CN105232623A - 一种青钱柳提取物在制备胃癌药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种青钱柳提取物在制备胃癌药物中的应用，通过对青钱柳叶进行水提、萃取、膜透析、以及纯化，得到高含量的活性青钱柳提取物。本发明采用青钱柳叶为原料，通过对青钱柳的有效成分进行提取，并将该有效成分用于制备治疗胃癌的药物，不仅提高青钱柳叶的利用率，而且通过对体外多种人胃肿瘤细胞及体内肿瘤动物模型的抗癌实验研究，发现青钱柳提取物对体内外肿瘤细胞具有较好的抑制作用，对于胃癌的防治有着非常显著的效果。
Description
技术领域
本发明涉及中药应用技术领域，具体是一种青钱柳提取物在制备胃癌药物中的应用。
背景技术
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率居各类肿瘤的首位。中国的胃癌发病率以西北最高，东北、内蒙古、华东及沿海次之，中南及西南最低。每年约有17万人死于胃癌，几乎接近全部恶性肿瘤死亡人数的1/4，且每年还有2万多新生病人。胃癌严重威胁着人类的身心健康，给患者(家庭)、社会和国家带来沉重的负担。
胃癌可发生于任何年龄，但以40-60岁多见，男多于女约为2∶1。其发病原因与多种因素，如生活习惯、饮食种类、环境因素、遗传素质、精神因素等有关，也与慢性胃炎、胃息肉、胃黏膜异形增生和肠上皮化生、手术后残胃以及长期幽门螺杆菌(HP)感染等有关。
胃癌可发生于胃的任何部位，但多见于胃窦部，尤其是胃小弯侧。根据癌组织浸润深度分为早期胃癌和进展期胃癌(中、晚期胃癌)。胃癌早期症状常不明显，如上腹部不适、隐痛、暖气、泛酸、食欲减退、轻度贫血等部分类似胃十二指肠溃疡或慢性胃炎症状。随着病情的进展，胃部症状渐转明显出现上腹部疼痛、食欲不振、消瘦、体重减轻和贫血等。后期常有癌肿转移、出现腹部肿块、左锁骨上淋巴结肿大、黑便、腹水及严重营养不良等。
目前，治疗癌症的常用方法有手术、放疗和药物治疗等。而药物治疗在癌症的治疗中占有越来越主要的地位。肿瘤的化疗可直接杀伤肿瘤细胞，但毒副反应严重，其中骨髓抑制是最主要的剂量限制因素。
鉴于上述原因，人们把目光转向天然抗肿瘤药物的研发上。使用天然药物治疗癌症已经有很长的历史了。据报道超过3000种植物可用于治疗癌症。现今临床使用的抗癌药物中超过60％来源于天然，包括植物、海洋生物、微生物。在众多抗肿瘤药中，天然植物类抗肿瘤药所占的比重最大，占据了27.0％的份额。
青钱柳，系胡桃科，属特有单种属植物，高大阔叶乔木，为我国所特有，属三类濒危树种，集用材、绿化、保健、药用于一身。其树皮、叶具有清热消肿、止痛的功能，可用于治疗顽癣。其嫩叶揉炒做茶，因味甜且具生津止渴，清热解暑，降血糖，降血压和延年益寿的作用。近十多年来研究表明青钱柳含氨基酸、有机酸、黄酮及其糖昔类、三菇、多糖、微量元素等70多种活性成分。药理研究显示其具有明显的降血糖、降血脂、降血压、消除自由基抗氧化、抗菌等方面的活性作用。
目前市场上治疗胃癌的药物种类繁多，西药副作用大，现有的中药效果并不太显著。而青钱柳对胃癌的影响目前尚未见有文献和专利报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种青钱柳提取物在制备胃癌药物中的应用，治疗效果明显，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种青钱柳提取物在制备胃癌药物中的应用，所述青钱柳提取物的制备方法如下：
(1)以青钱柳叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质量比为1∶6～8，在80～120℃下加压提取2～4次，压力控制在8～10个大气压，每次提取2～3h，将提取液合并得到提取液A；
(2)将提取液A在8～20倍乙醇浸泡回流3～5次，过滤浓缩，冷冻干燥得到提取物C；
(3)取上述提取物C溶于适量水中，加入正丁醇，搅拌后低温静置分层，上层水相重复操作3～4次后，用截留分子量为8000～12000的透析膜透析1～2天，取出透析袋内液体，过滤，减压浓缩后，冷冻干燥得到提取物D；
(4)将上述提取物D用阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，得到青钱柳提取物。
