 (en) * 2013-11-13 2019-10-23 Superlab Far East Limited Methods of determining interferon having direct inhibitory effects on tumors and uses thereof
RU2585695C1 (ru) * 2015-03-12 2016-06-10 Закрытое акционерное общество "Вектор-Медика" (ЗАО "Вектор-Медика") Способ ингибирования инфекционной активности вируса эбола в эксперименте
CN111363726A (zh) * 2018-12-26 2020-07-03 上海元宋生物技术有限公司 表达干扰素的溶瘤病毒及其应用
CN111658779A (zh) * 2020-06-22 2020-09-15 四川大学华西医院 治疗新型冠状病毒肺炎的联合用药物

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1375502A (zh) * 2001-10-25 2002-10-23 南京药科大学 聚乙二醇修饰重组人干扰素
AU2003248419A1 (en) * 2001-02-28 2003-11-06 Superlab Far East Limited Recombinant super-compound interferon

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4672108A (en) * 1981-12-07 1987-06-09 Hoffmann-La Roche Inc. Crystalline human leukocyte interferon
US6936694B1 (en) 1982-05-06 2005-08-30 Intermune, Inc. Manufacture and expression of large structural genes
US4462940A (en) * 1982-09-23 1984-07-31 Cetus Corporation Process for the recovery of human β-interferon-like polypeptides
US4681930A (en) * 1983-09-20 1987-07-21 Hoffmann-La Roche Inc. Immune interferon and a method for its extraction and purification
US5372808A (en) * 1990-10-17 1994-12-13 Amgen Inc. Methods and compositions for the treatment of diseases with consensus interferon while reducing side effect
CA2094275C (en) * 1990-10-17 2003-06-03 Lawrence M. Blatt Methods and compositions for the treatment of cell proliferation disorders
US5441734A (en) * 1993-02-25 1995-08-15 Schering Corporation Metal-interferon-alpha crystals
EP0626448A3 (de) * 1993-05-26 1998-01-14 BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GmbH Verfahren zur Herstellung und Reinigung von alpha-Interferon
JP4709333B2 (ja) * 1995-10-13 2011-06-22 プレジデント・アンド・フエローズ・オブ・ハーバード・カレツジ ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼおよびその使用
US5972331A (en) * 1995-12-22 1999-10-26 Schering Corporation Crystalline interferon alpha for pulmonary delivery and method for producing the same
US5874304A (en) * 1996-01-18 1999-02-23 University Of Florida Research Foundation, Inc. Humanized green fluorescent protein genes and methods
US5980884A (en) * 1996-02-05 1999-11-09 Amgen, Inc. Methods for retreatment of patients afflicted with Hepatitis C using consensus interferon
US6532437B1 (en) * 1996-10-23 2003-03-11 Cornell Research Foundation, Inc. Crystalline frap complex
US6114145A (en) * 1997-12-05 2000-09-05 Human Genome Sciences, Inc. Synferon, a synthetic interferon
US6087478A (en) * 1998-01-23 2000-07-11 The Rockefeller University Crystal of the N-terminal domain of a STAT protein and methods of use thereof
DE10037111A1 (de) * 2000-07-27 2002-02-07 Boehringer Ingelheim Int Herstellung eines rekombinanten Proteins in einer prokaryontischen Wirtszelle
US20020043262A1 (en) * 2000-08-22 2002-04-18 Alan Langford Spray device
US7544354B2 (en) * 2000-10-27 2009-06-09 Novartis Vaccines And Diagnostics Methods of protein purification and recovery
US20060035327A1 (en) * 2001-02-28 2006-02-16 Guangwen Wei Recombinant super-compound interferon and uses thereof
US6546074B1 (en) * 2001-03-27 2003-04-08 Astex Technology Limited Protein crystal structure and method for identifying protein modulators
IL161901A0 (en) * 2001-11-14 2005-11-20 Biocryst Pharmaceuticals Inc A Nucleosides, preparation thereof and use as inhibiDevice for the reading and the signalling of environmental parameters tors of rna viral polymerases
US20050021976A1 (en) 2003-06-23 2005-01-27 Nokia Corporation Systems and methods for controlling access to an event
CN1202861C (zh) * 2003-07-18 2005-05-25 中国科学院微生物研究所 复合干扰素在治疗sars疾病中的用途
CA2535982C (en) 2003-08-28 2016-11-29 Huiyangtech (Usa), Inc. Uses of interferons with altered spatial structure
WO2005113592A2 (en) * 2004-05-19 2005-12-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003248419A1 (en) * 2001-02-28 2003-11-06 Superlab Far East Limited Recombinant super-compound interferon
CN1375502A (zh) * 2001-10-25 2002-10-23 南京药科大学 聚乙二醇修饰重组人干扰素

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
同上.

