CN101926779A - 一种吉西他滨固体脂质纳米粒及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种吉西他滨固体脂质纳米粒，其组成重量百分比为：脂质材料5～70％、乳化剂5～60％、稳定剂0.1～15％、其中药物为吉西他滨1～20％。利用本发明的吉西他滨固体脂质纳米粒与赋形剂制备成吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂。本发明提供的吉西他滨固体脂质纳米粒作为药物载体具有良好的生理相容性，可降低药物的毒副作用，且可增加药物的组织靶向性和实现缓释功能。固体脂质纳米粒该发明产业化后可扩大吉西他滨的临床应用范围。

Description

一种吉西他滨固体脂质纳米粒及其制备方法与用途

技术领域

本发明涉及一种吉西他滨固体脂质纳米粒及其制备方法与用途，具体涉及一种抗肿瘤药物吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂及其制备方法，属于医药制剂技术领域。

背景技术

肿瘤已成了人口死亡的第二大原因，据世界卫生组织报告，全球60亿人口中肿瘤患者2000万，发病率约为3.3‰，肿瘤患者的年均死亡率为12％。据卫生部统计，肿瘤已成为导致我国人口死亡的重要病种之一，近几年中国每年新增肿瘤病人超过200万人，死亡130多万人，全国肿瘤患者总数超过400万人。另据中国肿瘤网最近公开统计报导，不到20年的时间，我国肿瘤发病率上升69％，死亡率增长了29％，预计2010年中国肿瘤患者人数将达600万人，如专家预测，目前每4～5个健康人，就有会一人将患癌症。

胰腺癌在西方国家最常见癌症中排名第七。在美国，每年被诊断出胰腺癌的患者有30,000人。2000年世界七大药品市场胰腺癌患者人数达78,700人。随着世界人口的自然增长，特别是老龄人口的增加，上述数字在2010年将上升为94,000人。肺癌是世界各地发病率和死亡率急剧增长的恶性肿瘤，在我国也已成为恶性肿瘤之首。非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的80％，而且确诊的NSCLC70％左右已是晚期，此时化疗为其治疗的主要手段。

吉西他滨，英文名：Gemcitabine，其化学名为2’-脱氧-2，2’-二氟胞苷(β-异构体)，分子式：C₉H₁₁F₂N₃O₄，分子量：263.20，CAS号：95058-81-4。是美国Lilly公司合成的一种破坏细胞复制的二氟核苷类抗肿瘤药物。该品为脱氧胞苷的类似物，是一个新型的抗肿瘤药物。1995年在瑞典、荷兰、芬兰和南非上市，被批准用于治疗胰腺癌和非小细胞肺癌，现FDA的肿瘤药物咨询委员会已推荐本品用于晚期和转移性非小细胞肺癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌及其他实体肿瘤。吉西他滨是治疗非小细胞肺癌最有效的一线药物之一，也是目前治疗晚期胰腺癌的金标准，它具有高缓解率、延长生存期和低副反应等优点；特别是其能有效延长病人的生命，提高病人生存质量。

盐酸吉西他滨具有广谱的抗肿瘤活性，适应症为非小细胞肺癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌及其他实体瘤。在对非小细胞肺癌和胰腺癌的治疗中取得了巨大的成功。特别是对胰腺癌的治疗，目前尚无第二种药物与之争锋。吉西他滨对非小细胞肺癌、胰腺癌呈现客观的疗效，被认为是胰腺癌和NSCLC一线治疗药物的首选。而吉西他滨在膀胱癌治疗上的成功，更增添了其市场前景。

最近几年来研究者逐渐认识到单纯靠发现新分子实体已经不能满足各种现有疾病及新发病症对药物治疗的需求，因为一个全新药用物质需要有实力的研发团队花费数十年时间、十几亿美元的研发投入，而许多在体外的系列试验显示出显著效果的物质在体内的表现却往往令人十分失望，其导致的药物相对于其他普通商品独特风险也造成了上市药物令人生畏的价格。而将现有化学构效基础优良的药物通过新的制药工业技术使之发挥更加优异的疗效远比开发一个新的有药效的化学分子实体更为省时、省力、节约资源。

固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles，SLN)是20世纪90年代中期发展起来的一种以固体脂质为粒子基质、粒径在纳米范围内的新型药物传递系统，目前其研究已覆盖口服、局部应用、透皮吸收及注射等多种给药途径，其中，SLN静脉注射具有提高靶向性、缓控释药物及降低药物毒副作用等优点，故制备可用于临床的SLN静脉注射剂已成为目前世界范围内相关领域科学家们努力的方向之一。

