CN100586302C - 一种强免疫促生长饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种强免疫促生长饲料添加剂及其制备方法。该添加剂以豆粕、麸皮、玉米蛋白粉、玉米淀粉、酒精糟粕、菌体蛋白粉、废糖蜜、次粉中的一种或几种为原料，不经蒸煮灭菌处理，由复合益生菌种经微生物固态发酵而获得。该添加剂免疫多糖总含量0.3～1.0%，免疫能量物质含量0.3～1.0%，赖氨酸含量≥4.0%，氨基氮为0.5～1.0%，总氮≥10.0%，水分≤12.0%，可明显增强动物的免疫力，治疗仔猪断奶拉稀，提高机体蛋白的合成速度，促进动物生长，发酵香味可促进采食，促进机体对矿物元素的吸收，调节机体的各种生理活动及改善机体的营养免疫状况，增加养殖经济效益。

Description

一种强免疫促生长饲料添加剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种强免疫促生长饲料添加剂及其制备方法，更具体地说涉及一种由蛋白质原料和辅料原料，不经过蒸煮灭菌，直接由复合益生菌种经微生物固态发酵而获得的强免疫促生长饲料添加剂及其制备方法。

背景技术

动物的集约化养殖存在诸多问题，动物的免疫力低下，蛋白质的沉积率下降，动物生长速度缓慢，断奶仔猪拉稀，死亡率高等。目前，防治和治疗动物疾病的主要措施是在动物出现疾病症状前后使用抗生素，能够起到明显的作用，但抗生素同时也给肠道和自身免疫系统造成了损伤，抗生素所造成的抗药性和耐药性使集约化养殖的动物更容易大面积得病死亡。

通过添加单一免疫增强剂或促生长剂，效果不好，添加成本高，又不能同时解决动物养殖其它方面的问题，比如同时解决断奶仔猪拉稀和免疫增强的问题。

微生态饲料添加剂是通过微生物发酵、酶工程等生物技术手段，产生免疫强化物质，免疫能量物质，促生长物质，大量维生素和益生物质，长期使用，能够缓和增强动物自身免疫机能，具有后效效果，可部分与抗生素配合使用，也可全部替代饲用抗生素，消除药残，敏化病原微生物，改善畜产品的质量。

发明内容

本发明的目的为提供一种由蛋白质原料和辅料原料，不经过蒸煮灭菌，直接由复合益生菌种经微生物固态发酵而获得的强免疫促生长饲料添加剂。

本发明的另一目的为提供上述强免疫促生长饲料添加剂的制备方法。

本发明的技术方案如下：

实施本发明的原料为：

蛋白质原料：豆粕、玉米蛋白粉、菌体蛋白粉、酒精糟粕中的一种或几种；

其它辅料原料：玉米淀粉、麸皮、废糖蜜、次粉中的一种或几种。

根据上述原料，本发明的配方按质量百分比为

豆粕                  72～86％；

玉米蛋白粉            1.5～3％；

菌体蛋白粉            10～15％；

酒精糟粕              0～5％；

玉米淀粉              1～2％；

麸皮                  0～1％；

废糖蜜                0.5～1％；

次粉                  0～1％。

上述原料均可在原料市场购得。

首先，微生物实验室用保藏的四种益生菌种黄短杆菌、芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌、酵母菌生产发酵菌种，四种菌种悬液各0.05～0.07％(相对于扩大培养后液态生产微生物菌种的体积比)，种子生产车间用四个发酵菌种分别投入种子发酵罐扩大培养，液态生产微生物菌种，微生物菌种液体经过配料，四种液体菌种的用量相对于蛋白质原料和辅料的总重量分别为2～3％，2～3％，2～3％，1～2％，自来水40～45％，加入上述原料中的废糖蜜，调节pH值至4.0～5.0，直接接入投入混合机和经过配比的其它发酵蛋白质原料和辅料，混合3～5分钟，下料发酵，发酵温度控制在25～38℃，固态发酵3～5天，SLY.DP-1000型气流流化床干燥，干燥出风温度45-52℃，进风温度125～140℃，0.8目筛网粉碎，计量包装得成品，测定免疫多糖的总含量0.3～1.0％，免疫能量物质L-谷氨酰胺含量0.3～1.0％，赖氨酸含量≥4.0％，氨基氮为0.5～1.0％，总氮≥10.0％，水分≤12.0％。

