CN105395600A - 一种青钱柳提取物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用 - Google Patents

一种青钱柳提取物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种青钱柳提取物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，通过对青钱柳叶进行水提、萃取、膜透析、柱纯化以及比例调节，得到高含量的活性青钱柳提取物。本发明采用青钱柳叶为原料，通过对青钱柳的有效成分进行提取，并将该有效成分用于制备治疗心脑血管疾病的药物，不仅提高青钱柳叶的利用率，而且治疗效果明显。

Description

一种青钱柳提取物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用
技术领域
本发明涉及中药应用技术领域，具体是一种青钱柳提取物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。
背景技术
青钱柳又名青钱李、山麻柳、摇钱树、甜茶树、山化树、一串钱等，系胡桃科青钱柳属特有单种属植物，高大阔叶乔木，为我国所特有，属三类濒危树种，集用材、绿化、保健、药用于一身。因其树形似柳，果实圆形似铜钱，色青而下垂，故名“青钱柳”。
青钱柳产于长江以南至华南、西南、台湾等省区海拔420-2500m的山区，主要分布在安徽、江西、江苏、浙江、台湾、湖北、湖南、四川、贵州、广西、广东和云南等地。据《中国中药资源志要》记载，其树皮、叶具有清热消肿、止痛的功能，可用于治疗顽癣。民间用其嫩叶揉炒做茶，因味甜且具生津止渴，清热解暑，降血糖，降血压和延年益寿的作用，又称为甜茶、神茶等。
近十多年来研究表明青钱柳含氨基酸、有机酸、黄酮及其糖昔类、三菇、多糖、微量元素等70多种活性成分。药理研究显示其具有明显的降血糖、降血脂、降血压、消除自由基抗氧化、抗菌等方面的活性作用。
心脑血管意外是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，即使应用最先进、完善的治疗手段，仍可有50％以上的脑血管意外幸存者生活不能完全自理。全世界每年死于心脑血管疾病的人数高达1500万人，居各种死因首位。心脑血管疾病已成为人类死亡病因最高的头号杀手，也是人们健康的“无声凶煞”。心脑血管疾病主要原因就是血管壁平滑肌细胞非正常代谢造成的，血管组织和人体的其他组织在一定周期内完成新陈代谢的过程，但是由于新的细胞组织不能正常的形成，使血管壁本身存在“缺陷”因此就容易产生炎症血管收缩不畅，就像是一条破烂不堪的旧管道，随时都有阻塞或破裂的可能。目前市场上改善心脑血管或治疗颈肩腰椎痛的药物种类繁多，西药副作用大，中药效果并不太显著。而青钱柳对心脑血管疾病的影响目前尚未见有文献和专利报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种青钱柳提取物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，治疗效果明显，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种青钱柳提取物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，所述青钱柳提取物的制备方法如下：
(1)以青钱柳叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质量比为1∶6～12，在80～120℃下加压提取2～4次，压力控制在10～12个大气压，每次提取2～3h，将提取液合并得到提取液A和药渣B；
(2)将提取液A在8～20倍有机溶剂中浸泡回流3～5次，过滤，待有机溶剂挥发干后溶于适量水中，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥得到提取物C；将药渣B也在有机溶剂中浸泡回流6～8次，过滤，待有机溶剂挥发干后加入乙醇，充分搅拌溶解，再次过滤，冷冻干燥得到提取物D；
(3)取上述提取物C溶于适量水中，加入体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液，搅拌后低温静置分层，上层水相重复操作4～7次后，用截留分子量为8000～12000的透析膜透析1～2天，取出透析袋内液体，减压浓缩后加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥得到提取物E；
(4)将提取物D进行步骤(3)的操作，得到提取物F，透析膜的截留分子量为8000～10000，透析的时间为2～3天；
(5)将上述提取物E和提取物F分别用凝胶柱或阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，再将纯化后的提取物E和提取物F按质量比2～4∶1的质量比混合，得到青钱柳提取物。
作为本发明进一步的方案：所述步骤(2)中的有机溶剂为丙酮、正己烷、乙醚或石油醚。
