CN101011601A - 用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥 - Google Patents

Abstract

本发明涉及骨科组织工程领域领域。目前脊柱肿瘤切除术后一般均用骨水泥进行填充，将骨水泥与抗肿瘤药复合进行局部化疗成为研究的热点，但以何种骨水泥作为载体是较为理想的；以何种方式复合药物较为合适；如何更有效的保护脊髓功能，这些问题尚未得到最佳的解决。本发明的目的在于提供一种用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥，它以微球作为载体与抗肿瘤药物复合得到的载药微球再与磷酸钙骨水泥以一定的重量比例混合，不仅能在植入体内后合理的减少初期“爆发效应”，有利于所载抗肿瘤药物缓慢释放并维持长期的剂量强度，同时也能有利于新生骨长入并替代CPC载体、有利于有远期生存可能的患者的椎体间长期稳定。

Description

用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥

技术领域：

本发明涉及骨科组织工程领域领域，具体涉及一种用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥及其制备方法。

背景技术：

脊柱肿瘤是严重危害人类健康的疾病之一，可分为原发性肿瘤和转移性肿瘤两大类。其中以转移性肿瘤为主，约占70％以上。据统计转移至脊椎的恶性肿瘤仅次于肺和肝脏，居第3位。研究表明约有40％以上死于恶性肿瘤病人发生脊椎转移(参考文献：肖建如主编，脊柱肿瘤外科学，上海科学技术出版社，2005年，第一版)。随着外科治疗观念和技术的进步，外科切除已日益成为脊柱肿瘤治疗的首要手段。然而脊柱肿瘤切除术后的复发率很高。其原因主要为脊柱肿瘤的手术切除，必需面对三个问题：①如何尽可能地彻底切除肿瘤；②如何尽可能地避免重要脏器损伤；③如何充分保存患者神经功能。理论上，“整体切除”即指从肿瘤包膜外，切除肿瘤及其假包膜及其环绕周围的部分正常组织，是最能减少复发的有效的切除方式。但事实上，由于肿瘤的局部侵袭和浸润特性，脊柱肿瘤常与脊柱周围毗邻的重要结构，如硬脊膜、大血管、重要的脏器等产生粘连，而这些脏器是应避免损伤或无法切除的。如肿瘤侵及硬脊膜后，切除脊髓，则必然导致患者瘫痪。因此，临床上行真正意义上的整体切除手术非常困难，多数情况下是行“广泛切除术”，即尽可能充分地切除肿瘤及其包膜。而包膜外的肿瘤侵袭病灶或“微转移”病灶，则成为脊柱肿瘤术后复发的主要原因之一。

由于脊柱肿瘤切除术后一般均用骨水泥进行填充，因此将骨水泥与抗肿瘤药复合进行局部化疗成为研究的热点。研究表明局部化疗具有：①在局部获得相对于全身用药的药物浓度；②减少全身用药达到该浓度所产生的多系统损害；③直接作用于局部肿瘤细胞等优点。

而骨水泥与抗肿瘤药物复合则会涉及以下2个问题即：(1)以何种骨水泥作为载体是较为理想的；(2)以何种方式复合药物较为合适；(3)如何更有效的保护脊髓功能。

既往研究表明聚甲基丙烯酸甲酯(Polymethylmetahcrylate，PMMA)中植入含有氨甲喋呤(MTX)的珠链能对胫骨骨肉瘤局部残留肿瘤细胞有杀灭作用。然而，一方面PMMA固化时产生高热可能损伤脊髓，另一方面PMMA的不可降解性也易引致远期的骨水泥-骨界面的松动。自固化磷酸钙骨水泥(Calcium Phosphate Cement，CPC)是多种磷酸钙盐粉末组成，能在人体环境和温度下自行固化并准确塑形，并最终转化为羟基磷灰石。研究表明CPC具有很好的缓释作用和生物相容性，同时在与内固定相结合的情况下能提供较为可靠的抗负荷的作用。从而成为一种较理想的骨骼填充与缓释的载体。目前CPC与药物复合的研究多集中与抗生素。在抗肿瘤药物研究中，研究表明阿霉素(ADM)顺铂(DDP)与CPC能较好的复合，并缓释(参见文献：林建华等，阿霉素一磷酸钙骨水泥缓释体系的制备及体外药物释放试验，中国骨肿瘤骨病，2003，2(4)：209～211)。但由于CPC是均相基质释放体系，其特点是药物从微孔内通过弥散机制释放，释放速度与药物在CPC内的弥散度有关。因此粉剂直接与CPC复合后，释放初期的“爆发效应”很明显，短期内常释放药物的50％以上。由于化疗药物作用于肿瘤细胞均主要是作用于增殖期，同时与剂量强度密切相关。因此释放初期的“爆发效应”太强，并不利于对于肿瘤细胞的持久杀灭作用，也不利于脊髓功能的保护。

