CN100582773C - Hplc微管法一次性测定白术内酯及苍术酮的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开的一次性测定白术内酯及苍术酮的方法，其步骤包括：取色谱纯甲醇、乙腈和重蒸水，配制流动相A、B溶液；制备含白术内酯I、白术内酯III、苍术酮的混合对照品溶液；制备供试样品溶液；利用液相色谱仪按设置的流动相A、B梯度及时间，分别测试对照品溶液在三个不同时间的三个吸收峰以及供试样品与对照品相应时间的三个吸收峰，按式X＝(供试品的峰面积×对照品的浓度/对照品的峰面积×供试品的浓度)×100%，计算内酯III、白术内酯I及苍术酮三成分的含量。本发明一次进样即可测定白术中白术内酯III、白术内酯I及苍术酮的含量，不仅简化操作，可减少多次进样的误差，还有利于同时分析这三种成分的构成比。具有重要的学术价值及实际应用意义。

Description

HPLC微管法一次性测定白术内酯及苍术酮的方法
技术领域
本发明涉及测定白术内酯及苍术酮的方法，尤其是采用HPLC微管法一次性测定白术内酯及苍术酮的方法。属于中药成份测定技术领域。
背景技术
中药白术为菊科植物白术(Rhizoma atractylodis macrocephala Koidz.)的干燥根茎《中华人民共和国药典》，2005版，一部。是著名的传统多用途常用中药，为“浙八味”之一。其具健脾益气、燥湿利水、止汗安胎之功效。国内多个省份有种植，浙江省是主产省份之一，我省年产量近5000吨，占全国总产量的近一半，年产值约5000万元。国内外市场年需量约为8000吨，市场销售额约为8000万元。
在分离得到苍术酮后，又已从白术中，分离出白术内酯类成分——白术内酯I、白术内酯III(黄宝山.白术内酯的分离鉴定.植物学报，1992，34(8)：614.)，药理学研究表明，白术内酯类成分(白术内酯I、白术内酯III)为白术的抗炎、抗癌有效成分，苍术酮也具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的作用(汤得芳，郝玉珩，刘佐雅，等.平江白术根茎挥发油的成分及其抑瘤作用研究.药学通报，1984，19(9)：43.)。目前对上述三种有效成分，有每个成分单独的含量测定方法(陈仲良.中药白术的化学成分.化学学报，1989，47：1022.)；(王燕生.白术成分的研究.陕西新医药，1980，(4)：47.)。但单一成分的含量测定方法不足之处，在于需要两个试验条件，分两次测定，不仅费时费力，而且加大了三成份内在比例的误差。
鉴于《中华人民共和国药典(2005年版，一部)》中尚无挥发油含量、苍术酮及白术内酯含量的测定方法和标准，同一色谱条件一次性测定中药白术中白术内酯III、白术内酯I及苍术酮的方法未见报道。
故发明一项一次性同时测定三个有效成分的方法是急待解决的问题，有重要的学术价值及实际应用的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种HPLC微管法一次性测定白术内酯及苍术酮的方法，以实现一次性同时测定白术样品中白术内酯III、白术内酯I及苍术酮三成份。
本发明的HPLC微管法一次性测定白术内酯及苍术酮的方法，包括以下步骤：
(1)配制流动相
取色谱纯甲醇、乙腈和重蒸水，按体积比配制流动相A、B溶液
流动相A溶液：甲醇∶乙腈∶水＝90∶5∶5
流动相B溶液：甲醇∶乙腈∶水＝55∶5∶40
(2)制备对照品溶液
精密称取白术内酯I 5.8mg、白术内酯III 6mg、苍术酮6.3mg，分别置入10ml量瓶内，加入甲醇至10ml刻度，摇匀，使对照品溶解；然后吸取白术内酯I 10μl、白术内酯III 10μl、苍术酮溶液80μl，加入流动相B溶液900μl，混匀，得含0.0058mg/ml白术内酯I、0.006mg/ml白术内酯III、0.0504mg/ml苍术酮的混合对照品溶液；
(3)制备供试样品溶液
