CN100502911C - 一种抗风湿药物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗风湿药物及其制备方法，该药物以昆明山海棠、淫羊藿、枸杞子、菟丝子为原料制成，本发明药物具有疗效突出、毒副反应轻和服用方便的特点。

Description

一种抗风湿药物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种药物及其制备方法，特别是涉及一种抗风湿的中药及其制备方法。
背景技术
普遍认为，风湿病和类风湿性关节炎(RA)是一种难以治愈的疾病，约有18,000,000 RA患者因病致残.。对于治疗RA新药的研究已经持续进行了近百年，阿斯匹林是最早广泛使用于RA的药物。治疗RA的药物可概分为两类：非类固醇类抗炎药物(NSAIDs)和免疫抑制剂。NSAIDs包括环氟拉嗪或者消炎痛，以及肾上腺皮质激素。临床研究表明，NSAIDs是有效的；免疫抑制剂和细胞毒类药物包括氨甲喋呤、环磷酰胺、青霉胺等等。近年来，免疫调节已被用作风湿性疾病的治疗方法。所有抗风湿药都表现出较为严重的副作用，而直到现在，还未研制出一种更加高效低毒的药物。
在抗风湿药物的研究和发展中有三方面是最需要强调的。第一方面包括NSAIDs和细胞因子拮抗剂，例如重组可溶性肿瘤坏死因子拮抗剂、白细胞间介素-1抑制剂和血小板活化因子抑制剂。第二方面是一种新的免疫抑制剂或者免疫调节剂，如环孢霉素A。第三方面是复方药物。
在中医药学领域中研究对于痹病(RA)的治疗早至可以追溯到中国古代医药学家张仲景的“麻杏石甘汤”、“防已黄芪汤”和“乌头汤”。“火把花”是一种生长在四川省的野生植物，在局部地区的临床实验中(四川)被证实对风湿症患者有一定疗效。不幸的是，同时也观察到许多不可控制的问题和对人体生殖系统的严重副作用。
中医药治疗痹病有悠久历史，经历代医家发展，中医药对痹病的治疗已有较高的疗效和众多药物，中国药典一九九五版、二○○○版收载可治疗痹病的单味药不少于80味，成药29种。但也存在一些问题，主要是①对严重的痹病如类风湿性关节炎疗效尚欠理想，②制剂剂型不能满足现代生活需要，③少数药物疗效堪称佳良，但毒副作用大，如雷公藤制剂。因此研制高效低毒、剂型适合现代生活和用药习惯的抗风湿药物，特别是其疗效能与抗风湿合成药相近而毒副作用相对较低的药物是必要的。
技术内容
本发明目的在于提供一种具有抗风湿作用的、高效低毒、服用方便的复方药物；本发明目的还在于提供一种具有抗风湿作用的药物的制备方法
本发明药物技术方案是通过选取如下原料药实现的：
昆明山海棠(Tripterygium hypoglaucum(Lev1.)Hutch.)
淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)
枸杞子(Lycium barbarum L.)
菟丝子(Cuscuta chinensis Lam.，Cuscuta australis R.Br.)