同时，研究表明100～150μm之间的空隙有利于骨细胞长入。虽然，研究表明在CPC制作过程中也可通过致孔剂直接在CPC中实现这一孔隙(参见文献：魏杰等，新型可降解钙磷骨水泥多孔支架研究，无机材料学报，2006，21(4)：958～964)。但孔隙增大却会导致药物释放时更大的初期爆发效应。

以微球为载体进行缓释是药物缓释的另一个重要形式。目前已实现多种类型药物的微球剂型。研究表明将CPC粉与聚乳酸一聚乙醇酸共聚体(PLGA)微球复合，发现PLGA微球在早期可稳定CPC(参见文献：Habraken WJ，et al.Injectable PLGA microsphere/calcium phosphatecements：physical properties and degradation characteristics，J BiomaterSci Polym Ed.2006，17(9)：1057-74.)。

用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥，尚未见报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥，它不仅能在植入体内后合理的减少初期“爆发效应”，有利于所载抗肿瘤药物缓慢释放并维持长期的剂量强度，同时也能有利于新生骨长入并替代CPC载体、利于有远期生存可能的患者的椎体间长期稳定。

本发明结合了上述背景技术的各个方面，提供了一种用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥，它通过微球为第一个载体与抗肿瘤药物复合，然后再将载药微球复合磷酸钙骨水泥。一方面，药物与微球复合的形式使得药物从CPC释放后还有第二次从微球释放的过程，减少了“爆发效应”，有利于药物更为平缓释放和减少对脊髓的冲击性损伤；另一方面其微球有利于早期稳定骨水泥，而微球释放后形成的孔隙又有利于成骨细胞进入，有助于CPC降解后被新骨替代，实现最终的脊柱稳定性。

药物选择：由于临床研究表明每一种化疗药物常常是对于某一种或几种类型的肿瘤具有一定的杀灭作用。同时如CPC中包含较多的药物微球容易影响其强度。因此本研究中药物微球所选择的药物主要是临床证明有效，并能够在较低的浓度就能发挥出较好的抗肿瘤作用的化疗药物，如三氧化二砷(AS₂O₃)、氨甲喋呤(MTX)、阿霉素(ADM)等。

载药微球技术：为了使磷酸钙骨水泥所载药物能够缓慢释放，本发明采用载药微球技术，该技术可参照文献：钟延强等，肝动脉栓塞用顺铂白蛋白微球的研究，药学学报，1995，30：7，543-548。所用载药微球可以是白蛋白、明胶、淀粉、聚酰胺、聚乳酸等。其微球直径控制在50～250μm之间。由于100～150μm之间更有利于骨细胞长入，因此优选粒径集中于100～150μm。

本发明还提供了上述用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥的制备方法，该方法依次包括以下步骤：

A、应用乳化热固化法制备载药微球，该载药微球的直径在50～250μm之间；

B、将载药微球与磷酸钙骨水泥以0.25％～2％∶1的比例混合，调匀，加入一定的固化液，将浆体填入玻璃管内，两头密封，放入恒温37℃、100％湿度环境中，待浆体已完全成形，稳定后，取出。

本发明采用药物蛋白微球与CPC复合与粉剂相比具有以下优点：①药物微球与CPC复合后能使抗肿瘤药物释放浓度更为平缓，有助于发挥化疗药物的局部作用并减少“爆发效应”保护脊髓功能；②本课题所设计的抗肿瘤药物微球直径均控制在50～250μm之间，这种空隙在药物缓释后有利于骨细胞长入，对于有较长生存期的脊柱肿瘤患者有助于CPC的降解和替代，有助于实现椎体间的长期稳定。

