CN110146639B - 一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂有关物质的分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂有关物质的分析方法，该方法可以准确测定化合物T供试品中杂质化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和化合物IX的含量，且溶剂不干扰杂质检测，方法专属性良好。该检测方法简便﹑快速﹑准确﹑灵敏度高﹑重复性好﹑准确度好，适合工业化生产使用。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域，涉及一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂有关物质的高效液相色谱分析方法。
背景技术
9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)
(化合物T)是吉利德研发的一种新型抗乙肝病毒药物，已经于2016年11月10日获得美国FDA批准。化合物T存在多个手性中心，因此供试品中有关物质种类繁多，需寻找一种新的、简单快速的能够同时检测化合物T有关物质的分析方法。
发明内容
一方面，本发明提供了化合物9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)有关物质的分析方法，其特征在于：所述方法是高效液相色谱法，该方法采用反相色谱柱，流动相A选自磷酸盐缓冲液、四氢呋喃和乙腈中一种或两种以上的组合，流动相B选自磷酸盐缓冲液、四氢呋喃和乙腈中一种或两种以上的组合，按照等度或梯度洗脱。
在一些实施方案中，所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸钠缓冲溶液、磷酸钾、磷酸铵缓冲溶液；在一些优选的实施方案中，所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸钾缓冲溶液。
在一些实施方案中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.1mol/L；在一些典型的实施方案中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.05mol/L；在一些更为典型的实施方案中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.02mol/L。
在一些实施方案中，所述流动相A为磷酸钾缓冲液-四氢呋喃-乙腈的组合，流动相B为磷酸钾缓冲液-四氢呋喃-乙腈的组合，按照等度或梯度洗脱；在一些典型的实施方案中，所述流动相A为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为900～1100:1～20:1～20的混合溶液，流动相B为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为1～20:2～15:1～10的混合溶液；在一些更为典型的实施方案中，所述流动相A为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为950～1000:5～10:1～5的混合溶液；流动相B为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为1～20:2～15:1～10的混合溶液；在一些最为典型的实施方案中，所述流动相A为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990：7：3的混合溶液；流动相B为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液。
在一些实施方案中，所述流动相A和流动相B按照下表进行梯度洗脱。
在一些实施方案中，所述流动相的流速为0.5～2.0ml/min；在一些典型的实施方案中，所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min；在一些更为典型的实施方案中，所述流动相的流速为1.0ml/min。
在一些实施方案中，所述反相色谱柱采用非极性固定相作为填料；在一些典型的实施方案中，所述反相色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填料，且其规格为250mm×4.6mm，5μm；在一些更为典型的实施方案中，所述反相色谱柱为Waters XBridge C18，其规格为150mm×4.6mm，3.5μm。
在一些实施方案中，所述分析方法在高效液相色谱仪上进行，采用二极管阵列检测器、紫外检测器、示差折光检测器或蒸发光散射检测器；在一些典型的实施方案中，所述分析方法在高效液相色谱仪上进行，采用紫外吸收检测器；在一些更为典型的实施方案中，所述分析方法在高效液相色谱仪上进行，采用紫外吸收检测器，且其检测波长为260nm。
在一些实施方案中，所述色谱柱的柱温为20～50℃；在一些典型的实施方案中，所述色谱柱的柱温为30～40℃；在一些更为典型的实施方案中，所述色谱柱的柱温为35℃。
在一些实施方案中，所述进样器的温度为0～15℃；在一些典型的实施方案中，所述进样器的温度为2～8℃；在一些更为典型的实施方案中，所述进样器的温度为2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃或8℃；在一些最为典型的实施方案中，所述进样器的温度为4℃。
一方面，本发明提供了一种9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)有关物质的分析方法，其特征在于：
所述分析方法是在高效液相色谱仪上进行的；
检测器是紫外吸收检测器，检测波长是260nm；
色谱柱是反相色谱柱，柱温为35℃；
进样器温度为4℃；
按照下表梯度洗脱，其中流动相A为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990：7：3的混合溶液；流动相B为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液
流动相的流速为1.0ml/min；
分别注入化合物T供试品溶液、对照溶液和系统适应性溶液；
