CN101019832A - 多西他赛脂肪乳剂及其冻干剂与制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属医药技术领域，涉及一种含有多西他赛的脂肪乳剂、其冻干剂及制备方法。本发明所提供的多西他赛脂肪乳剂及其冻干剂，主要包括多西他赛、注射用油、乳化剂、稳定剂、等渗调节剂、pH调节剂，按重量百分比计，含有多西他赛0.05～0.2％。将多西他赛加入到注射用油中，后加入稳定剂、抗氧剂，搅拌，至多西他赛溶解，得油相；将甘油、乳化剂分散于注射用水中，作为水相；将水相与油相混合，搅拌制成初乳，调节pH值至5～6后，高压匀化形成脂肪乳剂。本发明通过调节pH值和筛选适当的辅料使多西他赛稳定的包裹于乳粒中，制备的乳剂及其冻干剂安全性高，稳定性好，毒副作用低，疗效高。临床上可用于静脉注射使用。

Description

多西他赛脂肪乳剂及其冻干剂与制备方法

技术领域

本发明涉及含有多西他赛的脂肪乳剂及其冻干剂与制备方法，属医药技术领域。

背景技术

多西他赛，又名多西紫杉醇，属紫杉烷类化合物，具有抗肿瘤作用。多西他赛已被美国食品药品监督管理局批准为癌症治疗药物。多西他赛对乳癌、卵巢癌等癌症具有良好的疗效。

多西他赛不溶于水，口服生物利用度差，不足8％，为避免其低生物利用度，目前临床上使用其注射剂，上市剂型为注射用多西他赛和多西他赛注射液，该类制剂在静脉滴注前以5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液溶解、稀释才能使用。该类制剂中含有吐温80和乙醇等溶剂，易产生溶血和过敏性反应，需提前服用地塞米松等药物防治，临床用药不方便，用药安全性低。

大部分肿瘤疾病患者在应用药物的同时需补充营养，脂肪乳可为患者提供所需能量，因此将多西他赛制成注射用脂肪乳在治疗癌症同时可以为患者提供一定的营养成分。

目前多西他赛脂肪乳剂相关专利在CN1709236A中有描述，该专利所描述的脂肪乳剂中油相选自注射用植物油，但在本发明研究中发现多西他赛在注射用大豆油中的溶解度不高，制备的乳剂油相用量大，载药量低，形成的乳剂乳粒粒径较大。本发明中使用了中链三甘油酯米格列醇或米格列醇与大豆油的混合物为油相，在提高了载药量的同时减少了油相的用量，所制备的乳剂乳粒粒径小，达0.2μm以下，可过滤除菌，利于冷冻干燥制成冻干制剂，进一步提高制剂的稳定性。

多西他赛分子式为C₄₃H₅₃NO₁₄，分子量为807.88

结构式如下：

多西他赛结构中含有酯键，其在碱性条件下或中性条件下不稳定，在pH7以下，尤其是pH6附近或更酸性的条件下稳定。脂肪乳在酸性pH条件下，容易产生破乳或分层现象，因此制备多西他赛注射用脂肪乳应选用适宜的pH值，以保证药物及其脂肪乳剂的稳定性。专利CN1709236A中描述的脂肪乳剂pH选择为5^-8.5，本发明将所制成乳剂的pH值控制在7以下，以保证药物的稳定性，同时采用了油酸为稳定剂，使所制备的乳剂在流通蒸汽灭菌后，乳粒粒径不发生明显变化，体现出了较专利CN1709236A中描述的脂肪乳剂更稳定的优势。

本发明提供了一种新的多西他赛脂肪乳剂的制备方法，并通过合理技术制成了冻干制剂。

发明内容

本发明目的是提供一种稳定的多西他赛注射用脂肪乳剂及其冻干剂，并提供制备方法。在治疗癌症疾病的同时，可以为患者补充营养。

通过本发明制备的多西他赛脂肪乳剂乳粒粒度小，可用于0.22μm无菌过滤，适用于制成冻干制剂。

本发明要解决的技术问题是将多西他赛制成具有适宜pH值的脂肪乳剂，从而确保药物和乳剂的稳定性，使制得的脂肪乳剂具有良好的稳定性。为进一步提高脂肪乳剂的稳定性，增加药物的稳定性，利用冷冻干燥技术，将其制成固体乳剂，在使用时加入适宜的水化介质使其重新分散成可注射脂肪乳剂。本发明希望使用新的制备方法，通过调节pH值和筛选适当的辅料使多西他赛稳定的包裹于乳粒中，从而提高药物的稳定性，减少药物的副反应，提高疗效。

