CN101066249A - 多西他赛固体脂质纳米粒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，主要涉及一种含有多西他赛的固体脂质纳米粒、其冻干剂及制备方法。该制剂由活性成分多西他赛、注射用固体脂质材料、乳化剂、稳定剂、等渗调节剂、抗氧剂及注射用水组成，其按重量百分比计为多西他赛0.01－2％、注射用脂质材料2－20％、乳化剂1－6％、稳定剂0.1－3％、等渗调节剂2－3％、抗氧剂0.01－0.05％，其余为注射用水。本发明提供了多西他赛固体脂质纳米粒及其冻干剂的制备方法以及多西他赛固体脂质纳米粒在细胞水平的细胞毒作用。按照本发明制备的纳米粒制剂及其冻干剂有效地抑制了药物的降解，增加了药物的稳定性，提高了药物疗效。

Description

多西他赛固体脂质纳米粒及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种含有多西他赛的固体脂质纳米粒及其冻干剂与制备方法，属医药技术领域。

背景技术

多西他赛为紫杉醇类抗肿瘤药，通过干扰细胞有丝分裂和分裂间期细胞功能所必需的微管网络而起抗肿瘤作用。多西他赛可与游离的微管蛋白结合，促进微管蛋白装配成稳定的微管，同时抑制其解聚，导致丧失了正常功能的微管束的产生和微管的固定，从而抑制细胞的有丝分裂。

多西他赛分子式：C₄₃H₅₃NO₁₄

结构式为：

目前，国外及国内市售的多西他赛注射液(Taxotere，商品名：泰索帝)是由AVENTIS公司生产。此制剂将多西他赛溶解于吐温-80中，使用前需使用专用的注射用溶剂稀释，对操作人员的要求极其严格且使用方法繁琐；制剂中含有大量的吐温易引起溶血及过敏等不良反应。

目前有关多西他赛注射用脂肪乳剂的相关专利有CN1931158、CN1709236。多西他赛属于脂溶性药物，在含水溶液中易发生降解，将其包裹于液态脂质中也不可避免其向外渗漏，而制成固体脂质纳米粒则可利用其脂质材料在常温下为固态的性质将药物包裹其中，大大减少了药物渗漏，提高了药物的稳定性，且缓释作用更加突出，具有良好的靶向性。将其制成冻干产品则进一步提高了制剂的稳定性，更适于临床应用。

发明内容

本发明克服现有技术不足，提供了一种可以直接用于静脉注射、稳定的多西他赛固体脂质纳米粒输液剂。

本发明的目的是解决多西他赛在水中溶解度低且易水解的现有技术不足，本发明的另一目的是使用常温下为固态的可注射用脂质材料，与乳剂相比，有效控制药物向外渗漏，同时新制剂具有卓越的缓释效果，进一步提高制剂的稳定性及安全性。

本发明是通过如下技术方案完成的：

将多西他赛分散于脂质中，然后与水相混合搅拌并超声分散制成固体脂质纳米粒，并且通过调节pH值，使用适当的稳定剂，使制得的固体脂质纳米粒具有良好的稳定性。

多西他赛固体脂质纳米粒，包括多西他赛、注射用脂质材料、乳化剂、稳定剂、等渗调节剂、抗氧剂，其余为注射用水。

所述的多西他赛固体脂质纳米粒，其含有的注射用固体脂质材料选自硬脂酸、单硬脂酸甘油脂、三硬脂酸甘油脂、三棕榈酸甘油酯、三月桂酸甘油酯及山嵛酸甘油脂中的一种或几种混合物；乳化剂选自大豆磷脂、卵磷脂、合成磷脂、普朗尼克F₆₈、吐温80、聚乙二醇660-12-羟基硬脂酸酯(Solutol HS 15)、胆酸钠、脱氧胆酸钠中的一种或几种混合物；稳定剂选自油酸、甘胆酸钠和/或胆固醇；等渗调节剂为甘油；抗氧剂为维生素E。

所述固体脂质纳米粒，按重量百分比计，含有多西他赛0.01-2％、注射用脂质材料2-20％、乳化剂1-6％、稳定剂0.1-3％、等渗调节剂2-3％、抗氧剂0.01-0.05％，其余为注射用水。

