CN101100683B - 一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法 - Google Patents

一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,属于生物技术领域,其步骤包括:先溶解黄酮;然后调节溶液的pH值和温度;加入酶A,反应一定时间,再加入酶B,反应一定时间,最后加入酶C,调节pH值和温度,反应一定时间,酶转化结束后,进行浓缩,分离,大孔树脂柱吸附、解吸,解吸液浓缩、干燥得产品。本发明可使黄酮克服空间位阻效应,大大提高生物效价;且具有反应条件温和、副产物少和无环境污染等特点。

Description

一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法
(一)技术领域
本发明涉及一种生物技术,具体地说是一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法。
(二)背景技术
黄酮类化合物在动物体内的代谢途径不同,仅有甙元型黄酮可以直接被吸收进入动物血液,而大部分糖甙型的黄酮化合物在人体内不能通过小肠壁进入到血液中,而仅有小部分黄酮在结肠微生物的作用下,水解成甙元才能进入血液。因此,黄酮糖甙在动物体内的生物利用率远远低于甙元型黄酮。因此,改善黄酮的构型,提高其在血液中的吸收率是提高黄酮类产物生物利用率的重要途径。目前,对黄酮配糖体的构型转化主要有化学法和生物法,国内外许多研究者采用化学法水解黄酮糖苷,还有黄酮的醚化、酯化、酰基化等化学衍生化反应,也可以改变黄酮的特性。但这些方法在反应过程中往往屏蔽了黄酮化合物的主要官能团——酚羟基,对抗氧化产生不良影响。同时,这些方法副产品较多,易造成环境污染。
(三)发明内容
本发明的技术任务是针对现有技术的不足,提供一种应用生物酶技术使糖苷型黄酮转化为甙元型黄酮的甙元型黄酮生物转化及纯化的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
本发明主要包括以下步骤:
①溶解糖苷型黄酮;
②调节溶液的pH值和温度;
③加入酶A,反应一定时间;
④加入酶B,反应一定时间;
⑤调节pH值和温度,加入柚苷酶,反应一定时间;
⑥酶转化结束后,进行浓缩,分离;
⑦大孔树脂柱吸附、解吸;
⑧解吸液浓缩、干燥得产品。
上述一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其步骤①所述糖苷型黄酮是指银杏黄酮、芦丁、黄芩苷。
上述一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其步骤①中糖苷型黄酮的溶解,溶剂为自来水或纯化水,溶剂与反应底物的重量比为1∶100-300。
上述一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其步骤②中pH值为4-6,温度在40-60℃之间。
上述一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其步骤③中酶A为α-淀粉酶和纤维素酶中的一种或两种的混合物;酶加入量为反应底物的1%-5%;反应时间为6-24小时。
上述一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其步骤④中酶B为β-葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶中的一种或几种的混合物;酶加入量为反应底物的0.1-5%,反应时间为6-24小时.
上述一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其步骤⑤中pH值控制在3-5,温度控制在30-50℃之间;柚苷酶的用量为反应底物的0.5-3倍,反应时间为6-24小时。
上述一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其步骤⑦所用树脂为苯乙烯型树脂,所用洗脱液为50-90%的乙醇溶液。
上述一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其步骤⑧中浓缩、真空干燥时温度不大于50-90℃。
本发明的一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法与现有技术相比,所产生的有益效果是:
1)本发明应用生物酶技术能促进化合物发生生化反应的理论,成功地运用复合酶技术在分子水平上剪除糖苷型黄酮物质的分子配糖支链,使之转化为甙元黄酮,使糖苷型黄酮物质克服空间位阻效应,大大提高生物效价。且该发明具有反应条件温和,副产物少,无环境污染等特点;
2)根据分子修饰理论,应用酶技术对糖苷型黄酮的分子进行结构性修饰,使其转化为甙元型黄酮,转化率达到80%以上,生物活性效价提高7倍以上。
(四)具体实施方式
实施例1:
称取银杏黄酮5公斤,加入纯化水充分溶解,再加入纯化水到1000公斤,用稀盐酸调节溶液的pH值到5,调节溶液溶液到50℃,精确称取α-淀粉酶、纤维素酶各250克;少量纯化水溶解,加入溶液中,搅拌,反应15小时,再精确称取β-葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶各50克,少量水溶解,加入反应溶液中,反应12小时。用稀酸液调节PH值至3.8,温度调节至40℃,加入柚苷酶10公斤,反应20小时,反应完毕。将反应液真空减压浓缩至一定,离心过滤,清液上DM-130树脂柱吸附,2倍纯水冲洗,70%乙醇溶液洗脱,洗脱液减压浓缩,温度控制70℃,浓膏真空干燥,温度控制70℃以下。粉碎包装。
实施例2:
称取芦丁10公斤,加入自来水充分溶解,再加入水到1000公斤,用稀盐酸调节溶液的PH到5.5,调节溶液溶液到55℃,精确称取α-淀粉酶、纤维素酶各100克;少量纯化水溶解,加入溶液中,搅拌,反应12小时,再精确称取β-葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶各50克,少量水溶解,加入反应溶液中,反应12小时。用稀酸液调节PH值至3.5,温度调节至50℃,加入柚苷酶20公斤,反应24小时,反应完毕。将反应液真空减压浓缩至一定,离心过滤,清液上D101树脂柱吸附,2倍纯水冲洗,80%乙醇溶液洗脱,洗脱液减压浓缩,温度控制65℃,浓膏真空干燥,温度控制65-75℃以下,粉碎包装。
实施例3:
称取黄芩苷8公斤,加入自来水充分溶解,再加入水到1000公斤,用稀盐酸调节溶液的PH到6,调节溶液溶液到60℃,精确称取α-淀粉酶、纤维素酶各150克;少量纯化水溶解,加入溶液中,搅拌,反应24小时,再精确称取β-葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶各50克,少量水溶解,加入反应溶液中,反应12小时.用稀酸液调节PH值至3.5,温度调节至50℃,加入柚苷酶20公斤,反应24小时,反应完毕.将反应液真空减压浓缩至一定,离心过滤,清液上D101树脂柱吸附,2倍纯水冲洗,60%乙醇溶液洗脱,洗脱液减压浓缩,温度控制60℃,浓膏真空干燥,温度控制60-80℃以下,粉碎包装.

