CN101125102A - 子宫颈上皮内瘤变模型及模型建立方法 - Google Patents
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Abstract
子宫颈上皮内瘤变模型及模型建立方法,其特征是将子宫颈上皮内瘤变组织,埋植到免疫缺陷小鼠体内建立子宫颈上皮内瘤变模型。建模方法的特征是子宫颈上皮内瘤变组织分别取自阴道镜下活检并经病理科确诊的组织,接种在小鼠背部皮下;本发明免疫缺陷小鼠可以克服异种间的免疫排斥反应,接受人类肿瘤组织的移植,移植后的组织模型性状显著且稳定,观察周期短,实验结果的具有较大的临床参考意义。可以通过对CIN I、CIN II、CIN III动物模型的转归,病理过程探讨子宫颈癌癌变的机制。并且观察动物模型的子宫颈上皮内瘤变组织转归的周期,为逆转CIN I、CIN II病变组织的恶性转化提供了可行的临床动物实验模型。
Description
技术领域
本发明涉及子宫颈上皮内瘤变模型及模型建立方法。
背景技术
子宫颈癌是人体最常见的肿瘤之一,不但在女性生殖系统肿瘤中占首位,而且是女性各种恶性肿瘤中最多见的肿瘤。我国宫颈癌死亡率占总癌症死亡率的第四位,占女性癌的第二位。
子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)是与子宫颈浸润癌相关的一组癌前病变,能反映子宫颈癌发生发展中的连续过程。CIN的病理特点是局限于子宫颈鳞状上皮层的瘤变,包括细胞排列异常及核异常。按其程度不同可分为非典型增生CINI级、CINII级及CINIII级,分别为轻度、中度和重度(包括原位癌)。随着CIN病变程度加重,细胞DNA非整倍体和中心体复制增加。随着分子生物学发展和临床研究的深入,发现CIN并非是简单的病理生理学发展过程,而是具有两种不同的生物学行为。其一是由病毒引起的病变,常自然消退,很少发展为浸润癌;另一种是多因素(包括病毒)诱发的病变,具有癌变潜能,可能发展为浸润癌。
免疫缺陷小鼠,可以克服异种间的免疫排斥反应,接受人类正常和肿瘤组织移植,移植后的组织仍保持原有的组织形态及生化特征,更接近人类疾病的病理变化。
子宫颈上皮内瘤变CINI、CINII、CINIII三个病理级别反应着子宫颈癌发生发展的连续过程,这一过程是可以被阻断的,关键在于及时诊断和处理,显然,建立相应的动物模型将有利于探讨子宫颈上皮内瘤变向子宫颈癌转化的机制。但是,迄今为止,没有建立相关动物模型的报导。
发明内容
本发明是为避免上述现有技术所存在的问题,提供一种子宫颈上皮内瘤变模型,并提供该模型的建模方法,为研究子宫颈癌的发病机制,逆转子宫颈上皮内瘤变向子宫颈癌转化提供了新的研究策略。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是:
本发明子宫颈上皮内瘤变模型的特点是将子宫颈上皮内瘤变组织,埋植到免疫缺陷小鼠体内建立子宫颈上皮内瘤变模型。
本发明子宫颈上皮内瘤变模型的特点也在于:
所述子宫颈上皮内瘤变组织包括CINI、CINII和CINIII三个病理级别组织。
所述免疫缺陷小鼠包括NOD-SCID鼠和裸鼠。
子宫颈上皮内瘤变模型建立方法的特点是按如下步骤操作:
a、取材:子宫颈上皮内瘤变组织取自阴道镜下活检并经病理确诊的组织,所取组织置入培养液无菌瓶,随即置于冰盒;并送入动物房接种;
b、取免疫缺陷小鼠,6-8周龄,性成熟,雌性;
c、接种前处理:所取组织用2-8℃磷酸缓冲盐溶液洗去血块和黏液,于无菌培养皿内剪成小块,分装在盛有培养液的无菌管内为备用标本;
d、种植:腹腔注射麻醉小鼠,待小鼠麻醉后固定于操作板上,消毒备皮,并做小口,将已备标本种植于皮下,无菌丝线缝合即成。
本发明子宫颈上皮内瘤变模型模型建立方法的特点也在于:
在所述步骤a中,子宫颈上皮内瘤变组织包括CINI、CINII、CINIII三个病理级别的组织。
所述步骤b的培养液中含有100U/ml青霉素和100U/ml链霉素。
子宫颈上皮内瘤变分为三级:CINI级即轻度不典型增生。上皮下1/3层细胞核增大,核质比例略增大,核染色稍加深,核分裂相少,细胞极性保存。CINII级即重度不典型增生。上皮下1/3~2/3层细胞核明显增大,核质比例增大,核深染,核分裂相较多,细胞数量明显增多,细胞极性尚存。CINIII级即重度不典型增生和原位癌。病变细胞几乎或全部占据上皮全层,细胞核异常增大,核质比例显著增大,核型不规则,染色较深,核分裂相增多,细胞拥挤,排列紊乱,无极性。
与已有技术相比,本发明有益效果体现在:
1、本发明中三种病理级别的子宫颈上皮内瘤变组织是来源于阴道镜活检确诊的组织,组织来源丰富,稳定可靠。
2、免疫缺陷小鼠的机体免疫系统对子宫颈上皮内瘤变组织呈现免疫豁免状态,由此导致子宫颈上皮内瘤变组织容易异位种植,为造模提供了更好的理论依据。
