CN101007072A - 一种中药血必净注射液的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药血必净注射液的质量控制方法，本发明所述质量控制方法包括以下步骤：性状的观察，内容物的鉴别，内容物的检查，指纹图谱比较，对含有的成分进行含量测定。

Description

一种中药血必净注射液的质量控制方法

技术领域：

本发明涉及一种药物制剂的质量控制方法，特别涉及一种化瘀解毒。用于因感染诱发的全身炎症反应综合征的中药血必净注射液的质量控制方法。

背景技术：

血必净注射液其处方组成为：红花100g，赤芍100g，川芎100g，丹参100g，当归100g，现已经有产品上市。由于中药注射剂产品稳定性等问题，难以有效控制制剂的质量，从而影响产品的生产和保证质量。

为有效控制产品质量，我们建立了血必净注射液的质量控制方法，该质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，可确保产品质量的“安全、均一、稳定、有效、可控”。

发明内容：

本发明提供一种血必净注射液的质量控制方法，本发明的质量控制方法，简单易行，精度和准确性高，能够在大生产中应用，本发明的质量控制方法是针对本发明药物制剂的，具有严格的针对性，本发明的药物制剂，其配方组成如下：

红花100g，赤芍100g，川芎100g，丹参100g，当归100g，

其制备方法如下：

将上述配方的中药原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成注射液。所述活性物质可以通过选自以下方式的方法得到，如：通过粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等方法得到，这些活性物质可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，还可以是高纯度提取物，根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。

优选的制备方法如下：以上五味，取红花，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法渗漉，浓缩，干燥。赤芍加水煎煮，浓缩，加乙醇，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，浓缩，用水饱和正丁醇萃取，回收正丁醇，川芎，丹参，当归合并煎煮，煎液加乙醇，冷藏，回收乙醇，各提取物加注射用水，灌封。

最优选的制备方法见实施例。

本发明是针对以上制剂的质量控制方法，该方法针对其特点及本发明配方，具有针对性。

本发明所述质量控制方法包括以下步骤：

性状的观察，内容物的鉴别，内容物的检查，指纹图谱比较，对含有的成分进行含量测定，因此，本发明的质量控制方法主要的步骤是：

一、性状的观察，步骤是：

【性状】本品为棕黄色至棕红色的澄明液体。

二、内容物的鉴别，步骤是：

【鉴别】(1)取本品2ml，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取红花对照药材1g，加30％乙醇30ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水3ml使溶解，加乙醇15ml，静置，取上清液，蒸干，加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一含4％磷酸二氢钠溶液的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以丙酮-乙醇-二乙胺-氨试液(8∶6∶2∶3)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(2)取本品10ml，加水饱和的正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙脂-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)取川芎对照药材1g，加水30ml，煎煮30分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。再取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别(2)项下的供试品溶液和上述对照药材及对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF₂₅₄薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以1％间苯二酚的50％硫酸乙醇溶液。在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

三、内容物的检查，步骤是：

【检查】颜色精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至100ml，摇匀，与黄绿色标准比色液(《中国药典》2005年版一部附录XI A第一法)比较，不得浅于6号并不得深于9号。

pH值应为4.5～6.0(《中国药典》2005年版一部附录VII G)。

蛋白质取本品1ml，加新配制的30％磺基水杨酸试液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊。

鞣质取本品1ml，加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml[必要时，用微孔滤膜(0.45μm)滤过]，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀。

树脂取本品5ml，加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀。

草酸盐取本品2ml，加3％氯化钙溶液2～3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀。

钾离子取本品2ml，依法测定(《中国药典》2005年版一部附录IX S)，应符合规定。

炽灼残渣不得过1.5％(《中国药典》2005年版一部附录IX J)。

重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查(《中国药典》2005年版一部附录IX E)，不得过百万分之十。

