CN103156923A - 啤酒花有效部位用于制备预防和改善抑郁症及其临床症状药物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种啤酒花(Humunus Lupulus L)有效部位制备方法,特别是涉及了以啤酒花有效部位用于制备预防和改善抑郁症及该疾病引起的各种临床症状的药物制剂。本发明中啤酒花有效部位的活性成分主要由α酸、β酸和黄酮组成,动物实验表明啤酒花有效部位能够降低小鼠自主运动强度,增加小鼠前肢拨动转轮旋转的圈数、减少小鼠不动时间和拮抗利血平引起的小鼠体温下降。说明啤酒花有效部位能用于预防和改善抑郁症及该疾病引起的各种临床症状。
Description
技术领域
本发明涉及天然植物提取及应用,具体是涉及啤酒花(Humunus Lupulus L)有效部位用于制备抗抑郁症及其临床症状的药物的应用。
背景技术
抑郁症是一种常见的精神疾病,主要表现为情绪低落,兴趣减低,悲观,思维迟缓,缺乏主动性,自责自罪,饮食、睡眠差等,严重者可出现自杀念头和行为。抑郁症发病率非常高,几乎每7个成年人中就有1个抑郁症患者。抑郁症目前已成为给人类造成严重负担的第二位重要疾病。在我国,抑郁症发病率约为3%~5%,生活在大城市的白领们在高压力高竞争的环境下已成为此病的高发人群。因此,从身体健康及生活习惯角度出发,一种可以长期服用而且安全性高的用于预防及改善抑郁症的药物的研制为人们所期待。
啤酒花(hops),别名忽布、蛇麻花、香蛇麻花、酒花、野酒花,为桑科(Moraceae)葎草属植物啤酒花(Humulus lupulus L.)的雌花序,原产欧洲,我国新疆有野生,东北、华北、山东等地有栽培。人类利用啤酒花的历史已有2000多年,最初是作为助消化的药品、香料和观赏植物。公元8世纪初,德国开始将啤酒花用于啤酒生产,能赋予啤酒特有的香味、爽快的苦味,并能增加啤酒的防腐能力和非生物稳定性。清代末年,啤酒花被引入我国,开始种植栽培。
啤酒花亦是一种传统药用植物,性苦、平,具有健胃消食、抗菌消炎、安神利尿、抗结核等药用功效,用于治疗消化不良、浮肿、小便淋痛、失眠、痢疾、结核、麻风等。《中国药典》1977年版上记载酒花的乙醇浸膏用于治疗肺结核病和麻风病等症。啤酒花的化学成分主要有树脂、挥发油、黄酮及鞣质等。
近年来,对啤酒花提取物或其中含有的化合物药理作用研究的报道多集中在抗菌、抗肿瘤、抗氧化、镇静和雌激素样作用等方面,临床应用主要在结核病、麻风病和内分泌紊乱方面,但以α酸、β酸和黄酮为活性成分的啤酒花有效部位对预防和改善抑郁症及其临床症状的作用尚未报道。
发明内容
本发明的一方面提供了一种从啤酒花中提取制备啤酒花有效部位的方法和以啤酒花有 效部位为原料的药物在预防、改善抑郁症及其临床症状方面的新用途。
本发明的另一方面涉及包含啤酒花有效部位的药物制剂。
本发明的又一个方面涉及包含啤酒花有效部位的药物制剂的制备方法。
为解决本发明的技术问题,本发明采用如下技术方案:
一种从啤酒花中提取啤酒花有效部位的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)将干燥啤酒花粉碎,加入提取溶剂进行回流提取,合并提取液,过滤,减压浓缩至无有机溶剂味后,再加入乙醇,静置过夜,取上清液,浓缩,得无有机溶剂味的浓缩液;
(2)将上述浓缩液,经大孔树脂色谱柱吸附,用溶剂进行梯度洗脱,收集合并含有啤酒花有效部位的洗脱液,减压浓缩,干燥,即得啤酒花有效部位。
在一个优选的实施方式中,步骤(1)中使用的提取溶剂选自水、乙醇、甲醇、丙酮或它们的混合物;优选为水、乙醇、甲醇或它们的混合物,提取溶剂的浓度为优选50%至100%;提取溶剂的用量为啤酒花重量的6至12倍;提取温度为60℃至提取溶剂的沸点温度;提取次数为2至4次;每次的提取时间为1至4小时;加入乙醇,使得乙醇浓度优选40%至80%。
