CN101011409A - 一种维生素b12滴鼻液制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种维生素B₁₂滴鼻液制剂，其配方组成为，维生素B₁₂，增粘剂(或称粘附剂)，pH调节剂，渗透压调节剂，防腐剂。

Description

一种维生素B12滴鼻液制剂

技术领域：

本发明涉及一种药物制剂，特别涉及一种含有维生素B₁₂的滴鼻液药物制剂。

背景技术：

维生素B₁₂英文名：Vitamin B₁₂化学名：氰钴胺

化学结构式如下：

维生素B₁₂是细胞生长繁殖、造血、核酸及神经髓鞘脂类的合成及维持有鞘神经纤维功能完整性所必需的维生素。维生素B₁₂参与体内甲基转换及叶酸代谢，促进5-甲基四氢叶酸转变为四氢叶酸，当维生素B₁₂缺乏时，可导致叶酸缺乏及DNA合成障碍，影响红细胞的成熟。由于本品可促使甲基丙二酸转变为琥珀酸，参与三羧循环，当缺乏时可引起神经损害。

正常人每日需维生素B₁₂1μg，在动物来源的食物中含量丰富，不存在于植物来源的食物中，故在吸收功能正常的人群中，维生素B₁₂缺乏仅见于严格的素食者。食物中的维生素B₁₂必须与胃粘膜壁细胞分泌的一种糖蛋白(内因子)结合，形成复合物后，方不易被肠液消化，在有钙离子存在的情况下在回肠末端分离进入肠粘膜上皮细胞而吸收。恶性贫血患者的胃粘膜萎缩，“内因子”缺乏，导致维生素B₁₂吸收障碍。临床上主要用于治疗恶性贫血，也可以与叶酸合用治疗各种巨幼红细胞性贫血，抗叶酸药引起的贫血及脂肪泻。还可用于神经系统疾病(神经炎、神经萎缩)、肝脏疾病(肝炎、肝硬化)、白细胞减少症、再生障碍性贫血等。

维生素B₁₂主要用于治疗原发性或继发性内因子缺乏所致的巨幼细胞贫血，热带性或非热带性口炎性腹泻，胃切除，肠道切除后引起的盲端形成和小肠憩室以及短二叶裂头绦虫肠道寄生虫等所致维生素B12吸收障碍；也可用于神经炎的辅助治疗。也可用于患有HIV，爱滋病，多发性硬性及克隆氏病(Crohn’sDisease)时所引起的维生素B₁₂缺乏。另外，下列情况对维生素B₁₂需求增加，可给予适当补充：哺乳、妊娠、长期素食者，吸收不良综合征、肝硬化及其他肝脏疾患、反复发作的溶血性贫血、甲状腺功能亢进、慢性感染及恶性肿瘤。

维生素B₁₂口服后效果很不可靠，故都是通过肌注给药，注射后在局部吸收入血并与血浆蛋白结合，贮存在肝脏，由胆汁排泄，一部分进入肝肠再循环。吸收的维生素B₁₂经由与特殊的维生素B₁₂结合蛋白转钴胺(transcobalamin)I和II转运至各组织中，维生素B₁₂肌肉注射时，疼痛感较强烈，许多病人因害怕疼痛而不愿使用。

鼻腔给药过去多用于治疗鼻炎等局部疾病，近年来鼻腔给药的作用逐步扩大，可用于全身疾病的治疗，这与鼻粘膜下血管非常丰富有关。药物可直接通过鼻粘膜吸收进入体循环，而且鼻粘膜用药方便，易于被患者接受，对于有效剂量小，口服无效的药物鼻腔是一个较好的给药途径。

已经知道，Nastech药物公司生产一种维生素B₁₂鼻内给药制剂(商品名Nascobal Gel)于1997年10月上市。后又有维生素B₁₂鼻喷雾剂上市。

现有维生素B₁₂鼻内给药制剂，有一定的刺激性，而且稳定性差吸收率不高，本发明经过摸索，找到了一种没有刺激性的制剂组成，克服了现有技术的缺陷。

发明内容：

本发明提供一种以维生素B₁₂为药物活性成分的滴鼻液药物制剂，本发明的药物制剂，其配方组成如下：

维生素B₁₂，增粘剂(或称粘附剂)，pH调节剂，渗透压调节剂，防腐剂

本发明的配方组成，其2300ml滴鼻液中含有的组分配比如下：

维生素B₁₂           11.5-50g

增粘剂(或称粘附剂)  25-100g

渗透压调节剂        25-100g

防腐剂              5-20g或5-20ml

pH调节剂            加到2300ml

以上组成中，增粘剂(粘附剂)选自甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇及聚乙烯吡咯烷酮、甲壳素、卡波姆等