3、可以通过对CINI、CINII、CINIII三种动物模型转归的研究,探讨子宫颈癌癌变的机制。
4、本发明模型可以分别用于观察CINI动物模型的病变组织转化到CINII或者好转的周期,用于观察CINII动物模型的病变组织转化到CINI或者CINIII的周期,以及用于观察CINIII动物模型的小鼠的生存期和癌灶转移周期,为逆转CINI、CINII病变组织的恶性转化,提供了可行的临床动物实验模型。
免疫缺陷小鼠(如NOD-SCID、裸鼠等)可以克服异种间的免疫排斥反应,接受人类肿瘤组织的移植,移植后的组织仍保持原有的组织形态及生化特征,更接近人类疾病的病理变化;此类小鼠遗传背景明确,体内微生物可控制,模型性状显著且稳定,质量和规格可选择,价格适中,来源丰富;本发明模型建立成功率高,模型性状显著且稳定,观察周期短,实验结果具有较大的临床参考意义。
附图说明
图1为CINI级动物模型的子宫颈上皮内瘤变组织,光镜下HF染色图(×200)。
图2为CINII级动物模型的子宫颈上皮内瘤变组织,光镜下HE染色图(×200)。
图3为CINIII级动物模型的子宫颈上皮内瘤变组织,光镜下HF染色图(×200)。
以下通过具体实施方式,并结合附图对本发明作进一步说明。
具体实施方式
本实施例中子宫颈上皮内瘤变模型是将子宫颈上皮内瘤变组织,包括CINI、CINII、CINIII,分别埋植到非肥胖性糖尿病严重联合免疫缺陷NOD-SCID小鼠体内建立子宫颈上皮内瘤变模型。
模型的建立按如下步骤在常温下进行操作:
取材:
子宫颈上皮内瘤变(CINI、CINII、CINIII)组织分别取自阴道镜下活检并经病理确诊的组织,所取组织置入5毫升RPMI1640培养液无菌瓶,随即置于冰盒;具体实施中,PMRI1640培养液中可含有100U/ml青霉素和100U/ml链霉素,用于预防小鼠感染。
1、动物:
取NOD-SCID,6-8周龄,性成熟,雌性。
2、接种前处理:
所取蜕膜用磷酸缓冲盐溶液洗去血块和黏液,于无菌培养皿内剪成1×2毫米小块,分装在盛有RPMI1640培养液的无菌管内为备用标本。
3、种植:
以氯胺酮100毫克/千克腹腔注射麻醉小鼠,待小鼠麻醉后固定于操作板上,将已备标本种植于皮下。具体实施中,可以是对其背部进行消毒备皮,并在两侧各做一只0.5厘米长小口,将已备标本种植于皮下,无菌丝线缝合即成,皮下种植更有利于观察。
分组:16只NOD-SCID鼠分4组。实验鼠12只:A组为4只小鼠,种植CINI级病变组织;B组为4只小鼠,种植CINII级病变组织;C组4只小鼠,种植CINIII级病变组织;D组(对照组)4只小鼠,为不作任何处理的空白对照。
移植后处理:分别在移植后8周、16周、32周、48周,取出背部皮下病灶,10%福尔马林固定,乙醇逐级脱水,常规石蜡包埋,做HE染色。
结果:
1、NOD-SCID鼠存活及生长情况
16只均存活,可以排除饲养条件引起的感染。
2、于8周从实验鼠皮下取出移植物经HE染色,有11只小鼠皮下两侧均见到子宫内膜的腺体和间质,成功率为91.67%。
3、移植物病理
第8周从小鼠背部皮下取出病灶,常规石蜡包埋,HE染色,病理结果发现A组中有3只为CINI级(图1),种植成功率为75%;B组均为CINII级(图2),成功率为100%;C组分别为CINIII级(图3),成功率为100%。
Claims (6)
1.一种子宫颈上皮内瘤变模型,其特征是将子宫颈上皮内瘤变组织,埋植到免疫缺陷小鼠体内建立子宫颈上皮内瘤变模型。
2.根据权利要求1所述的子宫颈上皮内瘤变模型,其特征是所述子宫颈上皮内瘤变组织包括CINI、CINII和CINIII三个病理级别组织。
3.根据权利要求1所述的子宫颈上皮内瘤变模型,其特征是所述免疫缺陷小鼠包括NOD-SCID鼠和裸鼠。
4.一种权利要求1所述模型的建立方法,其特征是按如下步骤操作:
a、取材:子宫颈上皮内瘤变组织取自阴道镜下活检并经病理确诊的组织,所取组织置入培养液无菌瓶,随即置于冰盒;并送入动物房接种;
b、取免疫缺陷小鼠,6-8周龄,性成熟,雌性;
c、接种前处理:所取组织用2-8℃磷酸缓冲盐溶液洗去血块和黏液,于无菌培养皿内剪成小块,分装在盛有培养液的无菌管内为备用标本;
d、种植:腹腔注射麻醉小鼠,待小鼠麻醉后固定于操作板上,消毒备皮,并做小口,将已备标本种植于皮下,无菌丝线缝合即成。
5.根据权利要求4所述模型的建立方法,其特征是在所述步骤a中,所述子宫颈上皮内瘤变组织包括CINI、CINII、CINIII三个病理级别的组织。
6.根据权利要求2所述模型的建立方法,其特征是所述步骤b的培养液中含有100U/ml青霉素和100U/ml链霉素。
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