CN102028780B - 刺梨黄酮在制备电离辐射防护药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域,提供了一种刺梨黄酮的电离辐射防护新用途。通过水提醇沉的方法,制备刺梨黄酮,经过细胞及动物的电离辐射防护实验,证明:刺梨黄酮在3.75-120μg/mL浓度范围内对AHH-1细胞无毒性;在1.875-30μg/mL对60Coγ射线导致AHH-1细胞活力丧失呈剂量依赖的抑制作用;预防性给予30、60mg/kg可剂量依赖的提高60Coγ射线8Gy照射昆明小鼠的活存率,说明刺梨黄酮具有电离辐射防护的药用活性。为开发新的口服途径给药的电离辐射防护药物奠定了坚实的基础。
Description
技术领域
本发明涉及刺梨黄酮在电离辐射防护中的应用,属于医药技术领域。
背景技术
自1942年Hale报道辐射防护剂以来,国内外已开展一系列抗辐射药物的研究,我国科技工作者亦做了大量的工作。目前,国际上已经发现了许多对辐射具有防治作用的化学药物和生物制剂。但某些化学药物在防治辐射的同时,也对机体产生了一系列毒副作用。由美国Walter Reed陆军研究所开发的氨磷汀(商品名am ifo stine)是目前唯一的一个经美国FD A认可的辐射防护药物,被用于缓解头颈癌症病人辐射治疗过程中的口腔干燥症状。最近几年,造血生长因子和细胞因子也被用于辐射伤害的治疗,但它们在毒性、作用时效、用药的方便程度等方面都不太理想。人们期待开发出疗效显著、毒副作用小的抗辐射药物,因此开始重视从天然产物寻找抗辐射药。已发现的天然药物抗电离辐射成分主要为多糖类、黄酮类物质、多酚类、皂苷类、生物碱、肽类化合物。
刺梨(Ro sa roxburgh iiTratt.),为蔷薇科植物缥丝花或单瓣缥丝花的果实,始载于《本草纲目遗拾》,产于中国,现代研究表明其含有刺梨黄酮、刺梨多糖、Vc、SOD等活性成分。据报道,刺梨黄酮能很好地清除各种活性氧,并能显著抑制红细胞氧化溶血以及肝组织MDA的产生[天然产物研究与开发,2005,17(4)396-400];刺梨黄酮能非常显著地降低造型后小鼠的血清葡萄糖和甘油三酯,升高血清胰岛素,胰脏超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性分别非常显著和显著上升,MDA明显降低[营养学报,2004,26(6):474-476]。电离辐射使组织和细胞中产生大量活性氧(ROS),通过直接和间接作用损伤生物大分子(如DNA,蛋白质,脂类等),引起细胞死亡和机体功能丧失,刺梨黄酮具有抗氧化作用,可以通过清除自由基发挥电离辐射防护作用。本发明提供了刺梨黄酮的电离辐射防护新用途,现有技术未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供刺梨黄酮预防及治疗电离辐射损伤的新用途。
本发明通过水提醇沉的方法从刺梨中提取分离黄酮,通过细胞、动物水平对刺梨黄酮的抗电离辐射活性进行反复验证,实验结果表明刺梨黄酮可以抑制60CO γ射线照射导致的AHH-1细胞活力丧失,并能提高60CO γ射线8G y一次全身照射昆明种小鼠的活存率,从而完成了本发明。
本发明中所述刺梨黄酮为从植物刺梨中提取的有效部位,经测定黄酮纯度大于80%。
刺梨黄酮可与药学上可接受的载体按本领域已知方法制备成各种药物组合物,如片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂等各种固体、液体制剂等;或和其他中药有效成分组合制成各种不同的剂型,通过不同的给药途径用于预防及治疗电离辐射损伤。
本发明的优点:
1.发现了刺梨黄酮新的医疗用途。
2.刺梨黄酮作为刺梨的有效部位,天然存在于植物果实中,来源广,原料易得,制备工艺简单,得率高,成本低,药用前景广阔。
3.本发明将成为高效低毒抗电离辐射药物的有益补充。
附图说明
图1刺梨黄酮对AHH-1细胞的细胞毒性