pH调节剂：选自枸橼酸盐缓冲溶液，磷酸盐缓冲溶液，pH为4.0～6.0渗透压调节剂选自甘油，丙二醇。

防腐剂选自苯扎氯铵(洁尔灭)，苯扎溴铵(新洁尔灭)，苯乙醇，乙二胺四乙酸盐。

本发明优选的配方组成为

维生素B₁₂滴鼻液处方(1000支量，2.3ml/支)

维生素B₁₂                 11.5-50g

甲基纤维素                25-100g

甘油                      25-100g

苯扎溴铵溶液(5％)         5-20ml

*枸橼酸盐缓冲溶液加至     2300ml

本发明最优选的配方组成为

维生素B₁₂滴鼻液处方(1000支量)

维生素B₁₂                 25g

甲基纤维素                50g

甘油                      50g

苯扎溴铵溶液(5％)         10ml

*枸橼酸盐缓冲溶液加至     2300ml

其中的枸橼酸盐缓冲溶液的配制如下(100ml)：

枸橼酸                    0.52g

枸橼酸钠                  1.58g

注射用水加至              100ml

本发明的药物制剂可以采用以下方法制备：

(1).配制缓冲液：

(2).配制增粘剂液体：

(3).配制维生素B12滴鼻液：

避光、无菌操作下，称取维生素B₁₂，加适量缓冲液溶解，加入防腐剂，过滤除菌。将此溶液加入溶液(2)中，补加缓冲液至2300ml，搅拌均匀，分装即得。

本发明优选的制备方法如下：

(1).配制枸橼酸盐缓冲液：

称取枸橼酸26g、枸橼酸钠79g，加注射用水溶解并稀释至2300ml，测定pH值在4.5～5.5，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，备用。

(2).配制2.0％甲基纤维素液体：

称取甲基纤维素50g，加入枸橼酸盐缓冲液2500ml，加入甘油50g，充分搅拌后，100℃30分钟流通蒸汽灭菌，放冰箱过夜(使重新溶解)，备用。

(3).配制维生素B12滴鼻液：

避光、无菌操作下，精密称取维生素B₁₂25g，加适量枸橼酸盐缓冲液溶解，加入新洁尔灭溶液10ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌。

将此溶液加入溶液(2)中，补加枸橼酸盐缓冲液至2300ml，搅拌均匀，分装即得。

本发明的药物制剂，经过临床实验，证明安全有效。

临床研究结果：

采用多中心、随机、平行对照临床试验，对本发明实施例1方法制备的维生素B₁₂滴鼻液治疗巨幼细胞贫血有效性和安全性进行了临床研究。

以经典疗法肌注维生素B₁₂200～500微克，每天一次，连续二周，以后改为肌注维生素B₁₂200～500微克/每周一次对照，用药方法在常规肌注维生素B₁₂治疗有效的基础上，应用维生素B₁₂滴鼻液每周一次，每次滴入一侧鼻孔0.1毫升(含维生素B₁₂500微克)共90天。本次临床试验共随机入组病例122例，试验组与对照组各61例；病例总脱落率为1.64％。试验组与对照组人口学特征、既往病史、目前症状及体征均未发现有临床意义的差异。试验结果显示试验组与对照组治疗前后血清维生素B₁₂水平和叶酸水平的差值无明显差异，且各中心之间的结果无明显差异，P＞0.05。治疗前后血红蛋白含量两组之间无明显统计学差异，P＞0.05；而网织红细胞含量对照组的减低比试验组明显，P＜0.05。两组治疗后各实验室指标异常率均无明显统计学差异，P＞0.05。鉴于本观察主要指标为血清维生素B₁₂浓度的观察，通过外周血检查、结合病人症状、体征恢复以及依从性。故第四次访视骨髓形态学检查未做，但对本观察结果分析无影响。结论：试验药维生素B₁₂滴鼻液治疗巨幼细胞贫血有效而安全。

本发明最优选的配方筛选如下：

(1).增粘剂：

为增加药物的滞留时间，减少刺激性，提高生物利用度，本发明滴鼻液中加入适量的增粘剂，我们在甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇及聚乙烯吡咯烷酮进行了筛选，最终选用甲基纤维素作为增粘剂。