一种载体将药物转运到它的作用部位，而目前普遍认为纳米粒尤其是固体脂质纳米粒在各种载体的基础上取长补短，是一种优良的药物传递系统(DDS)。

其优点主要有以下几个方面：①控制药物的释放和药物的靶向性；②增加药物的稳定性；③较这几年来载药量；④可以包封亲水和亲脂性的药物，适用的范围比较大；⑤几乎没有生物毒性，是一种安全的药物载体；⑥具有工业化大生产的可能性。

目前固体脂质纳米粒制备方法主要有：①乳化溶剂蒸发/扩散法高压乳匀法②高剪切及超声技术微乳法③④超声法⑤薄膜接触器法等多种方法。高压乳匀法是采用高压均质技术处理得到SLN混悬液的方法。其中，以高压乳匀法最易实现工业化。

目前，国内外上市的吉西他滨均为普通的盐酸吉西他滨冻干粉针剂，规格为0.2g和1.0g。目前已有关于吉西他滨溶液制剂(CN1181829C)、微球缓释注射剂(CN101637444A)、脂质体(CN101444485A)等的研究报道，尚未有其固体脂质纳米粒冻干制剂的研究。

吉西他滨对于多种实体肿瘤有切实的疗效，但其作为一种抗代谢类抗肿瘤药物，细胞毒性强，临床应用过程中常伴有毒副反应，主要有骨髓抑制、消化系统反应、肾脏毒性、过敏反应，还有一些报道吉西他滨可引起低血压、脱发、嗜睡、深静脉血栓等不良反应，随着其临床应用，该药的不良反应报道有增多趋势。

发明内容

本发明的目的在于解决上述的技术问题，提供一种吉西他滨固体脂质纳米粒及其制备方法和应用。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

一种吉西他滨固体脂质纳米粒，包括脂质材料、乳化剂、稳定剂，其中药物为吉西他滨，其组成重量百分比为：

吉西他滨    1～20％；

脂质材料    5～70％；

乳化剂      5～60％；

稳定剂      0.1～15％。

进一步地，以上所述的一种吉西他滨固体脂质纳米粒，其组成及重量百分比为：

吉西他滨    1～10％；

脂质材料    10～60％；

乳化剂      15～50％；

稳定剂      5～15％。

进一步地，以上所述的一种吉西他滨固体脂质纳米粒，中所述吉西他滨是由吉西他滨或由吉西他滨与药学上可用的酸反应得到的盐，其盐为盐酸盐、碳酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、重酒石酸盐、马来酸盐或甲磺酸盐。

所述的脂质材料为单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、三脂酸甘油酯、硬脂酸、棕榈酸、癸酸或其混合物。

所述的乳化剂为大豆磷脂、卵磷脂、甘油、普朗尼克F₆₈或其混合物。

所述的稳定剂为油酸。

所述的吉西他滨固体脂质纳米粒粒径在50～500nm之间。

进一步地，为了更好地实现本发明，以上所述的一种吉西他滨固体脂质纳米粒，其组成重量百分比为：

吉西他滨    1～10％；

硬脂酸      30～50％；

大豆磷脂    15～40％；

普朗尼克F₆₈    0.1～10％；

油酸           8～15％。

更进一步地，为了更好地实现本发明，以上所述的一种吉西他滨固体脂质纳米粒，其组成重量百分比为：

吉西他滨          1～10％；

单硬脂酸甘油酯    30～50％；

卵磷脂            15～35％；

普朗尼克F68       0.1～10％；

油酸              8～15％。

更进一步地，为了更好地实现本发明，以上所述的一种吉西他滨固体脂质纳米粒其组成重量百分比为：

吉西他滨          1～10％；

单硬脂酸甘油酯    20～30％；

硬脂酸            10～20％；

大豆磷脂          15～30％；

普朗尼克F₆₈       0.1～10％；

甘油              0.1～10％；

油酸              8～15％。

进一步地，以上所述的一种吉西他滨固体脂质纳米粒，包括如下步骤：(1)将处方量的脂质材料在60～95℃的水浴条件下熔融；(2)将吉西他滨、油酸分散于熔融的注射用脂质材料中作为油相；(3)将乳化剂分散于注射用水中，加热至60～80℃，作为水相；(4)将水相搅拌下加入到熔融油相中，继续搅拌15～30min，形成初级混悬液；(5)将制好的初级混悬液转移至高压匀质机中，在冰浴条件下高压乳匀5～20次，即制成吉西他滨纳米粒混悬液。