作为本发明进一步的方案：所述青钱柳叶为新叶、老叶或落叶。
一种所述的青钱柳提取物作为活性成分在制药学上接受附加剂的药物组合物在制备治疗胃癌药物中的应用。
作为本发明进一步的方案：所述治疗胃癌药物制成固体制剂或液体制剂，所述固体制剂为颗粒剂、片剂、滴丸剂、粉针剂或胶囊，液体制剂为口服液。
作为本发明再进一步的方案：所述固体制剂中青钱柳提取物的质量含量为12～16％，液体制剂中青钱柳提取物的质量含量为8～12％。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用青钱柳叶为原料，通过对青钱柳的有效成分进行提取，并将该有效成分用于制备治疗胃癌的药物，不仅提高青钱柳叶的利用率，而且通过对体外多种人胃肿瘤细胞及体内肿瘤动物模型的抗癌实验研究，发现青钱柳提取物对体内外肿瘤细胞具有较好的抑制作用，对于胃癌的防治有着非常显著的效果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1青钱柳提取物的制备
(1)以青钱柳新叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质量比为1∶6，在100℃下加压提取4次，压力控制在10个大气压，每次提取43h，将提取液合并得到提取液A；
(2)将提取液A在10倍乙醇浸泡回流5次，过滤浓缩，冷冻干燥得到提取物C；
(3)取上述提取物C溶于适量水中，加入正丁醇，搅拌后低温静置分层，上层水相重复操作4次后，用截留分子量为10000的透析膜透析2天，取出透析袋内液体，过滤，减压浓缩后，冷冻干燥得到提取物D；
(4)将上述提取物D用阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，得到青钱柳提取物。
实施例2青钱柳提取物的制备
(1)以青钱柳老叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质量比为1∶7，在100℃下加压提取3次，压力控制在10个大气压，每次提取3h，将提取液合并得到提取液A；
(2)将提取液A在14倍乙醇浸泡回流4次，过滤浓缩，冷冻干燥得到提取物C；
(3)取上述提取物C溶于适量水中，加入正丁醇，搅拌后低温静置分层，上层水相重复操作4次后，用截留分子量为10000的透析膜透析2天，取出透析袋内液体，过滤，减压浓缩后，冷冻干燥得到提取物D；
(4)将上述提取物D用阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，得到青钱柳提取物。
实施例3青钱柳提取物的制备
(1)以青钱柳落叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质量比为1∶8，在100℃下加压提取4次，压力控制在10个大气压，每次提取3h，将提取液合并得到提取液A；
(2)将提取液A在18倍乙醇浸泡回流4次，过滤浓缩，冷冻干燥得到提取物C；
(3)取上述提取物C溶于适量水中，加入正丁醇，搅拌后低温静置分层，上层水相重复操作4次后，用截留分子量为10000的透析膜透析2天，取出透析袋内液体，过滤，减压浓缩后，冷冻干燥得到提取物D；
(4)将上述提取物D用阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，得到青钱柳提取物。
下面通过试验例用于进一步说明本发明。
试验例1：青钱柳提取物在体外抑制人胃癌细胞生长
使用5种人的恶性胃肿瘤(SGC7901，MNK45，BGC8223，HCG27，GC9811)细胞系，采用MTT法测定了青钱柳提取物体外抗癌活性，测定浓度范围为0-500mg/ml，处理时间为72h，结果见表1。
表1青钱柳提取物对5种人肿瘤细胞IC50(μg/ml)(M±SE)
由表1可见，青钱柳提取物在体外可抑制人胃癌细胞生长，而且不同的细胞系之间对青钱柳提取物敏感性明显不同。
试验例2：青钱柳提取物联合5-FU在体外抑制人胃癌细胞生长
使用5种人恶性胃肿瘤(SGC7901，MNK45，BGC8223，HCG27，GC9811)细胞系，采用MTT法测定了青钱柳提取物单独应用及与5-FU联合应用的体外抗癌活性，处理时间为72h，结果见表2。