附图说明

图1是As₂O₃微球累积缓释百分比与时间的关系

图2是As₂O₃微球累积缓释百分比与时间平方根的关系

图3是As₂O₃微球复合CPC累积缓释百分比与时间的关系

图4是As₂O₃微球复合CPC累积缓释百分比与时间平方根关系

具体实施方式：

下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述：

实施例1：

一、As₂O₃白蛋白微球制备及性能测试

(一)、方法

1、As₂O₃白蛋白微球制备

应用乳化热固化法制备As₂O₃白蛋白微球。将As₂O₃100mg与250mg人血清白蛋白溶于1ml，0.15mol·L^-1NaCl溶液中，混合均匀。25℃，将其加入150r.min^-1搅拌的30ml棉子油(A)中。加毕，继续搅拌5分钟，得初乳。另取棉子油(B)50ml，匀速130r.min^-1搅拌，加热至105℃。将初乳加至匀速搅拌的棉子油(B)中，固化20分钟。冷水浴中搅拌冷却至室温。抽滤分离微球，用200ml无水乙醚洗涤3次。干燥得淡黄色As₂O₃微球。封入安瓿，暗处低温保存。

2、As₂O₃白蛋白微球理化性能测试

(1)As₂O₃微球含量测定(微球消解法)

精确称量As₂O₃微球各300mg，分成3组。每组含As₂O₃微球100mg加入试管中，以0.3％胃蛋白酶溶液50ml(按药典配制)，恒温37℃，消解3小时，待溶液澄明后，加水稀释至200ml。

As₂O₃浓度测定参照前述之原子荧光法。

(2)微球粒径测定：

As₂O₃微球中随机一小部分，分成3组。以扫描电子显微镜(HITCHI公司S-2460)分析。每组在扫描电镜下选取3个视野，摄像。以HPIAs-1000高清晰度彩色病理图文分析系统测量任意100个微球粒径，取其平均值并确定粒径范围。

(3)微球稳定性实验(光照稳定性试验)

精确称量As₂O₃白蛋白微球10mg进行As₂O₃微球含量测定(对照组)。另称量As₂O₃白蛋白微球30mg，分成10mg3组封入安瓿中，置2500 1×不变光下分别照射5d和10d后及37℃避光保存3个月，行As₂O₃的定量检查。含量与对照组相比，计算百分数。每组设3个平行实验。

(二)结果：

As₂O₃微球含量55.22±11.19。经SEM扫描可见微球表面光滑，圆整。经图像分析示本As₂O₃微球粒径集中在56.4～256.7um，平均156±3.56um。As₂O₃微球封入安瓿后经2500 1×不变光照射5d、10d和37℃避光保存3个月仍有98.7％、94.8％和95.5％的药物未分解，说明As₂O₃白蛋白微球对该类条件是稳定的。

二、As₂O₃白蛋白微球复合CPC理化性能测定

(一)方法

1、凝结时间的测定

按质量百分比为0.25％、0.5％、1％、2％将药物粉末与CPC复合物混合，将浆体填入H＝6mm，D＝8mm的玻璃管内(尽量填实)，两头密封，放入100％湿度环境中，以凝结时间测定仪(维卡仪)测定凝结时间。以空白CPC为对照。

2、微球载药骨水泥缓释强度测定

在万能生物力学试验机上进行抗压强度的测定，施加载荷速度为1mm/min，记录标本样条的最大抗压强度和断裂强度。测量其抗压强度，施加载荷速度为1mm/min。每组至少3个平行实验。

(二)结果

随着0.25％～2％As₂O₃白蛋白微球的加入，CPC药物复合骨水泥的强度有下降趋势，但经配对t检验，与对照组并无显著性差异。

随着加入的As₂O₃白蛋白微球的增加，其最大抗压强度有所下降，其中尤以加入2％含量的As₂O₃白蛋白微球为著，但无统计学显著性差异。综上所述，考虑到凝结时间、复合后CPC强度与药物含量三者之间的关系，选择0.5％～2％As₂O₃白蛋白微球与骨水泥复合均可。