注射用固体脂质材料优选单硬脂酸甘油脂与硬脂酸的混合物；乳化剂优选注射用大豆磷脂、普朗尼克F₆₈及脱氧胆酸钠的混合物；稳定剂为油酸。

较好的固体脂质纳米粒，按重量百分比计，含有多西他赛0.04-0.5％、注射用脂质材料3-10％、乳化剂选自磷脂0.5-2％、普朗尼克F₆₈0.5-4％、吐温800.5-3％、脱氧胆酸钠0.5-2％中的一种或几种混合物，稳定剂0.1-3％、等渗调节剂2.25％、抗氧剂0.03％。

所述制剂按重量百分比计，含有多西他赛0.01-1％、等渗调节剂为2.25％；抗氧剂为0.03％。

所述固体脂质纳米粒的制备方法，包括如下步骤：

1)将多西他赛、稳定剂、抗氧剂分散于注射用脂质材料中，直至完全溶解，将溶液加热到65-75℃，保温备用，得溶液①，作为油相；

2)将乳化剂、等渗调节剂分散于注射用水中，搅拌直至完全溶解，加热至65-75℃，保温备用，得溶液②，作为水相；

3)在65-75℃条件下，将水相注入油相，高速搅拌2min制成初乳。

4)将初乳进行超声分散10-20min，制得含有多西他赛的纳米乳剂。

5)将所得纳米乳剂迅速在冰水浴中冷却，制得含有多西他赛的固体脂质纳米粒。

6)将所制得的含有多西他赛的固体脂质纳米粒通过0.22μm的滤膜灭菌。

所述固体脂质纳米粒的冻干剂，其特征在于：按重量百分比计，由纳米粒制剂和2-20％的冻干保护剂(甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖酐、氨基酸、氨基酸盐、磷酸盐和/或聚乙二醇)组成。

多西他赛固体脂质纳米粒冻干剂的制备方法如下：将前述多西他赛固体脂质纳米粒加入2-20％的冻干保护剂甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖酐、氨基酸、氨基酸盐、磷酸盐和/或聚乙二醇后，冷冻干燥，制成冻干剂。

上述制备工艺配液步骤中，制备初乳液时，温度优选70℃。

上述制备工艺中，超声分散的时间优选15min。

上述制备工艺中，冷却时可加入所需比例的注射用生理盐水或5％的葡萄糖溶液，形成含有多西他赛不同浓度的固体脂质纳米粒。

本发明使用新的制备方法，通过调节pH值和筛选适当的辅料，使多西他赛分散在固体脂质中制成纳米粒，增加了药物稳定性，放置后药物不析出。本发明的多西他赛固体脂质纳米粒与注射液相比，提高了疗效，减少了药物的副反应。

本发明的多西他赛脂肪乳剂及其冻干剂的制备方法简便，并且制得的产品稳定性好，安全性好，可以实现工业化生产。

具体实施方式

实施例1-3

下表为实施例1-3的脂肪乳剂处方组成(100ml)

成分	实施例1	实施例2	实施例3
				多西他赛	0.05g	0.1g	0.15g
单硬脂酸甘油脂	2.0g	2.2g	3.0g
				硬脂酸	-	0.8g	1.0g
脱氧胆酸钠	-	1.0g	0.5g
				普朗尼克F68	1.0g	2.0g	2.0g
油酸	-	0.8g	1.0g
				注射用大豆磷脂	1.0g	-	2.0g
甘油	2.25g	2.25g	2.25g
				维生素E	0.03g	0.03g	0.03g

将多西他赛、稳定剂如油酸、抗氧剂维生素E在70℃下分散于注射用脂质材料中，作为油相；将乳化剂磷脂、普朗尼克F₆₈，脱氧胆酸钠，甘油分散于注射用水中，然后加热到70℃作为水相；将水相在搅拌条件下加入油相中，70℃2000r·min^-1条件下机械搅拌2min制成初乳，将制得的初乳进行超声分散15min，形成粒径合格的纳米乳剂，将纳米乳剂在冰水浴中迅速冷却，脂质材料固化形成含有多西他赛的固体脂质纳米粒。0.22μm微孔滤膜滤过后，氮气保护下，将固体脂质纳米粒制剂灌装于输液瓶中，压盖，即得注射用多西他赛固体脂质纳米粒制剂。