Claims (7)

1.一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其特征在于包括以下步骤:
①溶解糖苷型黄酮;
②调节溶液的pH值和温度;
③加入酶A,酶A加入量为反应底物的1%-5%,反应时间为6-24小时,其中所述酶A为α-淀粉酶和纤维素酶中的一种或两种的混合物;
④加入酶B,酶B加入量为反应底物的0.1-5%,反应时间为6-24小时,其中所述酶B为β-葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶中的一种或几种的混合物;
⑤调节pH值和温度,加入柚苷酶,反应一定时间;
⑥酶转化结束后,进行浓缩,分离;
⑦大孔树脂柱吸附、解吸;
⑧解吸液浓缩、干燥得产品。
2.根据权利要求1所述的一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其特征在于,步骤①所述糖苷型黄酮是指银杏黄酮、芦丁、黄芩苷。
3.根据权利要求1所述的一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其特征在于,步骤①中糖苷型黄酮的溶解,溶剂为自来水或纯化水,溶剂与反应底物的重量比为1∶100-300。
4.根据权利要求1所述的一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其特征在于,步骤②中pH值为4-6,温度在40-60℃之间。
5.根据权利要求1所述的一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其特征在于,步骤⑤中pH值控制在3-5,温度控制在30-50℃之间;柚苷酶的用量为反应底物的0.5-2倍,反应时间为6-24小时。
6.根据权利要求1所述的一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其特征在于,步骤⑦所用树脂为苯乙烯型树脂,所用洗脱液为50-90%的乙醇溶液。
7.根据权利要求1所述的一种甙元型黄酮生物转化及纯化的方法,其特征在于,步骤⑧中浓缩、真空干燥时温度不大于75℃。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101307344B (zh) * 2008-07-08 2011-05-04 浙江大学 一种柚苷酶水解蜂胶黄酮苷的方法
CN102093326B (zh) * 2010-12-22 2012-12-26 晨光生物科技集团股份有限公司 一种从银杏叶中提取精制银杏黄酮的方法
CN102273670B (zh) * 2011-05-31 2014-05-14 徐志扬 一种应用酶解和喷雾干燥制备银杏晶的方法
CN103044507B (zh) * 2012-12-13 2016-04-13 大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司 一种从野生黄芩里提取黄芩苷的工艺方法
CN106676143A (zh) * 2017-01-10 2017-05-17 江苏农林职业技术学院 一种葛根黄酮改性的方法
CN107582588A (zh) * 2017-09-18 2018-01-16 漳州片仔癀药业股份有限公司 一种白凤菜总黄酮提取物及其制备方法与治疗酒精性脂肪肝的用途

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1390946A (zh) * 2001-06-12 2003-01-15 潘世全 异黄酮半乳糖甙制备工艺
CN1416470A (zh) * 2000-02-11 2003-05-07 默克专利有限公司 单糖苷化类黄酮的制备
CN1580271A (zh) * 2003-08-14 2005-02-16 中国农业大学 银杏黄酮甙元的生产方法
CN1685053A (zh) * 2002-09-23 2005-10-19 加拿大农业部 从植物生物质提取、纯化和转化类黄酮化合物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1416470A (zh) * 2000-02-11 2003-05-07 默克专利有限公司 单糖苷化类黄酮的制备
CN1390946A (zh) * 2001-06-12 2003-01-15 潘世全 异黄酮半乳糖甙制备工艺
CN1685053A (zh) * 2002-09-23 2005-10-19 加拿大农业部 从植物生物质提取、纯化和转化类黄酮化合物
CN1580271A (zh) * 2003-08-14 2005-02-16 中国农业大学 银杏黄酮甙元的生产方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
纵伟.酶法提取银杏叶中总黄酮的研究.山西食品工业 1.2000,(1),13-15.
纵伟.酶法提取银杏叶中总黄酮的研究.山西食品工业 1.2000,(1),13-15. *

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