CN1808115A - 六维磷脂软胶囊的鉴别和含量测定方法 - Google Patents

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周有财
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Zhou Youcai
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HEILONGJIANG AOLIDA NAIDE PHARMACEUTICAL CO Ltd
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Abstract

本发明公开了一种六维磷脂软胶囊的鉴别和含量测定方法。以高效液相色谱法鉴别烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素E，并测定烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素E的含量。本发明无须专门进行鉴别试验，利用含量测定时的高效液相色谱图即可，既方便又准确，而且省时、节约。方法学研究数据证明了本发明具有专属性，准确性高，可控性强。

Description

六维磷脂软胶囊的鉴别和含量测定方法
技术领域
本发明涉及一种治疗肝病的药品的检测方法。
技术背景
目前，肝病是我国的常见病，多发病。过量饮酒，药物滥用导致肝脏疾患逐年上升，临床迫切需要疗效确切、安全性高的药物以解除广大患者的痛苦。
国家药典委员会批准命名为六维磷脂软胶囊，是一种安全有效的肝病治疗用药，为软胶囊，内容物为棕黄色油状液体。每粒胶囊含300mg大豆磷脂，6mg维生素B1，6mg维生素B2，6mg维生素B6，26μg维生素B1，6mg维生素E，30mg烟酰胺。国外的同类产品是肝得健(现名易善力)，一种德国A.Nattermann&Cie.GmbH生产软胶囊。
中国药典标准中，烟酰胺鉴别方法为化学法、紫外光谱法和红外光谱法；维生素B1鉴别方法为化学法；维生素B2鉴别方法为化学法、紫外光谱法和红外光谱法；维生素B6鉴别方法为化学法、液相色谱法和红外光谱法；维生素E鉴别方法为化学法和红外光谱法。测定之前，样品均需经化学方法的预处理，经显色，测定吸收度，方法比较麻烦。这些鉴别方法麻烦、费时、浪费财力和物力。
肝利健质量标准中，烟酰胺的鉴别方法为薄层色谱法；维生素B1和维生素B2的鉴别方法均为经前处理后，观察荧光颜色的物理方法；维生素B6的鉴别方法为化学方法；维生素E为气相色谱法。这些鉴别方法麻烦、费时、浪费财力和物力，而且需对五种物质分别进行鉴别，适用性差。烟酰胺和维生素B6的含量测定，均为紫外分光光度法。测定之前，样品均需经化学方法的前处理，经显色，测定吸收度，方法比较麻烦。而维生素B1和维生素B2的含量测定方法则均为荧光分光光度法。荧光分析法远不如高效液相色谱法普及，荧光法作为含量测定方法，因灵敏度较高，干扰因素也多，如溶剂、测定液的澄清度、所用玻璃仪器及吸收池的洁净度、包括温度对荧光强度影响甚大。
综上所述，目前对六维磷脂软胶囊的含量测定方法，普遍存在着需要多种测定方法和仪器，对各组分分别进行测定。还未见简单方便的六维磷脂软胶囊的含量测定方法的报道，急需一种简便易行的六维磷脂软胶囊的含量测定方法。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种六维磷脂软胶囊的鉴别和含量测定方法。本发明旨在使六维磷脂软胶囊的鉴别与含量测定方法有较强的专属性和可靠性，灵敏、准确、省时并可控。
为达到上述目的，本发明提出以下技术方案：
以高效液相色谱法(用PLC法)鉴别烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素E，并测定烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素E的含量。
在含量测定项下记录的色谱图中，烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6供试品各组分的主峰保留时间应分别与其对照品主峰的保留时间一致；并且在含量测定项下记录的色谱图中，维生素E供试品主峰的保留时间应与其对照品主峰的保留时间一致。
在测定烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量时，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为容量比14∶6∶80的乙腈-甲醇-水，水中含0.0506％庚烷磺酸钠和0.12％三乙胺，并用磷酸调节至pH2.5；检测波长为273nm；烟酰胺、维生素B1、维生素B2和维生素B6的色谱峰之间的分离度大于1.5，理论板数按烟酰胺计算不低于1200。
测定维生素E的含量时，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为容量比97∶3的甲醇-水；检测波长为280nm，理论板数按维生素E峰计算不低于3500。
具体测定时，测定时采用避光操作；取装量差异项下的内容物适量，精密称定后置于容器中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取对照品，按与供试品相同的制备方法，制得对照品溶液；精密量取对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
中国药典标准中和肝利健标准中维生素E的含量测定方法为气相色谱法。因为用高效液相色谱仪能够同时检测六维磷脂软胶囊中5种成分(烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素E)的含量与鉴别，避免只为测定维生素E而购置气相色谱仪造成资金浪费，所以，新的维生素E的含量测定方法也为高效液相色谱法。含量测定方法的方法学研究结果表明，本方法同气相色谱法一样简便、灵敏，是可靠的检测方法。
