CN101131377A - 9-芴甲醇纯度的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种涉及9－芴甲醇纯度的测定方法，将已知纯度的标样与待测纯度的样品先进行溶液配制，然后用高效液相色谱法分别测出各自相关的色谱谱图与峰面积；最后按外定法的定量计算公式换算成待测样品的9－芴甲醇纯度值。本发明首次采用通用液相色谱柱和紫外多波检测器检测所得色谱峰峰形对称尖锐、分离度高，分析时间短；相对标准偏差是0.25％，加标回收率是98.1％～103.2％；本发明能广泛应用于生产、使用、销售及科研各领域内不同纯度9－芴甲醇的快速检测。

Description

9-芴甲醇纯度的测定方法

技术领域

本发明属于分析化学领域内的液相色谱分析方法，更具体涉及一种采用高效液相色谱仪器对9-芴甲醇纯度的测定方法。

背景技术

9-芴甲醇

是白色针状晶体，熔点106-107℃，不溶于水。它是制备功能性色素、染料、医药、农药、高分子单体的重要原料而且价格极其昂贵。9-芴甲醇也是一种重要的生物化工原料的中间体，它与光气反应生成氯甲酸-9-芴甲酯(Fmoc-Cl)，Fmoc-Cl是制备氨基酸的保护剂，在其合成中有重要及独到的作用。随着生物科学与技术的不断发展，由9-芴甲醇制取氨基保护剂产品已越来越受到人们的重视。近几年，人们对9-芴甲醇的合成的研究给于相当的重视，发展很快，所涉及资料报道甚多，均未涉及到对9-芴甲醇的测定，如《化学试剂》，2003，25(6)，P373～374上海应用技术学院的周祖新、顾建生在“氢化钠催化法合成芴甲醇”的文章中仅提到分析产物使用到液相色谱，但未涉及对9-芴甲醇的纯度进行测定。纯度的正确测定关系到其产品的成本价格，如何对9-芴甲醇的纯度进行测定仍是一个尚未解决的技术难题，也未见任何关于如何测定9-芴甲醇的纯度的相关报道，不同纯度的9-芴甲醇的测定始终成为生产、使用、销售及科研各领域中需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种9-芴甲醇纯度的测定方法，该方法能简便而准确地采用高效液相色谱方式进行测定，为生产、使用、销售及科研各领域内不同纯度的9-芴甲醇的测定提供了一种快速检测手段。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

该9-芴甲醇纯度的测定方法包括以下步骤：

首先，将已知纯度的标样与待测纯度的样品先进行溶液配制；然后用高效液相色谱法分别测出各自相关的色谱谱图与峰面积；最后按外定法的定量计算公式换算成待测样品的9-芴甲醇纯度值。

将已知纯度标样与待测纯度样品分别定量秤取，加入定量的色谱纯级有机溶剂，经充分振摇、混合、溶解、脱泡后静止5～10分钟，即分别配成浓度为0.1mg/ml～1.2mg/ml已知纯度标样与待测纯度样品的各自的分析样品溶液，待用。

所述色谱纯级有机溶剂为甲醇、乙腈或四氢呋喃中任选一种。

所述色谱纯级有机溶剂为甲醇。

高效液相色谱法所用流动相为色谱纯级有机溶剂与水按体积百分比10～90∶90～10的比例配制成混合液体。

所述色的谱纯级有机溶剂为甲醇、乙腈或四氢呋喃中任选一种。

所述的色谱纯级有机溶剂为甲醇。

所述水为二次石英蒸馏水。

所述的外定法的定量计算公式为：

其中，

X₁：待测样品中9-芴甲醇的纯度，％

X_标：已知标样中9-芴甲醇的纯度，％；

A₁：试样中9-芴甲醇组分的峰面积；

A₂：标样中9-芴甲醇组分的峰面积；

m₁：试样的质量，g；

m₂：标样的质量，g。

所述高效液相色谱的所用色谱柱为通用型液相色谱柱，其填料为十八烷基键合相硅胶或辛烷基键合相硅胶或者氰基键合相硅胶。

在本发明的上述的技术方案中，首先将已知纯度的标样与待测纯度的样品先进行溶液配制，然后用高效液相色谱法分别测出各自相关的色谱谱图与峰面积；最后按外定法的定量计算公式换算成待测样品的9-芴甲醇纯度值。该方法采了用柱效高、使用寿命长、重现性好的反相键合柱做分离柱，常用的紫外检测器检测，得到的色谱峰峰形对称尖锐、分离度高，分析时间短；该方法的相对标准偏差是0.25％，加标回收率是98.1％～103.2％；该发明具有峰呈现性好，分辨率高、重复性好的特点，能准确快速测定各种纯度的9-芴甲醇。