精密称取白术样品0.3克～0.5克，置入25ml量瓶中，加入流动相B溶液20ml；将量瓶置于超声震荡仪内超声30mim，放至室温后，再加入流动相B溶液至25ml刻度，摇匀，经滤纸过滤，取滤液2ml用0.32μm滤膜过滤，待测试；
(4)设置色谱条件
采用“带梯度测试”的高效液相色谱仪，色谱柱：l C18 5μm，150mm×1.0mm；设定检测波长：220nm；流动相的流速：50μl/min；
(5)设置梯度测试的参数
按下表设置梯度测试时的流动相A、B的参数及时间参数，
(6)进样测试
由高效液相色谱仪自动进样器注入对照品溶液3μl/次，分别在三个不同时间获得三个吸收峰；
由高效液相色谱仪自动进样器注入供试样品溶液3μl/次，分别与对照品相应时间获得三个吸收峰；
(7)计算内酯III、白术内酯I及苍术酮三成分的含量
依据步骤(6)测得的内酯III、白术内酯I及苍术酮的峰面积，按下列公式计算成g/100g生药的含量。
Figure C20071007078700061
本发明的有益效果在于：
仅用同一色谱条件，一次进样即可测定中药白术中白术内酯III、白术内酯I及苍术酮的含量，这样不仅简化了操作，可减少多次进样的误差，还有利于同时分析这三种成分的构成比。本发明具有重要的学术价值及实际应用的意义。
附图说明
图1是白术内酯III、I、苍术酮的对照品图谱；
图2是HPLC微管法测定的江西安福白术样品图谱；
图3是HPIC微管法测定的湖南邵东白术样品图谱；
具体实施方式
以下结合实施例进一步说明本发明。
实施例1：江西安福白术样品三种成分的含量测定
(1)配制流动相
取色谱纯甲醇、乙腈和重蒸水，按体积比配制流动相A、B溶液
流动相A溶液：甲醇∶乙腈∶水＝90∶5∶5
流动相B溶液：甲醇∶乙腈∶水＝55∶5∶40
(2)制备对照品溶液
于分析天平上精密称取白术内酯I 5.8mg、白术内酯III 6mg、苍术酮6.3mg，分别置入10ml量瓶内，加入甲醇至10ml刻度，摇匀，使对照品溶解；再吸取白术内酯I(0.58mg/ml)、白术内酯III(0.6mg/ml)各10μl、苍术酮(0.63mg/ml)溶液80μl，加入流动相B液900μl，混匀，即得含白术内酯I(0.0058mg/ml)、白术内酯III(0.006mg/ml)、苍术酮(0.0504mg/ml)的混合对照品溶液。
(3)制备供试样品溶液
于分析天平上精密称取江西安福白术样品0.4038克，加入含有流动相B溶液20ml的25ml量瓶内；将量瓶置于超声震荡仪内超声30mim，放至室温后，再加入流动相B溶液至25ml刻度，摇匀，经普通滤纸过滤，取滤液2ml用0.32μm滤膜过滤，待测试。
(4)设置高效液相色谱仪测定的色谱条件
按相应操作规范连接好“带梯度测试”的高效液相色谱仪，(本法采用Micro-Tech Ultra plus II高效液相色谱仪，微科技公司)；选用微管色谱柱C185μm，150mm×1.0mm；设定检测波长：220nm；流速：50μl/min。
(5)设置梯度测试的参数
按下表设置梯度测试时的流动相A、B的参数及时间参数
Figure C20071007078700072
(6)进样测试
由高效液相色谱仪自动进样器注入对照品溶液3μl次，分别在8、12、30min时获得三个吸收峰，见图1。
由高效液相色谱仪自动进样器注入供试品溶液3μl/次，也分别在8、12、30min时与对照品相应时间获得三个吸收峰，见图2。
(7)计算内酯III、白术内酯I及苍术酮三成分的含量
依据步骤(6)测得的白内酯III、白术内酯I及苍术酮的峰面积，按下列公式计算成g/100g生药的含量。
Figure C20071007078700073
结果见下表：
江西安福白术样品中三成分的含量
Figure C20071007078700081
实施例2：湖南邵东白术样品三种成分的含量测定
(1)配制流动相
取色谱纯甲醇、乙腈和重蒸水，按体积比配制流动相A、B溶液
流动相A溶液：甲醇∶乙腈∶水＝90∶5∶5
流动相B溶液：甲醇∶乙腈∶水＝55∶5∶40
(2)制备对照品溶液