本发明的药物由上述原料药制成。
其中原料药可以是由昆明山海棠与其余三种药物中的任何一种或两种或三种共同组成。
本发明药物最优选原料药配比为：
昆明山海棠1～4重量份    淫羊藿1～4重量份
枸杞子1～4重量份        菟丝子1～4重量份
本发明药物最优选原料药配比还可以为：
昆明山海棠2重量份       淫羊藿2重量份
枸杞子1重量份           菟丝子1重量份
本发明药物优选原料药配比还可以为：
昆明山海棠1～4重量份    淫羊藿1～4重量份
本发明药物优选原料药配比还可以为：
昆明山海棠2重量份         淫羊藿2重量份
本发明药物优选原料药配比还可以为：
昆明山海棠1～4重量份      淫羊藿1～4重量份
枸杞子1～4重量份
本发明药物优选原料药配比还可以为：
昆明山海棠2重量份         淫羊藿2重量份
枸杞子1重量份
本发明药物优选原料药配比还可以为：
昆明山海棠1～4重量份      淫羊藿1～4重量份
菟丝子1～4重量份
本发明药物优选原料药配比还可以为：
昆明山海棠2重量份         淫羊藿2重量份
菟丝子1重量份
以上药物组合物含量为淫羊藿甙C33H40O15计不得少于2.0mg。
本发明药物优选原料药配比还可以为：
昆明山海棠1～4重量份和枸杞子1～4重量份和/或菟丝子1～4重量份
本发明药物优选原料药配比还可以为：
昆明山海棠2重量份和枸杞子1重量份和/或菟丝子1重量份
将上述原料药按比例称取，用常规制剂工艺可制成任何临床可接受的药物剂型，如丸剂、散剂、膏剂、片剂、胶囊剂，如硬胶囊和软胶囊、颗粒剂、针剂等。
本发明药物制备方法为：
称取原料药：
昆明山海棠1～4重量份        淫羊藿1～4重量
枸杞子1～4重量份           菟丝子1～4重量份
将昆明山海棠、淫羊藿切碎，分别加水煎煮2-4次，枸杞子、菟丝子分别用80℃～95℃水温浸1～3次，分别每味中药的各次煎煮液或温浸液合并后，各合并液分别上各自对应的大孔吸附树脂柱；吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清，然后用60％-80％乙醇洗脱，至流出液颜色变深时开始收集洗脱液，直至洗脱液颜色由深变极浅时，用水压出柱上乙醇液，并与洗脱液合并，总洗脱液约为药材重量的3～8倍；每味中药的洗脱液分别回收、浓缩至比重1.10，并分别喷雾干燥得各药材提取物；将四种提取物混匀，制成任何临床可接受的剂型。
本发明方法优选下述工艺步骤：
昆明山海棠2重量份          淫羊藿2重量份
枸把子1重量份              菟丝子1重量份
昆明山海棠切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；淫羊藿切段，分别加15、10、10倍水提取三次，每次1小时；枸杞子粉碎成粗料，用20倍水80℃温浸1小时，连续3次；菟丝子粉碎成粗粉，用31倍水80℃温浸1小时，连续3次；四味药材的水煎煮液或水浸出液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱JD-1(WLD)，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液。当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后分别得到提取物药粉；将四种提取物药粉混匀，制成任何临床可接受的剂型。
本发明药物的制备还可以采用下述方法：
称取原料药，淫羊藿、昆明山海棠分别切碎；枸杞子、菟丝子原形或粉碎，以上四味，分别或合并用0～95％的乙醇于10～98℃提取，连续1～4次，提取液分别或合并回收乙醇后浓缩，干燥，粉碎，混匀或按比例混匀，制为临床可接受的剂型。
本发明药物还可以以上述原料药当中的有效成分制备而成。
上述原料药当中，淫羊藿含有淫羊藿甙，淫羊藿次甙I，淫羊藿次甙II和淫羊藿糖甙A，昆明山海棠当中含有双萜类，三萜类和生物碱类化合物，菟丝子和枸杞子的主要成分为黄酮。