作为本发明进一步的方案：所述青钱柳叶为新叶、老叶或落叶。
一种以青钱柳提取物作为活性成分在制药学上接受附加剂的药物组合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。
作为本发明进一步的方案：所述治疗心脑血管疾病药物制成固体制剂或液体制剂，所述固体制剂为颗粒剂、片剂、滴丸剂、粉针剂或胶囊，液体制剂为口服液。
作为本发明再进一步的方案：所述固体制剂中青钱柳提取物的质量含量为10～25％，液体制剂中青钱柳提取物的质量含量为8～16％。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用青钱柳叶为原料，通过对青钱柳的有效成分进行提取，并将该有效成分用于制备治疗心脑血管疾病的药物，不仅提高青钱柳叶的利用率，而且治疗效果明显。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
所述青钱柳提取物的制备方法如下：
(1)以青钱柳新叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质量比为1∶6，在120℃下加压提取2次，压力控制在10个大气压，每次提取3h，将提取液合并得到提取液A和药渣B；
(2)将提取液A在8倍丙酮中浸泡回流5次，过滤，待丙酮挥发干后溶于适量水中，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥得到提取物C；将药渣B也在丙酮中浸泡回流6次，过滤，待丙酮挥发干后加入乙醇，充分搅拌溶解，再次过滤，冷冻干燥得到提取物D；
(3)取上述提取物C溶于适量水中，加入体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液，搅拌后低温静置分层，上层水相重复操作4次后，用截留分子量为8000～12000的透析膜透析2天，取出透析袋内液体，减压浓缩后加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥得到提取物E；
(4)将提取物D进行步骤(3)的操作，得到提取物F，透析膜的截留分子量为8000～10000，透析的时间为3天；
(5)将上述提取物E和提取物F分别用凝胶柱或阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，再将纯化后的提取物E和提取物F按质量比2∶1的质量比混合，得到青钱柳提取物。
实施例2青钱柳提取物的制备
(1)以青钱柳老叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质量比为1∶9，在100℃下加压提取3次，压力控制在11个大气压，每次提取2.5h，将提取液合并得到提取液A和药渣B；
(2)将提取液A在14倍正己烷中浸泡回流4次，过滤，待正己烷挥发干后溶于适量水中，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥得到提取物C；将药渣B也在正己烷中浸泡回流7次，过滤，待正己烷挥发干后加入乙醇，充分搅拌溶解，再次过滤，冷冻干燥得到提取物D；
(3)取上述提取物C溶于适量水中，加入体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液，搅拌后低温静置分层，上层水相重复操作5次后，用截留分子量为8000～12000的透析膜透析2天，取出透析袋内液体，减压浓缩后加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥得到提取物E；
(4)将提取物D进行步骤(3)的操作，得到提取物F，透析膜的截留分子量为8000～10000，透析的时间为3天；
(5)将上述提取物E和提取物F分别用凝胶柱或阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，再将纯化后的提取物E和提取物F按质量比3∶1的质量比混合，得到青钱柳提取物。
实施例3
所述青钱柳提取物的制备方法如下：
(1)以青钱柳落叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质量比为1∶12，在80℃下加压提取4次，压力控制在12个大气压，每次提取2h，将提取液合并得到提取液A和药渣B；
(2)将提取液A在20倍乙醚中浸泡回流5次，过滤，待乙醚挥发干后溶于适量水中，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥得到提取物C；将药渣B也在乙醚中浸泡回流8次，过滤，待乙醚挥发干后加入乙醇，充分搅拌溶解，再次过滤，冷冻干燥得到提取物D；
(3)取上述提取物C溶于适量水中，加入体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液，搅拌后低温静置分层，上层水相重复操作7次后，用截留分子量为8000～12000的透析膜透析2天，取出透析袋内液体，减压浓缩后加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥得到提取物E；
