CN100504390C - 彩色胶乳层析法诊断试纸条及其制备方法 - Google Patents
彩色胶乳层析法诊断试纸条及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN100504390C CN100504390C CNB2004100272939A CN200410027293A CN100504390C CN 100504390 C CN100504390 C CN 100504390C CN B2004100272939 A CNB2004100272939 A CN B2004100272939A CN 200410027293 A CN200410027293 A CN 200410027293A CN 100504390 C CN100504390 C CN 100504390C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- film
- coated
- seconds
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000004816 latex Substances 0.000 title claims abstract description 50
- 229920000126 latex Polymers 0.000 title claims abstract description 50
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 46
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 40
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 47
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 41
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 29
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims description 30
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 20
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 17
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 15
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 5
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 claims description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 abstract 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 abstract 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 8
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 7
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 4
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 201000005111 ocular hyperemia Diseases 0.000 description 4
- 101000896148 Enterobacteria phage T4 Baseplate central spike complex protein gp27 Proteins 0.000 description 3
- 101000597227 Escherichia phage Mu Probable terminase, small subunit gp27 Proteins 0.000 description 3
- 101000912555 Escherichia phage lambda Tail fiber protein Proteins 0.000 description 3
- 101000764556 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Probable tape measure protein Proteins 0.000 description 3
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 3