进一步地，以上所述一种吉西他滨固体脂质纳米粒的制备方法，包括如下步骤：(1)将处方量的脂质材料在70℃的水浴条件下熔融；(2)将吉西他滨、油酸分散于熔融的注射用脂质材料中作为油相；(3)将乳化剂分散于注射用水中，加热至60℃，作为水相；(4)将水相搅拌下加入到熔融油相中，继续搅拌15min，形成初级混悬液；(5)将制好的初级混悬液转移至高压匀质机中，在冰浴条下件高压乳匀10次，即制成吉西他滨纳米粒混悬液。

以上所述吉西他滨固体脂质纳米粒的用途，可将吉西他滨固体脂质纳米粒制备成吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂。

进一步地，以上所述的吉西他滨固体脂质纳米粒的用途，吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂制备包括如下步骤：每100ml吉西他滨纳米粒混悬液加10～50g冻干赋形剂，搅拌溶解，过滤，灌装，冷冻干燥，即得吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂。

进一步地，以上所述的吉西他滨固体脂质纳米粒的用途，其中所述赋形剂为甘露醇、山梨醇、木糖醇、乳糖、蔗糖、海藻糖、甘氨酸、右旋糖苷中的一种或几种，其用量为每100ml吉西他滨纳米粒混悬液加25～50g冻干赋形剂。

本发明的有益效果主要体现在：本发明提供的吉西他滨固体脂质纳米粒作为药物载体具有良好的生理相容性，可降低药物的毒副作用，且可增加药物的组织靶向性和实现缓释功能。固体脂质纳米粒该发明产业化后可扩大吉西他滨的临床应用范围。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述。

实施例1

一种吉西他滨固体脂质纳米粒由吉西他滨、脂质材料、乳化剂、稳定剂组成：

吉西他滨           2g；

硬脂酸             16g；

大豆磷脂           10g；

普朗尼克F₆₈        3g；

油酸               3g。

制备方法：(1)将处方量的脂质材料硬脂酸在70℃的水浴条件下熔融；(2)将吉西他滨、油酸分散于熔融的脂质材料中作为油相；(3)将处方量的乳化剂大豆磷脂、普朗尼克F₆₈混合物分散于注射用水中，加热至60℃，作为水相；(4)将水相搅拌下加入到熔融油相中，继续搅拌15min，形成初级混悬液；(5)将制好的初级混悬液转移至高压匀质机中，高压乳匀10次，即制成吉西他滨纳米粒混悬液，该步操作在冰浴条件下进行。结果：制得的吉西他滨固体脂质纳米粒粒径在100～300nm之间。

取上述制得的吉西他滨固体脂质纳米粒混悬液，按每100ml吉西他滨纳米粒混悬液加40g甘露醇搅拌溶解后，过滤，按5g/支灌装，冷冻干燥，得吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂。

实施例2

一种吉西他滨固体脂质纳米粒由吉西他滨、脂质材料、乳化剂、稳定剂组成：

吉西他滨              2g；

单硬脂酸甘油酯        15g；

卵磷脂                12g；

普朗尼克F₆₈           3g；

油酸                  4g。

制备方法：(1)将处方量的脂质材料单硬脂酸甘油酯在65℃的水浴条件下熔融；(2)将吉西他滨、油酸分散于熔融的脂质材料中作为油相；(3)将处方量的乳化剂卵磷脂、普朗尼克F₆₈混合物分散于注射用水中，加热至60℃，作为水相；(4)将水相搅拌下加入到熔融油相中，继续搅拌15min，形成初级混悬液；(5)将制好的初级混悬液转移至高压匀质机中，高压乳匀10次，即制成吉西他滨纳米粒混悬液，该步操作在冰浴条件下进行。结果：制得的吉西他滨固体脂质纳米粒粒径在100～250nm之间。

取上述制得的吉西他滨固体脂质纳米粒混悬液，按每100ml吉西他滨纳米粒混悬液加40g乳糖搅拌溶解后，过滤，按5g/支灌装，冷冻干燥，得吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂。

