CN101068814A - 分离的伐昔洛韦杂质，制备伐昔洛韦杂质的方法及其作为参比标准物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供分离的N－甲酰基伐昔洛韦，其制备及其作为参比标示物和/或参比标准物的应用。
Description
相关申请的引用
本申请要求2004年9月3日提交的申请号为60/607,279的临时申请的权益，其内容在此引作参考。
技术领域
本发明涉及分离的伐昔洛韦杂质N-甲酰基伐昔洛韦，其制备及其作为参比标准物的应用。
背景技术
伐昔洛韦是阿昔洛韦的L-缬氨酰酯前药。阿昔洛韦是天然核苷的无环类似物，被发现具有高抗病毒活性。阿昔洛韦广泛用于治疗与预防人类病毒感染，尤其是疱疹族病毒引起的感染，参见Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics 1193-1198(第9版，1996)。
伐昔洛韦的化学名称为1-缬氨酸，2-[(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯。(CAS登记号124832-26-4)。伐昔洛韦目前以VALTREX商标在市场上销售。伐昔洛韦的化学结构如结构式I所示。
结构式I
众所周知，对于人类用药，活性药物成分(API)产品在上市前，安全性因素要求国内和国际管理机构对毒性未定的确证杂质规定非常低的限度。通常，这些限度是每种杂质低于约0.15％(重量)。对于未确证的和/或(毒性)未定的杂质，其限度显然要更低，低于0.1％(重量)。因此，在APIs的制备过程中，产品如伐昔洛韦的纯度在上市之前是有要求的，该纯度也是药物制剂制备中活性剂的纯度。
在本领域同样已知的是，API中的杂质可能是由于API自身的降解而产生的(这与贮存过程中API纯品的稳定性有关)，也可能来源于制备方法，包括化学合成。方法杂质包括未反应的起始原料、起始原料中包含的杂质的化学衍生物、合成副产物、以及降解产物。
稳定性是影响API保存期限的一种因素，除稳定性外，工业制备方法所产生的API的纯度显然也是要成为商品的必要条件。工业制备过程中带入的杂质必须限制到极少量，最好基本上不含。例如，针对API制造商的ICH Q7A指导原则要求在制备过程中通过详细说明原料、控制工艺参数(如温度、压力、时间和化学计量比)，以及包括提纯步骤如结晶、蒸馏和液-液提取，来维持方法杂质的含量低于规定限度。
化学反应的产物混合物很少是纯度足以符合药物标准的单一化合物。副产品和反应副产物以及反应中使用的添加剂在大多数情形下也都存在于产物混合物中。在加工API如伐昔洛韦过程中的某些阶段，必须要分析纯度(典型的是通过HPLC或TLC分析)来确定它是否适合于继续加工以及最终在药品中的使用。API不必是绝对纯的，因为绝对纯度是一个理论概念，通常是难达到的。相反，需要规定纯度标准，其目的是确保API尽可能不含杂质，从而对于临床应用也尽可能是安全的。如上所述，在美国，食品与药品管理局的指导原则建议某些杂质的含量要限制到低于0.1％。
一般来讲，副产品、副产物以及添加剂(统称“杂质”)采用光谱法和/或其它物理方法鉴别，它们随后与峰位置(如在色谱图中)或TLC板上的斑点存在关联关系。(Strobel第953页，Strobel，H.A.；Heineman，W.R.，Chemical Instrumentation：A Systematic Approach，3rd dd.(Wiley & Sons：New York 1989))。其后，可以根据例如其在色谱图中的相对位置对杂质进行鉴别，其中在色谱图中的位置方便地以在柱上注入试样与特定组分洗脱通过检测器之间的分钟数测量。色谱图中的相对位置称为“保留时间”。