图2不同浓度的刺梨黄酮对60CO γ射线4Gy照射的AHH-1细胞存活率的影响
图3刺梨黄酮对60C0 γ射线8Gy照射的昆明小鼠30天存活率的影响
图4刺梨黄酮对60C0 γ射线6Gy照射的昆明小鼠SOD含量的影响
具体实施方式
下面结合实施案例对本发明作进一步的说明:
[实施例一]刺梨黄酮对AHH-1细胞的细胞毒性检测
细胞特征:人淋巴母细胞AHH-1,悬浮成簇生长,倍增时间16-19小时。
培养条件:细胞培养于RPM I1640培养液(含10%FB S,100U/m L青霉素和100U/mL链霉素),37℃、5%CO2培养箱,2-3天更换培养液,推荐细胞培养密度1-2×105/m L。药物准备:将刺梨黄酮用DMEM培养液溶解,超声助溶,配置储存浓度10mg/ml母液备用。
毒性检测:取对数生长期AHH-1细胞(1×105个/mL)接种于96孔培养板,100μL/孔,每孔药物100μL,使终浓度为240、120、60、30、15、7.5、3.75μg/mL(简称药物组),每浓度6孔,另设空白对照组细胞悬液。于药物作用48h后每孔中加入CCK-8溶液10μL,继续培养4h,于多功能酶标仪490nm处测定各孔吸光值。细胞存活率%=实验组/正常组×100%;同时在倒置显微镜下每日观察细胞形态。结果,药物组细胞形态与对照组细胞形态没有明显的变化,数据用spss 16.0进行统计分析,与正常组相比:#,P<0.05。表明,刺梨黄酮在3.75-120μg/mL无明显细胞毒性。(见附图1)
[实施例2]刺梨黄酮对60C0γ射线导致的AHH-1细胞活力丧失的保护作用
取对数生长期AHH-1细胞(1×105个/mL)接种于96孔培养板,100μL/孔,每孔药物100μL,使终浓度为60、30、15、7.5、3.75、1.875μg/mL,每浓度6孔,另设空白对照组细胞悬液、辐照组细胞悬液。于药物作用24h后4Gy辐照,照后24h于每孔中加入CCK-8溶液10μL,继续培养4h,于多功能酶标仪490nm处测定各孔吸光值。与辐照组相比:#,P<0.05;##,P<0.01。结果表明,刺梨黄酮在1.875-30μg/mL对60CO γ射线4Gy照射的AHH-1细胞活力丧失呈剂量依赖的保护作用,对AHH-1细胞电离辐射防护的最优浓度为30μg/mL。(见附图2)
[实施例三]刺梨黄酮对60C0 γ射线8Gy一次全身照射昆明种小鼠存活率的影响
将雄性昆明种种小鼠适应环境后根据需要分为正常组、照射组、阳性药组和用药组,每组10只。正常组和照射组灌胃给予蒸馏水,用药组照前灌胃给予相应药物,连续3天,阳性药组照前24h灌胃给予“E523”一次,剂量5mg/kg,给药后全身一次性照射,剂量为 8Gy,照后连续观察30天。结果表明,刺梨黄酮60mg/kg给予小鼠,30天存活率可达到80%,动物实验再次表明刺梨黄酮的较强的电离辐射防护作用。(见表1,附图3)
表1刺梨黄酮对60C0γ射线8Gy照射的昆明
小鼠30天存活率和存活时间的影响
与辐照组比较:*,P<0.01
[实施例四]超氧化物歧化酶SOD的测定
实验方法按照实施例三,药物组为刺梨黄酮30mg/kg、60mg/kg。照射剂量为6Gy,于照后第10天,取各实验组小鼠的肝脏,冰浴中用匀浆器制各10%的组织匀浆,离心后取上清液进行实验。依照试剂盒说明书用可见光分光光度计测量SOD含量。结果,电离辐射使小鼠肝组织的SOD含量降低341U/mg prot,刺梨黄酮60mg/kg可显著提高电力辐射后小鼠肝组织的SOD含量357U/mg prot。结果表明刺梨黄酮预防和治疗电离辐射损伤途径之一是抗氧化作用。(见表2,附图4)
表2刺梨黄酮对60C0 γ射线6Gy照射昆明小鼠SOD含量的影响
与辐照组比较:*,P<0.01
Claims (1)
1.刺梨黄酮作为唯一活性成分在制备电离辐射防护药物中的应用。
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