本发明无须专门进行鉴别试验，利用含量测定时的高效液相色谱图即可。即方便又准确，而且省时、节约。方法学研究数据证明了本发明具有专属性，准确性高，可控性强。
具体实施方式
仪器，试药，样品及对照品
1.1仪器和试药
高效液相色谱仪      岛津LC-10AT
检测器              岛津SPD-10A
控制器              岛津
Class-VP工作站
色谱柱 ODSC18       5μm    150×4.6mm
乙腈、甲醇          均为色谱纯
三乙胺、庚烷磺酸钠  均为分析纯
1.2原料
大豆磷脂  本公司生产        国家标准(地标升部标)
烟酰胺    北京第二制药厂    中国药典2000年版
维生素B1  华中制药厂        中国药典2000年版
维生素B2  上海新亚制药厂    中国药典2000年版
维生素B6  上海新亚制药厂    中国药典2000年版
维生素B12 广东制药厂        中国药典2000年版
维生素E   河北制药有限公司  中国药典2000年版
1.3样品
六维磷脂软胶囊     由申请人自制
1.4对照品
烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6对照品  取原料多次精制而得(含量测定按中国药典2000年版二部测定)
烟酰胺             99.1％
维生素B1        99.5％
维生素B2        100.0％
维生素B6        99.3％
维生素E         由中检所提供
实施例1  烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为重量比为14∶6∶80的乙腈-甲醇-水混合物，水中含0.0506％庚烷磺酸钠和0.12％三乙胺，并用磷酸调PH值至2.5；检测波长为273nm。烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6的色谱峰之间分离度1.8，理论板数按烟酰胺计算为1200。
对照品溶液的配制  分别精密称取烟酰胺约60mg、维生素B1约12mg、维生素B2约12mg、维生素B6约12mg，置于200ml量瓶中，加乙醇100ml，加热溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置于50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为混合对照品溶液(每1ml中含烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6分别为30μg、6μg、6μg、6μg)，备用。
供试品溶液的制备  精密称取装量差异项下的内容物适量(约相当于烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6分别为30mg、6mg、6mg、6mg)，置于圆底烧瓶中，加乙醇约100ml，在水浴上加热回流至内容物溶解，放冷至室温，用流动相将溶液转移至200ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置于25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，高速离心，取上清液为供试品溶液。
测定法  精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
流动相与检测波长的选则  通过参考2000版中国药典二部，有关文献(1、《药学进展》2003年第27卷第1期P44-47，作者：王林、孙国庆、平其能；2、《中国公共卫生》1994年06期，作者：王雅贤、李静；3、《药物分析杂志》1995年05期，作者：黄冠文、薛卫平、于志超)及相关试验，最终选定上述色谱条件。在色谱图中，当流速为0.7ml/min时，烟酰胺主峰的保留时间为3.6分钟、维生素B1主峰的保留时间为8.9分钟、维生素B2主峰的保留时间为10.4分钟、维生素B6主峰的保留时间为5.2分钟。在同一张色谱图中，四种成分的出峰顺序为烟酰胺，维生素B6，维生素B1，维生素B2。
专属性按处方精密称取空白样品(除烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6外，辅料及所有成分)适量，按供试品溶液的制备项下制备空白对照溶液，按选定的色谱条件试验。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。精密量取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，所用辅料及大豆磷脂、维生素E均得到基线分离，而且不干扰烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6的测定，说明本试验所采用含量测定方法的色谱条件具有良好的专属性。
线性关系  精密称取对照品烟酰胺97.12mg、维生素B118.14mg、维生素B218.80mg、维生素B619.42mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液0.2、0.4、1.0、2.0、4.0ml，分别置于25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。绘制以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标的标准曲线图。以各组分峰面积与其相应的浓度进行回归处理，求得回归方程.试验结果表明，在本试验的色谱条件下，烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6在各自的浓度范围内，浓度与其相对应的色谱峰面积呈有良好的线性关系，结果见表1。
                表1 药物浓度与峰面积的线性关系
  组分   回归方程   相关系数   浓度范围