在另一个优选的实施方式中,步骤(2)中所述大孔吸附树脂类型选自D101、AB-8、HP-20、HPD-100、X-5、DA-201、DM-301或NKA-8等;优选D101、AB-8或HP-20大孔吸附树脂;洗脱液选自不同浓度的醇与水的混合溶液或酮与水的混合溶液;优选为不同浓度的乙醇-水或甲醇-水溶液;大孔树脂色谱柱采用梯度洗脱,先用10~30%乙醇-水或10~30%甲醇-水洗脱除去杂质后,再用95%乙醇-水或95%甲醇-水洗脱,即得啤酒花有效部位;得到啤酒花有效部位的干燥方式选自减压真空干燥、冷冻干燥、喷雾干燥。
本发明所述的啤酒花有效部位包括α酸、β酸和黄酮,其中α酸主要由化合物葎草酮(humulone)、类葎草酮(cohumulone)、聚葎草酮(adhumulone)组成,β酸主要由化合物蛇麻酮(lupulone)、类蛇麻酮(colupulone)、聚蛇麻酮(adlupulone)组成,黄酮主要由化合物黄腐酚(xanthohumol)和脱甲基黄腐酚(desmethylxanthohumol)组成。
本发明还涉及以啤酒花有效部位为原料药制备的药物制剂,所述制剂包括啤酒花有效部位以及药学上可接受的载体和/或辅料,所述制剂可以为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、微丸、注射剂等药学上可以接受的药物制剂形式。
所述包含啤酒花有效部位的药物制剂可以利用本领域公知的方法制备得到。
本发明还以小鼠自主活动实验,强迫游泳实验,悬尾实验以及利血平诱导实验,评价啤酒花有效部位对大鼠抑郁模型行为学的影响。结果显示,啤酒花有效部位具有较明显的镇静作用,且对各种抑郁行为表现出统计学上有意义的改善效果,并能够拮抗利血平引起的体温 降低。基于上述结果,确认本发明所述的以α酸、β酸和黄酮为有效成分的啤酒花有效部位的新用途的成立。
根据上述实验可以证明本发明提供啤酒花有效部位是一种安全性高,源于天然,具有预防和改善抑郁症及其临床症状效果的植物提取物,可以用于制备可以长期服用、安全无毒副作用的药物。
附图说明
图1为啤酒花有效部位的HPLC图,其中测定方法为:检测系统:Aglient1260;色谱柱:Phenomenex Luna C18(4.6×250mm,5μm);流动相:0.1%甲酸水(A)-甲醇(B),洗脱条件为0-3min(A∶B=55∶45);3-32min(A∶B=55∶45→A∶B=5∶95);32-37min(A∶B=5∶95);37-45min(A∶B=5∶95→A∶B=55∶45);45-47min(A∶B=55∶45);进样量:10μL;流速:1.0mL/min;检测波长:370nm;柱温:25℃。
图2是啤酒花有效部位对正常小鼠自主活动的影响结果图。
具体实施方式
下面的实施例用于进一步说明本发明,但这并不意味着对本发明的保护范围的任何限制。
实施例1啤酒花有效部位的制备
将干燥啤酒花粉碎,加入6倍的50%乙醇回流提取4次,每次提取的时间依次为4,3,2,1小时,合并提取液,过滤,减压浓缩至无醇味,加95%乙醇,边加边搅拌,至乙醇浓度为50%,静置过夜,取上清液,减压浓缩至无乙醇味,上D101型大孔树脂色谱柱吸附,分别用20%、95%乙醇洗脱,收集95%乙醇洗脱液,减压回收有机溶剂,减压干燥,即得啤酒花有效部位。
实施例2啤酒花有效部位的制备
将干燥啤酒花粉碎,加入10倍的80%乙醇回流提取3次,每次提取的时间依次为4,3,2小时,合并提取液,过滤,减压浓缩至无醇味,加95%乙醇,边加边搅拌,至乙醇浓度为70%,静置过夜,取上清液,减压浓缩至无乙醇味,上AB-8型大孔树脂色谱柱吸附,分别用10%、95%乙醇洗脱,收集95%乙醇洗脱液,减压回收有机溶剂,喷雾干燥,即得啤酒花有 效部位。
实施例3啤酒花有效部位的制备
将干燥啤酒花粉碎,加入12倍的95%甲醇回流提取3次,每次提取的时间依次为4,3,2小时,合并提取液,过滤,减压浓缩至无醇味,加95%乙醇,边加边搅拌,至乙醇浓度为80%,静置过夜,取上清液,减压浓缩至无乙醇味,上HP-20型大孔树脂色谱柱吸附,分别用30%、95%甲醇洗脱,收集95%甲醇洗脱液,减压浓缩回收有机溶剂,冷冻干燥,即得啤酒花有效部位。
实施例1至3所得的啤酒花有效部位用于下列实验,验证其作用。
实施例4啤酒花有效部位对正常小鼠自主活动的影响
