CN102507767A - 前列地尔及其制剂质量标准 - Google Patents

Abstract

本发明公开了前列地尔质量标准；用符合此质量标准的前列地尔原料药制备的冻干针剂，符合本发明公开的注射用前列地尔质量标准；符合本发明的注射用前列地尔脂质体标准；本发明指出了生产前列地尔、注射用前列地尔、注射用前列地尔脂质体在先发明；并进行了质量、药效学验证。

Description

前列地尔及其制剂质量标准

技术领域

本发明涉及前列地尔原料药及其制剂的质量标准。

技术背景

药品前列地尔，英文名Alprostadil，化学名为11α，15(S)-二羟基-9-羰基-13-反前列烯酸。

结构式如下：

分子式为C₂₀H₃₄O₅，分子量是354.48。

《中国药典》2010版已发表在国内执行，其中对原料药前列地尔质量标准已有明确规定。本发明研究，国内外药典对前列地尔质量标准规定还存在缺陷如下：

1.前列地尔是一种化学性质非常活泼的物质，本发明研究发现：室温下，其在光、热、酸、碱催化下，及易转变为杂质前列腺素A₁，而前列腺素A₁又极易转变成前列腺素B₁，这两种杂质又在光、氧化剂、氧、细菌等作用下进一步变质，不仅是疗效下降，更有杂质对人体不良反应。所以提高前列地尔质量，尤其是严格控制前列腺素A₁及前列腺素B₁杂质量，对医疗作用有重大意义。国外及《中国药典》2010版在其制剂注射用前列地尔质量标准中，规定含11α，15(S)-二羟基-9-羰基-13-反前列烯酸99.5％～105％(重量百分比或质量百分比，以下同)，规定杂质前列腺素A₁的量为1％以下，规定的前列地尔杂质中还有前列腺素B₁含量为0.5％，前列地尔原料药中还有其他杂质存在已及在制剂制造过程中还有产生上述三类杂质，可见规定前列地尔含量还是过低，所以本发明前列地尔质量标准规定前列地尔含量为99.95％～103.00％；

2.前列地尔原料药含量要达本发明上述所述质量标准要求，前列腺素A₁和前列腺素B₁(此两项又称为相关物质)及其他杂质含量应下降，所以本发明的前列地尔质量标准中：规定前列腺素A₁杂质量为0.3％，前列腺素B₁杂质量为0.2％，杂质总量为0.5％，标准高于现有药典指标；

3.此高含量又可称为高纯度的前列地尔，其【性状】项下，国外及《中国药典》2010版规定为“本品为白色针状结晶或结晶性粉末”，本发明的前列地尔质量标准规定改为“本品为白色晶亮结晶或晶亮结晶性粉末”；

4.在熔点项下，国外及《中国药典》规定的熔点范围过宽，本发明的前列地尔质量标准提高前列地尔熔点为116℃-118℃；

5.同样，此高含量又可称高纯度的前列地尔，其比旋度项下，国外及《中国药典》2010版规定范围宽而且其绝对值小，绝对值小者说明其旋光异构物质含量相对高，本发明的前列地尔质量标准提高为“取本品，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含10mg的溶液，依法测定(《中国药典》2010版附录VI E)，比旋度为-65°～70°”；

6.增加异常毒性测定项目，现有药典前列地尔原料药标准没有此项目规定，本发明增加此项目，在此项目不合格时，不得用于制备其制剂；

7.本发明研究发现，细菌作用下，前列地尔分子结构的支链可被氧化而变质，前列地尔原料药应在现有的药典基础上增加无菌项目；

8.在【检查】乙醇溶液的澄清度项下，由于国内前列地尔制备工艺是以动物体内酶作催化剂，以月见草籽油作起始原料半合成工艺，使用了抗氧剂氢醌，由于氢醌也是针状结晶，在精制结晶时和前列地尔有少量混合结晶，但在光照下，其易氧化成对苯二醌而显红色，其微量呈微红色可灵敏发现，所以应在此项下应增加有无氢醌检查项目；

9.对前列地尔原料药包装、贮运要求。国内外药典规定不详细，清楚，应详细规定。

依上所述，本发明公开新颖的、先进的、实用的前列地尔质量标准；

10.现有前列地尔冻干针剂，注射用前列地尔(前列地尔冻干针剂)质量标准，对标示量、鉴别、有关物质(杂质)、水分、细菌内毒素、含量、含量均匀度等项目的质量指标相对低下和不全面，该药品保持高质量带来高疗效和高安全性存在矛盾和差距，必须提高和增加质量项目和指标，本发明公开新颖的、先进的、实用的注射用前列地尔质量标准；

11.现有前列地尔用磷脂包封的乳剂注射液、乳剂冻干针剂质量标准更是低下和不完全，必须提高和补充完全。本发明公开新颖的、先进的、实用的注射用前列地尔脂质体质量标准；

发明内容

本发明是按以下发明技术方案实施的：

一.本发明的前列地尔质量标准是：

前列地尔

Qianliedi′el

Alprostadil

C₂₀H₃₄O₅ 354.48

本品为11α，15(S)-二羟基-9-羰基-13-反前列烯酸。按干燥品计算，含C₂₀H₃₄O₅应为99.95％～103.00％。

【性状】本品为白色晶亮针状结晶或晶亮结晶性粉末。

本品在乙醇中易溶，在水中微溶；在磷酸盐缓冲液(pH7.4～8.0)中溶解。

熔点  本品的熔点依(《中国药典》2010版附录VI C)测定，应为116℃～118℃。

比旋度  取本品，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含10mg的溶液，依法测定(《中国药典》2010版附录VI E)，比旋度为-65°～-70°。

【鉴别】(1)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致

(2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(中国药典委员会公布光谱集988图一致)。

【检查】乙醇溶液的澄清度取本品5mg，加乙醇5ml，振摇使溶解，依法检查(《中国药典》2010版附录VI B)溶液应无色澄清；溶液在300LX光照下放置2小时以上，溶液应无色澄请，不得转为微红色。

有关物质取本品适量，精密称定，加乙腈-水(9∶1)溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液作为供试品溶液；精密量取含量测定项下的对照品溶液，用乙腈-水(9∶1)稀释制成每1ml中约含10μg的溶液，作为前列地尔对照品溶液；另取前列腺素A₁和前列腺素B₁杂质对照品各适量，精密称定，分别加乙腈-水(9∶1)溶解稀释制成每1ml中各约含前列腺素A₁ 15μg与前列腺素B₁ 5μg的杂质对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)；以磷酸盐缓冲液(pH6.3{取磷酸二氢钾9.07g，加水1000ml使溶解，用无水磷酸氢二钠溶液(9.46g→1000ml)调节pH值至6.3，，临用前稀释10倍}-乙腈-甲醇(36∶11∶3)为流动相，流速为每分钟1.5ml；柱温40℃；检测波长为200mm。分别取前列地尔对照品溶液、前列腺素A₁和前列腺素B₁杂质对照品溶液各适量，按(1∶1∶1)比例混合，摇匀，作为系统适用性试验溶液。取25μl注入液相色谱仪，调整色谱系统，使前列地尔峰的保留时间约为11-13分钟，前列腺素A₁峰与前列腺素B₁峰的分离度应符合要求；同时调节检测灵敏度，使前列腺素B₁峰的高度约为满量程的10％。精密量取供试品溶液、前列腺素A₁、前列腺素B₁杂质对照品溶液，与前列地尔对照品溶液各25μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液的色谱图至主成分峰保留时间的4倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，前列腺素A₁和前列腺素B₁均按外标法计算，分别不得过0.3％和0.2％，；其它杂质以前列地尔对照品溶液中的前列地尔峰面积计算，单个最大杂质不得过0.3％；杂质总量不得过0.5％，(小于0.01％的色谱峰不计)。

干燥失重取本品0.2g，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，减失重量不得过1.0％，依(《中国药典》2010版附录VIII L)规定测定。

异常毒性  精密量取比旋度测定项下本品无水乙醇溶液1.0ml，加入到1％的2-羟丙基-β-环糊精的0.9％氯化钠注射液9ml中，摇匀溶解完全，制成每1ml中含0.1mg的溶液，依法检查(《中国药典》2010版附录IX C)，按静脉注射法给药，应符合规定。

无菌  取本品20mg，加经灭菌1％的2-羟丙基-β-环糊精的氯化钠注射液适量使溶解，依法检查(《中国药典》2010版附录XI H)，应符合规定。

含量测定  照高效液相色谱法(《中国药典》2010版附录V D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH 4.9)(40∶60)为流动相，检测波长为214nm。取有关物质项下的系统适应性试验溶液10μl，注入液相色谱仪，调整色谱系统，前列地尔峰与前列腺素A₁峰的分离度应大于3.0。

测定法  取本品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取前列地尔对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

【类别】前列腺素药。

【贮藏】西林瓶包装，丁基胶塞密封，避光，避氧及氧化剂，防潮、防震、防压；-15℃以下温度保存；运输可在包装中加冰块和干燥剂保护常温下运输，但不得超过3天，运到后-15℃贮存。