  烟酰胺维生素B1维生素B2维生素B6   A＝27902C+166671A＝53630C+4783A＝66307C+11057A＝37921C+5243   0.99951.0001.0001.000   15.5～310.8μg/ml2.9～58.0μg/ml3.0～60.2μg/ml2.9～62.1μg/ml
重复性  取同一供试品溶液20μl，以上述色谱条件，重复进样6次，记录色谱图。分别测定烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6的峰面积，其相对标准偏差(RSD)％分别为0.16％，0.21％，0.20％，0.24％，结果见表2。
表2  烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6重复性测定结果
  测定次数   1   2   3   4   5   6   RSD(％)
  烟酰胺维生素B1维生素B2维生素B6  5540974178485249670541120178   5338722170217747259981101786   5504527176667449047621142220   5540797178443049387121151062   5573567180666649640511155977   5587366181354749681761162023   1.652.261.922.05
稳定性  取混合对照品溶液20μl，按上述色谱条件，分别于0小时、1小时、4小时、8小时、12小时进样1次，测定其峰面积，记录色谱图。结果表明：12小时内测定值基本稳定。见表3。
表3  烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6稳定性测定结果
  测定时间(h)   0   1   4   8   12
  烟酰胺维生素B1维生素B2维生素B6   4299315145522243342181065739   4197896143836142529491045745   4286915145314842858611058872   4361508147278042959391075033   4372412148130542754851080487
耐用性  为了考查本测定方法的耐用性，选用同类柱不同厂牌的C18色谱柱(兰州化物所ODS柱与迪马公司钻石柱)，对同一样品(批号：030819)进行测定，考查其理论板数、分离度、重复性、拖尾因子等能否通过系统适用性试验要求。试验结果(表4)表明，色谱条件稍有变动，仍能够满足系统适用性试验要求，确保了测定方法的有效性。
表4  烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6耐用性试验中重复性测定结果
  1   2   3   4   5   均值   RSD(％)
  烟酰胺   ODS柱钻石柱   30448343982772   30487323982090   30488373983188   30496313987798   30379313987728   30459933984715   0.160.07
  维生素B1   ODS柱钻石柱   9528241509107   9485531502969   9525791496301   9572331498274   9511931498540   9524761501038   0.330.34
  维生素B2   ODS柱钻石柱   28154723560213   27926743524624   28127553487556   28002813466233   27844703406555   28011303489036   0.471.67
  维生素B6   ODS柱钻石柱   688655938649   685969939180   688567939651   688352941927   687877941504   687884940182   0.160.15
中间精密度  取样品(批号：030819)适量，搅拌均匀，各精密称取6份样品，以不同试验者，在不同日期，用同一台高效液相色谱仪，按规定的含量测定方法进行检测。试验结果(表5)表明，随机变动因素(试验者、日期)对测定结果的精密度影响甚小。
                          表5  中间精密度测试结果
  时间   1   2   3   4   5   6   均值   RSD(％)
  烟酰胺   04460449   108.54107.36   108.01108.09   108.36108.26   108.61108.01   109.36108.85   109.73109.09   108.77108.28   0.590.57
  维生素B1   04460449   98.5697.17   97.7298.16   98.1297.98   98.1697.91   99.2298.54   99.1799.04   98.4998.13   0.620.64
  维生素B2   04460449   93.8393.41   92.9993.38   93.1193.20   93.1692.09   93.1892.11   92.9191.23   93.2092.57   0.350.97
  维生素B6   04460449   107.50105.98   105.79107.54   106.10106.08   106.77106.39   107.64106.76   107.35107.55   106.86106.72   0.720.65
回收率  按处方比例配制三个空白样品(包括辅料，大豆磷脂，维生素E及维生素B12)，烟酰胺按标示量的80％，100％，120％分别加入，维生素B1、维生素B2、维生素B6按标示量的70％，100％，130％分别加入，制成低，中，高三种含量的样品。每种样品各取3份平行样，精密称定，每份取约相当于1粒量，按含量测定方法操作，分别测定其回收率。结果见表6，表7，表8，表9。试验结果表明，在本试验采用的色谱条件条件下，烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6的回收率良好。