所述系统适用性溶液包含化合物T和选自化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和化合物IX中的一种或两种以上混合物；
通过主成分自身对照法计算化合物T、化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和/或化合物IX的含量。
在一些实验方案中，所述的自身对照法加入校正因子计算；在一些实验方案中，所述的自身对照法不加入校正因子进行计算；在一些典型的实施方案中，化合物III、化合物IV、化合物VI和/或化合物VII的含量计算按照不加校正因子进行计算，化合物I、化合物II、化合物V、化合物VIII和/或化合物IX的含量计算按照加入校正因子进行计算；在一些更为典型的实施方案中，化合物I的矫正因子为0.8、化合物II的校正因子为1.2、化合物V的矫正因子为0.8、化合物VIII的影响因子为2.7、化合物IX的校正因子为0.6。
在一些特定的实施方案中，本发明提供了一种化合物T有关物质的分析方法，其特征在于：
(1)化合物T定位溶液配制：取化合物T对照品，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述的化合物T，其结构式为：
(2)化合物I定位溶液配制：取化合物I，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物I，其结构式为：
(3)化合物II定位溶液配制：取化合物II对照品，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物II，其结构式为：
(4)化合物III定位溶液配制：取化合物III对照品，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物III，其结构式为：
(5)化合物IV定位溶液配制：取杂化合物IV对照品，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物IV，其结构式为：
(6)化合物V定位溶液配制：取化合物V对照品，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述的化合物V，其结构式为：
(7)化合物VI定位溶液配制：取化合物VI对照品，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物VI，其结构式为：
(8)化合物VII定位溶液配制：取化合物VII对照品，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述的化合物VII，其结构式为：
(9)化合物VIII定位溶液配制：取化合物VIII对照品，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述杂质化合物VIII，其结构式为：
(10)化合物IX定位溶液配制：取化合物IX对照品，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物IX，其结构式为：
(11)系统适用性溶液配制：取化合物T、化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和化合物IX各适量，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得；
(12)供试品溶液配制：取9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)供试品适量，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得；
(13)对照溶液配制：精密量取供试品溶液适量，加流动相A稀释M倍，作为对照溶液；
(14)液相条件：采用Waters XBridge C18，规格为150mm×4.6mm，3.5μm的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，柱温为35℃；检测器是紫外吸收检测器，检测波长是260nm；进样器温度为4℃；流动相A为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990：7：3的混合溶液；流动相B为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液，流动相流速为1ml/min，按下表梯度洗脱：
(15)供试品测定：将化合物T定位溶液、化合物I定位溶液、化合物II定位溶液、化合物III定位溶液、化合物IV定位溶液、化合物V定位溶液、化合物VI定位溶液、化合物VII定位溶液、化合物VIII定位溶液、化合物IX定位溶液、系统适用性溶液﹑供试品溶液和对照溶液适量，分别注入液相色谱仪，记录各溶液的色谱图；
(16)含量计算：根据各色谱图，通过加校正因子/或不加校正因子的主成分自身对照法计算样品中各杂质含量：
其中，At为供试品溶液色谱图中化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII或化合物IX各自的峰面积；A为对照溶液中主峰的峰面积，即化合物T的峰面积；f为校正因子；M为稀释的倍数。
在一些实施方案中，供试品溶液中色谱图中如有杂质峰，除富马酸峰外，，化合物I含量不高于0.5％，优选为不高于0.1％；化合物II含量不高于0.5％，优选为不高于0.1％；化合物III和化合物IV的含量之和不高于0.5％，优选为不高于0.1％；化合物V含量不高于1.0％，优选为不高于0.5％；化合物VI含量不高于0.5％，优选为不高于0.1％；化合物VII含量不高于1.0％，优选为不高于0.5％；化合物VIII含量不高于0.5％，优选为不高于0.1％；化合物IX含量不高于2.0％，优选为不高于1.0％；其他未知单个杂质含量均不高于0.5％，优选为不高于0.1％；各杂质总含量不高于5.0％，优选为不高于3.0％。
文本中，化合物I可以通过实施例提供的方法制备得到。
文本中，化合物II可以通过直接购买或按照已经公开的文献制备得到，所述的文献包括但不限于WO2017007701。
文本中，化合物III可以通过实施例提供的方法制备得到。
文本中，化合物IV可以通过直接购买或按照已经公开的文献制备得到，所述的文献包括但不限于CN106167504A。
