CN113341038A - 一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，属于化学技术领域，具体涉及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐原药或含其制剂中的苯甲酸和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐同时测定含量的方法，采用液相色谱分析和外标法定量，其色谱条件为：流动相A为0.03‑0.5%三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，流速0.6‑1.4mL/min，检测波长为220‑260nm，所述检测方法简单、快速、准确，重现性好，可作为评价甲氨基阿维菌素苯甲酸盐产品质量的依据。

Description

一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法
技术领域
本发明涉及检测农药含量的方法，具体涉及一种使用高效液相色谱同时测定甲氨基阿维菌素苯甲酸盐中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苯甲酸含量的方法。
背景技术
甲氨基阿维菌素苯甲酸盐是一种新型、半合成的高效杀虫杀螨剂，具有高效、低毒、无残留等特点，对鳞翅目昆虫具有非常突出的杀虫活性。在农药领域有广泛的应用。
甲氨基阿维菌素苯甲酸盐以生物农药阿维菌素作为起始原料，经一系列保护、氧化、氨化、还原、脱保护最终与苯甲酸成盐。苯甲酸是有效成分的一部分，为保证甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的质量，国家标准(GB/T 20694-2019)及行业标准(NY/T 3773-2020)均对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苯甲酸这两项指标进行了制定。国家标准及行业标准分别规定了甲氨基阿维菌素苯甲酸盐中苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量的测定方法，即分别用甲醇+水+冰乙酸＝50:50:0.1测定苯甲酸含量，以甲醇+乙腈+氨水溶液(水+氨水＝300+1)＝35:50:15测定甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的含量。
而关于甲氨基阿维菌素苯甲酸盐中苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量的同时测定方法未见报道，为使检测更加快捷、简便，探索同时测定苯甲酸和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量的方法显得尤为必要。
发明内容
本发明提供了一种同时测定甲氨基阿维菌素苯甲酸盐中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐及苯甲酸含量的测定方法，该检测方法简单、快速、准确，重现性好。
为了解决上述问题，本发明采用的技术方案如下：
一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，采用高效液相色谱的方法进行测定，同时测定出甲氨基阿维菌素苯甲酸盐原药或制剂中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苯甲酸的含量。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述的测定方法按下述步骤进行：
(1)制定色谱条件：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为0.03-0.5％的三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，流速为0.6-1.4mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60-5％，流动相B的比例为40-95％，柱温为20-40℃；检测波长为220-260nm；进样量1-100μL；
(2)甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样溶液的制备：称取甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样约0.05g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得标样溶液1；
(3)苯甲酸标样溶液的制备：称取苯甲酸标样约0.05g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度；准确移取上述溶液10mL于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得标样溶液2；
(4)样品溶液的制备：称取与步骤(2)等量的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的样品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得样品溶液；
(5)测定方法：按照步骤(1)所述色谱条件分别进样标样溶液1、标样溶液2和样品溶液，分别计算样品中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐及苯甲酸的含量。
本发明技术方案的进一步改进在于：步骤(1)中梯度洗脱的程序为
时间(min) 0.0 5.0 10.0 20.0 25.0 30.0 30.1 35.0
流动相A(％) 60 60 35 35 5 5 60 60
流动相B(％) 40 40 65 65 95 95 40 40
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(1)中流动相A为0.1％三氟乙酸水溶液。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(1)中的流速为1.0mL/min，柱温为35℃。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(1)中的检测波长为245nm。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(1)中的进样量5μL。
本发明技术方案的进一步改进在于：甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样中的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的含量按下式计算：
Figure BDA0003066993670000031
式中:
A1—标样溶液中甲氨基阿维菌素B1峰面积的平均值；
A2—试样溶液中甲氨基阿维菌素B1峰面积的平均值；
m1—甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样的质量，g；
m2—试样的质量，g；
P—标样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1(B1a+B1b)的质量分数，％。
本发明技术方案的进一步改进在于：甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样中的苯甲酸的含量按下式计算：