因此，制备本发明药物的淫羊藿可以由淫羊藿甙，淫羊藿次甙I，淫羊藿次甙II和淫羊藿糖甙A中的一种或一种以上代替，昆明山海棠可以由昆明山海棠当中的双萜类，三萜类和生物碱类化合物代替，菟丝子和枸杞子可以由其中所含的黄酮代替。
本发明药物(风湿平胶囊)经药效学研究证明，风湿平经灌服给药，可显著抑制大鼠佐剂性关节炎(AA)的原发及继发性损伤；明显抑制2，4-二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠耳迟发型超敏反应(DTH)；明显抑制小鼠溶血素抗体形成及小鼠巨噬细胞、脾细胞IL-1、IL-2、IL-6、TNF的活性；风湿平可显著抑制ConA诱导的淋巴细胞转化，对于CD4、CD8细胞，风湿平均可显著抑制，但以对的CD4的作用为强，对CD4/CD8比值无明显影响。风湿平的上述作用均有显著的剂量-效应线性关系，12～18(生药)g/kg为最低有效量。对于NK细胞，风湿平也有显著抑制活性。但风湿平在有效剂量下不引起胸腺、脾脏等免疫器官萎缩，也不抑制巨噬细胞吞噬活性。
对于炎症反应，风湿平有显著的抑制作用，能抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进，抑制巴豆油所致小鼠耳肿胀，抑制鹿角菜胶所致小鼠胸膜炎及大鼠CMC囊中白细胞的聚集，但对鹿角菜胶性大鼠足爪肿胀及棉球性肉芽组织增生，风湿平抑制的作用较弱。此外，对于醋酸所致小鼠扭体反应风湿平有明显抑制作用。
实验例1：对佐剂性关节炎(AA)的影响
1.1 对大鼠AA的防治作用
SD同窝大鼠72只雌雄各半，体重180～220g，同源随机分为6组，每组12只，分笼饲养，每笼6只。用精密窄带尺量取大鼠左、右后爪踝关节及足爪最大周径作为正常值，分别灌服同体积不同剂量的药物或同体积西黄芪胶液，药后1h，于各组大鼠左后足垫皮内注射弗氏完全佐剂0.1ml/只。每日灌服药物1次，连续30天，逐日同法量取大鼠左、右爪踝关节及足爪周径，预防性给药试验以测量日鼠爪周径减去致炎前鼠爪周径计算肿胀度(△cm)，结果见表1.1、1.2。到期称取体重及各组动物主要脏器重量，结果见表1.3、1.4。
1.1  风湿平对AA大鼠注射佐剂侧鼠爪踝关节肿胀度的影响(x±S)
Figure C02828642D00131
Figure C02828642D00132
与对照组相比＊P<0.05，＊＊P<0.01(下同)
1.2  风湿平对AA大鼠注射佐剂侧鼠爪踝关节肿胀度的影响(x±S)
Figure C02828642D00133
Figure C02828642D00134
1.3  风湿平对AA大鼠体重变化的影响(x±S)
Figure C02828642D00141
1.4  风湿平对AA大鼠免疫器官重量的影响(预防)(x±S)
Figure C02828642D00142
1.2 对大鼠AA的治疗作用
另有雄性SD大鼠50只随机分5组，同法处理，但药物于注射弗氏佐剂致炎后第13日开始灌服，每日1次，连续2周，以测量日所测周径减去开始给药当日周径计算肿胀度(△cm)，结果见表1.5、1.6，主要脏器重量见表1.7。
1.5  风湿平对AA大鼠注射佐剂侧鼠爪踝关节肿胀的治疗作用(x±S)
1.6  风湿平对AA大鼠注射佐剂对侧踝关节肿胀的治疗作用(x±S)
Figure C02828642D00151
n＝10，与对照组相比，＊P<0.05，＊＊P<0.01
1.7  风湿平对AA大鼠体重及免疫器官重量的影响(x±S)
Figure C02828642D00152
由表1.1、1.2、1.3及表1.5、1.6可见，风湿平对佐剂性关节炎大鼠注射佐剂侧的原发和注射佐剂对侧的继发性关节损伤均有强的抑制作用，致炎同时或致炎后2周开始给药均有显著效果，表明风湿平对大鼠佐剂性关节炎有显著的预防和治疗作用。分析风湿平对大鼠后肢踝关节处特异性免疫性肿胀及鼠爪非特异性肿胀的影响可见，风湿平的作用以对踝关节肿胀的作用为强，表明风湿平主要作用于免疫性炎症反应。
表1.3、1.4及1.7结果表明，AA大鼠于整个实验期间体重无明显增长，而风湿平在有效剂量下可见大鼠体重增加，强的松治疗、预防组均可见大鼠体重下降，胸腺、肾上腺明显萎缩，单味昆明山海棠也可见胸腺萎缩，但风湿平三个剂量均未见对胸腺、肾上腺重量有明显影响。