【制剂】注射用前列地尔。

利用发明人在先中国专利(专利号：00109233.2)可制备符合本发明的前列地尔质量标准的前列地尔原料药。

本发明的前列地尔质量标准与现行《中国药典》2010版前列地尔质量标准新颖性、先进性、实用性比较表；

二.本发明的注射用前列地尔质量标准是：

注射用前列地尔

Zhusheyong Qianliedi′er

Alprostadil for Innjiecton

本品为前列地尔与赋形剂低分子右旋糖酐-40、甘露醇制成的无菌冻干品。按平均含量计算，含前列地尔(C₂₀H₃₄O₅)应为标示量的95.0％～110.0％。

【性状】本品为白色疏松块状物或粉末。

【鉴别】(1)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

(2)用4ml注射用水，使本品溶解30分钟后，本品为非乳状液，液体透明且澄清，不呈现脂质体特有浅蓝色乳光，以此区别乳剂或脂质体冻干针剂。

【检查】溶液的澄清度  取本品1瓶，加0.9％氯化钠溶液溶解并制成每1ml中含前列地尔20μg的溶液，依法检查(《中国药典2010版附录IX B)，溶液应澄请。

前列腺素A₁  取本品5瓶，分别精密加入25％乙醇溶液2ml，振摇使内溶物溶解完全，作为供试品溶液。另取前列腺素A₁杂质对照品适量，精密称定，用25％乙醇溶液溶解并稀释制成每1ml中约含3μg的溶液作为杂质对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，精密量取供试品溶液与前列腺素A₁杂质对照品溶液各50μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，每支及平均值的前列腺素A₁含量不得过前列地尔的标示量的0.3％。

水分  取本品，照水分测定法(《中国药典》2010版附录VIII M第一法A)测定，含水分不得过0.5％。

含量均匀度  以含量测定项下分别测定的10瓶结果计算，限度为±15％，应符合规定(《中国药典》2010版附录X E)。

异常毒性  取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中合0.1mg的溶液，依法检查(《中国药典》2010版附录XI C)，按静脉注射法给药，应符合规定。

细菌内毒素  取本品，依法检查(《中国药典》2010版附录XI E)，每1μg前列地尔中含细菌内毒素的量应小于0.125EU。

无菌  取本品，加氯化钠注射液适量使溶解，依法检查(《中国药典》2010版附录XI H)，应符合规定。

溶血与凝聚  取本品，用5ml的0.9％氯化钠注射液或5ml的5％葡萄糖注射液溶解，制成供试品溶液。依法检查(《中国药典》2010版二部附录VI L)。

过敏反应  取本品，用5ml的0.9％氯化钠注射液或5ml的5％葡萄糖注射液溶解，制成供试品溶液。依法检查(《中国药典》2010版二部附录VI K)。

其他  应符合注射剂项下有关的各项规定(《中国药典》2010版附录I B)。

【含量测定】取本品10瓶，分别精密加入25％的乙醇溶液1ml，振摇使内溶物溶解完全，作为供试品溶液；另取前列地尔对照品适量，精密称定，用25％乙醇溶液溶解并稀释制成与供试品溶液溶度相当的溶液，作为对照品溶液。照前列地尔含量测定项下的色谱条件，取对照品溶液与有关物质项下的前列腺素A₁杂质对照品溶也各适量，按(1∶5)的比例混合，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，调整色谱系统，使前列地尔峰的保留时间约为11～13分钟，前列地尔峰与前列腺素A₁峰之间的分离度`应大于4.0。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积分别计算每瓶的含量及10瓶的平均含量，即得。

【模拟使用含量测定】取本品5瓶，分别精密加入0.9％氯化钠注射液溶液2ml，振摇使内溶物溶解完全，作为供试品溶液1；另取本品10瓶，分别精密加入5％或10％葡萄糖注射液溶液2ml，振摇使内溶物溶解完全，作为供试品溶液2；按含量测定项下，取40μl注入液相色谱仪，分别测定供试品1和2溶解后6小时的每瓶含量及5瓶的平均含量，应合格。

【类别】同前列地尔。

【规格】80μg 100μg

【贮藏】密封，避光，-15℃以下保存；运输可在外包装箱中冰块、干燥剂保护下常温运输、存放时间累计不超过7天，运到目的地后，在-15℃以下贮藏。

本发明的注射用前列地尔质量标准与现行《中国药典》2010版注射用前列地尔质量标准新颖性、先进性、实用性比较表：

三.本发明的注射用前列地尔脂质体质量标准是：

注射用前列地尔脂质体质量标准

本品为前列地尔(前列腺素E₁，PGE₁)与蛋黄卵磷脂制成的前列地尔脂质体冻干针剂。前列地尔(C₂₀H₃₄O₅)含量平均值应为标示量的95.0％～120.0％。

【性状】本品为白色或类白色疏松块状或粉末。

【鉴别】

1.用4ml注射用水，使本品溶解30分钟后，本品为非乳状液，液体透明但不澄清，并呈现脂质体特有浅蓝色乳光，为纳米粒脂质体分散于水中特征，以此区别乳剂或非脂质体冻干针剂。

2.在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间与前列地尔对照品溶液主峰的保留时间一致；

3.精密量取4ml注射用水溶解本品，溶解10分钟后，精密量取本品水溶液50μl进样，按含量测定项下色谱条件测定，前列地尔主峰面积小于含量测定项下前列地尔主峰面积而大于包封率测定项下的游离前列地尔主峰面积。

【检查】pH值  应为4.2.0～6.0(《中国药典》2010版二部附录VI H)。

形态观察  用扫描或透射电子显微镜观察，粒子应呈球形或类似球形。

粒度及粒度分布  照粒度及粒度分布测定法(《中国药典》2010版二部附录IV E)测定。用注射用水(通过0.22μm膜滤过)4ml溶解本品，再稀释5000倍，摇匀，作为供试液，用动态激光散射粒径测定法(见附1)测定，脂质体平均粒径为0.02～0.20μm，95％粒径累计值应小于0.2μm，无粒径大于0.25μm的粒子。

含量、含量均匀度及相关物质

测定前列地尔、前列腺素A₁含量的色谱条件：色谱柱用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)；乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.9)体积比40∶60混合液(混合后pH5.1)为流动相，检测波长为214nm；柱温30℃，流速为0.5ml/min，浓度为2.5μg～5.0μg/ml，进样量为50μl，停止时间为45分钟，前列地尔峰与前列腺素A₁峰的分离度大于4.0；

取前列地尔对照品适量，精密称定，用液温20℃以下的25％乙醇水溶液溶解并稀释制成每ml中含前列地尔10μg的溶液，作为前列地尔对照品溶液，备用；

另取前列腺素A₁杂质对照品适量，精密称定，用液温20℃以下的25％乙醇水溶液溶解并稀释制成每ml中含前列腺素A₁为1.5μg的溶液作为杂质的对照品溶液，备用；若无前列腺素A₁对照品时，可按《中国药典》2015版前列地尔相关物质项下测定规定：精密称定10mg左右前列地尔对照品，用流动相溶解，转入50ml容量瓶中，稀释至刻度，量取2.0ml溶液，加入0.1mol/L的氢氧化钠液1滴，摇匀，放置1小时，取10μl注入液相色谱仪，前列地尔峰与前列腺素A₁峰分离度应大于4，前列腺素A₁峰保留时间是前列地尔峰保留时间的2.2～2.7，同一质量的前列腺素A₁的峰面积是前列地尔的7.28倍。

分别取本品5瓶，精密加入用液温20℃以下的25％乙醇水溶液4.0ml，间隔性地进行振摇-静置10min，至使内溶物溶解完全并使脂质体载药微粒水化成均匀半透明带浅蓝色乳光溶液，立即作为供试品溶液测定含量；

分别取前列地尔对照品溶液、前列腺素A₁对照品溶液各适量，按(1∶1)比例混合，摇匀，作为系统适用性试验溶液，取20μl注入液相色谱仪，调整色谱系统，使前列地尔峰的保留时间为11-13分钟，前列地尔峰与前列腺素A₁峰(按中国药典2005版规定其峰保留时间为前列地尔峰保留时间的2.2-2.7倍)的分离度应大于4.0。

分别精密量取供试品溶液50μl、前列地尔对照品液20μl、前列腺素A₁对照品液20μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液的色谱图至前列地尔峰保留时间的4倍以上。按外标法以峰面积分别计算每瓶的含量及10瓶的平均含量和含量均匀度。按平均计算，含前列地尔应为标示量的95.0％～115.0％；含量均匀度限度为±20％；

供试品溶液的色谱图中前列腺素A₁峰，按外标法计算；或供试品前列腺素A₁峰面积平均值÷7.28÷供试品前列地尔峰面积平均值×100％。

每瓶和平均值前列腺素A₁％不得过5％。

模拟使用含量  取本品3瓶，分别用室温25％乙醇溶液溶解后，在300LX光照下，分别放置120分钟，依含量测定法，分别测定放置120分钟并在光照下含量，每瓶含前列地尔应为标示量的85％～110％。