为了解决上述问题，本发明提供下述技术方案。

一种多西他赛的脂肪乳剂，包括多西他赛、注射用油、乳化剂、稳定剂、等渗调节剂、抗氧剂，并含有pH调节剂。

所述多西他赛脂肪乳剂，注射用油选自长链甘油三酯和/或中链甘油三酯的一种或多种；乳化剂选自大豆磷脂、卵磷脂、合成磷脂、普朗尼克F₆₈、吐温80、聚乙二醇660-12-羟基硬脂酸酯(Solutol HS15)中的一种或几种混合物；稳定剂选自油酸、甘胆酸钠和/或胆固醇；等渗调节剂为甘油；抗氧剂为维生素E；pH调节剂选自盐酸、柠檬酸、氢氧化钠、磷酸盐、碳酸盐和/或柠檬酸盐。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于长链甘油三酯选自大豆油、红花油、玉米油、橄榄油、蓖麻油、棉籽油、茶油、麻油中的一种或多种。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于注射用油是中链甘油三酯米格列醇、注射用大豆油的一种或混合物，注射用磷脂是注射用大豆磷脂或注射用卵磷脂。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于乳化剂为大豆磷脂、卵磷脂、合成磷脂、普朗尼克F₆₈、吐温80中的一种或几种混合物。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于稳定剂为油酸。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于所述脂肪乳剂中多西他赛重量体积浓度范围是0.05-0.2％。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于所述脂肪乳剂中多西他赛重量体积浓度为0.05％、0.08％、0.1％、0.2％。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于所述脂肪乳剂中注射用油的重量体积浓度范围是5-30％。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于所述脂肪乳剂中注射用油的重量体积浓度是5％、10％、15％、20％、25％、30％。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于按重量体积浓度计，含乳化剂1-4％。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于按重量体积浓度计，含稳定剂油酸0.1-1％。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于按重量体积浓度计，含等渗调剂甘油2-3％，抗氧剂维生素E0.02-0.08％。

所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于pH调节剂选自盐酸、柠檬酸、氢氧化钠、磷酸盐、碳酸盐和/或柠檬酸盐，用于调节pH至5-6，以保持药物的稳定性。

所述脂肪乳剂的制备方法，包括如下步骤：

1)将多西他赛加入到注射用油中，后加入稳定剂、抗氧剂，搅拌，至多西他赛溶解，得油相。

2)将甘油、乳化剂分散于注射用水中，作为水相。

3)在60-80℃将水相与油相混合，5000转每分钟的搅拌速率高速搅拌10分钟后制成初乳，用pH调节剂调节pH值至5-6后，在氮气条件下，90MPa进行高压匀化2-50次至形成乳粒粒径合格的脂肪乳剂(粒径均小于0.2μm)。

4)氮气保护下，将脂肪乳灌装于输液瓶中，压盖。

5)将灌装后的脂肪乳在110-120℃流通蒸汽灭菌15-30分钟，即得到多西他赛脂肪乳。

所述脂肪乳剂的另一种制备方法，包括如下步骤：

1)将多西他赛与脂肪乳注射液或中长链脂肪乳注射液一起磨碎，所获得的分散体5000转每分钟的搅拌速率高速搅拌5分钟后，氮气条件，90MPa进行高压匀化5-30次至形成乳粒粒径合格的脂肪乳剂(粒径均小于0.2μm)。

2)氮气保护下，将脂肪乳灌装于输液瓶中，压盖。

3)将灌装后的脂肪乳在110-120℃流通蒸汽灭菌15-30分钟，即得到多西他赛脂肪乳。

前述的脂肪乳剂的制备方法，其特征在于：可以采用自制的或市售的脂肪乳注射液或中长链脂肪乳注射液。

一种多西他赛脂肪乳剂冻干剂的制备方法，其特征在于：

1)将多西他赛加入到注射用油中，后加入稳定剂、抗氧剂，搅拌，至多西他赛溶解，得油相。

2)将甘油、乳化剂分散于注射用水中，然后加入2-20％的冻干保护剂甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖酐、氨基酸、氨基酸盐、磷酸盐和/或聚乙二醇，得到水相。

3)在60-80℃将水相与油相混合，5000转每分钟的搅拌速率高速搅拌10分钟后制成初乳，用pH调节剂调节pH值至5-6后，在氮气条件下，90MPa进行高压匀化2-50次至形成乳粒粒径合格的脂肪乳剂(粒径均小于0.2μm)后，无菌过滤后分装于西林瓶，冷冻干燥，制成冻干剂。