1.3 对大鼠AA治疗作用的病理学观察
SD大鼠45只分6组，体重18020g，用弗氏佐剂形成AA后用风湿平灌胃治疗，连续5天，末次药后1h，评价并计算大鼠关节指数。并取大鼠继发性损伤侧后肢关节用甲醛固定，HE染色，显微镜下观察关节滑膜及软骨的改变。各组大鼠关节指数结果见表1.8。
1.8  风湿平对大鼠AA关节指数的影响(x±S)
Figure C02828642D00161
与模型组相比＊＊P<0.01
关节指数根据大鼠每个关节红肿程度分别评分为0—4分，四肢分数之和即为关节指数。四肢及关节评分标准如下：0分＝正常，1分＝仅红，2分＝红、轻肿，3分＝严重肿，4分＝关节变形、强直。
显微镜下观察可见，模型组大鼠后肢关节滑膜层增生，胶原纤维增多，淋巴细胞及浆细胞浸润，形成明显肉芽肿；滑膜细胞变性，胞浆红染，胞核固缩，部分区域滑膜上皮脱落；软骨萎缩，表面粗糙，凹凸不平，软骨细胞有轻度增生。给予风湿平各剂量组治疗后，可见关节滑膜组织炎症减轻，形成较多胶原纤维；滑膜细胞部分脱落；软骨表层细胞增生，表面变平，软骨处于修复状态。
对照组大鼠，可见滑膜层增生，胶原纤维增多，淋巴细胞及浆细胞浸润，形成明显肉芽肿，滑膜细胞变性，胞浆红染，胞核固缩，部分区域滑膜上皮脱落。风湿平治疗组，关节滑膜组织炎症减轻，形成较多胶原纤维，滑膜细胞部分脱落，软骨表层细胞增生，表面变平，软骨处于修复状态。
实施例2对2，4—二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠耳迟发型超敏反应(DTH)的影响NIH小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，各鼠于腹部去毛部位用1％的DNFB丙酮溶液0.025ml/只致敏，隔日同法强化1次，于致敏后第5日，于小鼠右耳涂以1％的DNFB食用油溶液0.01ml/只攻击，24h鼠将小鼠处死，按法于扭力天平称取左、右耳片重量，以其差值(mg)作为小鼠DTH反应的强度。实验以不同免疫、给药程序进行。
2.1 全程给药对DTH的影响
免疫、给药程序如下：
Figure C02828642D00171
表2.1，风湿平对NIH小鼠DNFB所致小鼠迟发超敏反应的影响(x±S)
Figure C02828642D00172
＊与其它各组比较P<0.05或P<0.01
由表2.1结果可见，风湿平对DNFB所致小鼠DTH有显著的抑制作用，其抑制作用强度有显著的剂量相关性，剂量加大作用增强，至60.9g/kg可使DTH的抑制率达69.5％。
2.2　不同给药时间对小鼠DTH的影响
免疫、给药程序及结果见表2.1中栏和下半栏，由表中栏可见，致敏前2日至致敏当日、致敏前2日至致敏后2日、致敏前2日至致敏后5日、攻击前后给药均可显著抑制小鼠DTH反应，但以致敏前加致敏后全程给药，即致敏前2日至致敏后5日给药抑制作用尤强，提示风湿平抑制DTH的作用环节和机制可能既与抑制DTH反应的早期参予细胞，也抑制DTH晚期的效应细胞以及DTH反应中期细胞有关，而与环磷酰胺有不同，环磷酰胺于致敏前2日给药至致敏当日或致敏后2日，在较小剂量均不影响DTH反应。
由表2.1下栏可见，于致敏前3日1次给予大剂量的环磷酰胺，由于对Ts细胞的强烈抑制而使Th细胞功能相对亢进，表现为对小鼠DTH反应非但不抑制，反而有所增强，此时如与有显著DTH抑制效果的风湿平合用，则可抵消风湿平的抑制效果，提示风湿平抑制DTH反应的作用机理与环磷酰胺不同，有可能其对TH细胞的抑制作用相对敏感。
实验例3 对体液免疫的影响
3.1 对鸡红细胞(CRBC)免疫所致正常小鼠溶血素抗体生成的影响
18～22g小鼠190只，雌雄各半，随机分为19组，各组小鼠均ip5％CRBC0.2ml免疫，于免疫后7天，拔除眼球取血，用生理盐水稀释后测定风湿平对各组小鼠溶血素抗体形成的影响，风湿平于免疫的不同时间开始灌服，结果见表3.1、3.2、3.3。
表3.1  风湿平对NIH小鼠溶血素抗体生成的影响(x±S)
Figure C02828642D00191
＊＊与相同昆明山海棠含量的风湿平(40g/kg)相比P<0.01
表3.2  风湿平对ICR小鼠溶血素抗体生成的影响(x±S)