包封率

色谱条件同含量及相关物质测定。

供试品溶液的配制：取本品4瓶，分别精密量取温度＜10℃的4ml0.9％氯化钠注射液溶解，立即同时置于4ml离心超滤管(10k)中，温度低于20℃下，转速大于3500r/min，离心10min，照前列地尔含量测定下的色谱条件，进样50μl，分别测定游离的前列地尔峰面积。

包封率计算：包封率％＝[1-B/(A+B)]×100％

A：前列地尔含量测定的峰面积；

B：游离的前列地尔的峰面积。

单瓶和平均包封率≥95％。

模拟使用包封率和渗漏率即体外突释率照包封率测定项下，测定样品溶解和离心时间共为120分钟的包封率。

渗漏率＝(包封率-样品溶解120分钟的包封率)

渗漏率即体外突释率＜10％

磷脂氧化指数取本品5瓶，分别用4ml无水乙醇溶解，取上层清液，分别测定在波长233nm及215nm的吸光度，由下式计算每瓶磷脂氧化指数值及平均值：

磷脂氧化指数＝A_233nm/A_215nm

磷脂氧化指数≤2.0。

溶血与凝聚  取本品，用5ml的0.9％氯化钠注射液或5ml的5％葡萄糖注射液溶解，制成供试品溶液。依法检查(《中国药典》2010版二部附录VIL)。

过敏反应  取本品，用5ml的0.9％氯化钠注射液或5ml的5％葡萄糖注射液溶解，制成供试品溶液。依法检查(《中国药典》2010版二部附录VIK)。

细菌内毒素  取本品，依法检查(《中国药典》2010版二部附录XI E)，每瓶中含内毒素的量应小于25EU。

异常毒性  取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中合2.5μg的溶液，依法检查(《中国药典》2010版附录XI C)，按尾静脉注射法给药，应符合规定。

无菌  取本品，加0.9％氯化钠注射液5ml使溶解，依法检查(《中国药典》2010版二部附录XI H)，应符合规定。

其他  除溶液的澄清度不检查外，应符合注射剂项下各项规定(《中国药典》2010版二部附录I B)。

本发明的注射用前列地尔脂质体质量标准与现行国家标准前列地尔脂微球注射液质量标准新颖性、先进性、实用性比较表：

具体实施方式

利用发明人在先中国专利《前列地尔组合药物及其制备质量控制和用途》(专利号：201110147864.2)中实施例制备前列地尔组合药物并以本发明的注射用前列地尔质量标准进行质量控制和药效学验证试验：

具体实施方式

实施例1：

本发明一种前列地尔组合药物的各组份原料的重量比如下：

(1)高纯度前列地尔  符合本发明的前列地尔质量标准   0.77

(2)赖氨匹林∶水杨酸钠

重量比为90-95∶5-10混合物                         210

(3)右旋糖酐40与2-羟丙基-β-环糊精

重量比12-18∶1混合物混合物         500

(4)二巯丁二钠                      2.00

(5)喷替酸                          10

(6)针剂用活性炭(已活化)            50

(7)0.05M磷酸盐缓冲液pH值5.0-7.5    8000

操作过程及工艺条件：

(1)西林瓶理瓶、清洗、灭菌

将5ml西林瓶由传递柜经紫外灯灭菌后运入理瓶室，在理瓶室进行理瓶，把理好的西林瓶放到洗瓶室的固定位置；把GMSU-400W隧道式灭菌烘箱后面的排风口挡板开至一半，启动电加热按钮，预热区、高温区、冷却区温度开始逐渐上升；当烘箱内预热区温度达到250℃、高温区温度达到预置温度350℃、冷却区温度达到220℃，洗瓶机即可投入生产。PCX-IV型洗瓶机用热纯化水，XCQ-VI型洗瓶机用注射用水，启动PLC程控器，完成粗洗、精洗的全部过程，取精洗后的西林瓶，检测西林瓶是否洗净、有无可见异物；烘箱在运行过程中，温度保持在350±5℃；西林瓶洗净后至灭菌放置时间不超过4小时，西林瓶灭菌后至使用放置时间不超过16小时；

(2)胶塞清洗、灭菌

将装5ml胶塞小盒打开，将盒内的合格证取出，并剔除不合格胶塞之后，将胶塞装入料桶中；纯化水、注射用水压力0.1-0.2MPa，真空压力-0.06MPa以下，压缩空气0.4-0.6MPa，纯蒸汽0.2MPa以上。真空进料，待所有胶塞被吸入后，盖上“加料、取样口盖”；纯化水喷淋粗洗10分钟，超声波漂洗15分钟，注射用水精洗25分钟，取样进行可见异物检测，如检测不合格，则点动“重新精洗”按钮，继续自动精洗全过程；加入二甲硅油，二甲硅油加入量为10ml，温度上升至加热温度85℃后，硅化10分钟，冲洗时间5分钟；当灭菌温度逐渐上升到设置的123℃后，灭菌开始计时，灭菌时间30分钟；真空干燥8分钟，当烘干温度逐渐上升至105℃后，热风干燥10分钟，再真空干燥5分钟，当逐步降温冷却至60℃后，出料；胶塞灭菌后至使用放置时间不超过16小时；

(3)铝塑盖清洗、轧盖

将5ml铝塑盖拿到铝盖清洗间，先剔除不合格的铝盖，将合格铝塑盖放入清洗槽中，用热纯化水进行清洗；将已清洗的铝塑盖平铺于盘中放入JRSH型净化热风循环烘箱，于110℃，干燥灭菌3小时后放置备用，其灭菌后至使用放置时间不超过16小时；

(4)配液

活性炭和右旋糖酐40与2-羟丙基-β-环糊精重量比12-18∶1混合物的处理：

将针剂用活性炭放入1000ml烧杯中，在烘箱中于180℃温度下保温2.5小时除菌、除热原、除水，降温至室温并密封备用；

按配方量称取右旋糖酐40与2-羟丙基-β-环糊精重量比12-18∶1混合物重量，加入注射注射用水配成右旋糖酐6％(w/w)的溶液，搅拌溶解，按右旋糖酐40与2-羟丙基-β-环糊精重量比12-18∶1混合物重量加入10％(w％w)活性炭，加入赖氨匹林和水杨酸钠，不需搅拌，于121℃灭菌15分钟，下步配料用需用的磷酸盐缓冲液或注射用水也一同灭菌；冷却至60±5℃，趁热用0.22μm滤膜的滤芯过滤，滤器、滤筒、管件、滤芯应在滤前放在注射用水中同右旋糖酐40一起灭菌、过滤后，滤液密封，冷却20℃±2℃；

(5)将灭菌和滤过后的20℃±2℃右旋糖酐40与2-羟丙基-β-环糊精重量比12-18∶1混合物溶液放入料桶中，加入灭菌磷酸盐缓冲液，调至辅料液重量等于配方中磷酸盐缓冲液、右旋糖酐40与2-羟丙基-β-环糊精重量比12-18∶1混合物、赖氨匹林和水杨酸钠四者重量之和(调药液体积受温度波动误差较大，调药液重量只要车间在地球上地址不变，温度不同重量不变，批与批间含量均匀度好)，搅拌均匀，先用8％的氢氧化钠溶液调溶液pH值至8.5-8.6，用0.22μm膜滤芯过滤，除去辅料、活性炭带入辅料液中的金属离子沉淀物、不溶性粒子，尤其是三价铁离子沉淀物；滤过后的辅料液再用8％盐酸溶液调pH值5.4-5.5，分别在搅拌下加入喷替酸，加入配方量的二巯丁二钠或亚硫酸氢钠，分别搅拌溶解完全，再用8％盐酸溶液调pH值至5.0-5.2；

(6)称量配方用量前列地尔原料药，用1∶80(w/v)药用注射剂级无水乙醇将其溶解后，搅拌下滴加加入至上述药液中，搅拌均匀，溶解完全；将COMPACT-200型过滤器串连安装好，用0.22μm滤芯进行除菌过滤，滤过完毕，送样检测前列地尔中间产品含量，前列地尔加入无水乙醇后至检测完毕的配液的时间不能超过1.5小时；

(7)灌装、半加塞

生产前将硅胶灌液管、灌液针用配制好的2％NaOH溶液浸泡30分钟后用注射用水冲洗干净，然后用灭菌袋包好，放入湿热灭菌柜中于121℃灭菌30分钟；规定装量：80μg为1.2ml/支、100μg/支规格的为1.20ml/支，200μg/支规格的为2.4ml，正式灌装前调好灌装体积(称重法)，灌装过程中每10分钟测定一次装量差异；灌装好的西林瓶经过机器自动半加塞后进入平盘内；将平盘沿百级通道送入冻干机组的冻干箱内；整个灌装时间不能超过4小时；