实施例3

一种吉西他滨固体脂质纳米粒由吉西他滨、脂质材料、乳化剂、稳定剂组成：

吉西他滨              10g；

单硬脂酸甘油酯        40g；

硬脂酸                20g；

大豆磷脂              20g；

普朗尼克F₆₈           10g；

甘油                  10g；

油酸                  10g。

制备方法：(1)将处方量的单硬脂酸甘油酯和硬脂酸混合脂质材料在70℃的水浴条件下熔融；(2)将吉西他滨、油酸分散于熔融的脂质材料中作为油相；(3)将处方量的大豆磷脂、普朗尼克F₆₈、甘油混合乳化剂分散于注射用水中，加热65℃，作为水相；(4)将水相搅拌下加入到熔融油相中，继续搅拌20min，形成初级混悬液；(5)将制好的初级混悬液转移至高压匀质机中，高压乳匀15次，即制成吉西他滨纳米粒混悬液，该步操作在冰浴条件下进行。结果：制得的吉西他滨固体脂质纳米粒粒径在100～200nm之间。

取上述制得的吉西他滨固体脂质纳米粒混悬液，按每100ml吉西他滨纳米粒混悬液加50g甘露醇搅拌溶解后，过滤，按10g/支灌装，冷冻干燥，得吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂。

本发明提供的吉西他滨固体脂质纳米粒具有以下优点：

1、良好的生理相容性

SIN良好的生理相容性取决于其基质材料和制备工艺。SLN的基质材料为具有生理相容性和生物可降解性的固体脂质的单一成分或其混合物。此外，适合于大规模生产的高压乳匀法由于避免了使用有机溶剂，因此最终产品不会出现有机溶剂残留所引起的细胞毒性等问题。

2、粒径较小且分布均匀，具有被动靶向性

本发明的吉西他滨固体脂质纳米粒粒径在100～300nm之间，该粒径范围符合注射制剂的标准。该粒径的粒子能通过“滞留与渗漏”效应即“EPR”，实现肿瘤组织的被动靶向分布，吉西他滨药物通过固体脂质纳米粒载体使。

实体瘤组织血管系统与正常组织相比有很多不同。肿瘤直径达到2mm左右时，就诱导血管发生，形成新血管系统以满足不断增长的营养和氧需求，使血管密度增加。肿瘤血管形状构造不规则、血管壁膨胀缺失，血管内皮细胞排列不紧密、间隙大，文献报道人结肠腺癌血管孔径达400nm。正常组织中，血管平滑肌肉层在乙酰胆碱、NO等调节因子的作用下松弛或收缩以维持稳定的血流和血压；而肿瘤血管内皮细胞周围的平滑肌缺失使其丧失了自发调节功能而处于持久扩张状态，使血管渗漏增加。肿瘤血管内皮生长因子(VEGF/VPF)、缓激肽(BK)、NO、前列腺素(PGs)、基质金属蛋白酶(MMPs)等调节因子生成增多、交互作用加强，促使血管通透性增加。上述原因导致大分子物质可以透过血管壁进入肿瘤组织，在肿瘤组织滞留量增加；此外，肿瘤组织淋巴清除系统缺失，使需经淋巴系统清除的大分子药物和脂质等在肿瘤组织贮留时间延长，构成了大分子物质肿瘤被动靶向性的基础。大分子药物包括脂质体不能透过血管进入正常组织，但在肿瘤组织蓄积量增加、贮留时间延长，这种现象被称为EPR效应(Enhanced Permeability and Retention)。实体瘤解剖学和病理生理学的改变是大分子化合物存在EPR效应的根本原因，有文献报道大分子在肿瘤组织滞留时间可以延长数周甚至数月。另外，较小的粒径对于靶向性意义重大。本发明的吉西他滨固体脂质纳米粒带正电荷，根据文献资料显示，带正电的粒子易被肺摄取，所以本发明盐酸吉西他滨固体脂质纳米粒对于肺癌的靶向功能的实现提供了可能性。另经研究报道，胃肠道中的PP(Peyer’s patches)对粒径在100nm左右的纳米粒的吸收较高，若吉西他滨通过研究后扩大适应症至胃肠道肿瘤，则可利用本发明制成控制粒径在100nm左右范围内的吉西他滨固体脂质纳米粒，实现胃肠肠道肿瘤定位靶向。

3、包封率较高

吉西他滨的各种酸的盐形式水溶性较大，在制备过程中先将药物加入熔融的脂质材料中，减少了药物与水相直接接触的机会，有效避免了药物向外水相扩散，具有较高的药物包封率(可达80％以上)。

4、缓释功能

本发明通过高压乳匀法制备吉西他滨固体脂质体，其中药物是均匀分布在固体脂质纳米粒中，通过脂质材料的溶蚀缓慢释放药物，避免了药物突释现象，使药物在到达靶组强前损失较小，增强了疗效的同时降低了毒副作用。