附图说明

图1为9-芴甲醇标样谱图；

图2为9-芴甲醇精制品样品谱图；

图3为9-芴甲醇粗制品样品谱图。

具体实施方式

本发明的测定方法具体操作步骤如下：

一，溶液配制

将已知纯度标样与待测纯度样品分别定量秤取，加入定量的色谱纯级有机溶剂，经充分振摇、混合、溶解、脱泡后静止5～10分钟，即分别配成浓度为0.1mg/ml～1.2mg/ml已知纯度标样与待测纯度样品的各自的分析样品溶液，待用。所述色谱纯级有机溶剂为甲醇、乙腈或四氢呋喃中任选一种，其中优选为毒性小价格最低的甲醇。

二，测试峰面积

待色谱仪工作稳定后，用50μL微量注射器，分别从已知纯度标样溶液和待测纯度样品溶液中各取相同的进样量，依次注入液相色谱仪的进样口，由于色谱仪内泵的传动而使其流动相液体呈不断流动状态，因而使已进入的已知纯度标样液或待测纯度样品液带入通用型液相色谱柱内，最后顺色谱柱由上而下流出机外。由于上述两种液体的流动所产生的各种数值通过高效液相色谱仪中液相色谱柱及紫外多波检测器分别得出9-芴甲醇的标样及待测样品的分离色谱图和相应的峰面积。

三，测试条件

进样量范围为5μL～20μL；

流动相为色谱级有机溶剂与水按体积百分比10～90∶90～10的比例配制的混合液体，其中有机溶剂为甲醇、乙腈或四氢呋喃中任选一种，其中优选为毒性小价格最低的甲醇。上述使用的水为二次石英蒸馏水；

流动相的流速为0.8～1.2ml/分；

色谱分析时间为1～40分钟；

色谱柱采用通用型液相色谱柱，其填料为十八烷基键合相硅胶或辛烷基键合相硅胶或者氰基键合相硅胶；

6、紫外多波检测器波长为220～370nm。

(三)计算结果

将上述所得已知的9-芴甲醇的标样及待测样品的分离色谱图和相应的峰面积用外定法定量计算公式换算成待测样品的9-芴甲醇纯度值。具体公式如下：

X₁：待测样品中9-芴甲醇的纯度，％

X_标：已知标样中9-芴甲醇的纯度，％；

A₁：试样中9-芴甲醇组分的峰面积；

A₂：标样中9-芴甲醇组分的峰面积；

m₁：试样的质量，g；

m₂：标样的质量，g。

实施例1

实验仪器与色谱条件：

选用Agilent 1100型高效色谱仪，配备在线真空脱气机，四元梯度泵，20μl手动进样器，多波长紫外检测器，柱温箱，Agilent 1100化学工作站。

色谱柱选用的是Inertsil ODS-3，填料粒度5μm，柱长15cm，内径4.6mm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：232nm；进样量10μl。

试剂与药品：

9-芴甲醇标样由比利时的ACROS公司提供，产品编号是A0182055，纯度99.8％。标样经过红外光谱、质谱、核磁共振谱表征，并与标准谱图比较，结构得到确认。甲醇(色谱级)购自上海国药集团的产品。实验中流动相和溶液用水均为二次石英蒸馏水。

99.8％纯度9-芴甲醇标准样品的测定

流动相为甲醇∶水＝10∶90(v/v)。准确称取29.45mg9-芴甲醇标样，置于100ml洁净干燥的容量瓶中，用色谱级甲醇稀释至刻度，用超声波脱气10分钟，充分摇匀，进样。待仪器条件稳定后连续进样3次，取3次面积的平均值作为标样计算的面积(A2)。数据见表1。

典型色谱图见图1。

表1  9-芴甲醇标样积分面积

9-芴甲醇标样	进样次数
				1#	2#	3#
	峰面积	25342.5	25363.8				25338.4
平均峰面积(A2)				25348.2

实施例2

色谱条件同实施例1，准确称取28.76mg9-芴甲醇精制品试样，置于100ml

洁净干燥的容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释至刻度，用超声波脱气10分钟，充分摇匀，进样。得到试样中9-芴甲醇的面积A1＝24558.3，根据下式计算：