(8)冻干

灌装好的西林瓶都进入冻干箱内，开冷冻干燥机冷冻，当制品温度达到预冻温度-35℃以下，保温时间达到2小时，对捕水器进行预冷，待到“捕水器”温度达到-50℃，维持30分钟。对系统抽真空，当冷冻干燥箱内真空度达到10Pa以下时，开始升华，升华过程中，每1小时隔板升温2℃，升温至36℃，并保持系统真空度不高于20Pa；当制品温度达到36℃且冷冻干燥箱内达到极限真空(小于2.0Pa)6小时后，水分残留小于1％，升华结束。真空下压塞，使西林瓶内药物及辅料在真空状态下，不被氧气，不被水分、细菌破坏，冻干周期20-26小时；

(9)轧盖

打开冷冻干燥箱门(此时冻干箱内压与外压一致)，从冷冻干燥箱中取出已压塞的注射用前列地尔中间产品，放入传递柜中，关闭传递柜门，打开轧盖室内的传递柜门，取出注射用前列地尔中间产品。把铝塑盖加入料斗里，将前列地尔冻干中间产品装满送瓶盘，铝塑盖充满轨道，开始轧盖；轧盖过程中每5分钟检查一次轧盖是否轧紧，制得前列地尔组合药物的冻干针剂。

实施例2：

本发明一种前列地尔组合药物的各组份原料的重量比如下：

(1)高纯度前列地尔符合本发明的前列地尔质量标准                2.31

(2)赖氨匹林∶水杨酸钠

重量比为90-95∶5-10混合物                                    300

(3)右旋糖酐40与2-羟丙基-β-环糊精

重量比12-18∶1混合物混合物                                   580

(4)二巯丁二钠                                                3.00

(5)喷替酸                                                    15

(6)针剂用活性炭(已活化)                                      60

(7)0.05M磷酸盐缓冲液pH值5.0-7.5                              9000

本发明提供所述前列地尔组合药物的制备方法同实施例1。

实施例3：

本发明一种前列地尔组合药物的各组份原料的重量比如下：

(1)高纯度前列地尔符合本发明的前列地尔质量标准                1.96

(2)赖氨匹林∶水杨酸钠

重量比为90-95∶5-10混合物                                    265

(1)右旋糖酐40与2-羟丙基-β-环糊精

重量比12-18∶1混合物混合物                                   530

(4)二巯丁二钠                                                2.50

(5)喷替酸                                        12

(6)针剂用活性炭(已活化)                          55

(7)0.05M磷酸盐缓冲液pH值5.0-7.5                  8600

本发明提供所述前列地尔组合药物的制备方法同实施例1。

实施例4：

本发明一种前列地尔组合药物的各组份原料的重量比如下：

(1)高纯度前列地尔符合本发明的前列地尔质量标准    0.77

(2)赖氨匹林∶水杨酸钠

重量比为90-95∶5-10混合物                        300

(3)右旋糖酐40与2-羟丙基-β-环糊精

重量比12-18∶1混合物混合物                       500

(4)二巯丁二钠                                    3.00

(5)喷替酸                                        10

(6)针剂用活性炭(已活化)                          60

(7)0.05M磷酸盐缓冲液pH5.0-7.5                    8000

本发明提供所述前列地尔组合药物的制备方法同实施例1。

实施例5：

本发明一种前列地尔组合药物的各组份原料的重量比如下：

(1)高纯度前列地尔符合本发明的前列地尔质量标准    2.31

(2)赖氨匹林∶水杨酸钠

重量比为90-95∶5-10混合物                        210

(1)右旋糖酐40与2-羟丙基-β-环糊精

重量比12-18∶1混合物混合物                       580

(4)二巯丁二钠                                    2.00

(5)喷替酸                                        15

(6)针剂用活性炭(已活化)                          50

(7)0.05M磷酸盐缓冲液pH值5.0-7.5                  9000

本发明提供所述前列地尔组合药物的制备方法同实施例1。

实施例1-5例产品检验报告总结

质量验证性试验：

(一)本发明的前列地尔组合药物不含前列腺素A₁和不含前列腺素B₁的验证试验(按中国药典2010版规定的前列地尔原料药及制剂检验规定)：

同时测定前列地尔、前列腺素A₁和前列腺素B₁三者含量的色谱条件：色谱柱用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)；乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.9)体积比40∶60混合液(混合后pH5.1)为流动相，检测波长为214nm；柱温30-35℃，流速为0.5ml/min，或1.0ml/min，进样量为20μl，或10μl，前列地尔峰与前列腺素A₁峰的分离度大于4.0；

取前列地尔对照品适量，精密称定，用入25％乙醇水溶液溶解并稀释制成每ml中含前列地尔100μg的溶液，作为前列地尔对照品溶液，备用；

另取前列腺素A₁杂质对照品适量，精密称定，用25％乙醇水溶液溶解并稀释制成每ml中含前列腺素A₁为15μg的溶液作为杂质的对照品溶液，备用；

另取前列腺素B₁杂质对照品适量，精密称定，用25％乙醇水溶液溶解并稀释制成每ml中含前列腺素B₁为5μg的溶液作为杂质的对照品溶液，备用；

取本发明的前列地尔组合药物冻干针剂(100μg/支规格)10支，分别精密加入25％乙醇水溶液1.00ml，振摇，使内溶物溶解完全，作为供试品溶液备用；

分别取前列地尔对照品溶液、前列腺素A₁和前列腺素B₁杂质对照品溶液各适量，按(1∶1∶1)比例混合，摇匀，作为系统适用性试验溶液，取20μl注入液相色谱仪，调整色谱系统，使前列地尔峰的保留时间为11-13分钟，前列腺素A₁峰(按中国药典2005版规定其峰保留时间为前列地尔峰保留时间的2.2-2.7倍)与前列腺素B₁峰(因为前列腺素B₁比前列腺素A₁多一个共轭双键，所以其峰保留试间在前列腺素A₁之后)的分离度应大于4.0；同时调节检测灵敏度，使前列腺素B₁峰的高度药为满量程的10％。

分别精密量取供试品溶液、前列腺素A₁、前列腺素B₁杂质对照品液与前列地尔对照品液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液的色谱图至前列地尔峰保留时间的4倍以上。按外标法以峰面积分别计算每瓶的含量及10瓶的平均含量，即得；按平均计算，含前列地尔应为标示量(100μg/支)的90％-110.0％；供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，前列腺素A₁和前列腺素B₁均按外标法计算，分别不得过1.0％和0.3％；其他杂质以前列地尔对照品溶液中的前列地尔峰面积计算，单个最大杂质不得过1.0％；杂质总量不得过2.0％(小于0.1％的色谱峰不计)。

前列地尔峰保留时间为11.220min，在图谱上前列腺素A₁和前列腺素B₁含量在0.01％以下，因为在前列地尔峰后面无这两个杂质的峰，在前列地尔峰前面的三个峰为本发明的前列地尔组合药物辅料的特征峰。在三个辅料的特征峰前面的峰为溶剂和辅料重叠峰。

把流速改为1.0ml/min，进样量为10μl，其他色谱条件及操作参数不变，则前列地尔峰的保留时间为5-6分钟。前列地尔对照品(220.03984μg/ml浓度)前列地尔峰保留时间为5.887min，在图谱上前列腺素A₁和前列腺素B₁含量在0.01％以下，因为在前列地尔峰后面无这两个杂质的峰，在前列地尔峰前面的三个峰为本发明的前列地尔组合药物辅料的特征峰。在三个辅料的特征峰前面的峰为溶剂和辅料重叠峰。

流速为0.5ml/min时，前列地尔峰保留时间为11.220min，前列腺素A₁和前列腺素B₁含量在0.01％以下，在前列地尔峰后面无这两个杂质的峰，在前列地尔峰前面的三个峰是本发明的前列地尔组合药物辅料的特征峰，这三个特征峰的保留时间分别为：5.396min，7.248min，8.297min，这三个辅料的特征峰前面的峰为溶剂和辅料重叠峰；

把流速改为1.0ml/min，进样量为10μl，其他色谱条件及操作参数不变，前列地尔峰保留时间为5.887min，前列腺素A₁和前列腺素B₁含量在0.01％以下，在前列地尔峰后面无这两个杂质的峰，在前列地尔峰前面的三个峰为本发明的前列地尔组合药物辅料的特征峰，这三个辅料的特征峰的保留时间分别为：2.735min，3.765min，4.319min，三个辅料的特征峰前面峰为溶剂和辅料重叠峰；

需要说明的是，由于国内买不到前列腺素A₁和前列腺素B₁的对照品，需高价进口(3700元/mg)，所以中国药典2005版规定用前列地尔溶液制备前列腺素A₁方法，2005半药典及2010版药典对前列地尔制剂中前列腺素B₁的杂质量没有规定。