Also Published As

Publication number Publication date
EP1868636A2 (en) 2007-12-26
EP2537527A3 (en) 2013-02-20
EP2749290A3 (en) 2015-02-18
KR20070108904A (ko) 2007-11-13
US20080124302A1 (en) 2008-05-29
EP2749290A2 (en) 2014-07-02
AU2006257286B2 (en) 2012-08-16
AU2006257286A1 (en) 2006-12-21
EP1868636A4 (en) 2012-03-28
TW200640943A (en) 2006-12-01
JP2008532995A (ja) 2008-08-21
KR101329878B1 (ko) 2013-11-22
JP5209462B2 (ja) 2013-06-12
WO2006134497A3 (en) 2007-08-30
MY167668A (en) 2018-09-21
CN101137391A (zh) 2008-03-05
CA2597317A1 (en) 2006-12-21
EP2537527A2 (en) 2012-12-26
CA2597317C (en) 2018-01-02
WO2006134497A2 (en) 2006-12-21
TWI380993B (zh) 2013-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101137391B (zh) 重组高效复合干扰素的用途
CN106282216B (zh) 一种重组长效鸡干扰素α的制备方法
CN107074967A (zh) 白介素‑2/白介素‑2受体α融合蛋白和使用方法
CN102041263B (zh) 鸡α干扰素/白细胞介素2嵌合基因
Wang et al. Molecular characterization and biological functioning of interleukin-8 in Siberian sturgeon (Acipenser baeri)
CN102153657A (zh) IL-24-Tat PTD融合蛋白及其构建方法和应用
CN1611604A (zh) 猪α－干扰素的基因合成、表达载体构建及产物的制法
CN106552259A (zh) 一种融合蛋白及其治疗疾病的用途
CN101643749A (zh) 腺相关病毒载体及其制备方法和应用
CN104940955B (zh) 一种microRNA在制备治疗流感的药物中的应用
CN107513107A (zh) 抗肿瘤融合蛋白及其制法和应用
CN104531691A (zh) 一种获取牛干扰素α的基因的引物、重组牛干扰素α的制备方法
CN101688205B (zh) 抗肿瘤药物、药剂、组合物及其用途
CN111094324A (zh) 一种溶瘤病毒、合成dna序列及其应用
CN110101843A (zh) 一种抗肿瘤蛋白质及其应用
CN102079784A (zh) 一种犬α干扰素突变体
CN110684768B (zh) 一种基于模式识别受体配体的鸭天然免疫增强剂
CN103865899A (zh) 具有vegfr2/kdr受体特异性的融合毒素及其编码基因与应用
CN1167712C (zh) 一种白细胞介素11类似物
CN104388452B (zh) 一种犬干扰素α融合蛋白及其制备方法和应用
CN1800215A (zh) 一种预防和治疗日本血吸虫感染的相关基因和蛋白质及其用途
CN103409384A (zh) 一种具有抗病毒活性的对虾蛋白及其应用
CN101328475B (zh) 核酸分子nrn1sr1及其在制备抗癌药物中的应用
CN116790580A (zh) 一种溶瘤病毒来源的rna及其用途
CN111154755A (zh) 一种双链寡核苷酸dna及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: SICHUAN HUIYANG LIFE SCIENCE AND TECHNOLOGY CORP.

Free format text: FORMER OWNER: WEI GUANGWEN

Effective date: 20130107

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 610000 CHENGDU, SICHUAN PROVINCE TO: 610063 CHENGDU, SICHUAN PROVINCE

TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20130107

Address after: 610063, Chengdu, Sichuan, Jinjiang District three color road 163, Yinhai core block, room 402

Patentee after: Sichuan Huiyang Life Engineering Co., Ltd.

Address before: 610000 Sichuan Province, Chengdu City Jade Road No. 8

Patentee before: Wei Guangwen

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20151223

Address after: The British Virgin Islands of Tortola

Patentee after: SUPERLAB FAR EAST LTD.

Address before: 610063, Chengdu, Sichuan, Jinjiang District three color road 163, Yinhai core block, room 402

Patentee before: Sichuan Huiyang Life Engineering Co., Ltd.