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical class [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 3
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical class [H]N([H])* 0.000 description 3
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 3
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 101000851359 Drosophila melanogaster Troponin I Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003126 immunogold labeling Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000012092 latex agglutination test Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000001387 multinomial test Methods 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种彩色胶乳层析法诊断试纸条。本发明所述的彩色胶乳层析法诊断试纸条，该试纸条是在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆彩色胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸而形成的膜条，包被膜有检测区和控制区，检测区包被抗体或抗原，控制区包被抗鼠抗体。本发明能发挥胶乳标记层析检测技术快速、简便、操作方便的优点，避免现有检测技术的缺点和不足。
Description
技术领域
本发明属于医学检验领域，涉及一种利用彩色胶乳层析的诊断试纸条。
背景技术
彩色胶乳标记层析检测技术是继胶体金标记技术以后，在胶乳凝集试验的基础上发展起来的，作为一种免疫学方法，它是免疫亲和技术、印迹技术、免疫标记技术和层析技术的结合，由于其同金标技术一样具有快速、操作简便、试剂稳定、可室温储运、不易污染的特点发展迅速。
彩色胶乳标记技术是将不同直径范围0.1μm～1μm的彩色胶乳微球与含有羧基、氨基、羟基等酯类或其他大分子物质共价结合，利用大分子物质具有的羧基、氨基、羟基等基团结合蛋白质物质(抗原/抗体)，当此彩色胶乳标记的蛋白质(抗原/抗体)与检测样本中足够的相应抗体/抗原结合后形成的胶乳标记复合物，被膜上包被的抗原/抗体捕获，彩色胶乳标记物在相应的配体处大量聚积时，形成肉眼可见红色、紫红色、黑色、蓝色或者其他颜色的条带，因而可用于定性或者半定量的快速免疫检测方法中。
在免疫检测中，国内外主要采用放射性免疫、酶联免疫吸附法(E LISA)和胶体金标记等方法的试纸条。这些试纸条都存在不同程度的缺陷。以目前广泛采用的免疫胶体金层析法试纸条为例，存在以下不足之处：
(1)胶体金是一种纳米颗粒，制备胶体金纳米颗粒较难，且颗粒直径较难控制均匀。
(2)胶体金标记过程中用到强还原剂，同时要接触重金属者离子，对人体健康和安全有一定影响。
(3)胶体金标记过程是物理吸附过程，故液相时稳定性较差。
(4)显色后只能是单一颜色——紫红色，不能根据不同的品种或不同要求变化颜色。
发明内容
本发明的目的在于提供一种彩色胶乳微粒层析夹心法诊断试纸条，能发挥胶乳标记层析检测技术快速、简便、操作方便的优点，避免现有检测技术的缺点和不足。
本发明所述的彩色胶乳微粒层析夹心法诊断试纸条，该试纸条是在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫，涂覆彩色胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜，包被膜以及吸水纸而形成的膜条，包被膜有检测区和控制区，检测区包被抗体或抗原，控制区包被抗鼠抗体，其中，所述彩色胶乳微粒经过以下共价活化处理：超声波处理胶乳微粒30秒后，调节胶乳微球体浓度为1.0×106～1.0×107/ml，8000×g离心1～5分钟，离心后收集沉淀物用蒸馏水或者50mM～200Mm pH6.0～7.0磷酸钠溶液溶解，并超声波处理30秒；加入20～100mg/mlEDC，混匀；室温孵育30分钟后8000×g、离心1～5分钟，沉淀用20mM～100mM pH5.0～6.0的柠檬酸缓冲液溶解，放置于2～8℃环境中备用；活化后的彩色胶乳微粒标记蛋白的量为1ug～125ug蛋白/100ul彩色胶乳微粒；所述检测区包被的抗原/抗体的浓度为6～15ug/ml，膜液量为20ul/35cm。
所述的包被膜上，根据所采用双抗体夹心法、双抗原夹心法的检测方法，在检测区包被相应的抗体或抗原；控制区所包被的抗鼠抗体，是用纯化的IgG免疫小鼠得到的。
本发明的另一目的在于提供一种彩色胶乳微粒层析夹心法诊断试纸条的制备方法。
本发明所述的彩色胶乳微粒层析夹心法诊断试纸条的制备方法，包括以下步骤：