三、As₂O₃白蛋白微球复合CPC缓释性能测定

(一)方法

1、As₂O₃白蛋白微球复合CPC体外释放实验

(1)精确称量As₂O₃微球10mg，将载药微球与骨水泥CPC1g以1％比例混合，调匀，加入一定的固化液，将浆体填入H＝6mm，D＝8mm的玻璃管内，两头密封，放入恒温37℃、100％湿度环境中，待浆体已完全成形，稳定后，取出。

取模拟体液500ml(按药典配制)，将载药骨水泥置于其中，置于恒温37℃的摇床内，50r/min。建立体外缓释模型。定时取释放标本4ml，同时补加等量液体。在开始时，每2小时取样1次共计4次，8小时后取样间隔为5小时，取样后即补充等量的模拟体液。设3个平行实验。由于取出的标本量少，故可以认为每次所测浓度与溶液体积之积即为该时间累计缓释量。计算累计缓释百分比。

所取样液进行浓度测定。以原子荧光分光光度计光测量缓释液中As₂O₃浓度。

2、As₂O₃白蛋白微球体外释放实验

以前述所配模拟体液为溶剂。称取As₂O₃微球10mg于透析袋内，内加模拟体液5ml，扎紧端口中，以浸入含495ml模拟体液的盐水瓶中，每2小时取样1次共计4次，8小时后取样间隔为5小时，取样后即补充等量的模拟体液。设3个平行实验。

同上方法计算累计缓释百分比。

以空白微球释放液处理后作空白对照测定吸光度。同时取As₂O₃粉末5.5mg置于透析袋中，于37℃，摇床转速50r/min，作为对比溶出实验。每小时取样。

As₂O₃浓度测量方法同上。

(二)结果

1、As₂O₃微球体外释放特性实验

(1)、As₂O₃微球累计缓释百分比与时间的关系

图1是As₂O₃微球累积缓释百分比与时间的关系(虚线为As₂O₃粉末直接溶出对比)

图2是As₂O₃微球累积缓释百分比与时间平方根的关系

经回归分析得方程：Y＝13.05t1/2-13.07    r＝0.98

Y：As₂O₃微球累积缓释百分比(％)

t1/2：为时间(小时)的平方根

计算得As₂O₃微球50％缓释时间为：23.34小时

2、As₂O₃微球复合CPC累积缓释百分比与时间的关系

图3是As₂O₃微球复合CPC累积缓释百分比与时间的关系

图4是As₂O₃微球复合CPC累积缓释百分比与时间平方根关系

Y＝3.68t1/2-3.99    r＝0.99

Y：As₂O₃微球复合CPC累积缓释百分比

t1/2：为时间(小时)的平方根

计算得As₂O₃微球复合CPC50％缓释时间为：215.21小时

由于As₂O₃微球复合CPC与As203微球所含药物量相同，由此可得As₂O₃微球复合CPC药物缓释时间是直接从As₂O₃微球缓释时间的9.22倍。

四、抗肿瘤药物微球复合CPC对肿瘤细胞的体外抑瘤作用测定

(一)方法

1、材料

人骨肉癌细胞株U-2OS、人肝癌细胞株BEL-7404、人细胞肺癌细胞株SPC-A-1均购自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库。

2、实验步骤

(1)不同浓度下As₂O₃、EPI、MTX对不同系肿瘤细胞的抑制作用比较

骨肉瘤细胞、肺癌细胞、肝癌细胞株的培养与扩增(对照分子克隆实验指南)

(2)As₂O₃微球复合CPC对肿瘤细胞的抑制作用

体外模拟环境的建立及复合CPC缓释试验

精确称量1克CPC粉末，加入As₂O₃微球10mg，药物与CPC以1％比例混合，调匀，加入一定的固化液(1∶3)，将浆体填入H＝6mm，D＝8mm的玻璃管内(尽量填实)，两头密封，放入恒温37℃、100％湿度环境中，待浆体已完全成形，稳定后，取出。同法称量50mgMTX制备CPC复合骨水泥。每组设3个平行实验。

取上述已配制的模拟体液200ml，将载药骨水泥置于其中，置于恒温37℃的摇床内，30转/分。建立体外缓释模型。每天取样1次，取样后即补充等量的模拟体液，每次取样量为40ml。留取第2、5、7天所缓释的药液，送Co60消毒。