再利用发明人在先中国专利《前列地尔脂质体组合药物及工业制备和质量控制和用途》，专利号(201110212140.1)实施例进行验证注射用前列地尔脂质体质量标准：

实施例6：

本发明一种前列地尔脂质体组合药物的各组份原料的重量比如下：

(1)高纯度前列地尔符合本发明的前列地尔质量标准                    0.10

(2)赖氨匹林∶水杨酸钠重量比为85-95∶5-15混合物                   280

(3)亚硫酸氢钠和二巯丁二钠混合物                                  2.0

(4)甘露醇与低分子右旋糖酐-40

重量比1∶1.2-1.5混合物                                           1400

(5)0.015M磷酸盐缓冲液pH值4.0-6.5                                 14000

(6)蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂                                        20

(7)胆固醇                                                        4

(8)依地酸二钠盐                                                  8

前列地尔脂质体组合药物的制备步骤和方法：

操作过程及工艺条件：

(1)西林瓶理瓶、清洗、灭菌

将5ml西林瓶由传递柜经紫外灯灭菌后运入理瓶室，在理瓶室进行理瓶，把理好的西林瓶放到洗瓶室的固定位置；把GMSU-400W隧道式灭菌烘箱后面出现的排风口挡板开至一半，启动电加热按钮，预热区、高温区、冷却区温度开始逐渐上升；当烘箱内预热区温度达到250℃、高温区温度达到预置温度350℃、冷却区温度达到220℃，洗瓶机即可投入生产。PCX-IV型洗瓶机用热纯化水，XCQ-VI型洗瓶机用注射用水，启动PLC程控器，完成粗洗、精洗的全部过程，取精洗后的西林瓶，检测西林瓶是否洗净、有无可见异物；烘箱在运行过程中，温度保持在350±5℃；西林瓶洗净后至灭菌放置时间不超过4小时，西林瓶灭菌后至使用放置时间不超过16小时；

(2)胶塞清洗、灭菌

将装5ml胶塞小盒打开，将盒内的合格证取出，并剔除不合格胶塞之后，将胶塞装入料桶中；纯化水、注射用水压力0.1-0.2MPa，真空压力-0.06MPa以下，压缩空气0.4-0.6MPa，纯蒸汽0.2MPa以上。真空进料，待所有胶塞被吸入后，盖上“加料、取样口盖”；纯化水喷淋粗洗10分钟，超声波漂洗15分钟，注射用水精洗25分钟，取样进行可见异物检测，如检测不合格，则点动“重新精洗”按钮，继续自动精洗全过程；加入二甲硅油，二甲硅油加入量为10ml，温度上升至加热温度85℃后，硅化10分钟，冲洗时间5分钟；当灭菌温度逐渐上升到设置的123℃后，灭菌开始计时，灭菌时间30分钟；真空干燥8分钟，当烘干温度逐渐上升至105℃后，热风干燥10分钟，再真空干燥5分钟，当逐步降温冷却至60℃后，出料；胶塞灭菌后至使用放置时间不超过16小时；

(3)铝塑盖清洗、轧盖

将5ml铝塑盖拿到铝盖清洗间，先剔除不合格的铝盖，将合格铝塑盖放入清洗槽中，用热纯化水进行清洗；将已清洗的铝塑盖平铺于盘中放入JRSH型净化热风循环烘箱，于110℃，干燥灭菌3小时后放置备用，其灭菌后至使用放置时间不超过16小时；

(4)配液

活性炭和右旋糖酐40与甘露醇混合物的处理：

将针剂用活性炭放入1000ml烧杯中，在烘箱中于180℃温度下保温2.5小时除菌、除热原、除水，降温至室温并密封备用；

按配方量称取右旋糖酐40与甘露醇混合物重量，加入磷酸盐缓冲液，搅拌溶解，按右旋糖酐40重量加入10％(w％w)活性炭，加入赖氨匹林和水杨酸钠，不需搅拌，于121℃灭菌15分钟，下步配料用需用的磷酸盐缓冲液或注射用水也一同灭菌；冷却至60±5℃，趁热用0.22μm滤膜的滤芯过滤，滤器、滤筒、管件、滤芯应在滤前放在注射用水中灭菌后才可使用；过滤后，滤液密封，冷却20℃±2℃，制得辅料液；

(5)将灭菌和滤过后的20℃±2℃辅料液放入316L不锈钢料桶中，加入灭菌磷酸盐缓冲液，调至辅料液重量等于配方中磷酸盐缓冲液、右旋糖酐40与甘露醇混合物、赖氨匹林和水杨酸钠混合物三者重量之和(调药液体积受温度波动误差较大，调药液重量只要车间在地球上地址不变，温度不同重量不变，批与批间含量均匀度好)，搅拌均匀，先用8％的氢氧化钠溶液调溶液pH值至6.5-7.0，用0.22μm膜滤芯过滤，除去辅料、活性炭带入辅料液中的金属离子沉淀物、不溶性粒子，尤其是三价铁离子沉淀物；滤过后的辅料液再用8％盐酸溶液调pH值4.5-5.5，分别在搅拌下加入依地酸二钠盐，加入配方量的二巯丁二钠或亚硫酸氢钠，分别搅拌溶解完全，待下步制备用；

(6)将蛋黄卵磷脂溶解于无水乙醇中，蛋黄卵磷脂∶无水乙醇比为1∶100(W/V)；在700-1000转/分搅拌转速中，将蛋黄磷脂乙醇液在30分钟内滴加在(5)步制得的辅料液中，用40Hz频率(在常温下)超声波超声至空白脂质体粒子粒径经检测无大于0.2微米空白脂质体粒子止，制得空白脂质体分散液；称量配方用量前列地尔原料药，用1∶80(w/v)药用注射剂级无水乙醇将其溶解后，30分钟内搅拌下滴加加入至上述空白脂质体分散液中，搅拌均匀，溶解完全；将胆固醇溶于无水乙醇中，胆固醇重量∶无水乙醇体积为1∶80，将胆固醇乙醇溶液在700-1000转/分搅拌转速中，30分钟内滴加前列地尔脂质体分散液中，滴加完后，再常温搅拌孵化40分钟；到将COMPACT-200型过滤器串连安装好，用0.22μm滤芯进行除菌过滤，滤过完毕，送样检测前列地尔中间产品含量，前列地尔加入无水乙醇后至检测完毕的配液的时间不能超过2.5小时；

(7)灌装、半加塞

生产前将硅胶灌液管、灌液针用配制好的2％NaOH溶液浸泡30分钟后用注射用水冲洗干净，然后用灭菌袋包好，放入湿热灭菌柜中于121℃灭菌30分钟；按药剂学允许的前列地尔剂量，确定灌装量，正式灌装前调好灌装体积(称重法)，灌装过程中每10分钟测定一次装量差异；灌装好药液的西林瓶经过机器自动半加塞后进入316L不锈钢托盘内；将316L不锈钢托盘沿百级通道送入冻干机组的冻干箱内；整个灌装时间不能超过4小时；

(8)冻干

灌装好药液的西林瓶都进入冻干箱内，开冷冻干燥机冷冻，当制品温度达到预冻温度-35℃以下，保温时间达到2小时，对捕水器进行预冷，待到“捕水器”温度达到-50℃，维持30分钟。系统抽真空，冷冻干燥箱内真空度达到10Pa以下时，开始升华，升华过程中，每1小时隔板升温2℃，升温至36℃，并保持系统真空度不高于20Pa；当制品温度达到36℃且冷冻干燥箱内达到极限真空(小于2.0Pa)6小时后，水分残留小于1％，升华结束。真空下压塞，使西林瓶内药物及辅料在真空状态下，不被氧气，不被水分、细菌破坏，冻干周期20-26小时；

(9)轧盖

打开冷冻干燥箱门(此时冻干箱内压与外压一致)，从冷冻干燥箱中取出已压塞的注射用前列地尔中间产品，放入传递柜中，关闭传递柜门，打开轧盖室内的传递柜门，取出注射用前列地尔中间产品。把铝塑盖加入料斗里，将前列地尔冻干中间产品装满送瓶盘，铝塑盖充满轨道，开始轧盖；轧盖过程中每5分钟检查一次轧盖是否轧紧，制得前列地尔脂质体组合药物的冻干针剂；

(10)取(6)步制得的药液分装到316L不锈钢托盘中，放入冷冻干燥箱中冷冻干燥，达水分残留小于1％后出箱，将冷冻干燥固体无菌粉碎至60-80目，再按常法，配加其它辅料或溶液，按药剂学允许的前列地尔脂质体组合药物的剂量，按常法操作可制成前列地尔脂质体组合药物的口服制剂，或喷雾剂，或拴剂、或灌肠剂。

实施例7：

本发明一种前列地尔脂质体组合药物的各组份原料的重量比如下：

(1)高纯度前列地尔符合本发明的前列地尔质量标准                    0.27

(2)赖氨匹林∶水杨酸钠重量比为85-95∶5-15混合物                   350

(3)亚硫酸氢钠和二巯丁二钠混合物                                  4.0

(4)甘露醇与低分子右旋糖酐-40

重量比1∶1.2-1.5混合物                                           1600

(5)0.015M磷酸盐缓冲液pH值4.0-6.5                                 15000

(6)蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂                                        40