文本中，化合物V可以通过直接购买或按照已经公开的文献制备得到，所述的文献包括但不限于WO2018171665。
文本中，化合物VI可以通过直接购买或按照已经公开的文献制备得到，所述的文献包括但不限于WO2015161785。
文本中，化合物VII可以通过实施例提供的方法制备得到。
文本中，化合物VIII可以通过直接购买得到。
文本中，化合物IX可以通过直接购买或按照已经公开的文献制备得到，所述的文献包括但不限于CN102060876A。
本文中，除非另有说明用以“供试品配置”的化合物T包括但不限于新制备或经储存的化合物9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)原料药和包含化合物9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)的药物组合物。
本文中，有关物质也表述为杂质。
本文中，适量是指在高效液相色谱仪的检测限范围内，优选为：5ng/ml-10mg/ml。
定位溶液浓度为10ng/ml-100mg/ml；优选为0.1μg/ml-5mg/ml；更优选为1μg/ml-2mg/ml。
系统适用性溶中化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和化合物IX的浓度为：0.1μg/ml-100mg/ml；优选为1μg/ml-10mg/ml；更优选为2μg/ml-2mg/ml。
系统适用性溶中化合物T的浓度为：10μg/ml-10mg/ml；优选为50μg/ml-5mg/ml；更优选为100μg/ml-2μg/ml。
供试品溶液中，化合物T的浓度为0.01mg/ml～10mg/ml，优选为0.5mg/ml～5mg/ml
对照溶液中，化合物T的浓度为0.1μg/ml～5mg/ml；优选为2μg/ml～2mg/ml；更优选为5μg/ml～1mg/ml，相应的，稀释的倍数M可根据供试品中化合物T的浓度与所需对照溶液中化合物T的浓度之比计算得到。
本发明中，色谱柱Waters XBridge C18可以用其他效能相当的色谱柱代替。
本发明中校正因子的计算可通过精密称取主成分(化合物T)对照品和杂质对照品各适量，分别配制成不同浓度的溶液，HPLC检测，绘制主成分浓度和杂质浓度对其峰面积的回归曲线，以主成分回归直线斜率与杂质回归直线斜率的比计算校正因子。
0.02mol/L磷酸钾缓冲液的配置：称取无水磷酸钾4.24g，加水1000ml使溶解，用磷酸调节pH值至6.0，即得。
本发明要解决的技术问题是提供一种能准确测定化合物T有关物质含量的高效液相色谱分析方法，该检测方法中，溶剂不干扰杂质检测，方法专属性良好，且该检测方法简便﹑快速﹑准确﹑灵敏度高﹑重复性好﹑准确度好。本发明提供的方法可以准确测定化合物T供试品中上述杂质。
附图说明
图1是系统适用性溶液色谱图。
具体实施方式
下面的实施例可以使本专业的技术人员更全面地理解本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。本发明的方法也并不限于上述9个有关物质，任何采用本发明方法分离测定9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)与上述杂质中的1-9个杂质的任意组合均落入本发明范围内。
实施例1
取化合物T供试品，精密称定，加流动相A适量，超声使溶解并稀释制成每1ml中约含化合物T 1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用流动相A稀释制成每1ml中约含化合物T 1μg的溶液，作为对照溶液。
取9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)对照品1支，精密加入流动相A 1ml，超声使溶解配制成每1ml中约含9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)1mg、化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物VI和化合物VIII各1μg的溶液，化合物V和化合物VII各5μg，化合物IX 10μg的系统适用性溶液。
照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂[Waters XBridge C18(150mm×4.6mm，3.5μm)]；流动相A为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990：7：3的混合溶液；流动相B为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液，按下表进行梯度洗脱；流速为1.0ml/min；柱温为35℃；进样器温度为4℃，检测波长为260nm。取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)。
化合物III和化合物IV的均显示两个色谱峰，且出峰位置相同，出峰顺序依次为1：富马酸峰、2：化合物IX的色谱峰、3：化合物VII的色谱峰、4：化合物V的色谱峰、5：化合物I色谱峰、6：化合物VIII色谱峰、7：化合物II色谱峰、8：化合物III和化合物IV的色谱峰(1)、9：化合物T的色谱峰、10：化合物III和化合物IV的色谱峰(2)、11：化合物VI的色谱峰。
化合物T与各杂质之间的分离度及各杂质之间的分离度应符合规定。
再精密量取对照溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。计算各杂质的含量。
供试品溶液色谱图中如有杂质峰，除富马酸峰外，化合物I不高于0.1％；化合物II不高于0.1％；化合物III和化合物IV的含量之和不高于0.1％；化合物V含量不高于0.5％；化合物VI不高于0.1％；化合物VII含量不高于0.5％；化合物VIII含量不高于0.1％；化合物IX含量不高于1.0％；其他未知单个杂质含量均不高于0.1％；各杂质总含量不高于3.0％(化合物I的矫正因子为0.8、化合物II的校正因子为1.2、化合物V的矫正因子为0.8、化合物VIII的影响因子为2.7、化合物IX的校正因子为0.6；化合物III、化合物IV、化合物VI和/或化合物VII的含量计算按照不加校正因子进行计算)。
实施例2化合物I的制备