A.彩色胶乳的共价活化：超声波处理胶乳微球体30秒后，调节胶乳微球体浓度为1.0×106～1.0×107/ml，8000×g离心1～5分钟，离心后收集沉淀物用蒸馏水或者50mM～200Mm pH6.0～7.0磷酸钠溶液溶解，并超声波处理30秒；加入一定量的20～100mg/mlEDC，混匀；室温孵育30分钟后8000×g、1～5分钟离心，沉淀用20mM～100mM pH5.0～6.0的柠檬酸缓冲液溶解，放置2～8℃环境中备用，以标记蛋白质；
B.彩色胶乳微粒标记蛋白的制备：将步骤A中活化后的彩色胶乳超声波处理30秒后，按照1ug～125ug蛋白/100ul彩色胶乳的比例加入需标记的蛋白质，混匀后室温搅拌反应2小时，3次离心洗涤，每次8000g、离心1～5分钟，沉淀用PBS-TBN溶解并超声波处理30秒，用磷酸缓冲液恢复一定体积，放置室温备用，以涂覆玻璃纤维膜；
C.抗体或抗原包被到硝酸纤维素膜上及其封闭：膜上包被检测区和控制区是将抗原/抗体和抗鼠抗体调节一定浓度，膜液量为20ul/35cm，用包被缓冲液稀释包被抗原/抗体，浓度为6～15ug/ml，将抗原/抗体及抗鼠抗体喷到玻璃纤维膜上，两区间隔5mm，应细致均匀，室温凉干20分钟；25℃～37℃在封闭液浸泡60分钟，取出后置25℃～37℃烘干处理2小时，封袋，以备贴板之用；
D.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆彩色胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的试纸条。
本发明将不同直径范围0.1um～1um的彩色胶乳微球与含有羧基、氨基、羟基等酯类或其他生物大分子物质如抗原/抗体共价结合，当此彩色胶乳标记的蛋白质(抗原/抗体)与检测样本中足够的相应抗体/抗原结合后形成的复合物，包被膜上包被的抗原/抗体捕获，彩色胶乳标记物在相应的配体处于大量聚积时，形成肉眼可见红色、紫红色、黑色、蓝色或者其他颜色的条带，因而可用于定性或者半定量的快速免疫检测中。(夹心法)所形成的检测带是一肉眼可见的显色带，出现可见的显色带为样本中含有目的蛋白使检测带上积聚的彩色胶乳颗粒为肉眼所见，若检测带不可见，为样本中无目的蛋白或者浓度很低使检测带上积聚的彩色胶乳颗粒不能被肉眼看见。
本发明所述的彩色胶乳微粒层析夹心法诊断试纸条与放射性免疫、酶联免疫法相比，具有操作安全(无放射物污染)、简便、适合单人/份检测和快速(10分钟左右即可有结果)等优点；与免疫胶体金标记试纸条相比，本发明具有蛋白质标记过程不需要接触重金属离子，而且颜色多样可变等优点。
本发明所述的试纸条是可以使用双抗体夹心法、双抗原夹心法检测方法的试纸条，应用范围广，能够用于单项检测或者一检多项的快速检测试纸条，能够检测全血、血清、血浆、唾液、尿液、食品等样本；能够用于妊娠检测、疾病诊断、细菌检出等目的蛋白的检测。
附图说明
图1是本发明的结构示意图。
图2是本发明在采用双抗夹心法时检测结果的示意图。
图3是本发明用于一检多项时检测结果的示意图。
具体实施方式
本发明所述的彩色胶乳微粒层析夹心法诊断试纸条，如图1所示，该试纸条是在底衬1上顺次相互搭接地粘贴样品垫2、涂覆彩色胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜3、包被膜4以及吸水纸5而形成的膜条，包被膜4有检测区6和控制区7，检测区6包被抗体或抗原，控制区7包被抗鼠抗体。
本发明所述的试纸条可以使用双抗体夹心法、双抗原夹心法检测方法的试纸条。图2是采用双抗夹心法试纸条时的结果示意图，如图2(a)所示，样品中的抗原或者抗体的浓度可使彩色胶乳微粒在检测区(T区)6处集聚形成肉眼可见条带，控制区(C区)7出现可见的条带，表示样本阳性；如图2(b)所示，检测区(T区)6处不形成肉眼可见条带，控制区(C区)7出现可见的条带，表示样本阴性，不含被检测的抗原或抗体。
如图3所示，本发明可用于一检多项检测项目，如图3(a)所示，当样本中含有全部被检项目时，会出现两条检测带(代表两项检测指标)，一条质控带；如图3(b)所示，样品中含有某一检测项目时，出现对应的检测带和控制带；如图3(c)所示，不含有任何检测项目时，仅出现一条控制带；如果不出现任何条带，说明检测试纸条失效。
实施例一：早早孕HCG胶乳检测试纸条(双抗体夹心法)
本实施例早早孕HCG胶乳检测试纸条采用双抗体夹心法的层析检测原理，利用彩色胶乳微粒标记hCG单克隆抗体，包被膜上检测区(T)包被有a—hCG单克隆抗体，质控线(C)包被抗鼠IgG。当检测样本中含有促腺素人绒毛膜(hCG)时，样本中的hCG抗原与胶乳标记的hCG单抗结合，形成Ag—Ab*胶乳复合物，在试纸条层析作用下，到达包被有a—hCG单克隆抗体的检测区(T)，反应形成Ab—Ag—Ab*胶乳复合物，当样本中hCG浓度不小于25mIU/ml，彩色胶乳标物在此处于大量聚积时，形成肉眼可见红色、紫红色、黑色、蓝色或者其他颜色的条带，从而可以判断样本阳性，即受检者怀孕。
如图2所示，加样后，反应1～2分钟即可看到检测区(T区)6和质控区(C区)7相应的位置上出现紫红色条带，如果C区7和T区6均出现紫红色条带，如图2(a)所示，结果阳性，说明样品含有HCG；T区6不出现紫红色条带，如图2(b)所示，结果阴性，说明样品不含有HCG。C区7不出现紫红色条带，说明试纸条失效。