X₁：精制品样品中9-芴甲醇的纯度，％

X_标：已知标样中9-芴甲醇的纯度，％；

A₁：试样中9-芴甲醇组分的峰面积；

A₂：标样中9-芴甲醇组分的峰面积；

m₁：试样的质量，g；

m₂：标样的质量，g。

$X_1=99.8\×\frac{24558.3}{25348.2}\×\frac{29.45}{28.76}$

$=99.01$

该9-芴甲醇试样的纯度是99.01％。

谱图见图2。

实施例3

流动相为甲醇∶水＝20∶80(v/v)，其它色谱条件同实施例1，准确称取27.45mg9-芴甲醇粗制品试样，置于100ml洁净干燥的容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释至刻度，用超声波脱气10分钟，充分摇匀，进样。得到试样中9-芴甲醇的面积A1＝18944.0，根据下式计算：

X₁：精制品样品中9-芴甲醇的纯度，％

X_标：已知标样中9-芴甲醇的纯度，％；

A₁：试样中9-芴甲醇组分的峰面积；

A₂：标样中9-芴甲醇组分的峰面积；

m₁：试样的质量，g；

m₂：标样的质量，g。

$X_1=99.8\×\frac{18944.0}{25348.2}\×\frac{29.45}{27.45}$

$=80.02$

分析结果是该9-芴甲醇试样纯度为80.02％(w％)，

谱图如图3。

实施例4

高效液相色谱仪同实施例1，准确称取9-芴甲醇粗制品15mg左右，置于100ml洁净干燥的容量瓶中，再准确称取一定量99.8％标准样品加入试样瓶中，用色谱纯甲醇稀释至刻度，用超声波脱气10分钟，充分摇匀，进样，(C_实测/C_理论)×100％即为回收率，得到此方法的加标回收率为98.1％～103.2％，具体数据见表2。对实施例2中样品进行了6次连续测定，统计误差得到相对标准偏差是0.25％，

具体数据见表3。

表2  加标回收率试验数据

标准样品加入量(mg)	5.12	7.54	10.23	12.58	15.22
						测定值(mg)	5.023	7.70	10.56	12.55	15.45
回收率(％)	98.1	102.1	103.2	99.8	101.5

表3  相对标准偏差试验数据

进样次数	1#	2#	3#	4#	5#	6#
							峰面积	24558.3	24624.2	24484.2	24637.2	24525.9	24609.2
平均峰面积	24564.2

Claims (10)

1.一种9-芴甲醇纯度的测定方法，其特征在于，该测定方法包括以下步骤：

首先，将已知纯度的标样与待测纯度的样品先进行溶液配制；然后用高效液相色谱法分别测出各自相关的色谱谱图与峰面积；最后按外定法的定量计算公式换算成待测样品的9-芴甲醇纯度值。

2.根据权利要求1所述的9-芴甲醇纯度的测定方法，其特征在于：将已知纯度标样与待测纯度样品分别定量秤取，加入定量的色谱纯级有机溶剂，经充分振摇、混合、溶解、脱泡后静止5～10分钟，即分别配成浓度为0.1mg/ml～1.2mg/ml已知纯度标样与待测纯度样品的各自的分析样品溶液，待用。

3.根据权利要求1或2所述的9-芴甲醇纯度的测定方法，其特征在于：所述色谱纯级有机溶剂为甲醇、乙腈或四氢呋喃中任选一种。

4.根据权利要求3所述的9-芴甲醇纯度的测定方法，其特征在于：所述色谱纯级有机溶剂为甲醇。

5.根据权利要求1或2所述的9-芴甲醇纯度的测定方法，其特征在于：高效液相色谱法所用流动相为色谱纯级有机溶剂与水按体积百分比10～90∶90～10的比例配制成混合液体。

6.根据权利要求5所述的9-芴甲醇纯度的测定方法，其特征在于：所述色的谱纯级有机溶剂为甲醇、乙腈或四氢呋喃中任选一种。

7.根据权利要求6所述的9-芴甲醇纯度的测定方法，其特征在于：所述的色谱纯级有机溶剂为甲醇。

8.根据权利要求5所述的9-芴甲醇纯度的测定方法，其特征在于：所述水为二次石英蒸馏水。

9.根据权利要求1所述的9-芴甲醇纯度的测定方法，其特征在于，所述的外定法的定量计算公式为：

其中，

X₁：待测样品中9-芴甲醇的纯度，％

X_标：已知标样中9-芴甲醇的纯度，％；

A₁：试样中9-芴甲醇组分的峰面积；

A₂：标样中9-芴甲醇组分的峰面积；

m₁：试样的质量，g；

m₂：标样的质量，g。

10.根据权利要求1所述的9-芴甲醇纯度的测定方法，其特征在于：所述高效液相色谱的所用色谱柱为通用型液相色谱柱，其填料为十八烷基键合相硅胶或辛烷基键合相硅胶或者氰基键合相硅胶。

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