保留时间依据仪器操作条件及其它多种因素而围绕平均值变化。为了减少这些变化对杂质精确鉴别的影响，业内人员使用“相对保留时间”(“RRT”)来鉴别杂质。(Strobel p.922)。杂质的RRT是其保留时间除以参比标示物保留时间。有利的是选择其含量高到足以可检测但又充分低至不能饱和色谱柱、并且是已加入到或存在于混合物中且非API的化合物，并且使用该化合物作为测定RRT的参比标示物。
制药领域的研发人员都知道，相当纯态的化合物可用作“参比标准物”。参比标准物与参比标示物相似，它只用于定性分析，但也用于定量测定未知混合物中参比标准化合物的含量。在采用相同技术分析已知浓度参比标准物的溶液以及未知混合物时，参比标准物是“外标物”。(Strobel p.924，Snyder p.549，Snyder，L.R.；Kirkland，J.J.Introduction to Modern Liquid Chromatography，第2版(John Wiley &Sons：New York 1979))。化合物在混合物中的含量可以通过比较检测器响应值大小测定。同样也可参见美国专利6,333,198，其内容在此引作参考。
如果补偿检测器对两个化合物的敏感度差异的“响应因子”已经预先确定，则参比标准物也可以用于测量混合物中另一化合物的含量。(Strobel p.894)。为此，将参比标准物直接加到混合物中，并且被称为“内标物”。(Strobel p.552)。
在不蓄意加入参比标准物而是利用称作“标准物加入”的技术使未知混合物包含可检测量的参比标准物时，则参比标准物可用作内标物。
在“标准物加入技术”中，通过加入已知但不同量的内标物制备至少两种试样。(Strobep pp.391-393，Snyder pp.571，572)。通过绘制检测器响应值-加入到各试样中的参比标准物的量的曲线，并且将曲线外推到参比标准物的零浓度，可以求出由混合物中存在的而非加入的参比标准物引起的检测器响应的比例。(参见例如Strobel，图11.4，第392页)。
正如本领域技术人员所知，通过了解方法杂质的化学结构和合成途径，以及通过鉴别影响终产物中杂质含量的参数，能够大大增强对它们的管理。
同任何合成化合物一样，伐昔洛韦可能包含外来化合物或多种来源的杂质。它们可以是未反应的起始原料，反应的副产物、副反应的产物或降解产物。
在本申请中，参比标示物是API中的杂质N-甲酰基伐昔洛韦。检测或定量分析参比标示物能用来确定API的纯度水平。化合物作为参比标示物的应用要求用基本上纯的化合物样品。
发明概述
本发明的一个方面涉及分离的N-甲酰基伐昔洛韦。
本发明的另一个方面涉及制备N-甲酰基伐昔洛韦的方法，包括以下步骤：使伐昔洛韦与甲酸铵反应得到反应混合物，将该反应混合物与热水混合，加热反应混合物与热水的混合液，然后冷却该混合液，得到N-甲酰基伐昔洛韦沉淀物。
本发明的另一个方面涉及N-甲酰基伐昔洛韦作为参比标示物在伐昔洛韦的定性分析中的应用。
在另一个实施方案中，本发明涉及应用N-甲酰基伐昔洛韦作为参比标准物定量测定伐昔洛韦纯度的方法。
