CN101983633B - 一种刺梨多糖的电离辐射防护新用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，提供了一种刺梨多糖的电离辐射防护新用途。通过水提醇沉的方法，制备刺梨多糖，经过细胞及动物的电离辐射防护实验，证明：刺梨多糖在小于1000μg/mL浓度范围内对V79细胞无毒性；在12.5-200μg/mL对⁶⁰C_oγ射线导致V79细胞活力丧失呈剂量依赖的抑制作用；预防性给予50、100mg/kg可剂量依赖的提高⁶⁰C_oγ射线8Gy照射昆明小鼠的活存率，说明刺梨多糖具有电离辐射防护的药用活性。为开发新的口服途径给药的电离辐射防护药物奠定了坚实的基础。

Description

一种刺梨多糖的电离辐射防护新用途

技术领域

本发明涉及中药有效部位刺梨多糖在电离辐射防护中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

恶性肿瘤患者是一类接触射线的特殊人群，目前放射线疗法仍然是治疗肿瘤的重要手段，据报道，我国约有70％恶性肿瘤患者需要放射线治疗。另外，现实环境中人们受到电离辐射的机会非常多，如天然高辐射地区生活的居民、经常接触射线的医务工作者、宇航人员受到的空间辐射、核电站核泄漏事故等。长期过量的电离辐射将导致机体产生一系列损伤，包括氧化应激损伤、造血系统的功能异常、免疫功能障碍及细胞DNA链断裂、基因突变、染色体重组、细胞转化和细胞死亡等。因此，研究电离辐射损伤防治手段，寻找行之有效的防治药物，已引起人们的普遍关注。

对于电离辐射防护剂的研究始于20世纪早期，目前，国际上已经发现了许多对电离辐射具有防治作用的化学药物和生物制剂，主要药物有巯基类、维生素类、氨基酸类和抗氧化类。随着研究的深入，人们发现其中的很多药物对健康细胞的毒害也较大，并可能诱发其他病变。人们期待开发出疗效显著、毒副作用小的抗电离辐射药物，于是人们开始重视从天然产物中寻找。愈来愈多的药用植物已经被证实具有明显的电离辐射防护作用，现在已发现的天然药物抗电离辐射成分主要有多糖类、黄酮类物质、多酚类、皂苷类、生物碱、肽类化合物。刺梨(Rosa roxburghii Tratt.)，为蔷薇科植物缥丝花或单瓣缥丝花的果实，始载于《本草纲目遗拾》，产于中国，现代研究表明其含有刺梨多糖、刺梨黄酮、Vc、SOD等活性成分。Janse van Rensburg报道刺梨提取物的氧化应激的保护作用表现在抗氧化能力的提高，体内谷胱甘肽氧化还原状态的改变(Master thesis of Research Repository North-WestUniversity，South Africa，2003)；杨江涛等报道刺梨多糖可以剂量依赖性地提高衰老小鼠体内抗氧化能力[营养学报，2008，30(4)：407-409]；路筱涛报道刺梨多糖能够显著提高小鼠抗疲劳、耐缺氧、耐高温及耐低温的能力，提高小鼠的免疫能力[广州中医药大学学报，2002，19(2)：141-142]。电离辐射使组织和细胞中产生大量活性氧(ROS)，通过直接和间接作用损伤生物大分子(如DNA，蛋白质，脂类等)，引起细胞死亡和机体功能丧失，刺梨多糖具有抗氧化作用，可以通过清除自由基发挥电离辐射防护作用。本发明提供了刺梨多糖的电离辐射防护新用途，现有技术未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供刺梨多糖预防及治疗电离辐射损伤的新用途。

本发明通过细胞、动物水平对刺梨多糖的抗电离辐射活性进行反复验证，实验结果表明刺梨多糖可以抑制⁶⁰C₀γ射线照射导致的V79细胞活力丧失，并能提高⁶⁰C₀γ射线8Gy一次全身照射昆明种小鼠的活存率，从而完成了本发明。

本发明中所述刺梨多糖为从植物中提取的有效部位，经测定多糖纯度大于90％。

刺梨多糖可与药学上可接受的载体按本领域已知方法制备成各种药物组合物，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂等各种固体、液体制剂等；或和其他中药有效成分组合制成各种不同的剂型，通过不同的给药途径用于预防及治疗电离辐射损伤。