Figure C02828642D00192
＊＊与同剂量风湿平(18g/kg)相比P<0.01
表3.3  风湿平对ICR小鼠溶血素抗体生成的影响(x±S)
Figure C02828642D00193
从上列3表所示结果可见，风湿平对不同种系小鼠溶血素抗体形成均有显著抑制作用，并随剂量加大，作用增强，有良好的剂量—效应关系，最低抑制剂量为12g/kg，与风湿平组成主药之一的昆明山海棠相比，对抗体形成的抑制作用明显为强，表3.1结果示风湿平的作用强度约为其2.25倍以上(13.5g/kg昆明山海棠的作用较含6g/kg昆明山海棠的风湿平的作用为弱)。
3.2 对AA小鼠体液免疫功能的影响
NIH小鼠体重20±2g，每鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.05ml，3周后形成AA模型小鼠，随机分6组后，分别灌服不同药物5天，于开始给药同时ip10％绵羊红细胞(SRBC)0.5ml致敏，5天后处死，取脾用Hank’s液冲洗后制备淋巴细胞悬液，调整细胞浓度为2×107/ml，取1ml加于试管中，加0.2％SRBC1ml和1:30补体1ml，37℃水浴箱内孵育1小时，2000rpm离心5分钟，取上清液，用722分光光度计于415nm波长测其光密度，代表PFC量。
另取上述致敏小鼠血，分离血清，以凝集试验测定其抗体效价，以Log2值表示，结果见表3.4。
表3.4  风湿平对AA小鼠体液免疫功能的影响(x±S)
Figure C02828642D00201
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较#P<0.05，##P<0.01
由表3.4可见，AA小鼠PFC、IgM均显著高于正常小鼠，风湿平可显著降低AA小鼠脾脏抗体生成细胞(PFC)及抗体(IgM)生成量。
实验例4 对大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)的影响
取大鼠肌注卵白蛋白10mg/kg，同时腹腔注射百日咳杆菌2×1010/0.2ml免疫，2周后处死大鼠，取血分离血清备用。
另取体重150～200g大鼠60只，雌雄各半，随机分为6组。于乙醚轻度麻醉下，于鼠背剪毛部位皮内注射上述抗卵蛋白血清(1:5、1:10稀释，分别示为d1、d2)0.1ml，每稀释度2点。48h后用含卵白蛋白1mg的0.5％依文思蓝生理盐水溶液1ml iv攻击，20min后将大鼠断头处死，翻转鼠背皮肤，根据蓝斑色泽深浅及面积，多人按染料渗出强弱评定蓝斑级别，然后将蓝染皮肤剪碎，浸泡于5m10.1％硫酸钠丙酮(7:3)液中，48小时后离心，取上清于590nm测定光密度，计算各组大鼠PCA反应强度及抑制百分率，结果见表4。
表4  风湿平对大鼠PCA的影响(x±S)
Figure C02828642D00211
与对照组相比＊P<0.05，＊＊P<0.01
由表4可见，风湿平对大鼠PCA抑制作用弱，仅在较大剂量时与对照相比有显著差异。
实验例5 对细胞因子的影响
5.1 对小鼠TNFα、IL-2的影响
ICR小鼠体重18～22g，雄雌各半60只，随机分为6组，分别灌服不同剂量的风湿平或其它药物，每日1次，连续10天，末次药后24小时，无菌条件下取小鼠腹腔巨噬细胞或脾细胞，用Hank’s液洗涤2次，无血清RPIM 1640液洗1次，用5％FCS-RPMI 1640液调制为2×108/ml细胞悬液，分别加入LPS 10ng/ml或ConAlong/ml，于37℃5％CO2条件下培养48h，按法测定TNFα或IL-2。
TNFα的测定：
小鼠抗TNF-α单克隆抗体包被板条，恢复室温后加入培养上清50μl/孔，60分钟，加生物素标记抗体，25℃2h，加酶标亲和素，30分钟，加底物30分钟，加终止液，450nm波长测OD值。根据OD值在标准曲线上计算TNF-α含量(ng/ml)。
IL-2的测定：