                        表6  烟酰胺的回收率测定结果
  标示量(％)   加入量(mg)   测得量(mg)   回收率(％)   平均回收率(％)   RSD(％)
80   25.6725.2625.31   25.6725.3725.43   100.01100.43100.49 100.04 0.26
100   31.3031.4931.64   31.2831.4931.59   99.9499.9999.83
120   36.9637.4736.81   36.8937.3936.83   99.8199.78100.06
                     表7  维生素B1的回收率测定结果
  标示量(％)   加入量(mg)   测得量(mg)   回收率(％)   平均回收率(％)   RSD(％)
70   4.114.044.05   4.104.034.05   99.8399.79100.05 99.99 0.31
100   5.765.795.82   5.765.795.87   99.92100.01100.79
130   7.427.527.39   7.407.517.39   99.7699.8599.94
                       表8  维生素B2的回收率测定结果
  标示量(％)   加入量(mg)   测得量(mg)   回收率(％)   平均回收率(％)   RSD(％)
70   4.254.184.19   4.264.174.15   100.2499.8299.08 99.97 0.49
100   6.036.066.09   6.056.066.07   100.38100.0199.68
130   7.697.797.66   7.757.807.63   100.79100.0799.64
                    表9  维生素B6的回收率测定结果
  标示量(％)   加入量(mg)   测得量(mg)   回收率(％)   平均回收率(％)   RSD(％)
70   4.454.384.39   4.444.384.41   99.7999.97100.39 99.99 0.29
100   6.246.286.31   6.236.286.29   99.7999.9799.70
130   7.968.077.93   7.938.097.96   99.64100.28100.39
两种含量测定方法的比对精密称取同一批样品，各取6份，分别用修订前后的含量测定方法进行测定，结果见表10，表11，表12，表13。
                  表10  两种方法测定烟酰胺含量的比对结果
  1   2   3   4   5   6   均数   RSD(％)
  紫外法   107.01   107.48   106.89   107.93   108.22   107.80   107.56   0.49
  HPLC   108.54   108.01   108.36   108.61   109.36   109.73   108.77   0.59
                 表11  两种方法测定维生素B1含量的比对结果
  1   2   3   4   5   6   均数   RSD(％)
  荧光法   96.16   98.03   96.50   97.51   98.20   97.48   97.31   0.84
  HPLC   98.56   97.72   98.12   98.16   99.22   99.17   98.49   0.62
                 表12  两种方法测定维生素B2含量的比对结果
  1   2   3   4   5   6   均数   RSD(％)
  荧光法   92.19   91.98   93.06   91.24   92.89   91.92   92.21   0.73
  HPLC   93.83   92.99   93.11   93.16   93.18   92.91   93.20   0.35
                      表13  两种方法测定维生素B6含量的比对结果
  1   2   3   4   5   6   均数  RSD(％)
  紫外法   106.73   105.14   105.05   106.70   105.44   106.27   105.89  0.73
  HPLC   107.50   105.79   106.10   106.77   107.64   107.35   106.86  0.72
六维磷脂软胶囊中，烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量测定  取装量差异项下的内容物适量(约相当于烟酰胺30mg、维生素B16mg、维生素B26mg、维生素B66mg)，精密称定，置于圆底烧瓶中，加乙醇约100ml，在水浴上加热回流至内容物溶解，放冷至室温，用流动相将溶液转移至200ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，高速离心，取上清液作为供试品溶液。另取烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6对照品60mg、12mg、12mg、12mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙醇100ml，加热溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6分别为30μg、6μg、6μg、6μg的混合对照品溶液)。精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，结果见表14～17。