将化合物I-1加入到40mL三乙胺和10mL水的混合溶剂中，氮气保护下低温搅拌过夜，用乙酸乙酯萃取(20ml*3)，保留水相，水相在室温下减压浓缩2h，再冻干，得到化合物I。
实施例3化合物III的制备
以GS3-DYT为原料，先与亚磷酸三苯酯成酯，再与氯化亚砜反应，再与L-丙氨酸异丙酯盐酸盐反应，最后与富马酸成盐得到，合成路线如下：
合成工艺：将化合物III-1和乙腈依次加入到三口瓶中，然后再加入三乙胺，4-二甲氨基吡啶和亚磷酸三苯酯，反应72h。反应结束后，浓缩反应液，然后向浓缩液中加入水。向水相中加浓盐酸调节pH至2，有固体析出。搅拌1～2h后过滤，将滤饼置于鼓风干燥箱干燥。
将上一步得到的固体和乙腈加入到三口烧瓶中，开启加热反应，开始滴加氯化亚砜。SOCl2滴加完毕，保持80～85℃反应。反应结束后，将反应液在减压浓缩，向浓缩液中加入二氯甲烷使体系分散。氮气保护下，将L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、三乙胺和二氯甲烷加入到三口烧瓶中，开启降温，温度降至-10～0℃。
将酰氯的二氯甲烷溶液滴加到反应体系。滴加完毕，将反应液在低温继续反应半小时。停止反应，用NaH2PO4水溶液洗涤有机相至pH为6～7，KHCO3水溶液洗至pH＝7～8，用无水硫酸钠干燥有机相。过滤，有机相减压浓缩，得到黏稠油状物。
浓缩液中加入乙腈加热溶解，再加入富马酸溶清后冷却析晶，抽滤，得到白色固体，干燥得到化合物III
实施例4.化合物VII的制备
将化合物IX、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)加入到反应瓶中，再依次将N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)和环己基碳二亚胺(DCC)依次加入反应体系中，100℃反应24h。反应结束，将反应液浓缩干得到化合物VII粗品。将粗品进行制备纯化，收集合格组分，用氨水调节pH至8，然后冻干，得到化合物VII。合成路线如下：
Claims (20)
1.一种化合物9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)有关物质的分析方法，其特征在于：所述方法是高效液相色谱法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填料的反相色谱柱，流动相A为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990:7:3的混合溶液；流动相B为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液；流速为0.8～1.2ml/min，色谱柱的柱温为30～40℃，所述流动相A和流动相B按照下表进行梯度洗脱：
其中所述有关物质选自化合物I、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和/或化合物IX，结构如下：
2.一种化合物9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)有关物质的分析方法，其特征在于：所述方法是高效液相色谱法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填料的反相色谱柱，流动相A为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990:7:3的混合溶液；流动相B为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液；流速为0.8～1.2ml/min，色谱柱的柱温为30～40℃，所述流动相A和流动相B按照下表进行梯度洗脱：
其中所述有关物质包含至少选自化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V中的一种和至少选自化合物I、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX的一种的组合，所述化合物结构如下：
3.一种化合物9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)有关物质的分析方法，其特征在于：所述方法是高效液相色谱法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填料的反相色谱柱，流动相A为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990：7：3的混合溶液；流动相B为磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液；流速为0.8～1.2ml/min，色谱柱的柱温为30～40℃，所述流动相A和流动相B按照下表进行梯度洗脱：
其中所述有关物质为化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和化合物IX，所述化合物结构如下：
4.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，所述磷酸钾缓冲液的浓度为0.01～0.1mol/L。
5.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，所述磷酸钾缓冲液的浓度为0.01～0.05mol/L。
6.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，所述磷酸钾缓冲液的浓度为0.02mol/L。
7.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，所述流动相的流速为1.0ml/min。
8.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，所述反相色谱柱为Waters XBridgeC18，其规格为150mm×4.6mm，3.5μm。
9.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，所述分析方法在高效液相色谱仪上进行，采用二极管阵列检测器、紫外检测器、示差折光检测器或蒸发光散射检测器。
10.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，所述分析方法在高效液相色谱仪上进行，采用紫外吸收检测器。