制成无菌冻干制剂用于静脉注射，不会引起血液凝块、聚结及毛细血管栓塞，并可以达到缓释、靶向的目的。有研究报道SLN与血液循环系统中蛋白分子、血清白蛋白相互作用的情况，并推断SLN不会引起血细胞凝集和栓塞，预示SLN静脉给药具有较好的安全性。

5、提高药物的稳定性

吉西他滨大部分被胞苷脱氨酸在肝脏、肾、血液和其他组织中快速、完全的代谢，而制成吉西他滨固体脂质纳米粒后，可以保护其中的药物，提高了药物的稳定性。进一步制成吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冻干制剂后，储存3个月以上完整率达95％以上。

6、降低了毒副作用

本发明提供的吉西他滨固体脂质纳米粒，其中的药物吉西他滨均匀分散于固体脂质材料中，通过SLN载体一方面更易将药物转运至肿瘤细胞，提高了抗肿瘤活性，另一方面，药物被包裹于SLN中，避免了药物与血管的直接接触，减轻了对血管的刺激性。

需要理解到的是：上述说明并非是对本发明的限制，在本发明构思范围内，所进行的添加、变换、替换等，也应属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种吉西他滨固体脂质纳米粒，其特征在于：包括脂质材料、乳化剂、稳定剂，其中药物为吉西他滨，其组成重量百分比为：

吉西他滨    1～20％；

脂质材料    5～70％；

乳化剂      5～60％；

稳定剂      0.1～15％。

2.如权利要求1所述的一种吉西他滨固体脂质纳米粒，其特征在于：其组成及重量百分比为：

吉西他滨    1～10％；

脂质材料    10～60％；

乳化剂      15～50％；

稳定剂      5～15％。

3.如权利要求1或2所述的一种吉西他滨固体脂质纳米粒，其特征在于：所述吉西他滨是由吉西他滨或由吉西他滨与药学上可用的酸反应得到的盐，其盐为盐酸盐、碳酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、重酒石酸盐、马来酸盐或甲磺酸盐；

所述的脂质材料为单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、三脂酸甘油酯、硬脂酸、棕榈酸、癸酸或其混合物；

所述的乳化剂为大豆磷脂、卵磷脂、甘油、普朗尼克F₆₈或其混合物；

所述的稳定剂为油酸；

所述的吉西他滨固体脂质纳米粒粒径在50～500nm之间。

4.权利要求1所述的一种吉西他滨固体脂质纳米粒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)将处方量的脂质材料在60～95℃的水浴条件下熔融；(2)将吉西他滨、油酸分散于熔融的注射用脂质材料中作为油相；(3)将乳化剂分散于注射用水中，加热至60～80℃，作为水相；(4)将水相搅拌下加入到熔融油相中，继续搅拌15～30min，形成初级混悬液；(5)将制好的初级混悬液转移至高压匀质机中，在冰浴条件下高压乳匀5～20次，即制成吉西他滨纳米粒混悬液。

5.如权利要求4所述的一种吉西他滨固体脂质纳米粒的制备方法，其特征在于：(1)将处方量的脂质材料在70℃的水浴条件下熔融；(2)将吉西他滨、油酸分散于熔融的注射用脂质材料中作为油相；(3)将乳化剂分散于注射用水中，加热至60℃，作为水相；(4)将水相搅拌下加入到熔融油相中，继续搅拌15min，形成初级混悬液；(5)将制好的初级混悬液转移至高压匀质机中，在冰浴条下件高压乳匀10次，即制成吉西他滨纳米粒混悬液。

6.权利要求1所述吉西他滨固体脂质纳米粒的用途，其特征在于：将吉西他滨固体脂质纳米粒制备成吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂。

7.如权利要求6所述的吉西他滨固体脂质纳米粒的用途，其特征在于：吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂制备包括如下步骤：每100ml吉西他滨纳米粒混悬液加10～50g冻干赋形剂，搅拌溶解，过滤，灌装，冷冻干燥，即得吉西他滨固体脂质纳米粒无菌冷冻干燥制剂。

8.如权利要求7所述的吉西他滨固体脂质纳米粒的用途，其特征在于：所述赋形剂为甘露醇、山梨醇、木糖醇、乳糖、蔗糖、海藻糖、甘氨酸、右旋糖苷中的一种或几种，其用量为每100ml吉西他滨纳米粒混悬液加25～50g冻干赋形剂。