CN101096356B - 9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯的纯化工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种采用去离子水低温析晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的方法。本发明所提供的FMOC-Osu纯化工艺简单，条件温和，原料易得且能完全循环使用，收率高，易于工业化生产。精制纯化的产品纯度高，单个杂质含量低，有效的控制了9-芴甲烯杂质生成，使产品质量稳定，完全能满足多肽合成中保护氨基酸的要求。
Description
技术领域
本发明涉及氨基酸保护剂9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的纯化工艺技术领域，尤其是采用去离子水低温析晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的方法。
背景技术
多肽药物和诊断试剂已引起我国的高度重视，我国制定的＂十五＂期间生物医药研究的重点方向之一就是多肽药物和诊断试剂。如多肽疫苗、抗肿瘤多肽、抗病毒多肽、细胞因子模拟肽、抗菌性活性肽、用于心血管疾病的多肽以及诊断用多肽等，在未来几年里将会有大量的多肽药物和试剂进入临床试验。部分将被批准生产销售。由于诸如胸腺肽α、抗艾滋病药T-20等众多多肽药物的不断推出，以及它们在治疗病毒性感染、心血管疾病、抗肿瘤及艾滋病等疾病的优良功效，且没有传统氯化、硝化、磺化等工艺生产的常用药物的副作用。因此，多肽药物合成已成为最活跃的生化科技领域之一，也正成为世界各大制药公司研制与生产的热门。
多肽是由氨基酸残基通过肽键连接成的一类化合物，多肽在化学合成中对氨基酸的保护要求很高，因此，作为多肽合成最重要的氨基酸保护剂之一的9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(FMOC-Osu)市场前景十分广阔。化学合成多肽一般需经四个步骤：1、保护非反应性基团；2、活化羧基；3、形成肽键；4、脱保护基团。1963年，R.B Merrifield创立了将氨基酸的末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链，合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的，克服了经典液相合成法中每一步产物都需纯化的困难，奠定了自动化合成肽的基础，为此，Merrifield获得了1984年诺贝尔化学奖。FMOC固相法由于在合成含有酸性条件下不稳定的氨基肽时，具有特别优越之处，因而9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(FMOC-Osu)作为提供FMOC基团最有效的原料，近年来，得到了飞速发展。
9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(FMOC-Osu)的合成方法很多，文献早有报道，但所得9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(FMOC-Osu)纯度不高，杂质多，不能直接用于多肽药剂的合成，必须经过纯化。Lucas Lapatsanis等人在文献Synthesis Communication72，671-674(1983)中阐述了用石油醚重结晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的方法。此法虽原料易得，但需用大量溶剂，且重结晶时由于温度较高，易产生9-芴甲烯杂质，产品质量受到一定影响。
Alenka Paquet等人在文献Can.J.Chem.60，976-80(1982)中报导了用氯仿—乙醚重结晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的方法。此法操作条件温和，产品纯度也高，但乙醚挥发性强，损耗高，且使用极不安全，难以工业化生产。
发明内容
本发明提供的9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)纯化工艺，其技术特征是：先用现有技术制备出9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯粗品溶液，再采用去离子水低温析晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的方法，得到熔点147.2℃～148.2℃、杂质9-芴甲烯小于0.1％、纯度大于99％的精品9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)。在9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯粗品溶液中，按体积比加入去离子水，去离子水体积与9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯溶液体积比为5～1∶1，搅拌析晶，析晶温度为0～25℃，析晶时间为2小时。过滤，用脂肪醇浸泡，脂肪醇为1～4个碳原子的脂肪醇，脂肪醇与FMOC-OSu较适宜的体积重量比为2～1∶1，浸泡时间为1～2小时，洗涤的温度为0～25℃，洗涤时间为1～2小时，洗涤次数为2～3次，烘干后即得熔点147.2℃～148.2℃，杂质9-芴甲烯小于0.1％，纯度大于99％的精品9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)。所用脂肪醇回收后可循环使用。
本发明所提供的FMOC-OSu纯化是在常温以下进行，不会带来高温重结晶过程易产生杂质以及乙醚易挥发带来的不安全隐患，本发明工艺简单，条件温和，原料易得，所用的洗涤溶剂对FMOC-OSu产品中各不纯物质均有较大溶解度，而对产品溶解度小，单个杂质含量低，有效的控制了杂质9-芴甲烯的生成，使产品质量稳定，大大提高了产品的纯度和收率，纯化所用的溶剂能完全循环使用，对环境友好，并且产品质量稳定，易于工业化生产，完全满足多肽合成中保护氨基酸的要求。