本实施例采用的双抗体夹心法还可以适用于排卵(LH，促黄体生成素)，乙型肝炎表面抗原(HbsAg)，心肌肌钙蛋白(Tn—I，Tn—T)、肿瘤标记物(AFP、PSA、CEA、FOB)、衣原体(CT)等。
实施例二：艾滋病HIV1/2型诊断试纸条(双抗原夹心法)
本实施例艾滋病HIV1/2型诊断试纸条采用双抗原夹心法的层析检测原理，利用彩色胶乳微粒标记HIVgp36，gp41以及gp27重组抗原，包被膜上检测区(T)包被一定浓度的HIVgp36，gp41以及gp27重组抗原，质控区(C)包被抗鼠抗体。当检测样本中含有HIV抗体时，样本中的HIV抗体与胶乳标记的HIV抗原结合，形成Ab—Ag*胶乳复合物，在试纸条层析作用下，到达包被有HIVgp36，gp41以及gp27的检测区(T)，反应形成Ag—Ab—Ag*胶乳复合物，当样本中HIV抗体浓度1：1280，彩色胶乳标物在此处于大量聚积时，形成肉眼可见红色、紫红色、黑色、蓝色或者其他颜色的条带，从而可以判断样本阳性，即受检者感染HIV；阴性情况，说明受检者没有HIV抗体，21天后仍然阴性，排除受检者感染HIV病毒的可能。
本实施例采用的双抗原夹心法还可以适用于乙型肝炎表面抗体(HbsAb)，丙型肝炎(HCV)等。
本发明所述检测血液HIV1/2抗体的试纸条的制备方法见以下实施例：
实施例三：
本实施例的制备方法包括以下步骤：
A.彩色胶乳的共价活化：超声波处理胶乳微球体30秒后，调节胶乳微球体浓度为1.0×106～1.0×107/ml，8000×g离心1～5分钟，离心后收集沉淀物用蒸馏水或者50mM～200Mm pH6.0～7.0磷酸钠溶液溶解，并超声波处理30秒；加入一定量的20～100mg/mlEDC，混匀；室温孵育30分钟后8000×g、离心1～5分钟，沉淀用20mM～100mM pH5.0～6.0的柠檬酸缓冲液溶解，放置2～8℃环境中备用，以标记蛋白质；
B.彩色胶乳微粒标记蛋白的制备：将步骤A中活化的彩色胶乳超声波处理30秒后，按照1ug～125ug蛋白/100ul彩色胶乳的比例加入需标记的蛋白质，混匀后室温搅拌反应2小时，3次离心洗涤，每次8000xg、1～5分钟，沉淀用PBS-TBN溶解并超声波处理30秒，用磷酸缓冲液恢复一定体积，放置室温备用，以涂覆玻璃纤维膜；
C.抗体或抗原包被到硝酸纤维素膜上及其封闭：膜上包被的检测区和控制区是将抗原/抗体和抗鼠抗体调节一定浓度，膜液量为20ul/35cm，用包被缓冲液稀释包被抗原/抗体，浓度为6～15ug/ml，将抗原/抗体及抗鼠抗体喷到玻璃纤维膜上，两区间隔5mm，应细致均匀，室温凉干20分钟；25℃～37℃在封闭液浸泡60分钟，取出后置25℃～37℃烘干处理2小时，封袋，以备贴板用；
D.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆彩色胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的试纸条。
实施例四
本实施例的制备方法与实施例三基本相同，不同点在于：
所述的步骤B中，彩色胶乳微粒标记蛋白的制备方法是：将步骤A活化后的彩色胶乳超声波处理30秒后，按照75ug蛋白/100ul彩色胶乳的比例加入需标记的蛋白质，混匀后室温搅拌反应2小时，3次离心洗涤，每次8000xg、离心1～5分钟，沉淀用PBS-TBN溶解并超声波处理30秒，用磷酸缓冲液恢复一定体积，放置室温备用，以涂覆玻璃纤维膜。
实施例五
本实施例的制备方法与实施例三基本相同，不同点在于：
所述的步骤C中，抗体或抗原包被到硝酸纤维素膜上及其封闭方法是：膜上包被的检测区和控制区是将抗原/抗体和抗鼠抗体调节一定浓度，膜液量为20ul/35cm，用包被缓冲液稀释包被抗原/抗体，浓度为10ug/ml，将抗原/抗体及抗鼠抗体喷到玻璃纤维膜上，两区间隔5mm，应细致均匀，室温凉干20分钟；25℃～37℃在封闭液浸泡60分钟，取出后置25℃～37℃烘干处理2小时，封袋，以备贴板用。
Claims (5)
1、彩色胶乳微粒层析夹心法诊断试纸条，其特征在于：该试纸条是在底衬(1)上顺次相互搭接地粘贴样品垫(2)，涂覆彩色胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜(3)，包被膜(4)以及吸水纸(5)而形成的膜条，包被膜(4)有检测区(6)和控制区(7)，检测区(6)包被抗体或抗原，控制区(7)包被抗鼠抗体，其中，所述彩色胶乳微粒经过以下共价活化处理：超声波处理胶乳微粒30秒后，调节胶乳微球体浓度为1.0×106～1.0×107/ml，8000×g离心1～5分钟，离心后收集沉淀物用蒸馏水或者50mM～200mM pH6.0～7.0磷酸钠溶液溶解，并超声波处理30秒；加入20～100mg/mlEDC，混匀；室温孵育30分钟后8000×g、离心1～5分钟，沉淀用20mM～100mM pH5.0～6.0的柠檬酸缓冲液溶解，放置于2～8℃环境中备用；活化后的彩色胶乳微粒标记蛋白的量为1ug～125ug蛋白/100ul彩色胶乳微粒；所述检测区包被的抗原/抗体的浓度为6～15ug/ml，膜液量为20ul/35cm。
2、根据权利要求1所述的彩色胶乳微粒层析夹心法诊断试纸条，其特征在于：所述的玻璃纤维膜(3)上涂覆的彩色胶乳微粒的直径范围为0.1um～1um。