本发明的再一个方面涉及定量测定伐昔洛韦纯度的方法，包括使用N-甲酰基伐昔洛韦作为参比标准物，其中该参比标准物可以是外标物或内标物。
附图简述
图1是N-甲酰基伐昔洛韦标准溶液分析的典型HPLC色谱图。
图2是N-甲酰基伐昔洛韦的标示物溶液的典型HPLC色谱图。
图3是含N-甲酰基伐昔洛韦的伐昔洛韦试样的典型HPLC色谱图。
发明详述
本申请中使用的术语“分离的”是指根据HPLC判断至少90面积％的化合物。
“参比标示物”在定性分析中用于鉴别混合物中的各组分，以它们在例如色谱图或薄层色谱(TLC)板上的位置为基础(Strobel pp，921，922，953)。针对该目的，如果混合物中存在该化合物，则不一定再必须向混合物中加入。“参比标示物”仅用于定性分析，而参比标准物则可用于定量或定性分析，或者同时用于这两种分析。因此，参比标示物是参比标准物的子集，并且包括在参比标准物的定义内。
本文中使用的术语“参比标准物”是指可以用于活性药物成分的定量和定性这两种分析的化合物。例如，该化合物的HPLC保留时间允许用于测定相对保留时间，从而使得定性分析成为可能。注入到HPLC(或GC)柱之前的溶液中化合物的浓度允许进行HPLC(或GC)峰下面积比较，从而使得定量分析成为可能。
参比标准物用上面的通用术语描述。但是，正如本领域技术人员所知道的，检测器响应值可以是例如通过UV或折光率检测从HPLC系统的洗脱剂获得的色谱图的峰高或积分峰面积，或者是例如通过火焰离子化检测(FID)或热导检测从气相色谱的洗脱剂所获得的色谱图的峰高或积分峰面积，或者是其它检测器响应值，例如荧光TLC板上斑点的UV吸光度。参比标准物的位置可用来计算伐昔洛韦以及伐昔洛韦杂质的相对保留时间。
在一个实施方案中，本发明提供N-甲酰基伐昔洛韦，即一种与伐昔洛韦分离的伐昔洛韦杂质，而且在优选的实施方案中，其基本上不含伐昔洛韦。在另一个实施方案中，本发明提供制备N-甲酰基伐昔洛韦的方法。在进一步的实施方案中，本发明涉及N-甲酰基伐昔洛韦作为参比标示物在伐昔洛韦的定性分析中的用途。在另一个实施方案中，本发明涉及应用N-甲酰基伐昔洛韦作为参比标准物定量分析伐昔洛韦的纯度的方法。在再一个方面中，本发明涉及定量分析伐昔洛韦纯度的方法，包括使用N-甲酰基伐昔洛韦作为参比标准物，其中该参比标准物可以是外部物或内标物。
尽管在伐昔洛韦(VALTREX)的NDA中提到过N-甲酰基伐昔洛韦，但其从未以基本上纯的形式获得、与伐昔洛韦分离(即分开并脱离)。就申请人所知，N-甲酰基伐昔洛韦的结构以前也未被发现(N-甲酰基基团的位置是未知的)。
N-甲酰基伐昔洛韦可以在伐昔洛韦的合成过程或贮存期间形成，尤其是当伐昔洛韦含有残留的方法溶剂时。
本发明提供分离的伐昔洛韦杂质，N-甲酰基伐昔洛韦，其具有结构(II)。就申请人所知，N-甲酰基伐昔洛韦的结构从未报道过，并且该化合物也从未被独立制备以及与伐昔洛韦分离。
优选分离的N-甲酰基伐昔洛韦包含约0.03面积％-5面积％伐昔洛韦(根据HPLC判断)。
更优选是是，分离的N-甲酰基伐昔洛韦包含约0.03面积％-约2面积％的伐昔洛韦，或者分离的N-甲酰基伐昔洛韦是至少95面积％纯的(根据HPLC判断)。