取对数生长期、IL-2依赖性生长的CTLL细胞，用5％FCS-RPMI1640调制成1×105/ml细胞悬液。在96孔平底细胞培养板中加入CTLL细胞悬液100μl/孔，培养上清液100μl/孔，每份样品作3复孔，同时作不同稀释度标准rHIL-2和培养液对照。37℃ 5％ CO2条件下培养24小时，终止培养前6小时离心，去上清110μl/孔，加入MTT10μl/孔，37℃，3h测OD 570nm和OD 630nm值，每孔OD值＝OD570nm-OD630nm。
Figure C02828642D00221
表5.1  风湿平对TNF及IL-2的影响(X±S)
＊P<0.05，＊＊P<0.01
表5.1结果表明，风湿平对TNFα有显著的抑制效果，12g/kg可见有非常显著的抑制作用，剂量加大作用增强，但剂量—效应曲线平缓。对于IL-2，风湿平也有显著抑制作用，但剂量—效应关系不明显。
5.2 对IL-1、IL-6的影响
NIH小鼠体重18～22g，雌雄各半，70只随机分为7组，分别灌服不同剂量的风湿平或其它药物，每日1次，连续10天，末次药后24小时处死，按法取腹腔巨噬细胞及脾细胞，测定IL-1及IL-6。
IL-1的测定：
无菌条件下取腹腔巨噬细胞，用Hank’s液洗涤两次，无血清RP-MI1640洗涤一次，用5％ FCS-RPM1 1640调制成4×106/ml细胞悬液，取1ml于康氏管中，37℃ 5％CO2条件下培养1小时，弃未粘附细胞，加入5％FCS-RPM1 1640和LPS(10ng/ml)，37℃5％CO2条件下培养72小时，反复冻融，4℃保存。另取C57小鼠，在无菌条件下取胸腺细胞，用5％FCS-RPM11640调制成1×106/ml细胞悬液。
取胸腺细胞悬液和冻融上清各100μl加入96孔平底细胞培养板，每份样品作三复孔，同时作不同稀释度标准品rHIL-1和培养液对照，然后加入ConA2ng/孔，平板置37℃ 5％CO2条件培养72小时，于终止培养前14小时加入3H-TdR0.1μCi/孔，用多头细胞收集仪收集细胞，测cpm值。
Figure C02828642D00231
IL-6的测定：
无菌条件下取小鼠脾细胞，用Hank’s液洗涤两次，无血清RPM11640洗涤一次，用5％FC～RPM1 1640调制成2×106/ml细胞悬液，取1ml于康氏管中，加入ConA(10ng/ml)，37℃ 5％CO2条件下培养72小时。
取对数生长期、IL-6依赖性生长的MH60细胞，用5％FC-RPMI1640调制成1×105/ml细胞悬液。
在96孔平底细胞培养板中加入MH60细胞悬液100μl/孔、培养上清液25μl/孔，用5％FCS-RPMI 1640补足200μl/孔，每份样品作三复孔，同时作不同稀释度标准rHIL-6和培养液对照。37℃5％CO2条件下培养72小时，终止培养前6小时离心，去上清110μl/孔，加入MTT10μl/孔，37℃3小时，测OD570nm和OD630nm值，每孔OD值＝OD570nm-OD630nm。
Figure C02828642D00241
表5.2  对小鼠IL-1、IL-6的影响(x±S)
由表可见，风湿平对小鼠腹腔巨噬细胞生成IL-1及脾细胞生成IL-6均有强的抑制作用，并随剂量加大，作用增加。
5.3  对佐剂性关节炎大鼠血浆NO的影响
SD大鼠160～200g雌雄各半，60只随机分为6组：空白对照组，每鼠右后足跖皮内注射NS 0.5ml；模型组及风湿平高、中、低剂量组及雷公藤多甙组，每鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(FCA)0.5ml。于造模18天形成大鼠佐剂性关节炎(AA)后开始灌胃给药，每天1次，连续5天，空白对照组和模型组给予蒸馏水；高、中、低剂量组分别给予高、中、低剂量的风湿平，阳性对照组给予雷公藤多甙片。末次药后1小时腹主脉取血2ml，分离血浆，-70℃保存待测。NO的测定按NO试剂盒说明书进行：取血浆0.1ml加0.6mlC试剂混匀，加双蒸水0.4ml，混匀，加0.1mlD试剂混匀，冰上孵育60min，12000转离心2min，取上清0.6ml加0.4ml双蒸水及0.1mlA试剂，冰水孵育15min之后，加0.1mlB试剂，室温放置1小时，545nm比色读OD值。根据样品OD值，按标准曲线计算NO含量，结果见表5.3。
表5.3  风湿平对佐剂性关节炎大鼠血浆NO的影响(x±S)