3、一种制备权利要求1所述的彩色胶乳微粒层析夹心法诊断试纸条的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.彩色胶乳的共价活化：超声波处理胶乳微球体30秒后，调节胶乳微球体浓度为1.0×106～1.0×107/ml，8000×g离心1～5分钟，离心后收集沉淀物用蒸馏水或者50mM～200mM pH6.0～7.0磷酸钠溶液溶解，并超声波处理30秒；加入一定量的20～100mg/mlEDC，混匀；室温孵育30分钟后8000×g、离心1～5分钟，沉淀用20mM～100mM pH5.0～6.0的柠檬酸缓冲液溶解，放置2～8℃环境中备用，以标记蛋白质；
B.彩色胶乳微粒标记蛋白的制备：将步骤A中活化的彩色胶乳超声波处理30秒后，按照1ug～125ug蛋白/100ul彩色胶乳的比例加入需标记的蛋白质，混匀后室温搅拌反应2小时，3次离心洗涤，每次8000xg、离心1～5分钟，沉淀用PBS-TBN溶解并超声波处理30秒，用磷酸缓冲液恢复一定体积，放置室温备用，以涂覆玻璃纤维膜；
C.抗体或抗原包被到硝酸纤维素膜上及其封闭：膜上包被的检测区和控制区是将抗原/抗体和抗鼠抗体调节一定浓度，膜液量为20ul/35cm，用包被缓冲液稀释包被抗原/抗体，浓度为6～15ug/ml，将抗原/抗体及抗鼠抗体喷到玻璃纤维膜上，两区间隔5mm，应细致均匀，室温凉干20分钟；25℃～37℃在封闭液浸泡60分钟，取出后置25℃～37℃烘干处理2小时，封袋，以备贴板用；
D.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆彩色胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的试纸条。
4、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤B中，彩色胶乳微粒标记蛋白的制备方法是：将步骤A活化后的彩色胶乳超声波处理30秒后，按照75ug蛋白/100ul彩色胶乳的比例加入需标记的蛋白质，混匀后室温搅拌反应2小时，3次离心洗涤，每次8000xg、离心1～5分钟，沉淀用PBS-TBN溶解并超声波处理30秒，用磷酸缓冲液恢复一定体积，放置室温备用，以涂覆玻璃纤维膜。
5、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤C中，抗体或抗原包被到硝酸纤维素膜上及其封闭方法是：膜上包被的检测区和控制区是将抗原/抗体和抗鼠抗体调节一定浓度，膜液量为20ul/35cm，用包被缓冲液稀释包被抗原/抗体，浓度为10ug/ml，将抗原/抗体及抗鼠抗体喷到玻璃纤维膜上，两区间隔5mm，应细致均匀，室温凉干20分钟；25℃～37℃在封闭液浸泡60分钟，取出后置25℃～37℃烘干处理2小时，封袋，以备贴板用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2004100272939A CN100504390C (zh) | 2004-05-21 | 2004-05-21 | 彩色胶乳层析法诊断试纸条及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2004100272939A CN100504390C (zh) | 2004-05-21 | 2004-05-21 | 彩色胶乳层析法诊断试纸条及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1580778A CN1580778A (zh) | 2005-02-16 |
| CN100504390C true CN100504390C (zh) | 2009-06-24 |
Family
ID=34582039
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2004100272939A Expired - Lifetime CN100504390C (zh) | 2004-05-21 | 2004-05-21 | 彩色胶乳层析法诊断试纸条及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100504390C (zh) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101017168B (zh) * | 2007-02-15 | 2012-08-29 | 广州万孚生物技术股份有限公司 | 荧光胶乳定量层析试纸条及其制备方法 |
| CN101852799A (zh) * | 2010-05-19 | 2010-10-06 | 南京黎明生物制品有限公司 | 免疫层析法检测试剂及其制作方法 |
| CN102053157A (zh) * | 2010-11-19 | 2011-05-11 | 广州万孚生物技术有限公司 | 一种胎膜早破快速检测试纸条 |
| CN102087294B (zh) * | 2010-12-31 | 2014-08-20 | 广州万孚生物技术股份有限公司 | 一种疟疾免疫层析快速检测试纸条及其制备方法 |