(4)将提取物D进行步骤(3)的操作，得到提取物F，透析膜的截留分子量为8000～10000，透析的时间为3天；
(5)将上述提取物E和提取物F分别用凝胶柱或阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，再将纯化后的提取物E和提取物F按质量比4∶1的质量比混合，得到青钱柳提取物。
下面通过试验例用于进一步说明本发明。
实验例一：动物药效学试验(心脑血管)
实验材料：
动物：昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半；wistar大鼠，体重200-230g，雌雄各半，均购自安徽医科大学动物中心。
试剂药物：本发明组给予本发明药物(按照实施例2方法制备)
1、对小鼠缺氧存活时间的影响
取小鼠20只，随机分为2组，(1)对照组：iv10ml/kg生理盐水；(2)本发明组15mg/kg；30min后将小鼠放入500ml磨口瓶中(含3g钠石灰)，涂凡士林后。观察小鼠死亡时间，对正常小鼠缺氧存活时间的影响结果见表1。
表1
组别(mg/kg) 动物数(只) 存活时间(分)
对照组 10 44.14±9.60
本发明组 10 90.50±15.02
注：本发明组与对照组相比P＜0.05。
2、对乌头碱诱发的大鼠心律失常的影响
健康雌性Wistar大鼠20只，随机分为2组：(1)模型组：iv给予等容积生理盐水、(2)本发明组：给予本发明药物(按照实施例2方法制备)15mg/kg；30min后用20％乌拉坦(5mg/kg)腹腔注射麻醉，将动物仰位固定在鼠台上，并与BL-420生物机能实验系统相连，描记心电图。大鼠心电图稳定后，正常对照组舌下静脉注射生理盐水，本发明组舌下静脉注射0.04％乌头碱1ml/kg(40μg/kg)，5s内注完，观测室性早搏(VP)的发生时间，并统计室性心动过速(VT)、室颤(VF)的发生率和窦性节律恢复率。对乌头碱诱发的大鼠心律失常的影响结果见表2。
表2
注；本发明组与模型组相比P＜0.05。
3、对氯仿诱发小鼠室颤的影响
取小鼠20只，随机分为2组，(1)模型组：iv给予等容积生理盐水、(2)本发明组：给予本发明药物(按照实施例1方法制备)15mg/kg；给药后2-3分钟内，将小鼠逐个放入含有5ml氯仿棉球的导致500ml烧杯内，每换一只小鼠需加入0.5ml氯仿，让小鼠吸入氯仿直至停止呼吸。立即取出并与BL-420生物机能实验系统相连，描记心电图。计算室颤发生率，对氯仿诱发小鼠室颤的影响结果见表3。
表3
组别(mg/kg) 动物数(只) 室颤动物数(只) 室颤率/％
对照组 10 9 90
本发明组 10 1 10
注：本发明组与模型组相比P＜0.05。
4、对垂体后叶素诱发大鼠心肌缺血的保护作用
健康Wistar大鼠30只，随机分为3组：(1)对照组：iv给予等容积生理盐水，(2)模型组：iv给予等容积生理盐水，(3)本发明组：给予本发明药物(按照实施例1方法制备)15mg/kg；实验前一日进行大鼠对垂体后叶素敏感性筛选实验。方法是：大鼠舌下静脉注射垂体后叶素1U/kg，观察心电图变化情况，选取对垂体后叶素敏感大鼠用于实验(T波明显抬高，ST段抬高超过0.1mV)。将筛选获得的敏感大鼠用于对照组、模型组和本发明组，24h后开始实验。各组均以1ml/100g灌胃，1小时后用20％乌拉坦(5ml/kg)腹腔注射麻醉，将动物仰位固定在鼠台上，并与BL-420生物机能实验系统相连，描记心电图。正常对照组舌下静脉注射生理盐水，其余两组舌下静脉注射垂体后叶素1U/kg后，分别于即刻、1min后观察心电图变化。以T波和ST段改变为指标，判断心肌缺血程度和药物作用。60min，后腹主动脉取血，离心分离血清，测定血清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。对心肌缺血大鼠LDH、MDA、SOD的影响结果见表4。
表4
组别 N LDH(U/L) MDA(n mol/ml) SOD(U/ml)
对照组 13 8652.20±1467.65 2.86±0.69 95.63±9.52
模型组 13 10545.25±1287.34 4.95±1.49 77.68±8.61
本发明组 14 9067.46±1583.48 2.81±0.84 92.36±9.57
注：本发明组与对照组相比P＜0.05；本发明组与模型组比有差别P＜0.05。
结论：本发明组合物对实验大鼠的实验结论，本发明组合物对心律失常、室颤、心肌缺血等有显著疗效，同时还大大的提高了小鼠的存活率。
实验例二、临床试验(颈肩腰椎痛)
1、临床观察
本发明口服液(按照实施例2方法制备)对治疗颈肩腰腿痛患者100例，其中男性50例，女性50例。
2、药物选择
治疗组选本发明药物的口服液，二个疗程(5天一疗程)，15ml/瓶，一日1次，每次1瓶。
3、诊断标准
①持续性疼痛，疼痛成了生活的一部分；
②活动稍多甚至弯腰拾物、打喷嚏时便发病，疼痛难忍，功能受限；
③阴雨天或受风着凉可引起疼痛的复发或加重；
4、疗效标准
参照国家中医药管理局1994年实施的《中医病诊断疗效标准》拟定如下：
临床痊愈：中医临床症状、体征消失或基本消失；