将新制备的脂肪乳剂置具塞离心管中，4000r·min^-1离心20min后，未见分层，也未见白色药物界的结晶析出。4-10℃贮存6个月，固体脂质纳米粒的外观、粒径、Zeta电位、pH值、含量都未见明显变化，表明制剂稳定。以5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液稀释后8小时内无沉淀析出。

实施例4

将实施例3制的固体脂质纳米粒中加入甘露醇8g、海藻糖6g，溶解后分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。

将冷冻干燥的固体脂质纳米粒制剂在4-10℃贮存6个月，加水复溶后固体脂质纳米粒的外观、粒径、Zeta电位、pH值、含量都未见明显变化，以5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液稀释后8小时内无沉淀析出。

实施例5

对实施例3多西他赛固体脂质纳米粒进行安全性试验，具体包括：过敏试验；溶血试验和血管刺激性试验。

过敏性试验：取豚鼠18只(沈阳药科大学实验动物中心提供)，雌雄各半，体重250-300g，随机分为3组，每组6只。试验组豚鼠腹腔注射所制备的纳米粒制剂0.5ml/只，空白对照组腹腔注射等容量0.9％氯化钠注射液，阳性对照组注射2％新鲜蛋清0.5ml/只。隔日一次，共三次。首次给药后14天、21天，每组随机取3只，试验组豚鼠分别由股静脉注射纳米粒1.0ml/只，空白对照组和阳性对照组豚鼠分别由股静脉注射0.9％氯化钠注射液和2％新鲜蛋清各1.0ml/只，给药后立即观察动物有无喷嚏、搔鼻、干呕或咳嗽、竖毛、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克和死亡等过敏反应，观察1小时。试验结果为注射0.9％氯化钠注射液阴性对照组的豚鼠无过敏反应；2％新鲜蛋清阳性对照组豚鼠出现喷嚏、搔鼻、干呕或咳嗽、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克等过敏反应，且皆于15min内死亡，试验条件成立。所制备纳米粒制剂给予6只豚鼠均无过敏反应。

溶血性试验：家兔(沈阳药科大学实验动物中心提供)耳缘静脉采血，以竹签搅拌去纤维蛋白后，用生理盐水洗涤后离心(2000r·min^-1)，除掉上清液，再以生理盐水反复洗涤数次(均离心弃上清)直至上清液无红色，然后按体积比用生理盐水配成2％红细胞混悬液备用。取试管7支，各管分别加入不同体积的纳米粒制剂和相同体积的红细胞混悬液，其中第6管不加药，为0.9％氯化钠注射液空白对照，第7管加蒸馏水作完全溶血对照(阳性对照管)。各管轻轻摇匀后，置37℃水浴中温孵4小时，观察0.25小时至4.0小时内各管是否有溶血及红细胞聚集现象。试验结果为，所制备纳米粒和0.9％氯化钠注射液组各管在0.25-4.0小时内均无溶血现象，也无凝集反应，蒸馏水组在各时间点完全溶血，产生红色透明溶液。

血管刺激性试验：取2.0-2.5kg家兔3只(沈阳药科大学实验动物中心提供)，雌雄兼用。于家兔左耳静脉缓慢滴注所制备的固体脂质纳米粒2ml/kg，右耳静脉缓慢滴注等容积的0.9％氯化钠注射液，每日一次，连续三日。每日肉眼观察每只家兔双耳注射部位及周围血管是否有红肿、丘斑等刺激现象。末次给药后48小时，处死动物，分别剪取双耳注射处耳静脉及周围组织约5cm，肉眼观察有无红肿、水肿、丘斑形成，并用10％的甲醛固定后，石蜡切片，HE染色，显微镜下观察其炎性细胞浸润、血管周围组织出血、血栓形成及坏死等情况。结果表明，所制备纳米粒连续给药三天，肉眼观察家兔耳静脉血管及周围组织未见红肿、充血等异常现象；所制备纳米粒组1cm处血管内皮连续、完整，未见增生、肿胀；血管周围组织未见炎性细胞浸润及坏死；管腔内无血栓形成。静脉滴注本发明的固体脂质纳米粒制剂对家兔耳缘静脉无刺激作用，安全性好。