本发明的优点：

1.发现了刺梨多糖新的医疗用途。

2.刺梨多糖作为刺梨的有效部位，天然存在于植物果实中，来源广，原料易得，制备工艺简单，得率高，成本低，药用前景广阔。

3.本发明将成为高效低毒抗电离辐射药物的有益补充。

附图说明

图1刺梨多糖对V79细胞的细胞毒性

图2不同浓度的刺梨多糖对⁶⁰COγ射线5Gy照射的V79细胞存活率的影响

图3刺梨多糖对⁶⁰C0γ射线5Gy照射的V79细胞凋亡率的影响

图4刺梨多糖对⁶⁰C0γ射线8Gy照射的昆明小鼠30天存活率的影响

具体实施方式

下面结合实施案例对本发明作进一步的说明：

[实施例一]刺梨多糖对V79细胞的细胞毒性检测

细胞特征：中国仓鼠肺成纤维细胞V79，贴壁生长，倍增时间12-14小时。

1.培养条件

细胞培养于DMEM培养液(含10％FBS，100U/mL青霉素和100U/mL链霉素)，37℃、5％CO₂培养箱，2-3天更换培养液，推荐细胞培养密度1-2×10⁵/mL。

2.药物准备

将刺梨多糖用DMEM培养液溶解，超声助溶，配置储存浓度10mg/ml母液备用。

3.毒性检测

取对数生长期V79细胞(1×10⁵个/mL)接种于96孔培养板，100μL/孔，每孔药物100μL，使药物终浓度为2000、1000、500、100、50、25、12.5μg/mL(简称药物组)，每浓度6孔，另设空白对照组细胞悬液。于药物作用48h后每孔中加入CCK-8溶液10μL，继续培养4h，于多功能酶标仪490nm处测定各孔吸光值。细胞存活率％＝A实验组/A正常组×100％；同时在倒置显微镜下每日观察细胞形态。结果，药物组细胞形态与对照组细胞形态没有明显的变化，数据用spss 16.0进行统计分析，与正常组相比：#，P＜0.05。表明，刺梨多糖在最高浓度1mg/mL以下无明显细胞毒性。(见附图1)

[实施例二]刺梨多糖对⁶⁰C₀γ射线导致的V79细胞活力丧失的保护作用

1.不同浓度药物对V79细胞的电离辐射防护作用

取对数生长期V79细胞(1×10⁵个/mL)接种于96孔培养板，100μL/孔，每孔药物100μL，使药物终浓度为400、200、100、50、25、12.5μg/mL，每浓度6孔，另设空白对照组细胞悬液、辐照组细胞悬液。于药物作用24h后5Gy辐照，照后24h于每孔中加入CCK-8溶液10μL，继续培养4h，于多功能酶标仪490nm处测定各孔吸光值。与辐照组相比：#，P＜0.05；##，P＜0.01。结果表明，刺梨多糖在12.5-200μg/mL对⁶⁰COγ射线5Gy照射的V79细胞活力丧失呈剂量依赖的保护作用，对V79细胞电离辐射防护的最优浓度为200μg/mL。

(见附图2)

2.Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡

取对数生长期V79细胞(1×10⁶个/mL)接种于6孔培养板，根据实验筛选的结果采用200μg/mL的刺梨多糖处理细胞，于药物作用24h后5Gy辐照，照后24h分别收集正常组、辐照组和药物组细胞，离心1000rpm，10min，弃上清，用预冷的PBS洗涤2次后悬浮在200μL Binding Buffer中，加入10μL Annexin V-FITC，轻轻摇匀，室温避光反应15min，加入300μL Binding Buffer和5μL PI，然后样品用流式细胞仪进行分析。结果表明，正常组、辐照组、药物组的细胞凋亡率分别为5.21％、38.94％、8.36％，刺梨多糖具有明显降低电离辐射引起的细胞凋亡率的作用。(左下限为正常细胞，右下限为凋亡早期，右上限为凋亡中晚期，左上限为坏死区)。(见附图3)

[实施例三]刺梨多糖对⁶⁰C₀γ射线8Gy一次全身照射昆明种小鼠存活率的影响

动物分组、给药及照射：

将雄性昆明种小鼠适应环境后根据需要分为正常组、照射组、阳性药组和药物组，每组10只。正常组和照射组灌胃给予蒸馏水，药物组照前灌胃给予相应药物，连续6天，阳性药组照前24h灌胃给予“523”一次，剂量5mg/kg，给药后全身一次性照射，剂量为8Gy，照后连续观察30天。结果表明，刺梨多糖100mg/kg给予小鼠，30天存活率可达到90％，动物实验再次表明刺梨多糖的较强的电离辐射防护作用。(见表1，附图4)

表1刺梨多糖对⁶⁰C₀γ射线8Gy照射的昆明

小鼠30天存活率和存活时间的影响

与辐照组比较：*，P＜0.01

Claims (1)

1.200μg/mL的刺梨多糖在制备抗⁶⁰Co γ射线5Gy照射的V79细胞活力丧失的药物中的应用。

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