CN101028287A - 一种蝎毒的提取净化方法 - Google Patents

Abstract

本发明一种蝎毒的提取净化方法，该方法包括：将洁净蝎子在高于30℃的温度下在无菌环境中，用电脉冲刺激使蝎子排毒，其中电脉冲的频率为139赫兹，电压为8～10V，刺激时间不超过1秒，用温度约为－2～2℃范围内的容器收集蝎毒液，过滤，收集纯净蝎毒液。该方法还可以包括预处理过程和后续的冷冻、干燥过程。该方法可以快速提取蝎毒，而且蝎毒的提取率高，所得蝎毒提取液或蝎毒冻干粉品质好，其中毒蛋白含量高，生理活性物质基本没有变质，蝎子受损较小，可在短期内重复提毒。

Description

一种蝎毒的提取净化方法

技术领域

本发明涉及蝎毒的提取，尤其涉及一种蝎毒的提取净化方法。

背景技术

蝎子在我国中医学上称为全蝎，是一种珍贵的要用动物。全蝎能穿筋透骨、逐湿除风。全蝎的药用价值很高，用全蝎配成的中药处方多达100多种。全蝎是人参再造丸、大活络丹、七珍丹、保安万灵丹、牵正散等30多种中成药的重要原料，是我国中医临床常用的动物药材。特别是近几年，全蝎在治疗疑难病症上发现有显著的疗效，如全蝎可治疗脉管炎、血栓闭塞，蝎毒可治疗心血管病、各种肿瘤、三叉神经痛等。这些应用使蝎子的需求量急剧增加。除药用外，全蝎还可以制成滋补食品。随着社会物质文明的进步，蝎子作为治疗、保健佳品，倍受人们关注。

经科学验证，蝎子的有效成分是蝎毒，而蝎毒的药用价值远远高于蝎子本身。蝎子中的药用精华主要在于蝎毒，蝎毒的研究日益为各国科学家所重视，在国际市场上价格昂贵。蝎毒具有两大毒素，即神经毒素和细胞毒素，它在神经分子、分子免疫、分子进化、蛋白质的结构与功能等方面有着广阔的应用前景。蝎毒对神经系统、消化系统、心脑血管系统、癌症、皮肤病等多种疾病、以及对人类危害极大的各种病毒均有预防和抑制作用。可以预料蝎毒将会为人类医疗保健事业发挥巨大作用。

目前，已经有很多关于蝎毒提取方法的报道。例如，中国专利号98102385.1的专利公开了一种药用蝎毒素的提取方法，包括：提毒前饲养、检选灭菌、提毒、检验、沉淀过滤和干燥研磨。还例如，中国专利号97119704.0的专利公开了一种晶体蝎毒的提取方法，所提取蝎毒在整个提取、去杂、干燥及封装的过程中，始终在临界温度0℃条件下进行，有效地保留了蝎毒酶的活性，蝎毒毒蛋白质不会受到破坏，毒力强，可直接用于制药，用途广泛。还例如，中国专利号01106166.9的专利公开了一种获取无毒有效蝎毒的生产工艺，其包括：①采集蝎毒(SV)；②加蒸馏水后，分离，取上清液；③加热上清液，加热温度为100摄氏度，加热时间至少为2.5小时，加热方式为煮沸，即将盛装上清液的容器置于沸水中，武火煮沸，制度无毒SV水提液；④将上述无毒SV水提液与药材辅料制成片剂或胶囊。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蝎毒的提取净化方法，使用该方法可以提取更大量的蝎毒。

本发明提供了一种蝎毒的提取净化方法，该方法包括：将洁净蝎子在高于30℃的温度下在无菌环境中，用电脉冲刺激使蝎子排毒，其中电脉冲的频率为139赫兹，电压为8～10V，刺激时间不超过1秒，用温度约为-2～2℃范围内的容器收集蝎毒液，过滤，收集纯净蝎毒液。

上述蝎毒的提取净化方法中，提取蝎毒时的环境温度一般高于30℃，优选在30～30℃范围内，更优选在30～35℃范围内，最优选在约35℃。在该温度范围内，尤其是在约35℃时，蝎子排毒液的量较大，而且所排出蝎毒液的质量较高。

上述蝎毒的提取净化方法中，用电脉冲进行刺激的时间一般不超过1秒，更优选不超过0.5秒，这样可以减少对蝎子的伤害，使其能更频繁的排毒，从而整体上提高蝎毒产量。

上述蝎毒的提取净化方法中，所述过滤可以使用减压(负压)过滤，这样能提高过滤速度，降低蝎毒液暴露在空气中的时间，从而防止蝎毒毒蛋白变质。所用过滤网的孔径优选为约180～220目，更优选约为200目。如果孔径低于180目，则仍有杂质通过而成为蝎毒液中的杂质，如果孔径大于220目，则过滤速度太慢。

本发明吸毒的提取净化方法，在蝎子更易于排毒的高温环境中，使用了高频脉冲对蝎子进行较短时间的刺激，蝎子排毒快、排毒量大，而且对被电刺激排毒的蝎子伤害较小，蝎子经合理喂养恢复后可在短周期内重复进行排毒。

本发明蝎毒的提取净化方法还可以包括对要进行提取蝎毒的蝎子进行的预处理过程，该预处理过程可以包括：将蝎子用约35℃的温水喷琳清洗，去除泥沙等，然后用约35℃的5wt％的生理盐水进行喷琳消毒、灭菌；然后将洗净、消毒后的蝎子干燥，如将其置于干燥海绵上并且其上使用棉布进行披覆而使蝎子自然干燥。整个预处理过程中优选环境温度高于30℃，更优选在30～39℃范围内，还更优选在约30～35℃范围内，最优选在约35℃。