在另一个实施方案中，本发明提供制备分离的N-甲酰基伐昔洛韦的方法，包括下述步骤：使伐昔洛韦与甲酸铵反应，加热反应混合物，将所得热反应混合物与热水混合，进一步加热该反应混合物，冷却反应混合物，回收N-甲酰基伐昔洛韦。任选向反应混合物中加入溶剂。优选反应混合物在无溶剂存在的情形下获得。反应时间优选为约1-约10小时。更优选反应时间为约2-约4小时。优选将伐昔洛韦与甲酸铵的反应混合物加热到约125℃-约145℃。热水温度优选为约100℃。优选趁热过滤反应混合物与热水的混合液。优选将反应混合物冷却到室温。N-甲酰基伐昔洛韦的回收(分离)可以采用本领域公知的任何方法，例如过滤(重力过滤或抽吸过滤)或离心，仅举例这两种方式。
优选将N-甲酰基伐昔洛韦重结晶。更优选将N-甲酰基伐昔洛韦用水重结晶，以获得分离的N-甲酰基伐昔洛韦。
以分批产品中参比标准物的具体含量或浓度为基准可以建立大批生产交付标准。药物剂型的API中参比标准物的检测与定量分析可以用于测量药物剂型保存期限。亦即，对某种浓度的参比标准物的检测标志API开始变质并且AIP的效力可能受到损害。本文中使用的HPLC是指公知的高效液相色谱技术，也称为高压液相色谱。HPLC可用于检测与定量分析混合物的组分，例如检测与定量分析主化合物如活性药物成分(API)中的各种杂质。
对混合物中各组分的检测与(尤其是)定量分析，可以利用响应因子实现。对于从HPLC柱洗脱出的各化合物，HPLC检测器(例如UV检测器或折光率检测器)的响应值可以不同，并且通常也是不同的。正如我们所知，响应因子是造成检测器对从柱洗脱出的不同化合物产生这种不同响应信号的原因。
本发明提供了包括N-甲酰基伐昔洛韦作为参比标示物或参比标准物使用的各种方法。
本发明提供了鉴别伐昔洛韦试样中N-甲酰基伐昔洛韦的方法，包括：
(a)提供包含参比标示物和伐昔洛韦的参比试样；
(b)将参比试样通过HPLC或TLC以测定与伐昔洛韦比较参比标示物的相对保留时间；
(c)将伐昔洛韦试样通过HPLC或TLC，以测定与伐昔洛韦相比N-甲酰基伐昔洛韦的相对保留时间；
(d)比较步骤(b)和(c)中测定的相对保留时间；
其中，如果步骤(b)和(c)中测定的相对保留时间基本上相同，则N-甲酰基伐昔洛韦被鉴别为与参比标示物相同。
本发明还提供测定伐昔洛韦试样中杂质含量的方法，包括：
(a)向伐昔洛韦试样中加入已知量的参比标准物；
(b)将上述伐昔洛韦通过HPLC；
(c)鉴别并测量与N-甲酰基伐昔洛韦有关的HPLC峰的面积；
(d)鉴别并测量与参比标准物有关的HPLC峰的面积；
(e)根据步骤(c)和(d)的结果计算伐昔洛韦试样中的杂质含量；
其中参比标准物是N-甲酰基伐昔洛韦。
本发明还提供测定伐昔洛韦试样中N-甲酰基伐昔洛韦含量的方法，包括：
(a)提供含有未知浓度N-甲酰基伐昔洛韦的伐昔洛韦试样；
(b)提供已知浓度N-甲酰基伐昔洛韦的试样；
(c)将部分伐昔洛韦试样和部分N-甲酰基伐昔洛韦试样通过HPLC；
(d)测量由伐昔洛韦试样以及由N-甲酰基伐昔洛韦试样获得N-甲酰基伐昔洛韦峰的面积；和
(e)根据步骤(d)的测量结果计算伐昔洛韦试样中N-甲酰基伐昔洛韦的浓度。
本发明还提供测定伐昔洛韦试样中N-甲酰基伐昔洛韦含量的方法，包括：
(a)提供基本上纯的伐昔洛韦的第一种已知浓度参比溶液，
(b)提供基本上纯的N-甲酰基伐昔洛韦的第二种已知浓度参比溶液；
(c)将第一种和第二种参比溶液各自的等分试样进行HPLC分析，测定伐昔洛韦和N-甲酰基伐昔洛韦的响应因子；
(d)提供总浓度已知的伐昔洛韦溶液；
(e)在和步骤(c)所用基本相同的条件下将该溶液进行HPLC分析；和
(f)利用相应的峰面积和响应因子计算溶液中N-甲酰基伐昔洛韦的含量。