甲基纤维素常用作增粘剂，其在水中可形成粘性胶体，我们配制了不同浓度的甲基纤维素溶液，考察其粘度情况。

表1  甲基纤维素粘度试验

浓度(％)	粘度(Pa.s)
		0.5	0.232
1.0	1.168
		1.5	3.508
2.0	16.72
		2.5	35.36
3.0	228.9

将不同浓度的甲基纤维素液体装入装有喷液泵的瓶中，试验喷液效果。结果发现，粘度在1Pa.s左右，喷液较好，超过3.5Pa.s的不能正常喷出，所以我们确定甲基纤维素的浓度为1.0％。

(2).pH调节剂：

A为了尽可能减轻不适感，鼻用溶液应调节适宜的pH值。

①.健康人鼻腔的pH值在5.5～6.5之间，鼻粘膜呈酸性有利于抑制病原菌的生长，鼻分泌物中的溶菌酶如果在碱性条件下会失去抗病原微生物的活性。

②.甲基纤维素溶液在pH2～12均稳定；苯扎溴铵溶液在pH5～10时杀菌效果好。

③.维生素B₁₂溶液在pH为4.0～6.0时较稳定。

综合分析，本发明选择的pH为5.0左右，最后确定本发明的制剂pH值为4.5～5.5。

(3).渗透压调节剂：

①.甘油因粘度大，吸水性和渗透性强，能降低水的表面张力，是药物制剂常用的赋形剂及等渗调节剂；甘油在较低温度下，倾向过冷而不结晶，冰点较低，能防止冰冻。

②.药物1％溶液的冰点下降值：

1％枸橼酸      0.10

1％枸橼酸钠    0.185

1％甘油        0.203

血液冰点下降的降低值为0.52，则药液中需加入甘油的量为

[0.52-(0.1×0.52+0.185×1.58)]/0.203＝0.87％

处方中甘油的用量确定为1％。

(4).防腐剂：

我们选用符合中国药典标准的苯扎溴铵(新洁尔灭)作为防腐剂。新洁尔灭系季铵盐类的阳离子表面活性剂，抗菌谱广，穿透力强，对革兰氏阳性及阴性菌均有杀灭力，在1∶1000浓度时，半分钟杀死绿脓杆菌，金黄色葡萄球菌和伤寒杆菌，常用浓度为0.01％。

由于本发明中维生素B₁₂对光敏感，因此，本发明选择含有维生素B₁₂的药液的操作均应避光。

在本发明的制备方法中，为避免微生物污染，甲基纤维素因粘度过大不宜用过滤法除菌；维生素B₁₂对热较敏感，不宜用蒸汽灭菌。为此本发明将配制方法分成两部分，甲基纤维素采用流通蒸汽灭菌，维生素B₁₂采用过滤法除菌。

本发明还包括本发明的药物制剂的质量控制方法，包括以下步骤

性状的观察，内容物的鉴别，内容物的检查，对含有的成分进行含量测定，因此，本发明的质量控制方法主要的步骤是：

其中性状的观察，步骤是：

一.性状：

本品为红色黏稠液体，3批样品实际性状检查结果见表1。

其中内容物的鉴别，步骤是：

二.鉴别：

维生素B₁₂原料在其紫外吸收曲线中，在278nm、361nm与550nm的波长处有最大吸收。中国药典2005年版维生素B₁₂原料药的鉴别试验采用了361nm与278nm及361nm与550nm两个吸收度的比值；而注射液只采用了361nm与550nm处一个吸收度的比值作为鉴别试验。经试验，本品辅料在200～300nm有吸收干扰，在300nm以后基本无吸收，故将361nm波长处的吸收度与550nm的波长处的吸收度的比值作为鉴别试验，具体方法是：取本品含量测定项下的溶液，照分光光度法(中国药2005年版二部附录IVA)测定，在361nm与550nm的波长处有最大吸收；361nm波长处的吸收度与550nm的波长处的吸收度的比值应为3.15～3.45，3批样品检查结果见表1。