黄短杆菌、芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌、酵母菌的培养基分别按照中国工业微生物菌种保藏管理中心的2号、44号、100号、77号培养基配制。

数据的测定方法：

1、固定化酶测定L-谷氨酰胺含量

1.1工作原理

SBA是利用固定化酶测定物质浓度，在SBA-40型生物传感仪左右电极上分别安装L-Gln酶膜和Glu酶膜测定L-Gln。L-Gln酶膜对L-Gln和Glu均有响应；而Glu酶膜只对Glu有响应，经对测定结果进行数据处理，可以消除Glu对L-Gln测定的干扰。

1.2仪器与试剂

SBA-40型生物传感仪；L-Gln酶膜，谷氨酸酶膜；L-Gln，谷氨酸(Sigma公司)。

1.3方法与结果

1.3.1测定方法

用Glu标准液将仪器两侧显示器的显示值定标为(100，100)；进L-Gln标准液，测量值为(a，0)；进样品，测量值为(b，c)；按以下公式计算：

L-Gln的浓度(g·L^-1)＝(b-c)/a×标准液浓度×稀释倍数；

Glu的浓度(g·L^-1)＝c/100×标准液浓度×稀释倍数。

1.3.2标准溶液

分别取L-Gln和Glu标准品适量，准确称定，加蒸馏水使溶解并均定量稀释成1.0g·L^-1的溶液。

1.3.3线性关系

分别精密量取1.0g·L^-1的L-Gln标准溶液12，10，8，6，4，2，1mL至50mL容量瓶中，用蒸馏水定容，进样25μL，以浓度为横坐标，测量值与相应标准品溶液浓度相差百分数为纵坐标进行线性回归(L-Gln浓度在0.8～2.0g·L^-1范围内有良好的线性关系)，计算回归方程。若样品浓度偏高，应进行适当稀释。

1.3.4样品测定

根据经验估计样品中含有L-谷氨酰胺的浓度，精确称取细度为200目的样品约2克，精确至0.0001g，充分溶解，使L-谷氨酰胺溶出，定容至10ml，配制L-谷氨酰胺浓度为0.8～2.0g·L^-1范围内的样品溶液，取离心上清液，进样25μL，用SBA-40型生物传感仪和进口生化分析仪测定发酵液中L-Gln的含量。

1.3.5结果与计算

L-Gln的浓度(g·L^-1)＝(b-c)/a×标准液浓度×稀释倍数

L-Gln的含量(％)＝100％×L-Gln的浓度(g·L^-1)×1000/样品质量(g)

2、苯酚硫酸法检测免疫多糖含量

2.1测定原理

以葡聚糖为标准对照品，以苯酚硫酸法显色测定吸光值，依据标准曲线，计算样品中的粗多糖含量。

2.2材料与仪器

浓硫酸，苯酚，无水乙醇，葡聚糖标准品。752-分光光度计，分析天平，离心机。

2.3实验方法

2.3.1免疫多糖提取方法

准确称取样品2g(精确至0.0001g)，加适量水，沸水浴放置2h，冷却后定容至100ml。

2.3.2样品溶液的制备

将上述100ml提取液过滤，弃去初滤液，吸取滤液10.0ml，加50ml无水乙醇，混匀，离心，去上清液，残渣用10ml 80％乙醇洗涤三次，剩余残渣用2mol/L硫酸10ml溶解后，加水定容至50ml，溶液3000r/min离心20min，上清液为待测样品溶液。

2.3.3标准曲线的制备

准确称取葡聚糖标准应用液0.0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml于25ml比色管中，加水至2ml，加入苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml，沸水浴放置2min，冷却至室温，在485nm处，1cm比色皿测定吸光度值，绘制标准曲线，计算回归方程。

2.3.4多糖含量测定

吸取样品溶液1ml，于25ml比色管中，加水至2.0ml，加入苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml，沸水浴放置2min，冷却至室温，在485nm处，1cm比色皿测定吸光度值。

2.4结果计算

依据标准曲线，根据吸光值查出多糖的浓度，计算多糖含量。

本发明的有益效果：

本发明的产品作为饲料添加剂，可明显增强动物的免疫力，治疗仔猪断奶拉稀，提高机体蛋白的合成速度，促进动物生长，发酵香味可促进采食，促进机体对矿物元素的吸收，调节机体的各种生理活动及改善机体的营养免疫状况，增加养殖经济效益。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明作进一步描述，但不限制本发明：