响应因子计算如下：如果Y表示主要或主成分，化合物X(即Y中的杂质，特别是作为Y纯度的参比标示物)的相对响应因子可以表示如下：
RY/X＝[MX/MY]/[AX/Ay]
其中MX和MY为标准溶液(含已知量X和Y的溶液)中X和Y的已知摩尔量或浓度，并且AX和AY分别为物质X和Y的检测器响应值，例如HPLC中的峰面积。
然后，在含有已知总量试样但Y和X的相对量未知的溶液中：
M’X/M’Y＝RY/X*[A’X/A’Y]
其中M’X和M’Y分别为溶液中X和Y的含量，而A’X和A’Y则表示X和Y的相关检测器响应值。
对响应因子的测定要求获得基本上纯的X和Y样品，尤其是当X作为Y的纯度的参比标示物时。本发明提供适合用作参比标准物的分离形式的N-甲酰基伐昔洛韦。
为了例如评价保存期限和残余效力，对包含伐昔洛韦的药物剂型中伐昔洛韦纯度的测定要求将伐昔洛韦与剂型中的赋形剂及其它有意加入的成分分离。这可以通过例如将适宜量的剂型(如果需要加以粉碎)与适宜的溶剂混合。适宜的溶剂能溶解伐昔洛韦及其中的杂质，尤其是N-甲酰基伐昔洛韦，但不能溶解赋形剂和其它有意加入的成分。
本发明提供制备包含伐昔洛韦或其药学上可接受的盐的药物组合物的方法，该方法包括将按照作为本发明一部分的上述任何方法检测的伐昔洛韦或其药学上可接受的盐与载体赋形剂一起配制。
利用HPLC对混合物中各组分的检测且尤其是定量分析，均要求各组分的峰之间有充分的分离度(分辨度)。其可以按照下文所述方法通过施行测定分辨率的系统适用性检测法检查。
公知的薄层色谱(TLC)技术也适用于评价API的纯度。在这种情况下，根据在与参比标示物相同、同时测定的相对位置，RF处(相对于溶剂前沿)存在的的适当可视“斑点”，可以确定杂质，例如参比标示物。
在再一个实施方案中，本发明提供测试或检验散装的(bulk)或从含伐昔洛韦的药物剂型中分离出来的伐昔洛韦的纯度的方法。该方法包括利用HPLC或TLC测试伐昔洛韦以确定伐昔洛韦中存在N-甲酰基伐昔洛韦的步骤。下文描述的HPLC方法是适用于这种测试或检验的分析技术实施例。
实施例1
实施例1：伐昔洛韦中N-甲酰基伐昔洛韦的定量分析
A.色谱法
伐昔洛韦的定量分析可采用下述非手性HPLC法进行：
该色谱方法使用适宜的色谱柱如反相柱C18和梯度HPLC方式。
柱&填充物： Inertsil ODS-3V5μ 250×4.6mm
洗脱剂A： 98％0.01M磷酸二氢钾水溶液，用10％ H3PO4
和2％乙腈调节至pH-3.5
洗脱剂B： 乙腈
梯度： 时间(min) ％A ％B
0 100 0
5 100 0
32 87 13
平衡时间： 7min
流速： 1.5mL/min
检测器： 254nm(UV)
试样体积： 20μL
洗脱剂： 洗脱剂A
B.制备鉴别N-甲酰基伐昔洛韦用的N-甲酰基伐昔洛韦标准溶液：
制备N-甲酰基-伐昔洛韦标准物在稀释剂中的溶液。在RT＝27.4分钟出鉴别出N-甲酰基-伐昔洛韦的峰。标准物的色谱图见图1。
C.制备鉴别N-甲酰基-伐昔洛韦用的标示物溶液：
制备含N-甲酰基-伐昔洛韦的伐昔洛韦标示物溶液，浓度为约0.8mg/mL稀释剂。注入含N-甲酰基-伐昔洛韦的标示物溶液以鉴别伐昔洛韦试样中N-甲酰基伐昔洛韦杂质的峰。鉴别到N-甲酰基-伐昔洛韦的峰在RT＝28.345分钟处(根据标准溶液中得到的峰进行鉴别)。图2示出含N-甲酰基-伐昔洛韦的标示物的典型色谱图。
D.制备试样溶液：