| CN102087285B (zh) * | 2010-12-31 | 2013-09-11 | 广州万孚生物技术股份有限公司 | 急性胰腺炎免疫层析快速检测试纸条及其制备方法 |
| CN102297964A (zh) * | 2011-05-20 | 2011-12-28 | 广州万孚生物技术有限公司 | 一种三聚氰胺免疫层析检测试纸条 |
| CN102288757A (zh) * | 2011-07-12 | 2011-12-21 | 珠海市银科医学工程有限公司 | 无创伤一步法胃幽门螺旋杆菌检测试剂盒及检测方法 |
| CN102507959A (zh) * | 2011-11-08 | 2012-06-20 | 无锡安迪生物工程有限公司 | 一种壬基酚快速检测卡及其检测方法 |
| CN102565388A (zh) * | 2012-01-16 | 2012-07-11 | 宁波天润生物药业有限公司 | 肥达氏试验卡 |
| CN102590500A (zh) * | 2012-01-16 | 2012-07-18 | 宁波天润生物药业有限公司 | 外斐氏试验卡 |
| CN103226143A (zh) * | 2013-04-07 | 2013-07-31 | 南京基蛋生物科技有限公司 | 一种干式免疫检测试纸条及其制备方法与应用 |
| CN107290547A (zh) * | 2017-08-07 | 2017-10-24 | 广州市微米生物科技有限公司 | 一种不孕不育快速检测试剂盒及其制备方法 |
| CN109406773A (zh) * | 2018-12-27 | 2019-03-01 | 正元盛邦(天津)生物科技有限公司 | 一种用于促黄体生成素的毛细管检测试剂盒及其制备方法 |
| CN110824177B (zh) * | 2019-09-11 | 2021-06-11 | 润和生物医药科技(汕头)有限公司 | 一种快速检测试纸及其制备方法和应用 |
| CN113125713A (zh) * | 2019-12-31 | 2021-07-16 | 珠海宝龄创新生物科技有限公司 | 检测多种待测物的检验套组 |
| CN111157749B (zh) * | 2020-01-13 | 2021-06-22 | 润和生物医药科技(汕头)有限公司 | 一种快速检测试纸及其制备方法和应用 |
| CN116298252A (zh) * | 2023-03-07 | 2023-06-23 | 上海赫景医药科技有限公司 | 一种新型pet替代样品垫和结合垫试纸条的制备方法及应用 |
-
2004
- 2004-05-21 CN CNB2004100272939A patent/CN100504390C/zh not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 免疫微球吸附实验的建立-I，免抗人血清IgG检测. 唐宗湘等.广西师范大学学报，第15卷第2期. 1997 |
| 免疫微球吸附实验的建立-I，免抗人血清IgG检测. 唐宗湘等.广西师范大学学报，第15卷第2期. 1997 * |
| 免疫微球技术进展. 兰小鹏等.国外医学临床生物化学于检验学分册，第15卷第4期. 1994 |
| 免疫微球技术进展. 兰小鹏等.国外医学临床生物化学于检验学分册，第15卷第4期. 1994 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1580778A (zh) | 2005-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101017168B (zh) | 荧光胶乳定量层析试纸条及其制备方法 | |
| CN100504390C (zh) | 彩色胶乳层析法诊断试纸条及其制备方法 | |
| KR102566305B1 (ko) | 개선된 분석물 검출을 위한 분석 방법 | |
| JP2532788B2 (ja) | 免疫学的検定を行うための装置と方法 | |
| US10048257B2 (en) | Signal amplification microspheres, their use in one-step and multi-step analytical amplification procedures and methods for their production | |
| EP2376906B1 (en) | Method for amplification of signal in immunochromatographic assay and immunochromatographic kit using the method | |
| JP7451431B2 (ja) | 側方流動アッセイのシグナルを増幅させるシステム、装置および方法 | |
| KR101597413B1 (ko) | 효소 모방 무기 나노입자를 이용한 고감도 측면유동 면역 발색칩 및 이를 이용한 검출 방법 | |
| US20110201131A1 (en) | Antibody detection method involving oligonucleotide enhanced colloidal gold signal | |