Figure C02828642D00251
与模型组比较＊P<0.05，＊＊P<0.01；与雷公藤多甙比较△△P<0.01
由表5.3可见，模型组大鼠血浆NO水平显著高于空白对照组，风湿平可显著降低AA大鼠血浆NO水平，雷公藤多甙片也可降低关节炎大鼠血浆NO水平，但作用明显为弱。
实验例6 对小鼠T淋巴细胞、CD4、CD8及NK细胞的影响
6.1 对正常小鼠淋巴细胞转化的影响
NIH小鼠80只雌雄各半，随机分8组，分别灌服不同药物，每天1次，连续10天，末次药后24小时小鼠处死，无菌条件下取小鼠脾细胞，用Hank’s液洗涤两次，无血清RPM11640洗涤一次，用5％FCS-RP-MI1640调制成2×106/ml细胞悬液。将细胞悬液加入96孔平底细胞培养板，100gμl/孔，每份作3复孔，其中2孔加刺激剂(ConA2ng/孔)作为转化孔，另1孔不加刺激剂，作为对照孔。平板置37℃5％CO2条件培养72小时，终止培养前14小时，加入3H-TdR 0.1μCi/孔。用多头细胞收集仪收集细胞，测cpm值，计算复孔平均值。直接用各组cpm或刺激指数进行比较，刺激指数按下式计算：
Figure C02828642D00252
结果见表6.1。
表6.1  对ConA致小鼠淋巴细胞转化的影响(x±S)
Figure C02828642D00261
与对照相比＊P<0.05，＊＊P<0.01
由表6.1可见，风湿平对ConA刺激下的淋巴细胞转化有显著的抑制作用，并呈一定的量—效关系。
6.2 对正常小鼠CD4、CD8及NK细胞的影响
实验同5.1，停药24小时后用5％FCS-RPIM1640制备小鼠脾细胞悬液，调细胞数为2×108/ml按法测定CD4、CD8及其比值和NK细胞。
CD4、CD8的测定：
取小鼠脾细胞悬液50μl，加在经多聚赖氨酸铺底的玻片上制成细胞涂片。用经尼绒毛分离的小鼠T细胞为阳性对照。细胞涂片经丙酮固定后用正常小鼠血清封闭，加人生物素标记的抗CD4、CD8抗体，37℃孵育2小时，加酶标亲和素，室温10分钟，加底物10分钟，洗涤，苏木精复染2分钟。梯度酒精脱水后，明胶甘油封片，高倍显微镜下数200个细胞。
Figure C02828642D00262
NK细胞的测定：
EC细胞制备：无菌条件下取小鼠脾细胞，用Hank’s液洗涤两次，无血清RPMI1640洗涤一次，用5％FCS-RPMI1640调制成2×108/ml细胞悬液，作为EC。
TC细胞制备：对数生长期、小鼠NK细胞敏感的Yack-1细胞调制成4×104/ml细胞悬液，作为TC。
测定：取EC和TC各100μl加入96孔平底细胞培养板，每份样品作3复孔，同时作EC和TC对照(EC对照：EC100μl+5％FCS RPMI 1640100μl；TC对照：TC100μl+5％FCS RPM1 1640 100μl)。37℃5％CO2条件下培养24小时，终止培养前6小时离心，去上清110μl/孔，加入MTT10μl/孔，37℃3小时测OD570nm和OD630nm值，每孔OD值＝OD570nm-OD630nm。
Figure C02828642D00271
表6.2  风湿平对CD4、CD8、NK细胞的影响(x±S)
Figure C02828642D00272
与对照组比较＊P<0.05，＊＊P<0.01；与Cy比较△△P<0.01
从表6.2可见，风湿平对CD4、CD8细胞均有一定抑制作用，也呈现剂量—效应关系，但剂量—效应曲线很平缓。对CD4的抑制有效剂量为24g/kg，而对CD8细胞则于36g/kg高剂量才有显著抑制作用。相应，对CD4/CD8比值，风湿平无明显影响。环磷酰胺则对CD4、CD8均有强的抑制作用，而对CD8的作用尤强，结果导致CD4/CD8比值大为增高。
对于NK细胞，风湿平也有显著抑制效果，但量—效关系不明确，而环磷酰胺则有强烈的抑制作用，20mg/kg与12、24、36g/kg风湿平的作用相比，均有非常显著的差异。
6.3 对AA小鼠T淋巴细胞数和功能的影响