(7)胆固醇                                                        10

(8)依地酸二钠盐                                                  10

前列地尔脂质体组合药物的制备步骤和方法同例6。

实施例8：

本发明一种前列地尔脂质体组合药物的各组份原料的重量比如下：

(1)高纯度前列地尔符合本发明的前列地尔质量标准                    0.18

(2)赖氨匹林∶水杨酸钠重量比为85-95∶5-15混合物                   310

(3)亚硫酸氢钠和二巯丁二钠混合物                                  2.9

(4)甘露醇与低分子右旋糖酐-40

重量比1∶1.2-1.5混合物                                           1560

(5)0.015M磷酸盐缓冲液pH值4.0-6.5                                 14900

(6)蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂                                        36

(7)胆固醇                                                        6

(8)依地酸二钠盐                                                  9

前列地尔脂质体组合药物的制备步骤和方法同例6。

实施例9：

本发明一种前列地尔脂质体组合药物的各组份原料的重量比如下：

(1)高纯度前列地尔符合本发明的前列地尔质量标准                    0.10

(2)赖氨匹林∶水杨酸钠重量比为85-95∶5-15混合物                   350

(3)亚硫酸氢钠和二巯丁二钠混合物                                  2.0

(4)甘露醇与低分子右旋糖酐-40

重量比1∶1.2-1.5混合物                                           1600

(5)0.015M磷酸盐缓冲液pH值4.0-6.5                    14000

(6)蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂                           40

(7)胆固醇                                           4

(8)依地酸二钠盐                                     10

前列地尔脂质体组合药物的制备步骤和方法同例6。

实施例10

本发明一种前列地尔脂质体组合药物的各组份原料的重量比如下：

(1)高纯度前列地尔符合本发明的前列地尔质量标准       0.27

(2)赖氨匹林∶水杨酸钠重量比为85-95∶5-15混合物      280

(3)亚硫酸氢钠和二巯丁二钠混合物                     4.0

(4)甘露醇与低分子右旋糖酐-40

重量比1∶1.2-1.5混合物                              1400

(5)0.015M磷酸盐缓冲液pH值4.0-6.5                    15000

(6)蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂                           20

(7)胆固醇                                           10

(8)依地酸二钠盐                                     8

前列地尔脂质体组合药物的制备步骤和方法同例6

实施例1-10例质量检验结果总结：

质量验证性试验：

(一)本发明的前列地尔脂质体组合药物不含前列腺素A₁和不含前列腺素B₁的验证试验(按中国药典2010版规定的前列地尔原料药及制剂检验规定)：

同时测定前列地尔、前列腺素A₁和前列腺素B₁三者含量的色谱条件：色谱柱用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)；乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.9)体积比40∶60混合液(混合后pH5.1)为流动相，检测波长为214nm；柱温30-35℃，流速为0.5ml/min，或1.0ml/min，前列地尔脂质体组合药物供试品进样量为40μl，对照品进样量为20μl，或10μl，前列地尔峰与前列腺素A₁峰的分离度大于4.0；

取前列地尔对照品适量，精密称定，用入25％乙醇水溶液溶解并稀释制成每ml中含前列地尔100μg的溶液，作为前列地尔对照品溶液，备用；

另取前列腺素A₁杂质对照品适量，精密称定，用25％乙醇水溶液溶解并稀释制成每ml中含前列腺素A₁为15μg的溶液作为杂质的对照品溶液，备用；

另取前列腺素B₁杂质对照品适量，精密称定，用25％乙醇水溶液溶解并稀释制成每ml中含前列腺素B₁为5μg的溶液作为杂质的对照品溶液，备用；

取本发明前列地尔脂质体组合药物冻干针剂(10μg/支)10支，分别精密加入25％乙醇水溶液1.00ml，振摇，使内溶物溶解完全，作为供试品溶液备用；

分别取前列地尔对照品溶液、前列腺素A₁和前列腺素B₁杂质对照品溶液各适量，按(1∶1∶1)比例混合，摇匀，作为系统适用性试验溶液，取20μl注入液相色谱仪，调整色谱系统，使前列地尔峰的保留时间为11-13分钟，前列腺素A₁峰(按中国药典2005版规定其峰保留时间为前列地尔峰保留时间的2.2-2.7倍)与前列腺素B₁峰(因为前列腺素B₁比前列腺素A₁多一个共轭双键，所以其峰保留试间在前列腺素A₁之后)的分离度应大于4.0；同时调节检测灵敏度，使前列腺素B₁峰的高度药为满量程的10％。

精密量取前列地尔脂质体组合药物供试品溶液40μl、前列腺素A₁、前列腺素B₁杂质对照品液与前列地尔对照品液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液的色谱图至前列地尔峰保留时间的4倍以上。按外标法以峰面积分别计算每瓶的含量及10瓶的平均含量，即得；按平均计算，含前列地尔应为标示量(10μg/支)的90％-110.0％；供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，前列腺素A₁和前列腺素B₁均按外标法计算，分别不得过1.0％和0.3％；其他杂质以前列地尔对照品溶液中的前列地尔峰面积计算，单个最大杂质不得过1.0％；杂质总量不得过2.0％(小于0.1％的色谱峰不计)。

前列地尔脂质体组合药物供试品中，前列地尔峰保留时间为11.220min，在图谱上前列腺素A₁和前列腺素B₁含量在0.01％以下，因此在前列地尔保留峰后面无这两个杂质的保留峰出现，在前列地尔保留峰前面出现的三个保留峰和前列地尔后面出现又有的三个保留峰为本发明的前列地尔脂质体组合药物辅料的特征保留峰。在前列地尔前面出现的三个辅料的特征保留峰前面出现的保留峰为溶剂和辅料重叠峰。

把流速改为1.0ml/min，前列地尔脂质体组合药物供试品进样量为40μl，其他色谱条件及操作参数不变，则前列地尔峰的保留时间为5-6分钟。前列地尔对照品(220.03984μg/ml浓度)前列地尔峰保留时间为5.887min，在图谱上前列腺素A₁和前列腺素B₁含量在0.01％以下，因此在前列地尔保留峰后面无这两个杂质的保留峰出现，在前列地尔峰前面出现的三个保留峰和前列地尔后面出现又有的三个保留峰为本发明的前列地尔脂质体组合药物辅料的特征保留峰。在前列地尔前面出现三个辅料的特征保留峰之前面出现峰为溶剂和辅料重叠保留峰。

流速为0.5ml/min时，前列地尔脂质体组合药物供试品中的前列地尔峰保留时间为11.220min，前列腺素A₁和前列腺素B₁含量在0.01％以下，在前列地尔保留峰后面无这两个杂质的保留峰，在前列地尔保留峰峰前面出现的三个保留峰是本发明的前列地尔脂质体组合药物辅料的特征保留峰，这六个特征保留峰的保留时间分别为：5.396min，7.248min，8.297min，13.698min，15.197min，22.319min；在前列地尔保留峰前面出现的三个辅料的特征保留峰之前面出现的保留峰为溶剂和辅料重叠峰；需要说明的是，上述峰保留时间出现，由于种种原因，允许0.5-1.0min偏差。

把流速改为1.0ml/min，前列地尔脂质体组合药物供试品进样量为40μl，其他色谱条件及操作参数不变，前列地尔峰保留时间为5.887min，前列腺素A₁和前列腺素B₁含量在0.01％以下，在前列地尔保留峰后面无这两个杂质的保留峰，在前列地尔保留峰前面出现的三个峰为本发明的前列地尔脂质体组合药物辅料的特征保留峰，这六个辅料的特征保留峰的保留时间分别为：2.735min，3.765min，4.319min，6.988min，7.612min，11.158min在前列地尔保留峰前面出现的三个辅料的特征保留峰之前面出现的峰为溶剂和辅料重叠保留峰；需要说明的是，上述峰保留时间出现，由于种种原因，允许0.5-1.0min偏差。

需要说明的是，前面所述前列地尔脂质体组合药物辅料的特征保留峰是指本发明中配方中的混合辅料在经过灭菌、磷脂包封、孵化、过滤、冷冻干燥等工艺后的混合辅料特征保留峰。

需要说明的是，由于当时国内买不到前列腺素A₁和前列腺素B₁的对照品，需高价进口(3700元/mg)，所以中国药典2005版规定用前列地尔溶液制备前列腺素A₁方法，2005半药典及2010版药典对前列地尔制剂中前列腺素B₁的杂质量没有规定。

药效学验证试验：

1.治疗肿瘤：

选择小鼠肝癌、乳腺癌模型(选择有资质实验动物中心购买或作试验)，体重19-20g，随机分组，每组30只。

治疗组：用实施例1-10例制备药物依次分为第1-10组；第1-5组用前列地尔组合药物冻干针剂，每次剂量20-500μg/kg，腹腔注射，每天1次；

对照组：已知抗肝癌药物盐酸表柔比星阳性对照组为第11组，每次剂量50mg/kg，每天1次，腹腔注射；已知抗乳腺癌药物环磷酰胺阳性对照组为第12组，每次剂量50mg/kg，每星期1次，腹腔注射；现有市场销售非专利技术注射用前列地尔阳性对照药物为第13组，每次剂量600μg/kg，腹腔注射，每天1次；