(3)肿瘤细胞接种24小时后，进行无血清同步化24小时处理。于每孔中加入上述缓释的药液，每孔设3个重复孔。药物作用24、48小时。无药物但进行同样处理的孔作为对照组。MTT法测量样本吸光度，分别计算肿瘤细胞抑制率。

(二)结果

As₂O₃微球复合CPC对骨肉瘤细胞的抑制作用

表1药物经CPC缓释后对骨肉瘤细胞的抑制作用(24小时)(X％±SD)

	24小时
				As2O3微球CPC	D2	D5	D7
25.6±0.05	48.77±0.05*	39.88±0.06▲

^*P＜0.01，^▲P＜0.05

表2药物经CPC缓释后对骨肉瘤细胞的抑制作用(48小时)(X％±SD)

	48小时
				As2O3微球CPC	D2	D5	D7
47.5±0.05▲	85.10±0.03*	75.11±0.02*

^*P＜0.01，^▲P＜0.05

可以认为As₂O₃自微球复合CPC中缓释后其对肿瘤细胞的抑制作用未受到减弱。

五、抗肿瘤药物微球复合CPC抗肿瘤作用的体内研究

(一)、方法

1、实验动物模型

采用BALB/c-nu/nu裸鼠，均为4周龄，15只，重量平均16.2克(15～17g)。雌雄不限。随机分为A、B、C组。每组5只。肺癌细胞株SPA-A-1细胞培养至将铺满瓶壁时去上清，将细胞悬液稀释为2.2×107个/ml，接种于每只裸鼠颈背部或前臂腋窝处皮下注射细胞悬液0.2ml，继续饲养1周左右裸鼠颈背部或前臂腋窝处出现瘤体。

2、抗肿瘤药物复合CPC植入：精确称量As₂O₃微球5mg，精确称量CPC骨水泥0.5g，加入固化液，用调刀调和，充分混合。填入自制的模具内。100％湿度环境，37℃下干燥。送Co60消毒。制作5个样本。另制备同样大小的单纯CPC样本5个。

裸鼠麻醉后消毒、铺巾单。以剪开瘤体部位皮肤一小口，显露部分瘤体，将已消毒的锥形CPC复合骨水泥嵌入其中。以细丝线缝合皮肤。表面涂以金霉素软膏。A组为As₂O₃微球复合CPC组、B组为植入单纯CPC组，C组仅剪开，缝合后未做其他处理。

(二)、实验结果

1、动物模型的瘤体体积比较

(1)接种瘤细胞的各组裸鼠在接种后6～7天均于颈背部或前臂腋窝处出现肿块，并迅速膨大。10天后肿瘤体积为(112.4±15.5)mm³。

(2)B、C组裸鼠肿瘤呈现恶性持续增长，至15天后肿瘤体积达(520.4±56.7)mm³。部分肿瘤形成溃疡。

(3)A组裸鼠As₂O₃微球复合CPC植入后出现肿瘤明显生长抑制，肿瘤体积减小，肿瘤终体积为肿瘤终体积为(6.8±2.7)mm³。

2、肿瘤病理检查

(1)HE

A组肿瘤切面可见明显大片坏死灶，局部纤维组织增生。D组与C组肿瘤增殖旺盛，肿瘤细胞密集，分化可，核质深染，核仁粗大，可见较多核分裂相，瘤细胞中可见小灶性坏死，可能是肿瘤快速生长后，中央局部缺血所导致。

(2)肿瘤细胞坏死率：

计算肿瘤细胞坏死率为86.10％±4.18。C组肿瘤有部分坏死可能是CPC直接压迫所致，与D组肿瘤坏死率无显著差异。

本实验再次表明As₂O₃微球复合载药CPC在体内环境下对肺癌实体瘤有很好的抑瘤作用。同时其治疗作用是在低浓度就能表现出来的。

六、抗肿瘤药物微球复合CPC对脊髓功能影响的研究

(一)方法

1、动物模型

(1)动物分组

成年雄性新西兰兔75只，体重10～15kg(平均12.8kg)，随机分成A、B、C三大组。

A：3克CPC+30mgAs₂O₃微球(1％)固液比：3∶1

B：3克CPC

C：假手术组，仅作单纯椎板减压

(2)手术方法

纵形切开兔背部皮肤，于T9右侧椎板上开一直径约6mm的“窗”，显露脊髓。术中注意动作准确、轻柔不可触碰脊髓。以电生理仪测MEP，刺激电极置于硬膜外，记录电极置于兔右小腿胫后神经。将CPC样条放于开窗椎板处。以丝线缝于两侧韧带及肌膜上固定。再以细丝线逐层缝合椎板两侧筋膜，包紧固定骨块，冲洗后，缝合皮下、皮肤。金霉素眼药膏涂抹切口。