制备供分析用的伐昔洛韦溶液，浓度约0.8mg/稀释剂。
E.方法：
将标示物和试样溶液注入到色谱仪中，继续试样的色谱直至梯度程序结束。
试样色谱图见图3。
采用本领域已知的适宜积分仪测定各峰面积：
RRF-N-甲酰基-伐昔洛韦的相对响应因子
DL为大约0.01％；QL为大约0.03％。
实施例2：N-甲酰基伐昔洛韦的制备
用热水结晶
在150ml单口圆低烧瓶内配置磁力搅拌棒，用CaCl2管密封，加入10.8g(.03M)伐昔洛韦和2.1g(.033M)甲酸铵。在剧烈搅拌烧瓶内容物的情形下，在125℃的恒温油浴中加热上述多相反应混合物2.5小时。固体混合物熔化，释出氨气和水蒸气。
使用30ml沸水将反应混合物趁热转移到结晶瓶中，加入250ml热水。加热混合物，直到变为清亮为止。通过玻璃棉塞快速热过滤除去任何不溶杂质。将滤液在室温下放置8小时，过滤后得到白色粉末，9.5g，纯度85.39％。
使用热水(分别为150ml和75ml)重复该结晶步骤两次，得到4.5g，纯度95.85面积％。
1H和13C-NMR以及2D实验数据表明CHO基团与伐昔洛韦分子中的缬氨酸-NH2部分相连。
实施例3：N-甲酰基伐昔洛韦的制备
用热水结晶
在150ml单口圆低烧瓶内配置磁力搅拌棒，用CaCl2管密封，加入10.8g(.03M)伐昔洛韦和2.1g(.033M)甲酸铵。在剧烈搅拌烧瓶内容物的情形下，在145℃的恒温油浴中加热上述多相反应混合物2.5小时。固体混合物熔化，释出氨气和水蒸气。
利用30ml沸水将反应混合物趁热转移到结晶瓶中，加入250ml热水。加热混合物，直到变为清亮为止。通过玻璃棉塞快速热过滤除去任何不溶杂质。将滤液在室温下放置8小时，过滤后得到白色粉末，10.4g，纯度80％。
使用150ml热水重复该结晶步骤，得到9.0g，纯度92.4面积％。
实施例4：N-甲酰基伐昔洛韦的制备
在配有磁力搅拌棒的100ml圆低烧瓶中放入7.25gr伐昔洛韦(20mmol)、1.97gr甲酸铵(31.2mmol)，加入NMP(N-甲基-吡咯烷酮)(15ml)，启动搅拌。将所得混合物置于油浴中，125℃加热2小时。从油浴中移出混合物，冷却到室温，使用高真空泵减压除去溶剂。残留物用150ml沸水结晶，得到6.0gr，纯度80％。
Claims (27)
1、分离的N-甲酰基伐昔洛韦。
2、权利要求1的分离的N-甲酰基伐昔洛韦，根据HPLC判断它包含约0.03面积-5面积％的伐昔洛韦。
3、权利要求2的分离的N-甲酰基伐昔洛韦，根据HPLC判断它包含约0.03面积％-2面积％的伐昔洛韦，。
4、权利要求1的分离的N-甲酰基伐昔洛韦，根据HPLC判断它是至少95面积％纯的
5.制备N-甲酰基伐昔洛韦的方法，其包括：
a)使伐昔洛韦与甲酸铵反应；
b)加热该反应混合物；
c)将步骤a)的反应混合物与热水混合；
d)加热该反应混合物；
e)冷却反应混合物；和
f)回收N-甲酰基伐昔洛韦。
6、权利要求5的方法，其中在步骤a)中加入溶剂。
7、权利要求5的方法，进一步包括分离N-甲酰基伐昔洛韦的步骤。
8、权利要求5的方法，其中反应时间为大约1至大约10小时。
9、权利要求8的方法，其中反应时间为大约2至大约4小时。
10、权利要求5的方法，其中将伐昔洛韦与甲酸铵的反应混合物加热到大约125℃-大约145℃。
11、权利要求5的方法，其中步骤c)中的热水为大约100℃温度。
12、权利要求5的方法，其中将步骤d)中的反应混合物趁热过滤。