实施例6

将实施例3的产品采用MTT法，48小时细胞毒试验方案考察其对肝癌细胞HepG2细胞的细胞毒作用，比较其与游离药物的细胞毒性的差别，结果如下：实施例3制备的多西他赛固体脂质纳米粒的细胞毒性明显高于游离多西他赛，其毒性约为游离多西他赛细胞毒性的3倍，表明多西他赛固体脂质纳米粒能提高对癌细胞的杀伤力，结果见下表：

多西他赛脂肪乳剂与游离多西他赛的细胞毒IC₅₀(μg·mL^-1)

细胞模型(48小时)	多西他赛固体脂质纳米粒	游离多西他赛
			HepG2	0.73	2.28

Claims (8)

1、多西他赛固体脂质纳米粒，其特征在于：由活性成分多西他赛、注射用固体脂质材料、乳化剂、稳定剂、等渗调节剂、抗氧剂及注射用水组成，其按重量百分比计为多西他赛0.01-2％、注射用脂质材料2-20％、乳化剂1-6％、稳定剂0.1-3％、等渗调节剂2-3％、抗氧剂0.01-0.05％，其余为注射用水。

2、根据权利要求1所述的多西他赛固体脂质纳米粒，其特征在于：所述的注射用固体脂质材料选自硬脂酸、单硬脂酸甘油脂、三硬脂酸甘油脂、三棕榈酸甘油酯、三月桂酸甘油酯及山嵛酸甘油脂中的一种或几种混合物；乳化剂选自大豆磷脂、卵磷脂、合成磷脂、普朗尼克F₆₈、吐温80、聚乙二醇660-12-羟基硬脂酸酯、胆酸钠、脱氧胆酸钠中的一种或几种混合物；稳定剂选自油酸、甘胆酸钠和/或胆固醇；等渗调节剂为甘油；抗氧剂为维生素E。

3、根据权利要求2所述的多西他赛固体脂质纳米粒，其特征在于：注射用固体脂质材料优选单硬脂酸甘油脂与硬脂酸的混合物；乳化剂优选注射用大豆磷脂、普朗尼克F₆₈及脱氧胆酸钠的混合物；稳定剂为油酸。

4、根据权利要求1所述的多西他赛固体脂质纳米粒，其特征在于：所述制剂按重量百分比计，含有多西他赛0.01-1％、等渗调节剂为2.25％；抗氧剂为0.03％。

5、一种多西他赛固体脂质纳米粒的制备方法，包括如下步骤：

1)将多西他赛、稳定剂、抗氧剂分散于注射用脂质材料中，直至完全溶解，将溶液加热到65-75℃，保温备用，得溶液①，作为油相；

2)将乳化剂、等渗调节剂分散于注射用水中，搅拌直至完全溶解，加热至65-75℃，保温备用，得溶液②，作为水相；

3)在65-75℃条件下，将水相注入油相，高速搅拌制成初乳。

4)将初乳进行超声分散，10-20min，制得含有多西他赛的纳米乳剂。

5)将所得纳米乳剂迅速在冰水浴中冷却，制得含有多西他赛的固体脂质纳米粒。

6)将所制得的含有多西他赛的固体脂质纳米粒通过0.22μm的滤膜灭菌。

6、根据权利要求1所述的多西他赛固体脂质纳米粒冻干剂，其特征在于：按重量百分比计，由固体脂质纳米粒和2-20％的冻干保护剂组成。

7、根据权利要求6所述的多西他赛固体脂质纳米粒的冻干剂，其特征在于：所述的冻干保护剂为甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖酐、氨基酸、氨基酸盐、磷酸盐和/或聚乙二醇。

8、多西他赛固体脂质纳米粒冻干剂的制备方法，其特征在于：将前述多西他赛固体脂质纳米粒加入2-20％的冻干保护剂冷冻干燥，制成冻干剂。