2、指标观测

(1)、行为学观察

术后每日观察兔子进食情况、大小便情况及是否有烦燥、不安、流泪症状。

(2)、脊髓诱发电位检查

A、B、C三组分别于术中开窗时行诱发电位检测1次。测MEP，电极置于硬膜外(前述)。抽取相应编组于术后第1天、3天、5天、7天及14天行脊髓诱发电位检测。检测后处死动物，行病理学检查。

(3)、病理学检查

兔子经电生理实验后，迅速开胸，左心室插管，迅速灌入冷生理盐水300ml，其后灌入4％多聚甲醛行经心脏固定。完整取出“开窗”区头尾各10mm脊髓，存于4％蔗糖生理盐水(4℃过夜)，病变区以锐利刀片横断，一半存于4℃4％多聚甲醛留待行电镜检查。另一半行冰冻连续冠状切片，片厚15um。

白片行HE及免疫组化染色。免疫组化指标包括NF(Neurofilament神经纤维细丝蛋白)、GFAP(胶质纤维酸性蛋白)、SY(Synaptophysin突触素)。

(二)、结果

本研究采用了在硬膜外放置As₂O₃微球载药骨水泥的方法研究其对脊髓功能的影响。在临床中，如果能将As₂O₃微球复合骨水泥用于转移性肿瘤的椎体成形术中，如椎体后缘没有破坏，骨水泥不会渗漏到硬膜外的话，则在理论上可不需考虑这一问题。但如果存在，椎体后缘破坏，骨水泥可能渗漏到硬膜外，则这是一个不容忽视的问题。

1、诱发电位检测

研究表明，在术后第1天后，As₂O₃微球复合骨水泥(A组)与单纯放置骨水泥组(B组)引起了MEP的波幅下降。假手术组(C组)出现MEP波幅的略升高，但无统计学意义。第2天始，A组、B组、C组波幅逐渐恢复。

2、病理学检查

早期各组均以不同程度的水肿为主(第1天)，至第14天A、B、C组均呈逐渐恢复的表现。电镜检查示各组在第1天均可见到线粒体的轻度水肿。

本研究提示As₂O₃微球复合CPC能被脊髓所耐受。

Claims (6)

1、一种用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥，其特征在于它是以微球作为载体与抗肿瘤药物复合得到的载药微球再与磷酸钙骨水泥混合，其中载药微球的直径在50～250μm之间，载药微球与磷酸钙骨水泥是以0.25％～2％∶1的重量比例混合。

2、根据权利要求1所述的一种用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥，其特征在于其中的抗肿瘤药物是三氧化二砷、氨甲喋呤或阿霉素。

3、根据权利要求1所述的一种用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥，其特征在于其中的微球是白蛋白、明胶、淀粉、聚酰胺或聚乳酸。

4、根据权利要求1所述的一种用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥，其特征在于其中的微球直径是在100～150μm之间。

5、如权利要求1所述的一种用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥的制备方法，其特征在于该方法依次包括以下步骤：

A、应用乳化热固化法制备载药微球，该载药微球的直径在50～250μm之间；

B、将载药微球与磷酸钙骨水泥以0.25％～2％∶1的重量比例混合，调匀，加入一定的固化液，将浆体填入玻璃管内，两头密封，放入恒温37℃、100％湿度环境中，待浆体已完全成形，稳定后，取出。

6、根据权利要求5所述的一种用于脊柱肿瘤术中重建的载药微球复合磷酸钙骨水泥的制备方法，其特征在于其中的抗肿瘤药物是三氧化二砷、氨甲喋呤或阿霉素；其中的微球是白蛋白、明胶、淀粉、聚酰胺或聚乳酸；其中的微球直径是在100～150μm之间；其中的载药微球与磷酸钙骨水泥以1％∶1的重量比例混合。

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