Figure BDA0003066993670000032
式中:
A3—标样溶液中苯甲酸峰面积的平均值；
A4—试样溶液中苯甲酸峰面积的平均值；
m3—标样的质量，g；
m2—试样的质量，g；
p1—标样中苯甲酸的质量分数，％。
由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术效果如下：在此液相条件下，苯甲酸及甲氨基阿维菌素B1a及B1b主峰均能与其他杂质及助剂得到很好地分离，峰纯度高，专属性强，精密度好，准确度高，能够在较短的时间内同时对苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的含量进行准确测定，大大减少了流动相换相时柱子平衡所需的时间，有利于控制甲氨基阿维菌素苯甲酸盐原药及各种新型制剂产品的质量。
附图说明
图1是苯甲酸紫外光谱图；
图2是甲氨基阿维菌素B1b紫外光谱图；
图3是甲氨基阿维菌素B1a紫外光谱图；
图4是苯甲酸标样色谱图；
图5是甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样色谱图；
图6是甲氨基阿维菌素苯甲酸盐样品色谱图；
图7是苯甲酸线性图；
图8是甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1线性图。
具体实施方式
以下实施例说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
(1)甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样溶液的制备：称取甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样0.05g(精确至0.0002g)于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得标样溶液1。
(2)苯甲酸标样溶液的制备：称取苯甲酸标样0.05g(精确至0.0002g)于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度；准确移取上述溶液10mL于另一于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得标样溶液2。
(3)样品溶液的制备：称取含与标样溶液等量的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的样品，即2.3％甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂约2.2g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得样品溶液。
(4)色谱条件：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为0.03％-0.5％的三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，梯度系统程序见表1；流速为0.6-1.4mL/min；柱温为20-40℃；检测波长为220-260nm；进样量1-100μL。
(5)测定法：按照步骤(4)所述色谱条件测定，即得。
进一步地，所述步骤(4)色谱条件为：仪器为Agilent1260高效液相色谱仪，配有DAD(二极管阵列)检测器，自动进样器；色谱柱为C18填料液相色谱柱，规格250mm×4.6mm(i.d.)，5μm不锈钢柱；流速为1.0mL/min；柱温为35℃；检测波长为245nm；进样量5μL。
表1梯度洗脱程序
时间(min) 0.0 5.0 10.0 20.0 25.0 30.0 30.1 35.0
流动相A(％) 60 60 35 35 5 5 60 60
流动相B(％) 40 40 65 65 95 95 40 40
试剂：三氟乙酸(色谱纯)、甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、水：新蒸二次蒸馏水、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样、苯甲酸标样、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样：河北威远生物化工有限公司。
苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐紫外光谱检测：利用二极管阵列(DAD)检测器，开启紫外全波长对苯甲酸标样溶液及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样溶液分别进行光谱扫描，如图1所示，苯甲酸在228nm附近处有较强的吸收；如图2和图3所示，甲氨基阿维菌素B1在244nm处有较强的吸收，为保证两者均能同时被准确测定，最终确定245nm为检测波长。
峰纯度检测：称取甲氨基阿维菌素苯甲酸盐样品2.1954g，测定各峰峰纯度,得苯甲酸峰纯度为999.990,甲氨基阿维菌素B1b峰纯度999.914，甲氨基阿维菌素B1a峰纯度999.998，峰纯度均满足定量分析的要求。
试样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的甲氨基阿维菌素含量按下式计算
Figure BDA0003066993670000051
式中:
A1—标样溶液中甲氨基阿维菌素B1峰面积的平均值；
A2—试样溶液中甲氨基阿维菌素B1峰面积的平均值；
m1—甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样的质量，g；
m2—试样的质量，g；
P—标样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1(B1a+B1b)的质量分数，％。
试样中甲氨基阿维菌素B1苯甲酸盐的苯甲酸的含量按下式计算
Figure BDA0003066993670000061
式中:
A3—标样溶液中苯甲酸峰面积的平均值；
A4—试样溶液中苯甲酸峰面积的平均值；
m3—标样的质量，g；
m2—试样的质量，g；
p1—标样中苯甲酸的质量分数，％。
10—标样稀释倍数。
线性关系考察
制备不同浓度的苯甲酸标样溶液进行液相色谱测定，得苯甲酸结果如下
标样含量％ 标样称样量，g 浓度，mg/mL 面积，A
99.7 0.00507 0.0051 29.9
99.7 0.01013 0.0101 57.8
99.7 0.03039 0.0303 173.4
99.7 0.05091 0.0508 295.3
99.7 0.07636 0.0761 442.4
99.7 0.10132 0.1010 566.0
制备不同浓度的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样溶液进行液相色谱测定，得甲氨基阿维菌素苯甲酸盐结果如下
Figure BDA0003066993670000062
Figure BDA0003066993670000071
如图7和图8所示，苯甲酸在0.0051mg/mL～0.1010mg/mL范围内，线性方程Y＝2.95629+5658.60374X,相关系数R＝0.9996；甲氨基阿维菌素苯甲酸盐在0.0501mg/mL～1.0032mg/mL范围内，线性方程Y＝8997.54288X-52.82427,相关系数R＝0.99916；其线性相关系数R均大于0.99，说明线性关系良好。