              表14  六维磷脂软胶囊中烟酰胺的含量测定结果
  批号   030819   030823   030822   030821   030820
  含量(％)   101.22   100.74   100.96   100.14   102.21
              表15  六维磷脂软胶囊中维生素B1的含量测定结果
  批号   030819   030823   030822   030821   030820
  含量(％)   100.78   101.14   101.38   102.76   102.22
              表16  六维磷脂软胶囊中维生素B2的含量测定结果
  批号   030819   030823   030822   030821   030820
  含量(％)   100.09   99.48   98.04   98.76   97.71
                  表17  六维磷脂软胶囊中维生素B6的含量测定结果
  批号   030819   030823   030822   030821   030820
  含量(％)   101.55   101.00   101.52   103.41   101.98
实施例2  维生素E的含量测定方法
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；重量比为97∶3的甲醇-水混合物为流动相；检测波长为280nm，理论板数按维生素E峰计算为3500。
对照品溶液的配制  避光操作。精密称取维生素E对照品适量，加甲醇适量溶解并稀释制成每1ml中含维生素E 0.48mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备  避光操作。取装量差异项下的内容物适量(约相当于维生素E 12mg)，精密称定，置于25ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
测定法  避光操作。分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
流动相与检测波长的选则  通过参考2000版中国药典，有关文献及相关试验，最终选定上述色谱条件。当流速为1ml/min时，维生素E主峰的保留时间为18.3分钟。
专属性  按处方精密称取空白辅料(除维生素E外，所有成分和辅料)适量，加甲醇制备空白对照溶液，按选定的色谱条件试验。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。精密量取维生素E对照品溶液20μl(0.473mg/ml)，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，在本色谱条件下，所用辅料及大豆磷脂、烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12均得到基线分离，不干扰维生素E的测定，说明本试验所采用含量测定方法的色谱条件具有良好的专属性。
线性关系  精密称取维生素E对照品26.83mg，置于25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液0.6、1.25、2.5、5.0ml分别置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液和贮备液20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。绘制以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标的标准曲线。结果表明：维生素E浓度在64.4μg～1073μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。回归方程为：
A＝5585C+27720    r＝1.000
取同一供试品溶液20μl，以上述色谱条件，重复进样6次，记录色谱图，测定维生素E的峰面积。相对标准偏差(RSD％)为0.17％。结果见表18。
                       表18  维生素E重复性测定结果
  测定次数   1   2   3   4   5   6   RSD(％)
  维生素E   3045036   2758165   2951930   2897388   2841681   3052696   0.17
稳定性  取维生素E对照品溶液20μl，以上述色谱条件分别于0h、0.5h、1h、3h、6h各进样1次，记录色谱图，测定其峰面积。结果表明：6小时内测定值比较稳定。结果见表19。
                      表19  维生素E稳定性测定结果
 测定时间(h)   0   0.5   1   3   6
 维生素E   1936824   2039642   2195843   2023574   2258538
耐用性  为了考查本测定方法的耐用性，选用同类柱不同厂牌的C18色谱柱(兰州化物所ODS柱与迪马公司钻石柱)对同一样品(批号：030819)进行测定，考查其理论板数、分离度、重复性、拖尾因子等能否通过系统适用性试验要求。试验结果(表20)表明，色谱条件稍有变动，仍能够满足系统适用性试验要求，确保了测定方法的有效性。
                     表20  维生素E耐用性试验中重复性测定结果
  1   2   3   4   5   均值   RSD(％)
  ODS柱钻石柱   22295851972108   21995601965152   21787141966143   21716551964038   21784261980904   21915881969669   1.080.36