| CN107907679A (zh) | 一种免疫层析试纸条及其制作方法与应用 | |
| JPH055743A (ja) | 測定装置 | |
| US20160341723A1 (en) | Au nanoparticles encapsulated in nanocompoites and applications thereof in rapid detection of an analyte | |
| CN106526166A (zh) | 猪肉中瘦肉精的快速检测 | |
| CN110231488A (zh) | 一种基于羧基修饰多壁碳纳米管标记的试纸条生物传感器及使用方法 | |
| JP4980944B2 (ja) | 免疫学的測定方法 | |
| WO2020067233A1 (ja) | イムノクロマト用試験片 | |
| JP2010032396A (ja) | バイオセンサ | |
| JPH0552849A (ja) | 検体の特異的検出および特異的分離方法 | |
| CN102004146A (zh) | 一种混合标记物质和标记方法及其应用 | |
| EP1933148B1 (en) | Urinary immunochromatographic multiparameter detection cup | |
| CN114264819A (zh) | 快速检测新冠病毒的量子点纳米球免疫层析试纸条 | |
| EP1933141B1 (en) | Antigen detection method involving an oligonucleotide enhanced collodial gold signal | |
| JP3718510B2 (ja) | 検出装置及び検出方法 | |
| JP2020052028A (ja) | イムノクロマト用試験片 | |
| JP2020051910A (ja) | イムノクロマト用試験片 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: GUANGZHOU WANFU BIOTECHNOLOGY CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: WANG JIHUA Effective date: 20110527 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 510640 WANFUYUAN, INSIDE SOUTH CHINA UNIVERSITY OF TECHNOLOGY, GUANGZHOU CITY, GUANGDONG PROVINCE TO: 510663 NO. 8, LIZHISHAN ROAD, SCIENCE CITY, LUOGANG DISTRICT, GUANGZHOU CITY, GUANGDONG PROVINCE |
|
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20110527 Address after: 510663 Guangzhou, Luogang District Science City, litchi Road, No. 8, No. Patentee after: GUANGZHOU WONDFO BIOTECH. Co.,Ltd. Address before: 510640 Guangdong city of Guangzhou Province on the campus of South China University of Technology Fuyuan million Patentee before: Wang Jihua |
|
| C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: GUANGZHOU WONDFO BIOTECH. CO., LTD. Free format text: FORMER NAME: GUANGZHOU WONDOFO BIOMEDICAL CO., LTD. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 510663 Guangzhou, Luogang District Science City, litchi Road, No. 8, No. Patentee after: GUANGZHOU WONDFO BIOTECH Co.,Ltd. Address before: 510663 Guangzhou, Luogang District Science City, litchi Road, No. 8, No. Patentee before: GUANGZHOU WONDFO BIOTECH. Co.,Ltd. |
|
| CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20090624 |
|
| CX01 | Expiry of patent term |