砷盐取本品5ml，置250ml锥形瓶中，加数粒沸石，再加硝酸，硫酸各5ml，小火缓缓加热，待反应完全后，放冷；小心缓缓滴加硝酸至溶液呈无色或略显微黄色，放冷；加蒸馏水20ml，煮沸至产生白烟为止放冷，转移至25ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。精密吸取5ml，加盐酸5ml与蒸馏水18ml，按《中国药典》2005年版第一部附录IX F第一法，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作，并同时制备标准砷斑。本品含砷量不得过百万分之二。

总固体精密量取本品10ml，置称定重量的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速称定重量，遗留残渣应为50.0mg～60.0mg/ml。

热原取本品依法检查(《中国药典》2005年版一部附录XIII A)，剂量按家兔体重每1kg缓缓注射5ml，应符合规定。

无菌取本品，依法检查(《中国药典》2005年版一部附录XIII B)，应符合规定。

溶血与凝聚(1)2％细胞混悬液的制备：取兔或羊血数毫升、放入盛有玻璃珠的二角瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原、使成脱纤血液，加约10倍量的生理盐水，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水如法洗涤2～3次，至上清液不显红色为止。将所得红血球用生理盐水配成2％的混悬液，即得。

(2)检验方法：取试管6只，按下表配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水，混匀后，于37℃恒温箱放置半小时，然后分别加入不同量的药液(第6管为对照管)，摇匀后，置37℃恒温箱中。开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，一般观察4小时，如溶液呈透明红色，即表示溶血，如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝聚作用。

试管编号	1	2	3	4	5	6
							2％红细胞混悬液(ml)	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5
生理盐水(ml)	2.0	2.1	2.2	2.3	2.4	2.5
							药液(ml)	0.5	0.4	0.3	0.2	0.1	-

结果判断

①一般以0.3ml注射剂(第3管)，在2小时内不产生溶血作用者认为可供注射用。

②如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝集物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴生理盐水，在显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，供试品可供临床应用，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝集，供试品不宜供临床使用。

异常毒性取本品，依法检查(中国药典2005版二部附录XIC)，按静脉注射每只给药0.8mL，注射速度为0.1mL/秒，应符合规定。

过敏反应取本品，依法检查(中国药典2005版二部附录XIK)，应符合规定。其他应符合注射剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版一部附录IU)。

四、指纹图谱比较，步骤是：

【指纹图谱】参照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI D)，结合指纹图谱要求进行测定。

色谱条件及系统适用性试验用Diamonsil^TM C₁₈(250×4.6mm 5μm)为色谱柱；以乙腈-甲醇-冰乙酸(60∶40∶0.5)为流动相A，以0.5％(V/V)冰乙酸为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长280nm；流速每分钟1ml；柱温40℃。记录时间为60～70分钟。理论板数按芍药苷峰计算应不低于10000。

时间(分钟)	流动相A	流动相B
			0550556065809095120	334545858510010033	979755551515009797

参照物溶液的制备  取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品溶液，作为供试品溶液。

测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

供试品指纹图谱与质量标准所附的对照指纹图谱经计算机模拟相似度计算软件计算，相似度不得低于0.8。

标准图谱(详见附件一)

共有峰描述共设17个共有峰，9号峰为参照物峰(芍药苷)。

比较对照指纹图谱可以采用目测法，也可以采用计算软件比较，该软件可由国家药典委员会提供，是一种中药色谱指纹图谱相似度评价系统，其基本方法是，将样品的高效液相色谱图和标准品阿魏酸的高效液相色谱图输入安装有指纹图谱相似度评价系统的计算机，该程序即可对图谱进行比较并输出相似度数值，两者完全相似的相似度数值为100％，根据本发明，相似度大于0.80为合格，优选的是85％以上，更优选的是90％以上。

五、对含有的成分进行含量测定，步骤是：

【含量测定】

红花黄色素A

对照品溶液的制备取干燥至恒重的红花黄色素A对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含0.8mg的溶液，摇匀，精密吸取1ml，置于50ml量瓶中，加5％的三氯化铝乙醇溶液2ml，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备精密吸取本品1ml，水浴上蒸干，残渣加50％甲醇2ml使溶解，置已处理好的聚酰胺柱(内径1.0cm，长20cm，聚酰胺粒度14-30目，水浸泡过夜，湿法装柱，高度7cm，用50％甲醇15ml预洗)上，用50％甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，至50ml量瓶中，再加入5％三氯化铝乙醇溶液2ml，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法取上述对照品与供试品溶液，以试剂为空白，照紫外-可见分光光度法测定，(《中国药典》2005年版一部附录V A)在401nm的波长处测定吸光度，计算，即得。