本实验采用7周龄雄性昆明种小白鼠,由北京维通利华实验动物技术有限公司购入。饲养温度23±2℃,照明时间12小时/日(7:00~19:00开灯)。经饲养一周后进行实验。将小鼠按体重随机分为4组,每组10只,分别为空白对照组(蒸馏水)、啤酒花低剂量组(50mg/kg)、啤酒花中剂量组(100mg/kg)和啤酒花高剂量组(200mg/kg)。受试药物均于实验前按10ml/kg体重溶解于蒸馏水中,灌胃给药。小鼠给药后立即放入小鼠自主活动记录仪中,每间隔20min记录10min小鼠自主水平活动次数(Locomotor counts)。共记录5次即持续时间2h。实验在安静,室温25℃房间内,于9:00至17:00之间进行。实验结果如附图2所示。
实验结果显示,啤酒花各剂量组具有降低小鼠自发运动强度的作用,特别是高剂量组对小鼠自主运动强度的降低作用具有统计学意义。说明啤酒花有效部位具有较明显的镇静安神作用。
实施例5啤酒花有效部位对小鼠强迫游泳实验行为学的影响
应激负荷实验使用动物为约为22g雄性昆明种小鼠,由北京维通利华实验动物技术有限公司购入。饲养温度23±2℃,照明时间12小时/日(7:00~19:00开灯)。经饲养一周后进行实验。本实验分三天进行,第一、二天为训练日。即将游泳箱中水加至滑轮中央,约18cm高度处,此水位能保证小鼠游泳时不会借助滑轮爬出箱外,也不会因够不到滑轮而过分疲劳。水温保持在22~23℃。训练时将小鼠面向滑轮轻轻放入水中,使其游泳10min,取出擦干放回饲养笼中,连续训练两天。训练过程中剔除掉过度兴奋或抑制的小鼠。实验日将小鼠按体 重随机分为4组,分别为正常组、啤酒花低剂量组(50mg/kg)、啤酒花中剂量组(100mg/kg)、啤酒花高剂量组(200mg/kg),每组12只小鼠。受试药物均于实验前按10ml/kg溶解于蒸馏水中,灌胃给药。小鼠给药20min后面向滑轮轻轻放入游泳箱中,使其游泳6min,采用计算机记录后5min小鼠用前肢拨动滑轮的圈数。实验在安静,室温25℃房间内,于9:00至17:00之间进行。
实验结果显示,在强迫游泳引起小鼠绝望行为实验中(表1),灌胃给与100mg/kg和200mg/kg啤酒花有效部位均能够显著增加小鼠前肢拨动转轮旋转的圈数,且两个剂量下对旋转圈数的增加作用与空白对照组均具有显著的统计学差异(P<0.05)。
表1啤酒花有效部位对小鼠强迫游泳实验的影响
与对照组比较,*P<0.05
实施例6啤酒花有效部位对小鼠悬尾实验行为学的影响
小鼠随机分为4组,分组同上,灌胃给药1h后,将小鼠尾部距末端约2cm处用胶布粘在线上,并连接于肌肉张力换能器上,使其成倒挂状态,换能器连接到台式平衡记录仪,放置于一箱内,其头距箱底约5cm。悬挂时间为6min,累计后4min内的不动时间。
实验结果显示,在悬尾实验中(表2),灌胃给与100mg/kg和200mg/kg啤酒花有效部位均能够显著减少小鼠不动时间,且在两个剂量下对不动时间的降低作用与空白对照组比均具有显著的统计学差异(P<0.05)。
表2啤酒花有效部位对小鼠悬尾实验行为学的影响
与对照组比较,*P<0.05
实施例7利血平拮抗实验
小鼠随机分为5组,每组12只,分别为对照组、利血平组(2mg/kg)、利血平+丙咪嗪 组(10mg/kg)、利血平+啤酒花(50mg/kg)、利血平+啤酒花(100mg/kg)、利血平+啤酒花(200mg/kg)。首先对给药组小鼠皮下注射2mg/kg利血平,对照组小鼠皮下注射等体积生理盐水,18h后将数字测温仪探头插入动物肛门内2cm处测量每只小鼠肛温,再分别腹腔注射丙咪嗪及灌胃给予5g/L羧甲基纤维素钠、啤酒花各剂量,1h后(即腹腔注射丙咪嗪30min后),再次测量每只小鼠肛温,并连续观察3h,每30min测量1次肛温。实验结果见表3。
表3利血平拮抗实验中应用利血平后0~150min各组小鼠体温的比较
实验结果显示,啤酒花有效组分能够在不同程度上拮抗利血平引起的小鼠体温下降,表明药物对中枢去甲肾上腺素重摄取及/或对去甲肾上腺素传递有影响,具有较显著的抗抑郁活性。
实施例8以啤酒花有效部位为原料药的片剂