样品	性状	A361/A550
			000224	红色黏稠液体	3.23
000226	红色黏稠液体	3.23
			000302	红色黏稠液体	3.31

其中内容物的检查，步骤是：

三.检查：

1.酸度：依法测定(中国药典2005年版二部附录VIH)，应为4.5～5.5，本品3批样品测定结果见表2。

仪器：5986--25酸度计  Cole-Parmer公司

表2  pH值检查结果

样品	pH值
		000224	5.03
000226	5.05
		000302	5.06

4.每瓶总喷次：

取供试品，除去盖帽，连续喷射直到喷尽为止，计算喷射次数，本品标示每瓶总喷次为8次，3批样品测定结果见表5。

5.每喷主药含量：

取供试品1瓶，除去盖帽，试喷5次，喷口上部套一适宜烧杯，揿压10次，取下烧杯，用蒸馏水洗净烧杯及药瓶喷口外部，洗液并入100ml量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IVA)于361nm波长处测定吸收度，按C₆₃H₈₈CoN₁₄0₁₄P的吸收系数(E_1cm ^1％)为207计算，将计算结果除以10，即为平均每喷主药含量，3批样品测定结果见表5。

6.装量：

按最低装量检查法(中国药典2005年版二部附录X F)检查，3批样品测定结果见表5。

表5  每瓶总喷次、每揿主药含量和装量检查结果

样品	每瓶总喷次	每揿主药含量(％)	装量(ml)
				000224	46	109.6	＞5
000226	45	108.4	＞5
				000302	46	110.1	＞5

7.渗透压

(1)样品：010119批、010120批、010122批自制98008A Nascobal Schwarz Pharma公司

(2)测定仪器：美国FISKE ONE-TEN Osmometer

(3)测定结果见表6

滴鼻剂应呈等渗或略呈高渗，测得国外样品Nascobal略呈高渗。0.9％氯化钠注射液毫渗透压摩尔浓度为286mOsM，如以国外样品Nascobal的测得值354mOsM为标准的均值，故拟订本品渗透压摩尔浓度应为191～635mOsM，经测定试制样品三批均符合规定。

8.黏度

(1)样品：010119批、010120批、010122批自制98008A Nascobal Schwarz Pharma公司

(2)测定仪器：NDJ-8S型数显粘度计  上海天平仪器厂

(3)测定结果见表6。

用旋转式粘度计(3号转子及12r/min)，依法测定(附录VIG第二法)。为增加药物的滞留时间，提高生物利用度，黏度较高为好。本品黏度检查为7.3Pa·s左右。在中国药典2005年版“甲基纤维素”项下规定标示黏度大于100mPa·s者，限度范围应为标示黏度的75.0~140.0％，如以国外样品Nascobal测得值6.4Pa·s为标准的均值，则本品黏度范围应为4.8~9.0Pa·s。拟定本品黏度检查限度为：取本品，以旋转式粘度计(3号转子及12r/min的转速)测定(中国药典2005年版附录VIG第二法)，在20℃时的运动黏度应为5.6~9.0Pa·s，经测定试制样品三批均符合规定。

表6  渗透压和黏度与国外样品对比测定结果

	渗透压(mSoM)	黏度(Pa.s)
			010119	341	1.239
010120	343	1.082
			010122	348	1.262
Nascobal	354	1.103

7.微生物限度：

取本品10ml加入90ml稀释液中，混匀，依法检查(中国药典2005年版二部附录XIJ)，本品3批样品均符合规定，测定结果见表7。

表7  微生物限度检查结果

样品	细菌数	霉菌数	绿脓杆菌	金黄色葡萄球菌
					000224	＜10个/ml	＜10个/ml	未检出	未检出
000226	＜10个/ml	＜10个/ml	未检出	未检出
					000302	＜10个/ml	＜10个/ml	未检出	未检出

其中对含有的成分进行含量测定，步骤是：

四.含量测定：

1.方法依据：

我们参照中国药典2005年版维生素B₁₂注射液含量测定方法，采用紫外分光光度法测定样品含量。

2.仪器：

UV1100紫外分光光度计北京瑞利分析仪器公司

3.辅料干扰试验：

依处方称取辅料配制空白对照液，精密量取1ml置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，于200～600nm扫描，得吸收曲线，辅料在300～400nm处无吸收，因此对本品含量测定无干扰。

4.线性范围：

精密称取维生素B₁₂适量，加水溶解并定量稀释制成1.25mg/ml的溶液，摇匀，精密量取0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml，分别置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀后，于361nm波长处测定吸收度，结果见表8。