图1是本发明的工艺流程图。
具体实施例
以下结合实施例，对本发明作进一步说明，但本发明不仅仅局限于以下的实施例。
实施例1：
在500ml三口瓶中加入含50g FMOC-OSu的溶液200mL，降温至0℃，缓慢加入去离子 水200mL，控制温度低于25℃，加完搅拌1小时，降温至10℃以下析晶，过滤。将滤饼加入到250mL乙醇中，控温低于25℃搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤，滤饼干燥，得46gFMOC-OSu，纯度99.5％，9-芴甲烯杂质小于0.1％，熔点147.5～148.2℃。
实施例2：
500ml三口瓶中中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至0℃，控制温度低于25℃，缓慢加入去离子水200mL，加完搅拌1小时，降温至10℃以下析晶，过滤，将滤饼加入250mL异丙醇中，控温低于25℃搅拌1小时，过滤，用少量异丙醇洗涤，滤饼干燥，得45gFMOC-OSu，纯度99.2％，9-芴甲烯杂质小于0.1％，熔点147.2～148.1℃。
实施例3：
500Lml三口瓶中搪瓷反应釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至0℃，缓慢加入去离子水200mL，控制温度小于25℃，加完搅拌1小时，降温至10℃以下析晶，过滤。将滤饼加入回收的250mL乙醇中，控温低于25℃搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤，滤饼干燥，得46g FMOC-OSu，纯度99.7％，9-芴甲烯杂质小于0.1％，熔点147.5～148.2℃。
实施例4：
500ml三口瓶中搪瓷反应釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至0℃，缓慢加入去离子水200mL，控制温度小于25℃，加完搅拌1小时，降温至10℃以下析晶，过滤。将滤饼加入二次回收的250mL乙醇中，控温低于25℃搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤，滤饼干燥，得46g FMOC-OSu，纯度99.5％，9-芴甲烯杂质小于0.1％，熔点147.2～148.2℃。
实施例5：
500ml三口瓶中搪瓷反应釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至0℃，缓慢加入去离子水400mL，控制温度小于25℃，加完搅拌1小时，降温至10℃以下析晶，过滤。将滤饼加入二次回收的250mL乙醇中，控温低于25℃搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤，滤饼干燥，得46g FMOC-OSu，纯度99.8％，9-芴甲烯杂质小于0.1％，熔点147.8～148.2℃。
实施例6：
500ml三口瓶中搪瓷反应釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至0℃，缓慢加入去离子水200mL，控制温度小于15℃，加完搅拌1小时，降温至10℃以下析晶，过滤。将滤饼加入二次回收的250mL乙醇中，控温低于25℃搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤，滤饼干燥，得46g FMOC-OSu，纯度99.6％，9-芴甲烯杂质小于0.1％，熔点147.6～148.2℃。
实施例7：
500ml三口瓶中搪瓷反应釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至0℃，缓慢加入去离子水200mL，控制温度小于25℃，加完搅拌1小时，降温至10℃以下析晶，过滤。将滤饼加入二次回收的500mL乙醇中，控温低于25℃搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤，滤饼干燥，得46g FMOC-OSu，纯度99.7％，9-芴甲烯杂质小于0.1％，熔点147.7～148.2℃。
Claims (1)
1.9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯纯化工艺，其特征在于，先用现有技术制备出9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯粗品溶液，再采用去离子水低温析晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯的方法，在9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯粗品溶液中，按体积比加入去离子水，去离子水体积与9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯溶液体积比为5～1∶1，搅拌析晶，析晶温度为0～25℃，析晶时间为1～2小时，过滤，用脂肪醇浸泡洗涤，浸泡时间为1～2小时，洗涤时间为1～2小时，洗涤的温度为0～25℃，洗涤次数为2～3次，烘干后即得熔点147.2℃～148.2℃，杂质9-芴甲烯小于0.1％，纯度大于99％的9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯，所述的脂肪醇为1～4个碳原子的脂肪醇，脂肪醇与9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯的体积重量比为2～1∶1，纯化所用溶剂脂肪醇循环使用。
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