中间精密度  取样品(批号：030819)适量，搅拌均匀，各精密量取6份样品，以不同试验者，在不同日期，用同一台高效液相色谱仪，按规定的含量测定方法进行检测。试验结果(见表21)表明，随机变动因素(试验者、日期)对测定结果的精密度影响甚小。
                   表21  维生素E中间精密度测试结果
  时间   1   2   3   4   5   6   均值  RSD(％)
  04460449   96.1295.12   95.4196.13   96.0195.81   95.2496.48   96.3496.08/   96.0496.24   95.8695.98  0.450.49
回收率  按处方量配制三个空白样品(包括辅料，大豆磷脂，烟酰胺、维生素B1，维生素B2，维生素B6，维生素B12)，维生素E对照品按标示量的70％、100％、130％分别加入，每个样品各取三份平行样，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取20μl，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，维生素E的平均回收率为100.03％(RSD 0.44％)。结果见表22。结果表明，在本试验采用含量测定的色谱条件下，维生素E含量测定的方法的回收率良好。
                  表22  维生素E的回收率测定结果
  标示量(％)   加入量(mg)   测得量(mg)   回收率(％)   平均回收率(％)    RSD(％)
70   8.268.278.27   8.268.248.27   99.9899.58100.06 100.03 0.44
100   12.0512.0012.14   12.1312.0912.08   100.68100.7899.53
130   15.9715.6415.71   15.9315.6415.68   99.78100.0299.82
两种含量测定方法的比对  精密称取同一批样品，各取6份，分别用修订前后的含量测定方法(GC法HPLC法)进行测定，结果见表23。
                        表23  两种方法测定维生素B6含量的比对结果
 1   2   3  4  5  6  均数   RSD(％)
  GC法HPLC法  95.7796.12   96.0495.41   95.9796.01  96.4895.24  96.5796.34  96.0796.04  96.1595.86   0.320.45
六维磷脂软胶囊中维生素E的含量测定避光操作。取装量差异项下的内容物适量(约相当于维生素E12mg)，精密称定，置于25ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取维生素E对照品适量，加甲醇制成每1ml中含维生素E约0.48mg的溶液，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。结果见表24。
                  表24  六维磷脂软胶囊中维生素E的含量测定结果
  批号   030819   030823   030822   030821   030820
  含量(％)   100.85   100.38   99.48   102.16   101.17
以上对本发明所提供的六维磷脂软胶囊的含量测定方法进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims (5)

1.一种六维磷脂软胶囊的鉴别和含量测定方法，其特征在于：以高效液相色谱法鉴别烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素E，并测定烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素E的含量。
2.如权利要求1所述的六维磷脂软胶囊的鉴别和含量测定方法，其特征在于：在含量测定项下记录的色谱图中，烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6供试品各组分的主峰保留时间应分别与其对照品主峰的保留时间一致；并且在含量测定项下记录的色谱图中，维生素E供试品主峰的保留时间应与其对照品主峰的保留时间一致。
3.如权利要求1所述的六维磷脂软胶囊的鉴别和含量测定方法，其特征在于：测定烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量时，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为容量比14∶6∶80的乙腈-甲醇-水，水中含0.0506％庚烷磺酸钠和0.12％三乙胺，并用磷酸调节至pH2.5；检测波长为273nm；烟酰胺、维生素B1、维生素B2和维生素B6的色谱峰之间的分离度大于1.5，理论板数按烟酰胺计算不低于1200。
4.如权利要求1所述的六维磷脂软胶囊的鉴别和含量测定方法，其特征在于：测定维生素E的含量时，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为容量比97∶3的甲醇-水；检测波长为280nm，理论板数按维生素E峰计算不低于3500。
5.如权利要求1所述的六维磷脂软胶囊的鉴别和含量测定方法，其特征在于：测定时采用避光操作；取装量差异项下的内容物适量，精密称定后置于容器中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取对照品，按与供试品相同的制备方法，制得对照品溶液；精密量取对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
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