显效：中医临床症状、体征明显改变；
有效：中医临床症状、体征均有好转；
无效：中医临床症状、体征均无明显改善；
5、治疗结果
治疗患病例100例，治愈75例，显效19例，有效5例，无效1例，有效率为99％。
实验例三：典型病例
病例1：兰某，男，60岁，腰椎间盘突出，椎管狭窄，腰椎间盘突出L4-5\L5-S1、椎管狭窄，因右下肢疼痛、右足麻木数月，走不能走远，走一段距离(10多米)后下肢出现麻木、疼痛、无力、加重而无法行走，间断休息(下蹲或弯腰一会)后症状减轻或消失，继续行走后又反复出现这种临床症状，牵引按摩、外贴风湿膏治疗无效，口服药物不见好转。来诊时查腰L4、5椎棘突旁右侧压疼明显并向右下肢放射，直腿抬高30°，腰椎活动受限，右足肌力减弱，膝腿反射良好。通过饮用本发明口服液治疗一个疗程后(每个疗程5天)，疼痛减轻，继续治疗一个疗程后，上述症状完全消失，痊愈。随访1年无复发。
病例2：蔡某，女，65岁，患颈椎病(神经根型)2月余，颈椎疼痛，放射至左侧肩臂膀疼痛难忍、左手大拇指麻木，夜不能眠、害怕晚上睡觉。通过服用本发明胶囊剂治疗，三天后疼痛基本减轻，继续饮用7天后全愈，半年后查未复发。
病例3：邓某，男，55岁，肩周炎，患者3年前偶受风寒，右肩患上了肩周炎，昼夜疼痛难忍，肌肉无力、活动障碍，刀割样持久性疼痛，疼痛呈游走性，时而是手掌，时而是肩膀。通过服用本发明片剂治疗一个疗程后(每个疗程5天)，疼痛明显减轻。继续治疗一个疗程，疼痛症状完全消除，肩部和手臂活动自如，彻底治愈。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims (6)

1.一种青钱柳提取物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，其特征在于，所述青钱柳提取物的制备方法如下：
(1)以青钱柳叶为原料，经清洗、烘干、粉碎过筛后置于提取罐中，加入蒸馏水，料液质量比为1∶6～12，在80～120℃下加压提取2～4次，压力控制在10～12个大气压，每次提取2～3h，将提取液合并得到提取液A和药渣B；
(2)将提取液A在8～20倍有机溶剂中浸泡回流3～5次，过滤，待有机溶剂挥发干后溶于适量水中，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥得到提取物C；将药渣B也在有机溶剂中浸泡回流6～8次，过滤，待有机溶剂挥发干后加入乙醇，充分搅拌溶解，再次过滤，冷冻干燥得到提取物D；
(3)取上述提取物C溶于适量水中，加入体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液，搅拌后低温静置分层，上层水相重复操作4～7次后，用截留分子量为8000～12000的透析膜透析1～2天，取出透析袋内液体，减压浓缩后加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥得到提取物E；
(4)将提取物D进行步骤(3)的操作，得到提取物F，透析膜的截留分子量为8000～10000，透析的时间为2～3天；
(5)将上述提取物E和提取物F分别用凝胶柱或阴离子交换色谱柱纯化，再用硫酸苯酚法跟踪收集活性主峰合并，加入乙醇，冰浴放置，过滤，冷冻干燥，再将纯化后的提取物E和提取物F按质量比2～4∶1的质量比混合，得到青钱柳提取物。
2.根据权利要求1所述的青钱柳提取物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，其特征在于，所述步骤(2)中的有机溶剂为丙酮、正己烷、乙醚或石油醚。
3.根据权利要求1所述的青钱柳提取物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，其特征在于，所述青钱柳叶为新叶、老叶或落叶。
4.一种如根据权利要求1所述的青钱柳提取物作为活性成分在制药学上接受附加剂的药物组合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述治疗心脑血管疾病药物制成固体制剂或液体制剂，所述固体制剂为颗粒剂、片剂、滴丸剂、粉针剂或胶囊，液体制剂为口服液。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述固体制剂中青钱柳提取物的质量含量为10～25％，液体制剂中青钱柳提取物的质量含量为8～16％。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109580865A (zh) * 2018-12-24 2019-04-05 江西轩豪中药饮片有限公司 一种青钱柳的质量控制方法
WO2021196505A1 (zh) * 2020-03-30 2021-10-07 四川大学华西医院 青钱柳叶黄酮提取物在制备抗菌药物和/或抗菌剂中的用途
CN114099376A (zh) * 2020-08-25 2022-03-01 四川大学华西医院 青钱柳叶或其提取物在制备抗菌的食品、日用品或化妆品中的用途

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