经过上述预处理过程，要进行提毒的蝎子被充分清洗、消毒和干燥，从而蝎子本身外表是洁净的，因此在提毒过程中，所提取的蝎毒液不会被蝎子身体所携带的泥沙、细菌或水份等污染，从而在极大程度上保证所提取的蝎毒液的纯净度。

本发明蝎毒的提取净化方法还可以包括将过滤所得的纯净蝎毒液冷冻(例如，在低于-24℃的温度下进行冷冻)、干燥(例如，在约0℃真空干燥)的过程，由此，可以将蝎毒液制成冻干粉，从而提高蝎毒的保质期，并提高蝎毒的可保藏性。

本发明提供的方法可以快速提取蝎毒，而且蝎毒的提取率高，所得蝎毒提取液或蝎毒冻干粉品质好，其中毒蛋白含量高，生理活性物质基本没有变质。

具体实施方式

以下通过具体实施例来进一步描述本发明，本发明的特点和优点将随着以下描述而变得更清楚。但这些实施例仅是范例性的，用于解释说明本发明，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不违背本发明精神和范围的情况下，对本发明的细节进行任何修改或等价替代方案都落入本发明的保护范围内。

实施例1

1)选择2600条个体大、色泽好、体力强、运动快的良种蝎子；

2)将这2600条蝎子单独隔离饲养一周，期间只喂养一次；

3)在约35℃的环境温度下，将这些选好的蝎子用约35℃的温水喷琳清洗，除去蝎子体上的尘土等，而后用约35的5％食盐水喷琳消毒、杀菌，然后将洁净的蝎子放在垫有干燥海绵的盆中，蝎子体上盖有干棉布，蝎体自然干燥；

4)在约35℃的环境中，用139Hz的电脉冲刺激蝎子尾部1秒使其排毒，用置于0℃冰浴环境中的容器收集蝎毒液；

5)每小时将在冰浴环境中收集的蝎毒液仍在此环境下在容器中沉淀约10分钟，然后用清洁注射器抽取上层毒液并将其使用200目的减压过滤器进行过滤(减压0.5公斤)，滤除杂质，收集得到3g滤液；

6)将上述滤液在-24℃冷冻2小时，然后在0℃真空干燥3小时，得到1g蝎毒冻干粉，将其装于棕色广口瓶中，用蜡密封。

该蝎毒冻干粉的保质期：-30℃密封保持，6年内不变质；在密封避光条件下常温保藏，2年不变质。

其中，提毒后的蝎子立即喂食。6-8月份，每只蝎子可每隔10天提毒一次，而不伤害蝎子。

比较实施例2

根据现有技术，专利号98102385.1所公开的方法，将3300只与实施例1相同的蝎子进行提毒，共得到1g蝎毒冻干粉。在6-8月份，每只蝎子可每隔20～30天提毒一次，而不伤害蝎子。

从实施例和比较实施例2可以看出，使用本发明方法每次可提取的蝎毒比现有技术至少高15％，而且提取频率为现有技术的2～3倍，从而对于确定量的蝎子而言，使用本发明方法提取的蝎毒量远远高于使用现有技术所提取的蝎毒量。

试验例1

将实施例1的蝎毒冻干粉于制备后第三天、比较实施例2的蝎毒冻干粉于制备后第三天送到卫生部上海生物制品研究所进行检测，结果如下表1所示：

              表1  实施例1和比较实施例2蝎毒冻干粉检测结果

检测项目	生物毒性	蛋白质含量	酶活性
				方法	小白鼠腹腔注射半数致死量(在24小时内为微克/20g)	凯氏方法(％)	采用TOLKSDORF法透明质酸酶活力测定(TRU/mg)
实施例1	40.12±8.10	65.22	47
				比较实施例2	39.18±7.78	64.51	46

从上表内容可知，本发明所得蝎毒冻干粉，相较现有技术所得的蝎毒冻干粉而言，其毒性更强、蛋白质含量更高、酶活性更高，说明其品质更好。

Claims (7)

1、一种蝎毒的提取净化方法，该方法包括：将洁净蝎子在高于30℃的温度下在无菌环境中，用电脉冲刺激使蝎子排毒，其中电脉冲的频率为139赫兹，电压为8～10V，刺激时间不超过1秒，用温度约为-2～2℃范围内的容器收集蝎毒液，过滤，收集纯净蝎毒液。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环境温度在30～30℃范围内，优选在30～35℃范围内，最优选为约35℃。

3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述刺激时间不超过0.5秒。

4、根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述过滤为减压过滤，过滤网的孔径为180～220目，更优选为200目。

5、根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，该方法还包括对要进行提取蝎毒的蝎子进行的预处理过程，该预处理过程包括：将蝎子用约35℃的温水喷琳清洗，去除泥沙等，然后用约35℃的5wt％的生理盐水进行喷琳消毒、灭菌；然后将洗净、消毒后的蝎子干燥，如将其置于干燥海绵上并且其上使用棉布进行披覆而使蝎子自然干燥。

6、根据权利要求5所述的方法，其特征在于，预处理过程中环境温度高于30℃，更优选在30～39℃范围内，还更优选在约30～35℃范围内，最优选在约35℃。

7、根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，该方法还括将过滤所得的纯净蝎毒液冷冻、干燥的过程。