13、权利要求5的方法，其中将步骤e)的反应混合物冷却到室温。
14、权利要求5的方法，其中将N-甲酰基伐昔洛韦重结晶。
15、权利要求14的方法，其中将N-甲酰基伐昔洛韦用水重结晶。
16、鉴别伐昔洛韦试样中杂质的方法，其包括
a)提供包含参比标示物和伐昔洛韦的参比试样；
b)将参比试样通过HPLC或TLC，测定与伐昔洛韦比较参比标示物的相对保留时间；
c)将伐昔洛韦试样通过HPLC或TLC，测定与伐昔洛韦比较N-甲酰基伐昔洛韦的相对保留时间；
d)比较步骤(b)和(c)中测定的相对保留时间；
其中，如果步骤(b)和(c)中测定的相对保留时间基本上相同，则N-甲酰基伐昔洛韦被鉴别为与参比标示物相同
17、权利要求16的方法，其中在步骤(b)和(c)两步中都进行HPLC。
18、测定伐昔洛韦试样中N-甲酰基伐昔洛韦含量的方法，其包括：
(a)向伐昔洛韦试样中加入已知量的参比标准物；
(b)将伐昔洛韦通过HPLC；
(c)鉴别并测量与N-甲酰基伐昔洛韦有关的HPLC峰的面积；
(d)鉴别并测量与参比标准物有关的HPLC峰的面积；
(e)根据步骤(c)和(d)的结果计算伐昔洛韦试样中的杂质含量；
其中参比标准物是N-甲酰基伐昔洛韦。
19.测定伐昔洛韦试样中N-甲酰基伐昔洛韦含量的方法，其包括：
a)提供含有未知浓度杂质的伐昔洛韦试样；
b)提供已知浓度N-甲酰基伐昔洛韦的试样；
c)取部分伐昔洛韦试样和部分N-甲酰基伐昔洛韦试样通过HPLC；
d)测量由伐昔洛韦试样以及由杂质试样获得的N-甲酰基伐昔洛韦峰的面积；和
e)根据步骤(d)的测量结果计算伐昔洛韦试样中N-甲酰基伐昔洛韦的浓度。
20、测定伐昔洛韦试样中杂质含量的方法，其包括：
a)提供已知浓度基本上纯的伐昔洛韦的第一种参比溶液，
b)提供已知浓度基本上纯的N-甲酰基伐昔洛韦的第二种参比溶液；
c)将第一种和第二种参比溶液各自的等分试样进行HPLC分析，测定伐昔洛韦和N-甲酰基伐昔洛韦的响应因子；
d)提供已知总浓度的伐昔洛韦溶液；
e)在步骤(c)所用的基本相同条件下将该溶液进行HPLC分析；和
f)利用相应的峰面积和响应因子计算溶液中N-甲酰基伐昔洛韦的含量。
21、权利要求16的方法，其中伐昔洛韦试样是散装伐昔洛韦。
22、权利要求18、19和20任一项的方法，其中伐昔洛韦是散装伐昔洛韦。
23、权利要求18、19和20任一项的方法，其中伐昔洛韦试样取自分批或大批生产的伐昔洛韦，测得的N-甲酰基伐昔洛韦含量根据HPLC判断低于10面积％，并且所述分批或大批生产的伐昔洛韦交付用于销售/出口。
24、权利要求16的方法，取之所述伐昔洛韦是从包含伐昔洛韦的一种或多种药物剂型中分离出来的伐昔洛韦。
25、权利要求18、19和20任一项的方法，取之所述伐昔洛韦是从包含伐昔洛韦的一种或多种药物剂型中分离出来的伐昔洛韦。
26、权利要求25的方法，取之包含伐昔洛韦的药物剂型取自分批或大批生产的，测得的N-甲酰基伐昔洛韦含量根据HPLC判断低于10面积％，并且所述分批或大批生产的药物剂型交付用于销售/出口。
27、制备包含伐昔洛韦或其药学上可接受的盐的药物组合物的方法，该方法包括将按照权利要求16、18、19和20任一项的方法检测的伐昔洛韦或其药学上可接受的盐与载体赋形剂一起配制。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20071107 |