本品每1ml含红花以红花黄色素A(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不得少于0.5mg。

芍药苷、苯甲酸照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸(30∶70∶0.5)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备取芍药苷对照品和苯甲酸对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含0.1mg芍药苷和10μg苯甲酸的混合溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备精密吸取本品5ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1ml含赤芍以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，不得少于1.0mg；1ml含苯甲酸(C₇H₆O₂)应为0.01～0.25mg。

葡萄糖

对照品溶液的制备精密称取120℃干燥2小时的无水葡萄糖对照品1g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水葡萄糖200μg)。

标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20ml，分别置10ml量瓶中，分别加入酶试剂溶液3ml，摇匀，在36℃水浴中保温40分钟，取出，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，以不加对照品溶液的为空白，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版一部附录V A)在505nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。计算，即得。

测定法精密量取本品10ml，置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入酶试剂溶液3ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的重量(μg)，计算，即得。供试品中含有C₆H₁₂O₆·H₂O的重量应为标示量的85.0～115.0％。

以上操作步骤中所述本品是指本发明的血必净注射液。

其中的几种测试溶液的配制方法如下：

*1％间苯三酚的50％硫酸乙醇溶液：向2％的间苯三酚乙醇液中慢慢滴加等量硫酸(1∶1)混合，即得。

**1.0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.0)：精密称取1.7gKH₂PO₁，加水100ml使溶解，加0.1mol/L NaOH溶液调节pH值至7.0，加水稀释至250ml，即得。

2.0.00154mol/L 4-氨基安替比林溶液：精密称取0.078g 4-氨基安替比林溶于250ml0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.0)中，即得。

3.0.022mol/L苯酚溶液：精密称取0.5176g苯酚溶于水中，稀释至250mL，即得。

4.酶试剂溶液：精密称取4.48mg葡萄糖氧化酶，8mg过氧化物酶，0.00154mol/L4-氨基安替比林溶液和0.022mol/L苯酚溶液各取100mL充分混匀后，溶解，即得。

本发明的优点在于：本发明的质量控制方法保证了本发明的制剂的质量检测标准能够较全面有效控制制剂的质量特征，具有准确性和先进性，可作为质量控制和考察工艺的稳定性的有效技术手段。对提高产品质量有重大意义。

附图说明：

图1为标准品芍药苷的指纹图谱

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1：

血必净注射液的制备：

配方组成如下：

红花100g，赤芍100g，川芎100g，丹参100g，当归100g，

其制备方法如下：

【制法】以上五味，取红花，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(中国药典2005版一部附录I O)，用8倍量30％乙醇作溶剂，浸渍8小时，渗漉，收集5倍量漉液，加乙醇处理两次，第一次使含乙醇量达70％，第二次达80％，每次5℃下冷藏48小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至5倍量，真空干燥成干膏，用0.5倍量注射用水溶解，备用；赤芍加水煎煮两次，第一次加10倍量水煎煮2小时，第二次8倍量水煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，浓缩至5倍量，冷却至25℃，搅拌下加10％量的蛋清，静置30分钟，加乙醇使含醇量达70％，5℃下冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至5倍量，用水饱和正丁醇萃取4次，每次加2.5倍量，合并萃取液，回收正丁醇至无醇味，加5倍量注射用水溶解，5℃下冷藏48小时，滤过，滤液浓缩至5倍量，真空干燥成干膏，用2.5倍量注射用水溶解，备用；川芎，丹参，当归合并煎煮，按赤芍制备方法操作；将上述三种水溶液合并，滤过，调节pH值至6.5～7.0，加乙醇使含醇量达80％，5℃下冷藏24小时，滤过，回收乙醇至无醇味，滤过，另取滤液总量4.5％的葡萄糖，加适量注射用水使溶解，调节pH值至6.5，加入上述滤液中，混匀，加注射用水至1000ml，调节pH值至6.5，加1％注射用活性炭，煮沸15分钟，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例2：