取啤酒花有效部位与微晶纤维素、滑石粉、维生素C混合均匀,加无水乙醇制成软材,过24目筛,制成颗粒,干燥,加入硬脂酸镁,混匀,压片。
实施例9以啤酒花有效部位为原料药的胶囊剂
取啤酒花有效部位与淀粉、微晶纤维素、焦亚硫酸氢钠混合均匀,加无水乙醇制成软材,过24目筛,制成颗粒,干燥,加入硬脂酸镁,混匀,装入胶囊。
实施例10以啤酒花有效部位为原料药的颗粒剂
取啤酒花有效部位与淀粉、亚硫酸氢钠混合均匀,加无水乙醇制成软材,过24目筛,制成颗粒,干燥,加入硬脂酸镁,混匀,装袋。
实施例11以啤酒花有效部位为原料药的口服液剂
上述组分混匀后,采用口服液常规制备方法,分装即可。
实施例12以啤酒花有效部位为原料药的滴丸剂
取啤酒花有效部位、维生素C与聚乙二醇6000混合,融溶,滴入低温二甲基硅油中,选丸,除去二甲基硅油,即得。
实施例13以啤酒花有效部位为原料药的微丸剂
取啤酒花有效部位、蔗糖、亚硫酸氢钠、羟丙甲基纤维素与滑石粉混合,采用微丸常规制备方法,即得。
实施例14以啤酒花有效部位为原料药的注射剂
上述组分混匀后,采用注射剂常规制备方法,即可得1000支。
Claims (8)
1.啤酒花有效部位用于制备预防和改善抑郁症及该疾病引起的各种临床症状药物的用途,所述的啤酒花有效部位的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)将干燥啤酒花粉碎,加入提取溶剂进行回流提取,合并提取液,过滤,减压浓缩至无有机溶剂味后,再加入乙醇,静置过夜,取上清液,浓缩,得无有机溶剂味的浓缩液;
(2)将上述浓缩液,经大孔树脂色谱柱吸附,用溶剂进行梯度洗脱,收集合并含有啤酒花有效部位的洗脱液,减压浓缩,干燥,即得啤酒花有效部位。
2.根据权利要求1所述的方法,其中步骤(1)中使用的提取溶剂选自水、乙醇、甲醇、丙酮或它们的混合物;提取溶剂的用量为啤酒花重量的6至12倍;提取温度为60℃至提取溶剂的沸点温度;提取次数为2至4次;每次的提取时间为1至4小时。
3.根据权利要求1所述的方法,其中步骤(2)中所述大孔吸附树脂类型为D101、AB-8、HP-20、HPD-100、X-5、DA-201、DM-301或NKA-8;洗脱液选自醇与水的混合溶液或酮与水的混合溶液;使用的干燥方式为减压真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
4.根据权利要求1至3任意一项所述的方法,其中得到的啤酒花有效部位,其特征在于:所述的啤酒花有效部位含有活性成分α酸、β酸和黄酮。
5.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的啤酒花有效部位含有活性成分α酸,主要由化合物葎草酮(humulone)、类葎草酮(cohumulone)、聚葎草酮(adhumulone)组成,每克啤酒花有效部位中该3种成份含量之和不少于100毫克。
6.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的啤酒花有效部位含有活性成分β酸,主要由化合物蛇麻酮(lupulone)、类蛇麻酮(colupulone)、聚蛇麻酮(adlupulone)组成,每克啤酒花有效部位中该3种成份含量之和不少于100毫克。
7.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的啤酒花有效部位含有活性成分黄酮,主要由化合物黄腐酚(xanthohumol)和脱甲基黄腐酚(desmethylxanthohumol)组成,每克啤酒花有效部位中该2种成份含量之和不少于200毫克。
8.权利要求1所述的啤酒花有效部位在制备预防及改善抑郁症及其临床症状的药物中的应用:所述的药物包括有效治疗剂量的啤酒花有效部位,以及药学上可接受的载体包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、微丸、注射剂等。
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