实施例1：

称取原料：

豆粕              78公斤；

玉米蛋白粉        3公斤；

菌体蛋白粉        13公斤；

酒精糟粕          3公斤；

玉米淀粉          2.0公斤；

麸皮              0.5公斤；

首先，微生物实验室用保藏的四种益生菌种：黄短杆菌、芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌、酵母菌生产发酵菌种，四种菌种悬液各480mL，种子生产车间用四个发酵菌种投入种子发酵罐分别发酵四个菌种，液态生产微生物菌种各800L，微生物菌种液体经过配料，液体菌种的比例相对于蛋白质原料和辅料的总重量分别为2％，2％，2％，2％，自来水42％，加入0.5公斤废糖蜜，调节pH值至4.3，直接接入投入混合机和经过配比的其它发酵蛋白质原料和辅料，混合3分钟，下料发酵，发酵温度控制在30-37℃，固态发酵3天，SLY.DP-1000型气流流化床干燥，干燥出风温度48℃，进风温度134℃，0.8目筛网粉碎，计量包装得成品。

黄短杆菌、芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌、酵母菌的培养基分别按照中国工业微生物菌种保藏管理中心的2号、44号、100号、77号培养基配制。

苯酚硫酸法检测免疫多糖含量：(测定方法参照“粗多糖测定方法的研究”方法，胡居吾江西食品工业2002年)

免疫多糖的总含量≥0.3-1.0％；

固定化酶测定L-谷氨酰胺的含量：(测定方法参照“L-谷氨酰胺的含量测定法”方法，文加才中国新药杂志2002年第11卷5期)

免疫能量物质L-谷氨酰胺的总含量≥0.3-1.0％；

利用甲醛法对成品进行氨基氮测定：(按照生物化学实验发表的方法，上海科学技术出版社，1987年)

氨基氮为0.5-1.0％；

按照国家GB/T6432-1994的方法测定总氮：

总氮含量≥8.0％；

按照国家GB/T6435-1994的方法测得含水量：

水分含量≤12.0％。

实施例2：

称取原料：

豆粕              80公斤；

菌体蛋白粉        14公斤；

玉米蛋白粉        2公斤；

玉米淀粉          2公斤；

麸皮              1公斤；

上述原料均从原料市场购得。

首先，微生物实验室用保藏的四种益生菌种：黄短杆菌、芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌、酵母菌生产发酵菌种，四种菌种悬液各400mL。种子生产车间用四个发酵菌种投入种子发酵罐分别发酵四个菌种，液态生产微生物菌种各800L，微生物菌种液体经过配料，菌种比例相对于蛋白质原料和辅料的总重量分别为2％，3％，2％，2％，自来水40％，加入1公斤废糖蜜，调节pH值至4.6，直接接入投入混合机和经过配比的发酵蛋白质原料和辅料，混合5分钟，下料发酵，发酵温度控制在32-37℃，固态发酵4天，SLY.DP-1000型气流流化床干燥，干燥出风温度45℃，进风温度132℃，0.8目筛网粉碎，计量包装得成品。

黄短杆菌、芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌、酵母菌的培养基分别按照中国工业微生物菌种保藏管理中心的2号、44号、100号、77号培养基配制。

苯酚硫酸法检测免疫多糖含量：(测定方法参照“粗多糖测定方法的研究”方法，胡居吾江西食品工业2002年)

免疫多糖的总含量≥0.3-1.0％；

固定化酶测定L-谷氨酰胺的含量：(测定方法参照“L-谷氨酰胺的含量测定法”方法，文加才中国新药杂志2002年第11卷5期)

免疫能量物质L-谷氨酰胺的总含量≥0.3-1.0％；

利用甲醛法对成品进行氨基氮测定：(按照生物化学实验发表的方法，上海科学技术出版社，1987年)