血必净注射液指纹图谱比较，步骤是：

【指纹图谱】参照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)，结合指纹图谱的要求进行测定。步骤如下：

1、制定标准对照指纹图谱；

2、测定本发明制剂的指纹图谱；

3、将上述指纹图谱进行比较；

具体是：

用高效液相色谱法得到标准品芍药苷高效液相色谱图，标准品芍药苷溶液的制备取芍药苷(标准对照品可在药监部门购买)对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，即得。

具体色谱条件如下：

色谱条件及系统适用性试验用Diamonsil^TM C₁₈(250×4.6mm 5μm)为色谱柱；以乙腈-甲醇-冰乙酸(60∶40∶0.5)为流动相A，以0.5％(V/V)冰乙酸为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长280nm流速每分钟1ml；柱温40℃。记录时间为60～70分钟。理论板数按芍药苷峰计算应不低于10000。

本发明制剂溶液的制备取本品溶液，作为供试品溶液。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

供试品指纹图谱与质量标准所附的对照指纹图谱经计算机模拟相似度计算软件计算，相似度不得低于0.8。

标准芍药苷的指纹图谱见图1

共有峰描述共设17个共有峰，9号峰为参照物峰(芍药苷)。

比较对照指纹图谱可以采用目测法，也可以采用计算软件比较，该软件可由国家药典委员会提供，是一种中药色谱指纹图谱相似度评价系统，其方法是，将样品的高效液相色谱图和标准品阿魏酸的高效液相色谱图输入安装有指纹图谱相似度评价系统的计算机，该程序即可对图谱进行比较并输出相似度数值，两者完全相似的相似度数值为100％，根据本发明，相似度大于0.80为合格。

Claims (6)

1、一种中药血必净注射液的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：

性状的观察，内容物的鉴别，内容物的检查，指纹图谱比较，对含有的成分进行含量测定。

2、权利要求1的方法，其特征在于，其中性状的观察，步骤是：

观察本品为棕黄色至棕红色的澄明液体。

3、权利要求1的方法，其特征在于，其中内容物的鉴别，步骤是：

(1)取本品2ml，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取红花对照药材1g，加30％乙醇30ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水3ml使溶解，加乙醇15ml，静置，取上清液，蒸干，加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一含4％磷酸二氢钠溶液的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8∶6∶2∶3＝丙酮-乙醇-二乙胺-氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，

(2)取本品10ml，加水饱和的正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以40∶5∶10∶0.2＝三氯甲烷-乙酸乙脂-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，

(3)取川芎对照药材1g，加水30ml，煎煮30分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液，再取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取鉴别(2)项下的供试品溶液和上述对照药材及对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF₂₅₄薄层板上，以8∶2∶0.5＝三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以1％间苯三酚的50％硫酸乙醇溶液，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4、权利要求1的方法，其特征在于，其中内容物的检查，步骤是：

颜色精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至100ml，摇匀，与黄绿色标准比色液比较，不得浅于6号并不得深于9号，

pH值应为4.5～6.0，

蛋白质取本品1ml，加新配制的30％磺基水杨酸试液1ml，混匀，放置5分钟，不得出现浑浊，

鞣质取本品1ml，加新配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液5ml，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀，

树脂取本品5ml，加盐酸1滴，放置30分钟，不得出现沉淀，

草酸盐取本品2ml，加3％氯化钙溶液2～3滴，放置10分钟，不得出现浑浊或沉淀，钾离子取本品2ml，依法测定，应符合规定，

炽灼残渣不得过1.5％，

重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查，不得过百万分之十，

砷盐取本品5ml，置250ml锥形瓶中，加数粒沸石，再加硝酸，硫酸各5ml，小火缓缓加热，待反应完全后，放冷；小心缓缓滴加硝酸至溶液呈无色或略显微黄色，放冷；加蒸馏水20ml，煮沸至产生白烟为止放冷，转移至25ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，加盐酸5ml与蒸馏水18ml，依法操作，并同时制备标准砷斑，本品含砷量不得过百万分之二，