各组均给药3星期，存活的小鼠停药24小时后处死，称量瘤重，计算平均值；并统计注射疼痛率，注射后小鼠有跳起、尖叫、翻滚、全身抖动等现象之一者，均判为注射疼痛。

试验结果如下表：

可见，本发明质量标准控制药物与阳性对照药比：比阳性药物治癌谱广，疗效高，副作用面小。

2.治疗脑卒中、降血压、血脂：

选动脉硬化引起的自发性高血压大鼠(SHR)模型，随机分组，每组20只，给药2周后，血压下降20mmHg以上或下降到正常血压水平为有效；

选脑卒中自发性高血压大鼠(SHRSP)模型，随机分组，每组20只，每天饮1％盐水，比较空白对照组、阳性药物对照组、和本发明药物治疗组的死亡率，给药2周；

给药剂量和方法：

实施例1-10例药物，依次分为第1-10组；其中第1-5组依次用实施例1-5例的注射用前列地尔组合药物，每次剂量为200μg/kg，腹腔注射给药，每天1次；其中第6-10组依次用实施例6-10例的注射用前列地尔脂质体药物，每次剂量为20μg/kg，尾静脉注射，每天1次；阳性药物组为第11组，为现有市场销售非专利技术的注射用前列地尔，每次剂量为600μg/kg，腹腔注射给药，每天1次；空白对照组为12组，不给药，每天饮1％盐水。

试验结果如表：

可见，本发明质量标准控制药物药物疗效好，副作用小。

3.治疗乙型肝炎：

动物模型：取1日龄北京雌鸭感染乙型肝炎病毒模型，每组30只；

试验方法：在感染前、感染后7天、给药后第5天和第10天、停药后5天，分别杀剖三只鸭，取血肝，测定血清DHBV-DNA，计算各组给药后比给药前的抑制百分率；

分组、给药剂量及方法：以实施例1-10例的药物依次为第1-10组，阳性对照组是阿德福韦酯给药组。为第11组；实施例第1-5组药物，以每次600μg/kg剂量腹腔注射，每天1次，第6-10组以每次20μg/kg剂量尾静脉注射给药，每天1次；11个组均给药10天；统计各组在不同检测时间的DHBV-DNA抑制百分率以及停药后的乙肝复发率。

试验结果如下表：

可见，本发明脂量标准控制的药物治疗效果显著并且有副作用者少。以上提供实施例，仅是提供几个具体实例，不影响保护范围。

Claims (3)

1.一种前列地尔质量标准，其特征是，本发明的前列地尔质量标准是：

前列地尔

Qianliedi′el

Alprostadil

C₂₀H₃₄O₅ 354.48

本品为11α，15(S)-二羟基-9-羰基-13-反前列烯酸。按干燥品计算，含C₂₀H₃₄O₅应为99.95％～103.00％。

【性状】本品为白色晶亮针状结晶或晶亮结晶性粉末。

本品在乙醇中易溶，在水中微溶；在磷酸盐缓冲液(pH7.4～8.0)中溶解。

熔点  本品的熔点依(《中国药典》2010版附录VI C)测定，应为116℃～118℃。

比旋度  取本品，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含10mg的溶液，依法测定(《中国药典》2010版附录VI E)，比旋度为-65°～-70°。

【鉴别】(1)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致

(2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(中国药典委员会公布光谱集988图一致)。

【检查】乙醇溶液的澄清度  取本品5mg，加乙醇5ml，振摇使溶解，依法检查(《中国药典》2010版附录IV B)溶液应无色澄清；溶液在300LX光照下放置2小时以上，溶液应无色澄请，不得转为微红色。

有关物质  取本品适量，精密称定，加乙腈-水(9∶1)溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液作为供试品溶液；精密量取含量测定项下的对照品溶液，用乙腈-水(9∶1)稀释制成每1ml中约含10μg的溶液，作为前列地尔对照品溶液；另取前列腺素A₁和前列腺素B₁杂质对照品各适量，精密称定，分别加乙腈-水(9∶1)溶解稀释制成每1ml中各约含前列腺素A₁ 15μg与前列腺素B₁ 5μg的杂质对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)；以磷酸盐缓冲液(pH6.3{取磷酸二氢钾9.07g，加水1000ml使溶解，用无水磷酸氢二钠溶液(9.46g→1000ml)调节pH值至6.3，，临用前稀释10倍}-乙腈-甲醇(36∶11∶3)为流动相，流速为每分钟1.5ml；柱温40℃；检测波长为200mm。分别取前列地尔对照品溶液、前列腺素A₁和前列腺素B₁杂质对照品溶液各适量，按(1∶1∶1)比例混合，摇匀，作为系统适用性试验溶液。取25μl注入液相色谱仪，调整色谱系统，使前列地尔峰的保留时间约为11-13分钟，前列腺素A₁峰与前列腺素B₁峰的分离度应符合要求；同时调节检测灵敏度，使前列腺素B₁峰的高度约为满量程的10％。精密量取供试品溶液、前列腺素A₁、前列腺素B₁杂质对照品溶液，与前列地尔对照品溶液各25μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液的色谱图至主成分峰保留时间的4倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，前列腺素A₁和前列腺素B₁均按外标法计算，分别不得过0.3％和0.2％，；其它杂质以前列地尔对照品溶液中的前列地尔峰面积计算，单个最大杂质不得过0.3％；杂质总量不得过0.5％，(小于0.01％的色谱峰不计)。

干燥失重  取本品0.2g，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，减失重量不得过1.0％，依(《中国药典》2010版附录VIII L)规定测定。

异常毒性  精密量取比旋度测定项下本品无水乙醇溶液1.0ml，加入到1％的2-羟丙基-β-环糊精的0.9％氯化钠注射液9ml中，摇匀溶解完全，制成每1ml中含0.1mg的溶液，依法检查(《中国药典》2010版附录XI C)，按静脉注射法给药，应符合规定。

无菌  取本品20mg，加经灭菌1％的2-羟丙基-β-环糊精的氯化钠注射液适量使溶解，依法检查(《中国药典》2010版附录XI H)，应符合规定。

含量测定  照高效液相色谱法(《中国药典》2010版附录V D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH 4.9)(40∶60)为流动相，检测波长为214nm。取有关物质项下的系统适应性试验溶液10μl，注入液相色谱仪，调整色谱系统，前列地尔峰与前列腺素A₁峰的分离度应大于3.0。

测定法  取本品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取前列地尔对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

【类别】前列腺素药。

【贮藏】西林瓶包装，丁基胶塞密封，避光，避氧及氧化剂，防潮、防震、防压；-15℃以下温度保存；运输可在包装中加冰块和干燥剂保护常温下运输，但不得超过3天，运到后-15℃贮存。

【制剂】注射用前列地尔。

2.依权利要求1所述，其特征是，用符合本发明的前列地尔质量标准的前列地尔原料药，制备出前列地尔制剂，符合本发明的注射用前列地尔质量标准：

注射用前列地尔

Zhusheyong Qianliedi′er

Alprostadil for Innjiecton

本品为前列地尔与赋形剂低分子右旋糖酐-40、甘露醇制成的无菌冻干品。按平均含量计算，含前列地尔(C₂₀H₃₄O₅)应为标示量的95.0％～110.0％。

【性状】本品为白色疏松块状物或粉末。

【鉴别】(1)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

(2)用4ml注射用水，使本品溶解30分钟后，本品为非乳状液，液体透明且澄清，不呈现脂质体特有浅蓝色乳光，以此区别乳剂或脂质体冻干针剂。

【检查】溶液的澄清度  取本品1瓶，加0.9％氯化钠溶液溶解并制成每1ml中含前列地尔20μg的溶液，依法检查(《中国药典2010版附录IX B)，溶液应澄请。

前列腺素A₁取本品5瓶，分别精密加入25％乙醇溶液2ml，振摇使内溶物溶解完全，作为供试品溶液。另取前列腺素A₁杂质对照品适量，精密称定，用25％乙醇溶液溶解并稀释制成每1ml中约含3μg的溶液作为杂质对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，精密量取供试品溶液与前列腺素A₁杂质对照品溶液各50μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，每支及平均值的前列腺素A₁含量不得过前列地尔的标示量的0.3％。

水分  取本品，照水分测定法(《中国药典》2010版附录VIII M第一法A)测定，含水分不得过0.5％。

含量均匀度  以含量测定项下分别测定的10瓶结果计算，限度为±15％，应符合规定(《中国药典》2010版附录X E)。

异常毒性  取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中合0.1mg的溶液，依法检查(《中国药典》2010版附录XI C)，按静脉注射法给药，应符合规定。