另一种多西他赛脂肪乳剂冻干剂的制备方法，其特征在于：将前述多西他赛脂肪乳剂加入2-20％的冻干保护剂甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖酐、氨基酸、氨基酸盐、磷酸盐和/或聚乙二醇后，冷冻干燥，制成冻干剂。

本发明使用新的制备方法，通过调节pH值和筛选适当的辅料，增加了多西他赛的稳定性，同时保持脂肪乳剂的稳定性，流通蒸汽灭菌后乳粒粒径没有明显增大。本发明多西他赛脂肪乳组成中不含吐温80，增加了药物使用的安全性。

本发明的多西他赛脂肪乳及其冻干剂的制备方法简便，并且制得的产品安全性高，稳定性好，毒副作用低，疗效高。可以实现工业化生产。

具体实施方式

实施例1-3

下表为实施例1-3的脂肪乳剂处方组成(100ml)

成分	实施例1	实施例2	实施例3
				多西他赛	0.05g	0.08g	0.10g
注射用大豆油	-	2g	2g
				中链甘油三酯	5g	8g	10g
注射用大豆磷脂	1g	1.2g	1.5g
				普朗尼克F68	0.2g	0.2g	0.2g
油酸	0.8g	0.8g	0.8g
				甘油	2.2g	2.2g	2.2g
维生素E	0.04g	0.05g	0.06g

将多西他赛加入到注射用油中，后加入稳定剂、抗氧剂，搅拌，至多西他赛溶解，得油相；将甘油、乳化剂分散于注射用水中，作为水相；两相分别预热至70℃，在高速搅拌的条件下，将油相缓慢加入到水相，5000转每分钟的搅拌速率高速搅拌10分钟后制成初乳，用pH调节剂调节pH值至6，再氮气条件下，90MPa进行高压匀化20次至形成乳粒粒径合格的脂肪乳剂(粒径均小于0.2μm)。微孔滤膜滤过后，氮气保护下，将脂肪乳灌装于输液瓶中，压盖；将灌装后的脂肪乳在120℃流通蒸汽灭菌20分钟，即得到多西他赛脂肪乳。

灭菌前后测定脂肪乳乳粒粒径，粒径无明显变化；将制备的脂肪乳剂置具塞离心管中，4000rpm离心20min后，未见分层，也未见药物结晶析出。4-10℃贮存6个月，脂肪乳剂的外观、粒径、Zeta电位、pH值、含量都未见明显变化，表明乳剂稳定。以5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液稀释后8小时内无沉淀析出。

实施例4

将50mg多西他赛与100ml Lipofudin MCT/LCT 20％(中长链脂肪乳注射液)一起磨碎，所获得的分散体5000转每分钟的搅拌速率高速搅拌5分钟后，氮气条件，90MPa进行高压匀化15次至形成乳粒粒径合格的脂肪乳剂(粒径均小于0.2μm)，微孔滤膜滤过后，氮气保护下，将脂肪乳灌装于输液瓶中，压盖；将灌装后的脂肪乳在120℃流通蒸汽灭菌20分钟，即得到多西他赛脂肪乳。

灭菌前后测定脂肪乳乳粒粒径，粒径无明显变化；将制备的脂肪乳剂置具塞离心管中，4000rpm离心20min后，未见分层，也未见药物结晶析出。4-10℃贮存6个月，脂肪乳剂的外观、粒径、Zeta电位、pH值、含量都未见明显变化，表明乳剂稳定。以5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液稀释后8小时内无沉淀析出。

实施例5

称取多西他赛0.05g、中链三甘油酯5.0g、油酸0.8g、维生素E0.04g、充分溶解混匀，得油相；注射用大豆磷脂1.0g、甘油2.2g、普朗尼克F680.2g、甘露醇8g、海藻糖2g溶于90ml注射用水中，作为水相；两相分别预热至70℃，再高速搅拌的条件下，将油相缓慢加入到水相，5000转每分钟的搅拌速率高速搅拌10分钟后制成初乳，用pH调节剂调节pH值至6，再氮气条件下，90MPa进行高压匀化20次至形成乳粒粒径合格的脂肪乳剂(粒径均小于0.2μm)；0.22μm无菌过滤后，分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。

将冷冻干燥的脂肪乳剂在4-10℃贮存6个月，加水复溶后脂肪乳剂的外观、粒径、Zeta电位、pH值、含量都未见明显变化，以5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液稀释后8小时内无沉淀析出。

实施例6

将实施例1制的脂肪乳剂中加入甘露醇8g、海藻糖2g，溶解后0.22μm无菌过滤后，分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。