总固体精密量取本品10ml，置称定重量的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速称定重量，遗留残渣应为50.0mg～60.0mg/ml，

热原取本品依法检查，剂量按家兔体重每1kg缓缓注射5ml，应符合规定，

无菌取本品，依法检查，应符合规定，

溶血与凝聚 (1)2％细胞混悬液的制备：取兔或羊血数毫升、放入盛有玻璃珠的二角瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原、使成脱纤血液，加约10倍量的生理盐水，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水如法洗涤2～3次，至上清液不显红色为止，将所得红血球用生理盐水配成2％的混悬液，即得，

(2)检验方法：取试管6只，依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水，混匀后，于37℃恒温箱放置半小时，然后分别加入不同量的药液，摇匀后，置37℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，一般观察4小时，如溶液呈透明红色，即表示溶血，如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝聚作用，

结果判断

①以0.3ml注射剂，在2小时内不产生溶血作用者认为可供注射用，

②如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚，若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝集物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴生理盐水，在显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，供试品可供临床应用，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝集，供试品不宜供临床使用，

异常毒性取本品，依法检查，按静脉注射每只给药0.8mL，注射速度为0.1mL/秒，应符合规定，

过敏反应取本品，依法检查，应符合规定，

其他应符合注射剂项下有关的各项规定。

5、权利要求1的方法，其特征在于，其中指纹图谱比较，步骤是：

参照高效液相色谱法，结合指纹图谱要求进行测定，

色谱条件及系统适用性试验用Diamonsil^TM C₁₈为色谱柱；以60∶40∶0.5＝乙腈-甲醇-冰乙酸为流动相A，以0.5％冰乙酸为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长280nm；流速每分钟1ml；柱温40℃，记录时间为60～70分钟，理论板数按芍药苷峰计算应不低于10000，

参照物溶液的制备 取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，即得，

供试品溶液的制备  取本品溶液，作为供试品溶液，

测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，

供试品指纹图谱与质量标准所附的对照指纹图谱经计算机模拟相似度计算软件计算，相似度不得低于0.8。

6、权利要求1的方法，其特征在于，其中对含有的成分进行含量测定，步骤是：

红花黄色素A

对照品溶液的制备取干燥至恒重的红花黄色素A对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含0.8mg的溶液，摇匀，精密吸取1ml，置于50ml量瓶中，加5％的二氯化铝乙醇溶液2ml，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，

供试品溶液的制备精密吸取本品1ml，水浴上蒸干，残渣加50％甲醇2ml使溶解，置已处理好的聚酰胺柱上，用50％甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，至50ml量瓶中，再加入5％三氯化铝乙醇溶液2ml，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，

测定法取上述对照品与供试品溶液，以试剂为空白，照紫外-可见分光光度法测定，在40lnm的波长处测定吸光度，计算，即得，

本品每1ml含红花以红花黄色素A计，不得少于0.5mg，

芍药苷、苯甲酸照高效液相色谱法测定，

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶70∶0.5＝甲醇-水-醋酸为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500，

对照品溶液的制备取芍药苷对照品和苯甲酸对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含0.1mg芍药苷和10μg苯甲酸的混合溶液，摇匀，即得，

供试品溶液的制备精密吸取本品5ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得，

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得，

本品每1ml含赤芍以芍药苷计，不得少于1.0mg；1ml含苯甲酸应为0.01～0.25mg，

葡萄糖

对照品溶液的制备精密称取120℃干燥2小时的无水葡萄糖对照品1g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，

标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20ml，分别置10ml量瓶中，分别加入酶试剂溶液3ml，摇匀，在36℃水浴中保温40分钟，取出，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，以不加对照品溶液的为空白，照紫外-可见分光光度法在505nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算，即得，

测定法精密量取本品10ml，置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的重量，计算，即得，供试品中含有C₆H₁₂O₆·H₂O的重量应为标示量的85.0～115.0％。

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