氨基氮为0.5-1.0％；

按照国家GB/T6432-1994的方法测定总氮：

总氮含量≥8.0％；

按照国家GB/T6435-1994的方法测得含水量：

水分含量≤12.0％。

实施例3

称取原料：

豆粕              84公斤；

菌体蛋白粉        12公斤；

玉米蛋白粉            1.7公斤；

玉米淀粉              1.5公斤；

次粉                  1公斤；

上述原料均从原料市场购得。

首先，微生物实验室用保藏的四种益生菌种：黄短杆菌、芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌、酵母菌生产发酵菌种，四种菌种悬液各560mL。种子生产车间用四个发酵菌种投入种子发酵罐分别发酵四个菌种，液态生产微生物菌种各800L，微生物菌种液体经过配料，菌种比例相对于蛋白质原料和辅料的总重量分别为3％，3％，2％，2％，自来水45％，加入0.8公斤废糖蜜，调节pH值至4.8，直接接入投入混合机和经过配比的其它发酵蛋白质原料和辅料，混合4分钟，下料发酵，发酵温度控制在28-37℃，固态发酵5天，SLY.DP-1000型气流流化床干燥，干燥出风温度50℃，进风温度138℃，0.8目筛网粉碎，计量包装得成品。

黄短杆菌、芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌、酵母菌的培养基分别按照中国工业微生物菌种保藏管理中心的2号、44号、100号、77号培养基配制。

苯酚硫酸法检测免疫多糖含量：(测定方法参照“粗多糖测定方法的研究”方法，胡居吾江西食品工业2002年)

免疫多糖的总含量≥0.3-1.0％；

固定化酶测定L-谷氨酰胺的含量：(测定方法参照“L-谷氨酰胺的含量测定法”方法，文加才中国新药杂志2002年第11卷5期)

免疫能量物质L-谷氨酰胺的总含量≥0.3-1.0％；

利用甲醛法对成品进行氨基氮测定：(按照生物化学实验发表的方法，上海科学技术出版社，1987年)

氨基氮为0.5-1.0％；

按照国家GB/T6432-1994的方法测定总氮：

总氮含量≥8.0％；

按照国家GB/T6435-1994的方法测得含水量：

水分含量≤12.0％。

Claims (2)

1.一种由蛋白质原料和辅料原料，不经过蒸煮灭菌，直接由复合益生菌种经微生物固态发酵而获得的强免疫促生长饲料添加剂，该添加剂按质量百分比计，含有免疫多糖总含量0.3～1.0％，免疫能量物质L-谷氨酰胺含量0.3～1.0％，赖氨酸含量≥4.0％，氨基氮0.5～1.0％，总氮≥10.0％，水分≤12.0％；

所述复合益生菌种为黄短杆菌、芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌和酵母菌；

蛋白质原料和辅料原料的配比按质量百分比计算为：

豆粕            72～86％，

玉米蛋白粉      1.5～3％，

菌体蛋白粉      10～15％，

酒精糟粕        0～5％，

玉米淀粉        1～2％，

麸皮            0～1％，

废糖蜜          0.5～1％，

次粉            0～1％；

制备方法为：

(1)用芽孢杆菌、黄短杆菌、酵母菌、谷氨酸棒状杆菌四种益生菌种生产种子发酵菌种；

(2)用发酵菌种液态生产微生物菌种，液体经过配料，调节种子发酵菌种培养剂pH值至4.0～5.0；

(3)蛋白质原料和辅料不经过蒸煮直接投入混合机，微生物菌种接入，混合3～5分钟；

(4)下料平铺发酵，翻料控温，发酵温度控制在25～38℃，静态固态发酵3～5天；

(5)气流流化床干燥，干燥出风温度45～52℃，进风温度125～140℃；

(6)0.8目筛网粉碎，计量包装得成品；

其中，相对于蛋白质原料和辅料的总重量，芽孢杆菌、黄短杆菌、酵母菌、谷氨酸棒状杆菌的接种用量分别为2～3％、2～3％、2～3％、1～2％。

2.如权利要求1所述的强免疫促生长饲料添加剂的制备方法，由以下步骤组成：

(1)用芽孢杆菌、黄短杆菌、酵母菌、谷氨酸棒状杆菌四种益生菌种生产种子发酵菌种；

(2)用发酵菌种液态生产微生物菌种，液体经过配料，调节种子发酵菌种培养剂pH值至4.0～5.0；

(3)蛋白质原料和辅料不经过蒸煮直接投入混合机，微生物菌种接入，混合3～5分钟；

(4)下料平铺发酵，翻料控温，发酵温度控制在25～38℃，静态固态发酵3～5天；

(5)气流流化床干燥，干燥出风温度45～52℃，进风温度125～140℃；

(6)0.8目筛网粉碎，计量包装得成品。