将冷冻干燥的脂肪乳剂在4-10℃贮存6个月，加水复溶后脂肪乳剂的外观、粒径、Zeta电位、pH值、含量都未见明显变化，以5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液稀释后8小时内无沉淀析出。

实施例7

将实施例4制的脂肪乳剂中加入甘露醇8g、海藻糖2g，溶解后0.22μm无菌过滤后，分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。

将冷冻干燥的脂肪乳剂在4-10℃贮存6个月，加水复溶后脂肪乳剂的外观、粒径、Zeta电位、pH值、含量都未见明显变化，以5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液稀释后8小时内无沉淀析出。

实施例8

实施例1的产品的过敏性试验：取豚鼠18只(沈阳药科大学实验动物中心提供)，雌雄各半，体重250-300g，随机分为3组，每组6只。试验组豚鼠腹腔注射所制备的脂肪乳剂0.5ml/只，空白对照组腹腔注射等容量0.9％氯化钠注射液，阳性对照组注射2％新鲜蛋清0.5ml/只。隔日一次，共三次。首次给药后14天、21天，每组随机取3只，试验组豚鼠分别由股静脉注射脂肪乳1.0ml/只，空白对照组和阳性对照组豚鼠分别由股静脉注射0.9％氯化钠注射液和2％新鲜蛋清各1.0ml/只，给药后立即观察动物有无喷嚏、搔鼻、干呕或咳嗽、竖毛、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克和死亡等过敏反应，观察1小时。试验结果为注射0.9％氯化钠注射液阴性对照组的豚鼠无过敏反应；2％新鲜蛋清阳性对照组豚鼠出现喷嚏、搔鼻、干呕或咳嗽、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克等过敏反应，且皆于15min内死亡，试验条件成立。所制备脂肪乳给予6只豚鼠均无过敏反应。

实施例9

实施例3的产品的溶血性试验：家兔(沈阳药科大学实验动物中心提供)耳缘静脉采血，以竹签搅拌去纤维蛋白后，用生理盐水洗涤后离心(2000rpm)，除掉上清液，再以生理盐水反复洗涤数次(均离心弃上清)直至上清液无红色，然后按体积比用生理盐水配成2％红细胞混悬液备用。取试管7支，各管分别加入不同体积的脂肪乳和相同体积的红细胞混悬液，其中第6管不加药，为0.9％氯化钠注射液空白对照，第7管加蒸馏水作完全溶血对照(阳性对照管)。各管轻轻摇匀后，置37℃水浴中温孵4小时，观察0.25小时至4.0小时内各管是否有溶血及红细胞聚集现象。试验结果为，所制备脂肪乳和0.9％氯化钠注射液组各管在0.25-4.0小时内均无溶血现象，也无凝集反应，蒸馏水组在各时间点完全溶血，产生红色透明溶液。

实施例10

实施例3的产品的血管刺激性试验：取2.0-2.5kg家兔3只(沈阳药科大学实验动物中心提供)，雌雄兼用。于家兔左耳静脉缓慢滴注所制备的脂肪乳15ml/kg，右耳静脉缓慢滴注等容积的0.9％氯化钠注射液，每日一次，连续三日。每日肉眼观察每只家兔双耳注射部位及周围血管是否有红肿、丘斑等刺激现象。末次给药后48小时，处死动物，分别剪取双耳注射处耳静脉及周围组织约5cm，肉眼观察有无红肿、水肿、丘斑形成，并用10％的甲醛固定后，石蜡切片，HE染色，显微镜下观察其炎性细胞浸润、血管周围组织出血、血栓形成及坏死等情况。结果表明，所制备脂肪乳连续给药三天，肉眼观察家兔耳静脉血管及周围组织未见红肿、充血等异常现象；所制备脂肪乳组1cm处血管内皮连续、完整，未见增生、肿胀；血管周围组织未见炎性细胞浸润及坏死；管腔内无血栓形成。静脉滴注本发明的多西他赛脂肪乳剂对家兔耳缘静脉无刺激作用，安全性好。

实施例11

将实施例3的产品采用MTT法，48小时细胞毒试验方案考察其对人乳腺癌细胞MCF-7和其耐药细胞MCF-7/ADR细胞的细胞毒作用，比较其与游离药物的细胞毒性的差别，结果如下：实施例1制备的多西他赛脂肪乳剂的细胞毒性明显高于游离多西他赛，对于MCF-7细胞其毒性约为游离多西他赛细胞毒性的3倍，对于MCF-7/ADR细胞其毒性约为游离多西他赛细胞毒性的2.5倍，表明多西他赛脂肪乳剂能提高对癌细胞的杀伤力，结果见下表：

多西他赛脂肪乳剂与游离多西他赛的细胞毒IC₅₀(μmol/L)