于分析天平上精密称取白术内酯I 5.8mg、白术内酯III 6mg、苍术酮6.3mg，分别置入10ml量瓶内，加入甲醇至10ml刻度，摇匀，使对照品溶解，再吸取白术内酯I(0.58mg/ml)、白术内酯III(0.6mg/ml)各10μl、苍术酮(0.63mg/ml)溶液80μl，加流动相B液900μl，混匀即得含白术内酯I(0.0058mg/ml)、白术内酯III(0.006mg/ml)、苍术酮(0.0504mg/ml)的混合对照品溶液。
(3)制备供试样品溶液
于分析天平上精密称取湖南邵东白术样品0.4134g，加入含有流动相B溶液20ml的25ml量瓶内；将量瓶置于超声震荡仪内超声30mim，放至室温后，再加入流动相B溶液至25ml刻度，摇匀，经普通滤纸过滤，取滤液2ml用0.32μm滤膜过滤，待高效液相色谱仪测试。
(4)设置高效液相色谱仪测定的色谱条件
按相应操作规范连接好“带梯度测试”的高效液相色谱仪，(本法采用Micro-Tech Ultra plus II高效液相色谱仪，微科技公司)；色谱柱：C18 5μm，150mm×1.0mm；设定检测波长：220nm；流速：50μl/min。
(5)设置梯度测试的参数
按下表设置梯度测试时的流动相A、B的参数及时间参数
Figure C20071007078700091
(6)进样测试
由高效液相色谱仪自动进样器注入对照品溶液3μl次，分别在8、12、30min三个不同时间获得三个吸收峰，见图1。
由高效液相色谱仪自动进样器注入供试品溶液3μl次，分别与对照品相应时间获得三个吸收峰，见图4。
(7)计算内酯III、白术内酯I及苍术酮三成分的含量
依据步骤(6)测得的白内酯III、白术内酯I及苍术酮的峰面积，按下列公式计算成g/100g生药的含量。
Figure C20071007078700092
结果见下表：
湖南邵东白术样品三种成分的含量测定
Figure C20071007078700093

Claims (1)

1.HPLC微管法一次性测定白术内酯及苍术酮的方法，包括以下步骤：
(1)配制流动相
取色谱纯甲醇、乙腈和重蒸水，按体积比配制流动相A、B溶液
流动相A溶液：甲醇∶乙腈∶水＝90∶5∶5
流动相B溶液：甲醇∶乙腈∶水＝55∶5∶40
(2)制备对照品溶液
精密称取白术内酯I 5.8mg、白术内酯III 6mg、苍术酮6.3mg，分别置入10ml量瓶内，加入甲醇至10ml刻度，摇匀，使对照品溶解；然后吸取白术内酯I 10μl、白术内酯III 10μl、苍术酮溶液80μl，加入流动相B溶液900μl，混匀，得含0.0058mg/ml白术内酯I、0.006mg/ml白术内酯III、0.0504mg/ml苍术酮的混合对照品溶液；
(3)制备供试样品溶液
精密称取白术样品0.3克～0.5克，置入25ml量瓶中，加入流动相B溶液20ml；将量瓶置于超声震荡仪内超声30mim，放至室温后，再加入流动相B溶液至25ml刻度，摇匀，经滤纸过滤，取滤液2ml用0.32μm滤膜过滤，待测试；
(4)设置色谱条件
采用“带梯度测试”的高效液相色谱仪，色谱柱：C18 5μm，150mm×1.0mm；设定检测波长：220nm；流动相的流速：50μl/min；
(5)设置梯度测试的参数
按下表设置梯度测试时的流动相A、B的参数及时间参数，
Figure C2007100707870002C1
(6)进样测试
由高效液相色谱仪自动进样器注入对照品溶液3μl/次，分别在三个不同时间获得三个吸收峰；
由高效液相色谱仪自动进样器注入供试样品溶液3μl/次，分别与对照品相应时间获得三个吸收峰；
(7)计算白术内酯III、白术内酯I及苍术酮三成分的含量
依据步骤(6)测得的白术内酯III、白术内酯I及苍术酮的峰面积，按下列公式计算成g/100g生药的含量。
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微管径高效液相色谱及其应用. 龙梅，裴世桥.岩矿测试，第19卷第2期. 2000
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