表8  线性范围测定结果

浓度(μg/ml)	吸收度
		6.25	0.126
12.5	0.256
		25	0.514
37.5	0.769

50

1.025

回归方程为：A＝0.020543C-0.001256    r＝1.000

5.回收率试验：

按处方称取主药，加入配制好的辅料溶液，混匀，按含量测定方法于361nm波长处测定吸收度，计算回收率，测定结果见表9。

表9  回收率测定结果

样品	加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(％)
				1	4.23	4.26	100.7
2	4.17	4.13	99.0
				3	5.05	5.03	99.6
4	5.35	5.36	100.2
				5	6.17	6.15	99.7
6	6.26	6.22	99.4
				平均回收率＝99.8％       RSD＝0.60％

本品回收率试验结果，符合制剂分析要求。

7.精密度试验：

取同一样品，重复取样测定6次，测定结果见表10。

表10  精密度试验结果

n	1	2	3	4	5	6
							含量(％)	99.9	99.5	100.5	99.1	99.9	99.3
x＝99.8％                                  RSD＝0.41％

8.溶液稳定性试验：

按照含量测定条件，取原料于0、2、4、8、12、24小时进样测定，结果见表11。

表11  溶液稳定性试验

时间(h)	吸收度(A)
		0	0.514
2	0.515
		4	0.513
8	0.515
		12	0.516
24	0.515

溶液避光放置24小时，基本稳定。

9.本品的含量测定方法：

精密量取本品1ml置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IVA)，在361nm的波长处测定吸收度，按C₆₃H₈₈CoN₁₄O₁₄P的吸收系数(E_1cm ^1％)为207计算，即得。

10.本品的测定结果：

按上述方法，实测本品3批样品，结果见表12。

表12  本品含量测定结果

样品	含量(％)	RSD(％)
			000224	100.2	0.42
000226	99.8	0.42
			000302	100.1	0.35

根据实测结果，并参考滴鼻剂的有关要求，暂订本品的含量限度为含维生素B12应为标示量的90.0-110.0％。

本发明经过筛选的配方，特别是本发明最优选的配方与现有技术相比具有稳定性好，刺激性小，吸收率高的特点。

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1

维生素B₁₂                25g

甲基纤维素               50g

甘油                     50g

苯扎溴铵溶液(5％)        10ml

*枸橼酸盐缓冲溶液加至    2300ml

其中的枸橼酸盐缓冲溶液的配制如下(100ml)：

枸橼酸                   0.52g

枸橼酸钠                 1.58g

注射用水加至             100ml

制备：

(1).配制枸橼酸盐缓冲液：

称取枸橼酸26g、枸橼酸钠79g，加注射用水溶解并稀释至2300ml，测定pH值在4.5～5.5，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，备用。

(2).配制2.0％甲基纤维素液体：

称取甲基纤维素50g，加入枸橼酸盐缓冲液2500ml，加入甘油50g，充分搅拌后，100℃30分钟流通蒸汽灭菌，放冰箱过夜(使重新溶解)，备用。

(3).配制维生素B12滴鼻液：

避光、无菌操作下，精密称取维生素B₁₂25g，加适量枸橼酸盐缓冲液溶解，加入新洁尔灭溶液10ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌。

将此溶液加入溶液(2)中，补加枸橼酸盐缓冲液至2300ml，搅拌均匀，分装即得。

实施例2

维生素B₁₂                11.5g

甲基纤维素               25g

甘油                     25g

苯扎溴铵溶液(5％)        5ml

*枸橼酸盐缓冲溶液加至    2300ml

其中的枸橼酸盐缓冲溶液的配制如下(100ml)：

枸橼酸                   0.52g

枸橼酸钠                 1.58g

注射用水加至             100ml

制备方法与实施例1相同。

实施例3

维生素B₁₂                50g

甲基纤维素               100g

甘油                     100g

苯扎溴铵溶液(5％)        20ml

*枸橼酸盐缓冲溶液加至    2300ml

其中的枸橼酸盐缓冲溶液的配制如下(100ml)：

枸橼酸                   0.52g

枸橼酸钠                 1.58g

注射用水加至             100ml

制备方法与实施例1相同。

Claims (9)