细胞模型(48小时)	多西他赛脂肪乳剂	游离多西他赛
			MCF-7MCF-7/ADR	0.0110.20	0.0320.48

Claims (8)

1、一种多西他赛的脂肪乳剂，其特征在于：该脂肪乳剂由活性成分多西他赛、注射用油、乳化剂、稳定剂、等渗调节剂、抗氧剂，pH调节剂及注射用水组成，其重量体积浓度范围为多西他赛0.05～0.2％，注射用油5～30％，乳化剂1～4％，稳定剂0.1～1％，等渗调剂2～3％，抗氧剂0.02～0.08％，其余为注射用水，pH调节剂调节pH至5～6。

2、根据权利要求1所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于：注射用油选自长链甘油三酯和/或中链甘油三酯的一种或多种；乳化剂选自大豆磷脂、卵磷脂、合成磷脂、普朗尼克F₆₈、聚乙二醇660-12-羟基硬脂酸酯中的一种或几种混合物；稳定剂选自油酸、甘胆酸钠和/或胆固醇；等渗调节剂为甘油；抗氧剂为维生素E；pH调节剂选自盐酸、柠檬酸、氢氧化钠、磷酸盐、碳酸盐和/或柠檬酸盐。

3、根据权利要求2所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于：长链甘油三酯选自大豆油、红花油、玉米油、橄榄油、蓖麻油、棉籽油、茶油、麻油中的一种或多种；中链甘油三酯选自米格列醇、注射用大豆油的一种或混合物；注射用磷脂选自注射用大豆磷脂或注射用卵磷脂；乳化剂选自大豆磷脂、卵磷脂、合成磷脂、普朗尼克F₆₈、吐温80中的一种或几种混合物；稳定剂为油酸；pH调节剂选自盐酸、柠檬酸、氢氧化钠、磷酸盐、碳酸盐和/或柠檬酸盐。

4、根据权利要求1所述多西他赛脂肪乳剂，其特征在于：所述脂肪乳剂中多西他赛重量体积浓度为0.05％、0.08％、0.1％、0.2％。注射用油为5％、10％、15％、20％、25％、30％。

5、一种多西他赛脂肪乳剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将多西他赛加入到注射用油中，后加入稳定剂、抗氧剂，搅拌，至多西他赛溶解，得油相；

2)将甘油、乳化剂分散于注射用水中，作为水相；

3)在60～80℃将水相与油相混合，5000转每分钟的搅拌速率高速搅拌10分钟后制成初乳，用pH调节剂调节pH值至5～6后，在氮气条件下，90MPa进行高压匀化2～50次至形成乳粒粒径均小于0.2μm的脂肪乳剂；

4)氮气保护下，将脂肪乳灌装于输液瓶中，压盖；

5)将灌装后的脂肪乳在110～120℃流通蒸汽灭菌15～30分钟，即得到多西他赛脂肪乳。

6、多西他赛脂肪乳剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将多西他赛与脂肪乳注射液或中长链脂肪乳注射液一起磨碎，所获得的分散体5000转每分钟的搅拌速率高速搅拌5分钟后，氮气条件，90MPa进行高压匀化5～30次至形成乳粒粒径均小于0.2μm的脂肪乳剂；

2)氮气保护下，将脂肪乳灌装于输液瓶中，压盖；

3)将灌装后的脂肪乳在110～120℃流通蒸汽灭菌15～30分钟，即得到多西他赛脂肪乳。

7、多西他赛脂肪乳剂冻干剂的制备方法，其特征在于：

1)将多西他赛加入到注射用油中，后加入稳定剂、抗氧剂，搅拌，至多西他赛溶解，得油相；

2)将甘油、乳化剂分散于注射用水中，然后加入2～20％的冻干保护剂甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖酐、氨基酸、氨基酸盐、磷酸盐和/或聚乙二醇，得到水相；

3)在60～80℃将水相与油相混合，5000转每分钟的搅拌速率高速搅拌10分钟后制成初乳，用pH调节剂调节pH值至5～6后，再氮气条件下，90MPa进行高压匀化2～50次至形成乳粒粒径均小于0.2μm的脂肪乳剂后，无菌过滤后分装于西林瓶，冷冻干燥，制成冻干剂。

8、多西他赛脂肪乳剂冻干剂的制备方法，其特征在于：将前述多西他赛脂肪乳剂加入2～20％的冻干保护剂甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、乳糖、果糖、海藻糖、麦芽糖、右旋糖酐、氨基酸、氨基酸盐、磷酸盐和/或聚乙二醇后，冷冻干燥，制成冻干剂。