11.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，所述分析方法在高效液相色谱仪上进行，采用紫外吸收检测器，且其检测波长为260nm。
12.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，所述色谱柱的柱温为35℃。
13.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，进样器的温度为0～15℃。
14.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，进样器的温度为2～8℃。
15.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，进样器的温度为2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃或8℃。
16.如权利要求1-3任一项所述的分析方法，其中，进样器的温度为4℃。
17.一种9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)有关物质的分析方法，其特征在于：所述分析方法是在高效液相色谱仪上进行的；
检测器是紫外吸收检测器，检测波长是260nm；色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填料的反相色谱柱，柱温为35℃；进样器温度为4℃；
按照下表梯度洗脱，其中流动相A为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990:7:3的混合溶液；流动相B为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液；
流动相的流速为1.0ml/min；
分别注入化合物T供试品溶液、对照溶液和系统适用性 溶液；
所述系统适用性溶液包含化合物T和选自化合物I、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和化合物IX中的一种或两种以上混合物；
通过主成分自身对照法计算化合物T、化合物I、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和/或化合物IX的含量；
其中，所述的化合物T，其结构式为：
所述化合物I，其结构式为
所述化合物VI，其结构式为：
所述化合物VII，其结构式为：
所述化合物VIII，其结构式为：
所述化合物IX，其结构式为：
其中，化合物VI和/或化合物VII的含量计算按照不加校正因子进行计算，化合物I、化合物VIII和/或化合物IX的含量计算按照加入校正因子进行计算；化合物I的校正因子为0.8、化合物VIII的校正因子为2.7、化合物IX的校正因子为0.6。
18.一种9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)有关物质的分析方法，其特征在于：所述分析方法是在高效液相色谱仪上进行的；检测器是紫外吸收检测器，检测波长是260nm；色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填料的反相色谱柱，柱温为35℃；进样器温度为4℃；按照下表梯度洗脱，其中流动相A为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990:7:3的混合溶液；流动相B为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液；
流动相的流速为1.0ml/min；
分别注入化合物T供试品溶液、对照溶液和系统适用性 溶液；
所述系统适用性溶液包含化合物T、至少选自化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V中的一种和至少选自化合物I、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX中的一种的混合物；
通过主成分自身对照法计算化合物T、化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和/或化合物IX的含量；
其中，所述的化合物T，其结构式为：
所述化合物I，其结构式为
所述化合物II，其结构式为：
所述化合物III，其结构式为：
所述化合物IV，其结构式为：
所述化合物V，其结构式为：
所述化合物VI，其结构式为：
所述化合物VII，其结构式为：
所述化合物VIII，其结构式为：
所述化合物IX，其结构式为：
其中，化合物III、化合物IV、化合物VI和/或化合物VII的含量计算按照不加校正因子进行计算，化合物I、化合物II、化合物V、化合物VIII和/或化合物IX的含量计算按照加入校正因子进行计算；化合物I的校正因子为0.8、化合物II的校正因子为1.2、化合物V的校正因子为0.8、化合物VIII的校正因子为2.7、化合物IX的校正因子为0.6。
19.一种9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)有关物质的分析方法，其特征在于：所述分析方法是在高效液相色谱仪上进行的；检测器是紫外吸收检测器，检测波长是260nm；色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填料的反相色谱柱，柱温为35℃；进样器温度为4℃；按照下表梯度洗脱，其中流动相A为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990:7:3的混合溶液；流动相B为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液；
流动相的流速为1.0ml/min；
分别注入化合物T供试品溶液、对照溶液和系统适用性 溶液；
所述系统适用性溶液包含化合物T、化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和化合物IX的混合物；
通过主成分自身对照法计算化合物T、化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和化合物IX的含量；