1、一种含有维生素B₁₂的滴鼻液药物制剂，其配方组成如下：维生素B₁₂，增粘剂，pH调节剂，渗透压调节剂，防腐剂。

2、权利要求1的药物制剂，其2300ml滴鼻液中含有的组分配比如下：

维生素B₁₂       11.5-50g

增粘剂          25-100g

渗透压调节剂    25-100g

防腐剂          5-20g或5-20ml

pH调节剂        加到2300ml

其中增粘剂选自：甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇及聚乙烯吡咯烷酮、甲壳素、卡波姆，

pH调节剂：选自枸橼酸盐缓冲溶液，磷酸盐缓冲溶液

pH为4.0～6.0

渗透压调节剂选自：甘油，丙二醇

防腐剂选自：苯扎氯铵，苯扎溴铵，苯乙醇，乙二胺四乙酸盐。

3、权利要求2的药物制剂，其2300ml滴鼻液中含有的组分配比如下：

维生素B₁₂            11.5-50g

甲基纤维素           25-100g

甘油                 25-100g

苯扎溴铵溶液(5％)    5-20ml

枸橼酸盐缓冲溶液加至 2300ml

4、权利要求3的药物制剂，其2300ml滴鼻液中含有的组分配比如下：

维生素B₁₂               25g

甲基纤维素              50g

甘油                    50g

苯扎溴铵溶液(5％)       10ml

枸橼酸盐缓冲溶液加至    2300ml

其中的枸橼酸盐缓冲溶液的配比如下：

枸橼酸        0.52g

枸橼酸钠      1.58g

注射用水加至  100ml

5、权利要求1的药物制剂的制备方法，步骤如下：

(1).配制缓冲液：

(2).配制增粘剂液体：

(3).配制维生素B12滴鼻液：

避光、无菌操作下，称取维生素B₁₂，加适量缓冲液溶解，加入防腐剂，过滤除菌。将此溶液加入溶液(2)中，补加缓冲液至2300ml，搅拌均匀，分装即得。

6、权利要求5的制备方法，步骤如下：

(1).配制枸橼酸盐缓冲液：

称取枸橼酸26g、枸橼酸钠79g，加注射用水溶解并稀释至2300ml，测定pH值在4.5～5.5，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，备用。

(2).配制2.0％甲基纤维素液体：

称取甲基纤维素50g，加入枸橼酸盐缓冲液2500ml，加入甘油50g，充分搅拌后，100℃30分钟流通蒸汽灭菌，放冰箱过夜，备用。

(3).配制维生素B12滴鼻液：

避光、无菌操作下，精密称取维生素B₁₂25g，加适量枸橼酸盐缓冲液溶解，加入新洁尔灭溶液10ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌。

将此溶液加入溶液(2)中，补加枸橼酸盐缓冲液至2300ml，搅拌均匀，分装。

7、权利要求1的药物制剂在制备治疗巨幼细胞贫血的药物中的应用。

8、权利要求1的药物制剂的质量控制方法，包括以下步骤：性状的观察，内容物的鉴别，内容物的检查，对含有的成分进行含量测定。

9、权利要求8的质量控制方法，

其中性状的观察，步骤是：

观察本品为红色黏稠液体；

其中内容物的鉴别，步骤是：

取本品含量测定项下的溶液，照中国药2005年版二部附录IV A分光光度法测定，在361nm与550nm的波长处有最大吸收；361nm波长处的吸收度与550nm的波长处的吸收度的比值应为3.15～3.45，

其中内容物的检查，步骤是：

1)酸度：依法中国药典2005年版二部附录VI H测定，应为4.5～5.5，

2)每瓶总喷次：

取供试品，除去盖帽，连续喷射直到喷尽为止，计算喷射次数，本品标示每瓶总喷次为8次，

3)每喷主药含量：

取供试品1瓶，除去盖帽，试喷5次，喷口上部套一适宜烧杯，揿压10次，取下烧杯，用蒸馏水洗净烧杯及药瓶喷口外部，洗液并入100ml量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照中国药典2005年版二部附录IV A分光光度法于361nm波长处测定吸收度，按C₆₃H₈₈CoN₁₄O₁₄P的吸收系数E_1cm ^1％为207计算，将计算结果除以10，即为平均每喷主药含量，

4)装量：

按中国药典2005年版二部附录X F最低装量检查法检查，

5)渗透压

渗透压摩尔浓度应为191～635mOsM，

6)黏度

取本品，以旋转式粘度计-3号转子及12r/min的转速按中国药典2005年版附录VIG第二法测定，在20℃时的运动黏度应为5.6-9.0Pa·s，

7)微生物限度：

取本品10ml加入90ml稀释液中，混匀，依中国药典2005年版二部附录XI J法检查，

其中对含有的成分进行含量测定，步骤是：

精密量取本品1ml置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照中国药典2005年版二部附录IV A分光光度法，在361nm的波长处测定吸收度，按C₆₃H₈₈CoN₁₄O₁₄P的吸收系数E_1cm ^1％为207计算，即得。本品的含量限度为含维生素B12应为标示量的90.0-110.0％。