精密度试验
称取同一批次甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样6份，按照步骤(4)中所述方法进行检测，分别计算苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的精密度结果如下：
Figure BDA0003066993670000072
根据NY/T 2887-2016《农药产品质量分析方法确认指南》中3.2.1c)中要求，RSD的可接受标准为：％RSD＜0.67×2(1-0.5logc)，其中C为样品中有效成分含量，由上表得苯甲酸RSD为0.93％小于霍维茨(RSDr＝0.67×2(1-0.5logc))理论计算值3.23％；甲氨基阿维菌素苯甲酸盐RSD为0.49％小于霍维茨(RSDr＝0.67×2(1-0.5logc))理论计算值2.36％，证明本方法精密度良好。
回收率试验
称取空白样品，向其分别添加苯甲酸标样及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样，分别按照步骤(4)中所述方法进行检测，分别计算苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的回收率结果如下
Figure BDA0003066993670000081
按照NY/T 2887-2016《农药产品质量分析方法确认指南》中3.3.1c)中要求，有效成分1％～10％，回收率要求在97％～103％，由表4结果可知，甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(有效成分含量2.3％)平均回收率99.7％；有效成分＜1％，回收率要求在95％～105％，由表4结果可知，苯甲酸(有效成分含量0.2％)平均回收率99.5％，均在各自要求范围内，说明回收率合格。
实施例
称取5批次甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样，分别按照甲维盐国标的方法及本申请中所述方法进行检测，分别计算苯甲酸及甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的含量如下，结果对比满意。
Figure BDA0003066993670000082
Figure BDA0003066993670000091

Claims (9)

1.一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱的方法进行测定，同时测定出甲氨基阿维菌素苯甲酸盐原药或制剂中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苯甲酸的含量。
2.根据权利要求1所述的一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，其特征在于：所述的测定方法按下述步骤进行：
(1)制定色谱条件：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为0.03-0.5％的三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，流速为0.6-1.4mL/min梯度洗脱，流动相A的比例为60-5％，流动相B的比例为40-95％，柱温为20-40℃；检测波长为220-260nm；进样量1-100μL；
(2)甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样溶液的制备：称取甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样约0.05g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得标样溶液1；
(3)苯甲酸标样溶液的制备：称取苯甲酸标样约0.05g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度；准确移取上述溶液10mL于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得标样溶液2；
(4)样品溶液的制备：称取与步骤(2)等量的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的样品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得样品溶液；
(5)测定方法：按照步骤(1)所述色谱条件分别进样标样溶液1、标样溶液2和样品溶液，分别计算样品中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐及苯甲酸的含量。
3.根据权利要求2所述的一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，其特征在于：步骤(1)中梯度洗脱的程序为
时间(min) 0.0 5.0 10.0 20.0 25.0 30.0 30.1 35.0 流动相A(％) 60 60 35 35 5 5 60 60 流动相B(％) 40 40 65 65 95 95 40 40
4.根据权利要求2所述的一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中流动相A为0.1％三氟乙酸水溶液。
5.根据权利要求2所述的一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中的流速为1.0mL/min，柱温为35℃。
6.根据权利要求2所述的一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中的检测波长为245nm。
7.根据权利要求2所述的一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中的进样量5μL。
8.根据权利要求2所述的一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，其特征在于：甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样中的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的含量按下式计算：
Figure FDA0003066993660000021
式中:
A1—标样溶液中甲氨基阿维菌素B1峰面积的平均值；
A2—试样溶液中甲氨基阿维菌素B1峰面积的平均值；
m1—甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样的质量，g；
m2—试样的质量，g；
P—标样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1(B1a+B1b)的质量分数，％。
9.根据权利要求2所述的一种甲氨基阿维菌素苯甲酸盐含量测定方法，其特征在于：甲氨基阿维菌素苯甲酸盐试样中的苯甲酸的含量按下式计算：
Figure FDA0003066993660000022
式中:
A3—标样溶液中苯甲酸峰面积的平均值；
A4—试样溶液中苯甲酸峰面积的平均值；
m3—标样的质量，g；
m2—试样的质量，g；
P1—标样中苯甲酸的质量分数，％。
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