细菌内毒素  取本品，依法检查(《中国药典》2010版附录XI E)，每1μg前列地尔中含细菌内毒素的量应小于0.125EU。

无菌  取本品，加氯化钠注射液适量使溶解，依法检查(《中国药典》2010版附录XI H)，应符合规定。

溶血与凝聚  取本品，用5ml的0.9％氯化钠注射液或5ml的5％葡萄糖注射液溶解，制成供试品溶液。依法检查(《中国药典》2010版二部附录VI L)。

过敏反应  取本品，用5ml的0.9％氯化钠注射液或5ml的5％葡萄糖注射液溶解，制成供试品溶液。依法检查(《中国药典》2010版二部附录VI K)。

其他  应符合注射剂项下有关的各项规定(《中国药典》2010版附录I B)。

【含量测定】取本品10瓶，分别精密加入25％的乙醇溶液1ml，振摇使内溶物溶解完全，作为供试品溶液；另取前列地尔对照品适量，精密称定，用25％乙醇溶液溶解并稀释制成与供试品溶液溶度相当的溶液，作为对照品溶液。照前列地尔含量测定项下的色谱条件，取对照品溶液与有关物质项下的前列腺素A₁杂质对照品溶也各适量，按(1∶5)的比例混合，摇匀，取20μ1注入液相色谱仪，调整色谱系统，使前列地尔峰的保留时间约为11～13分钟，前列地尔峰与前列腺素A₁峰之间的分离度`应大于4.0。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积分别计算每瓶的含量及10瓶的平均含量，即得。

【模拟使用含量测定】取本品5瓶，分别精密加入0.9％氯化钠注射液溶液2ml，振摇使内溶物溶解完全，作为供试品溶液1；另取本品10瓶，分别精密加入5％或10％葡萄糖注射液溶液2ml，振摇使内溶物溶解完全，作为供试品溶液2；按含量测定项下，取40μl注入液相色谱仪，分别测定供试品1和2溶解后6小时的每瓶含量及5瓶的平均含量，应合格。

【类别】同前列地尔。

【规格】80μg 100μg

【贮藏】密封，避光，-15℃以下保存；运输可在外包装箱中冰块、干燥剂保护下常温运输、存放时间累计不超过7天，运到目的地后，在-15℃以下贮藏。

3.依权利要求1所述，其特征是，用符合本发明的前列地尔质量标准的前列地尔原料药，制备出前列地尔脂质体制剂，符合本发明的注射用前列地尔脂质体质量标准：

注射用前列地尔脂质体质量标准

本品为前列地尔(前列腺素E₁，PGE₁)与蛋黄卵磷脂制成的前列地尔脂质体冻干针剂。前列地尔(C₂₀H₃₄O₅)含量平均值应为标示量的95.0％～120.0％。

【性状】本品为白色或类白色疏松块状或粉末。

【鉴别】

1.用4ml注射用水，使本品溶解30分钟后，本品为非乳状液，液体透明但不澄清，并呈现脂质体特有浅蓝色乳光，为纳米粒脂质体分散于水中特征，以此区别乳剂或非脂质体冻干针剂。

2.在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间与前列地尔对照品溶液主峰的保留时间一致；

3.精密量取4ml注射用水溶解本品，溶解10分钟后，精密量取本品水溶液50μl进样，按含量测定项下色谱条件测定，前列地尔主峰面积小于含量测定项下前列地尔主峰面积而大于包封率测定项下的游离前列地尔主峰面积。

【检查】pH值应为4.2.0～6.0(《中国药典》2010版二部附录VI H)。

形态观察  用扫描或透射电子显微镜观察，粒子应呈球形或类似球形。

粒度及粒度分布  照粒度及粒度分布测定法(《中国药典》2010版二部附录IV E)测定。用注射用水(通过0.22μm膜滤过)4ml溶解本品，再稀释5000倍，摇匀，作为供试液，用动态激光散射粒径测定法(见附1)测定，脂质体平均粒径为0.02～0.20μm，95％粒径累计值应小于0.2μm，无粒径大于0.25μm的粒子。

含量、含量均匀度及相关物质

测定前列地尔、前列腺素A₁含量的色谱条件：色谱柱用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)；乙腈一0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.9)体积比40∶60混合液(混合后pH5.1)为流动相，检测波长为214nm；柱温30℃，流速为0.5ml/min，浓度为2.5μg～5.0μg/ml，进样量为50μl，停止时间为45分钟，前列地尔峰与前列腺素A₁峰的分离度大于4.0；

取前列地尔对照品适量，精密称定，用液温20℃以下的25％乙醇水溶液溶解并稀释制成每ml中含前列地尔10μg的溶液，作为前列地尔对照品溶液，备用；

另取前列腺素A₁杂质对照品适量，精密称定，用液温20℃以下的25％乙醇水溶液溶解并稀释制成每ml中含前列腺素A₁为1.5μg的溶液作为杂质的对照品溶液，备用；若无前列腺素A₁对照品时，可按《中国药典》2015版前列地尔相关物质项下测定规定：精密称定10mg左右前列地尔对照品，用流动相溶解，转入50ml容量瓶中，稀释至刻度，量取2.0ml溶液，加入0.1mol/L的氢氧化钠液1滴，摇匀，放置1小时，取10μl注入液相色谱仪，前列地尔峰与前列腺素A₁峰分离度应大于4，前列腺素A₁峰保留时间是前列地尔峰保留时间的2.2～2.7，同一质量的前列腺素A₁的峰面积是前列地尔的7.28倍。

分别取本品5瓶，精密加入用液温20℃以下的25％乙醇水溶液4.0ml，间隔性地进行振摇-静置10min，至使内溶物溶解完全并使脂质体载药微粒水化成均匀半透明带浅蓝色乳光溶液，立即作为供试品溶液测定含量；

分别取前列地尔对照品溶液、前列腺素A₁对照品溶液各适量，按(1∶1)比例混合，摇匀，作为系统适用性试验溶液，取20μl注入液相色谱仪，调整色谱系统，使前列地尔峰的保留时间为11-13分钟，前列地尔峰与前列腺素A₁峰(按中国药典2005版规定其峰保留时间为前列地尔峰保留时间的2.2-2.7倍)的分离度应大于4.0。

分别精密量取供试品溶液50μl、前列地尔对照品液20μl、前列腺素A₁对照品液20μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液的色谱图至前列地尔峰保留时间的4倍以上。按外标法以峰面积分别计算每瓶的含量及10瓶的平均含量和含量均匀度。按平均计算，含前列地尔应为标示量的95.0％～115.0％；含量均匀度限度为±20％；

供试品溶液的色谱图中前列腺素A₁峰，按外标法计算；或供试品前列腺素A₁峰面积平均值÷7.28÷供试品前列地尔峰面积平均值×100％。

每瓶和平均值前列腺素A₁％不得过5％。

模拟使用含量取本品3瓶，分别用室温25％乙醇溶液溶解后，在300LX光照下，分别放置120分钟，依含量测定法，分别测定放置120分钟并在光照下含量，每瓶含前列地尔应为标示量的85％～110％。

包封率

色谱条件同含量及相关物质测定。

供试品溶液的配制：取本品4瓶，分别精密量取温度＜10℃的4ml0.9％氯化钠注射液溶解，立即同时置于4ml离心超滤管(10k)中，温度低于20℃下，转速大于3500r/min，离心10min，照前列地尔含量测定下的色谱条件，进样50μl，分别测定游离的前列地尔峰面积。

包封率计算：包封率％＝[1-B/(A+B)]×100％

A：前列地尔含量测定的峰面积；

B：游离的前列地尔的峰面积。

单瓶和平均包封率≥95％。

模拟使用包封率和渗漏率即体外突释率  照包封率测定项下，测定样品溶解和离心时间共为120分钟的包封率。

渗漏率＝(包封率-样品溶解120分钟的包封率)

渗漏率即体外突释率＜10％

磷脂氧化指数  取本品5瓶，分别用4ml无水乙醇溶解，取上层清液，分别测定在波长233nm及215nm的吸光度，由下式计算每瓶磷脂氧化指数值及平均值：

磷脂氧化指数＝A_233nm/A_215nm

磷脂氧化指数≤2.0。

溶血与凝聚  取本品，用5ml的0.9％氯化钠注射液或5ml的5％葡萄糖注射液溶解，制成供试品溶液。依法检查(《中国药典》2010版二部附录VIL)。

过敏反应  取本品，用5ml的0.9％氯化钠注射液或5ml的5％葡萄糖注射液溶解，制成供试品溶液。依法检查(《中国药典》2010版二部附录VIK)。

细菌内毒素  取本品，依法检查(《中国药典》2010版二部附录XI E)，每瓶中含内毒素的量应小于25EU。

异常毒性  取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中合2.5μg的溶液，依法检查(《中国药典))2010版附录XI C)，按尾静脉注射法给药，应符合规定。

无菌  取本品，加0.9％氯化钠注射液5ml使溶解，依法检查(《中国药典》2010版二部附录XI H)，应符合规定。

其他  除溶液的澄清度不检查外，应符合注射剂项下各项规定(《中国药典》2010版二部附录I B)。