其中，所述的化合物T，其结构式为：
所述化合物I，其结构式为
所述化合物II，其结构式为：
所述化合物III，其结构式为：
所述化合物IV，其结构式为：
所述化合物V，其结构式为：
所述化合物VI，其结构式为：
所述化合物VII，其结构式为：
所述化合物VIII，其结构式为：
所述化合物IX，其结构式为：
其中，化合物III、化合物IV、化合物VI和化合物VII的含量计算按照不加校正因子进行计算，化合物I、化合物II、化合物V、化合物VIII和化合物IX的含量计算按照加入校正因子进行计算；其中，化合物I的校正因子为0.8、化合物II的校正因子为1.2、化合物V的校正因子为0.8、化合物VIII的校正因子为2.7、化合物IX的校正因子为0.6。
20.一种化合物T有关物质的分析方法，其特征在于：
(1)化合物T定位溶液配制：取化合物T对照品，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述的化合物T，其结构式为：
(2)化合物I定位溶液配制：取化合物I，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物I，其结构式为：
(3)化合物II定位溶液配制：取化合物II对照品，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物II，其结构式为：
(4)化合物III定位溶液配制：取化合物III对照品，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物III，其结构式为：
(5)化合物IV定位溶液配制：取杂化合物IV对照品，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物IV，其结构式为：
(6)化合物V定位溶液配制：取化合物V对照品，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物V，其结构式为：
(7)化合物VI定位溶液配制：取化合物VI对照品，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物VI，其结构式为：
(8)化合物VII定位溶液配制：取化合物VII对照品，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述的化合物VII，其结构式为：
(9)化合物VIII定位溶液配制：取化合物VIII对照品，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物VIII，其结构式为：
(10)化合物IX定位溶液配制：取化合物IX对照品，精密称定，用流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得，
其中，所述化合物IX，其结构式为：
(11)系统适用性溶液配制：取化合物T、化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII和化合物IX各适量，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得；
(12)供试品溶液配制：取9-{(R)-2-[((S)-{[(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基]氨基}-苯氧基磷酰基)甲氧基]丙基}腺嘌呤富马酸盐(2:1)供试品适量，精密称定，加流动相A溶解并稀释，定容，摇匀，即得；
(13)对照溶液配制：精密量取供试品溶液适量，加流动相A稀释M倍，作为对照溶液；
(14)液相条件：采用Waters XBridge C18，规格为150mm×4.6mm，3.5μm的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，柱温为35℃；检测器是紫外吸收检测器，检测波长是260nm；进样器温度为4℃；流动相A为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为990：7：3的混合溶液；流动相B为0.02mol/L磷酸钾缓冲液：四氢呋喃：乙腈的体积比为10:7:3的混合溶液，流动相流速为1ml/min，按下表梯度洗脱：
(15)供试品测定：将化合物T定位溶液、化合物I定位溶液、化合物II定位溶液、化合物III定位溶液、化合物IV定位溶液、化合物V定位溶液、化合物VI定位溶液、化合物VII定位溶液、化合物VIII定位溶液、化合物IX定位溶液、系统适用性溶液﹑供试品溶液和对照溶液适量，分别注入液相色谱仪，记录各溶液的色谱图；
(16)含量计算：根据各色谱图，通过加校正因子/或不加校正因子的主成分自身对照法计算样品中各化合物含量：
其中，At为供试品溶液色谱图中化合物I、化合物II、化合物III、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII或化合物IX各自的峰面积；A为对照溶液中主峰的峰面积，即化合物T的峰面积；f为校正因子；M为稀释的倍数。
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| HPLC法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯原料药的有关物质;李俊等;《广东化工》;20160115(第01期);129-130 * |
| RP-HPLC测定替诺福韦及其有关物质;刘超等;《中国药科大学学报》;20150225(第01期);78-80 * |
| Stability Indicating Assay Method Development and Validation for Tenofovir Alafenamide Fumarate by RP-HPLC;Aggarwal NN et al;《Pharm Anal Acta》;20181231;第9卷(第12期);601:1-6 * |
| 反相高效液相色谱法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯的有关物质;陶静等;《淮海工学院学报(自然科学版)》;20121215(第04期);60-62 * |
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