表25-FU联合青钱柳提取物对5种人肿瘤细胞IC50(μmol/L)(M±SE)
由表2可见，联合用药后，青钱柳提取物能够明显降低5-FU在不同的细胞系的工C50值。
试验例3：青钱柳提取物抑制B(a)P诱导的小鼠胃前癌的发生
实验动物，健康昆明种小鼠120只，6周龄，体重20-22g，雄性；所有动物均在同样环境下饮水、摄食、保持自然光照；温度25℃，湿度60-70％。
实验共分6组：溶剂对照组；B(a)P荷瘤对照组(ig仅给予B(a)P)；5mg/kg青钱柳提取物组；2.5mg/kg青钱柳提取物+B(a)P组；5mg/kg青钱柳提取物+B(a)P组；10mg/kg青钱柳提取物+B(a)P组；小鼠按体重随机共分成6组，每组20只，分别于灌胃给予B(a)P，隔日1次，连续给予B(a)P2周。之后分别饮食给予不同剂量青钱柳提取物(mg/kg体重)或溶剂对照连续给药36周。给青钱柳提取物结束次日，将动物称体重后脱臼处死，肿瘤病理学分析，进行统计处理，计算抑瘤率。青钱柳提取物对B(a)P诱导的小鼠前胃肿瘤抑制作用的结果见表3。统计学处理方法采用组间“t”检验。
表3青钱柳提取物对B(a)P诱导的小鼠胃前肿瘤抑制作用的结果
由表3可见，青钱柳提取物能够显著降低B(a)P诱导的小鼠胃前癌的发生率。
试验例4：青钱柳提取物抑制人胃癌细胞BGC823异植小鼠胃肿瘤的发生
4周龄BALE/C(nu/nu)裸鼠，由中国生物药品鉴定所提供，鼠龄4周，雌雄兼用，其实验和饲养均在无菌条件下的超净层流架中进行，灭菌水和饲料供动物自由摄入，BGC823(人胃癌细胞系)，常规传代，收集体外培养的对数生长期的BGC823细胞，调节细胞数为2×107cells/ml，每只裸鼠取0.2ml细胞悬液1P注入右大腿背侧皮下，当皮下移植瘤长至直径为1cm左右时，小鼠按体重随机分租，共分成3组，分别隔日IP(10mg/kg，20mg/kg体重)瘤内注射给予青钱柳提取物，连续给药4周。4周后，小鼠称体重后脱臼处死，取出观察小鼠肿瘤体积变化情况，青钱柳提取物对人胃癌细胞BGC823异植小鼠胃肿瘤的抑制作用见表4。
表4青钱柳提取物抑制人胃癌细胞BGC823异植小鼠胃肿瘤的发生
由表4可见，青钱柳提取物对人胃癌细胞BGC823异植小鼠前胃肿瘤的发展有明显的抑制作用。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
Claims (5)
1.一种青钱柳提取物在制备胃癌药物中的应用，其特征在于，所述青钱柳提取物的制备方法如下：
(1)以青钱柳叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质量比为1∶6～8，在80～120℃下加压提取2～4次，压力控制在8～10个大气压，每次提取2～3h，将提取液合并得到提取液A；
(2)将提取液A在8～20倍乙醇浸泡回流3～5次，过滤浓缩，冷冻干燥得到提取物C；
(3)取上述提取物C溶于适量水中，加入正丁醇，搅拌后低温静置分层，上层水相重复操作3～4次后，用截留分子量为8000～12000的透析膜透析1～2天，取出透析袋内液体，过滤，减压浓缩后，冷冻干燥得到提取物D；
(4)将上述提取物D用阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，得到青钱柳提取物。
2.根据权利要求1所述的青钱柳提取物在制备胃癌药物中的应用，其特征在于，所述青钱柳叶为新叶、老叶或落叶。
3.一种如根据权利要求1所述的青钱柳提取物作为活性成分在制药学上接受附加剂的药物组合物在制备治疗胃癌药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述治疗胃癌药物制成固体制剂或液体制剂，所述固体制剂为颗粒剂、片剂、滴丸剂、粉针剂或胶囊，液体制剂为口服液。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述固体制剂中青钱柳提取物的质量含量为12～16％，液体制剂中青钱柳提取物的质量含量为8～12％。
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