20±2gNIH小鼠每鼠右后足跖皮内注射Freund’s完全佐剂0.05ml，三周后制成佐剂性关节炎模型。阴性对照组每鼠右后足跖皮内注射生理盐水0.05ml。灌服给药，每日1次，连续5日。5天后分别取各组小鼠外周血推血片，进行酯酶染色。油镜下观察酯酶染色阳性细胞百分率(即外周血中T细胞的百分率)。小鼠麻醉后，取脾脏制成单细胞悬液，PBS洗一次，弃上清，加红细胞溶解液4ml，充分摆动2～3min待红细胞完全溶解后，离心弃上清，荧光洗液洗二次，离心后弃上清，调整细胞浓度为1×106/ml，每管分别加入50μl稀释抗CD4、CD8抗体，4℃孵育1小时，荧光洗液洗两次后加固定液2ml。400目网过滤至FCA管，上流式细胞仪分析，结果见表6.3。
表6.3  对佐剂性关节炎小鼠T细胞的影响(x±s)
Figure C02828642D00281
n＝8，与对照组比较＊P<0.05，＊＊P<0.01；与模型组比较#P<0.05，##P<0.01；与对照组比较▲P>0.05
由表6.3可见，ANAE阳性细胞各组无明显差异，但AA小鼠CD4细胞明显增加，而CD8细胞明显减少，CD4/CD8则明显升高，风湿平治疗可使CD4、CD8、CD4/CD8异常恢复至正常水平。
实验例7 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
NIH小鼠50只，体重18～22g，雌雄各半，随机分为5组，分别灌服同体积不同剂量的药液，每日1次，连续1周，末次药后1h，每鼠腹腔注入10％鸡红细胞0.2ml，4h后小鼠处死，取出腹腔液，用滴片法于镜下观察并计数吞噬有CRBC的巨噬细胞数及每巨噬细胞吞噬CRBC的数目，结果见表7。
表7  风湿平对ICR小鼠腹腔巨噬CRBC能力和影响(x±S)
Figure C02828642D00291
＊P<0.05
由表7可见，于27、40.5及60.9g/kg剂量，风湿平对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力均无明显影响。
实验例8 对小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的影响
NIH小鼠90只体重18～22g，雌雄各半，随机分9组，分别灌服同体积不同剂量的药液1次或每日1次，连续3日，末次药后1小时，每鼠腹腔注射0.7％HAC生理盐水溶液，同时iv 0.5％依文思蓝生理盐水0.1ml/10g，30分钟后小鼠脱颈椎处死，剪开腹腔，每鼠用5ml生理盐水分数次冲洗腹腔，吸出冲洗液，合并，并添加生理盐水定容至8ml/鼠，3000rpm离心后取上清液于590nm比色测OD值，结果见表8。
表8  风湿平对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的影响(x±S)
Figure C02828642D00292
由表8结果可见，风湿平对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进，给药1次时无明显作用，连续给药3天则有显著的抑制效果。
实验例9 对鹿角菜胶所致小鼠胸膜炎渗出和炎性细胞聚集的影响
小鼠随机分组后，分别于尾静脉按0.1ml/10g体重注入0.5％伊文思兰生理盐水溶液，小鼠以乙醚浅麻，并按0.03ml/只给小鼠右胸腔内用特制针头注入1％鹿角菜胶液。分别于致炎后4h和32h断头处死小鼠，剪开腹部，暴露膈肌，以1ml注射器分两次注入总量为2ml的胸腔洗液，并收集洗液于试管中。取上述洗出液20μl，加于400μl白细胞稀释液中，于镜下进行白细胞计数。余液3000rpm离心10min，取上清液于600nm处比色测定光密度，以胸腔洗液原液校零，结果见表9。
表9  风湿平对鹿角菜胶所致小鼠胸膜炎细胞聚集的影响(x±S)
Figure C02828642D00301
＊P<0.05，＊＊P<0.01
由表9可见，风湿平对小鼠胸膜炎白细胞聚集有显著的抑制效果，此作用以对早期聚集为尤强，4h时得到回归方程y＝44.13-2.01x，r＝-0.9625，对晚期聚集弱，至20g/kg剂量方有显著效果，对胸膜炎渗出则无明显影响。
实验例10 对大鼠CMC囊中自细胞聚集的影响
SD大鼠体重150～180g，雌雄各半，64只随机分为8组，分别灌服相同体积不同剂量的药液1次或每日1次，连续3日。实验日向前一日预先于大鼠背部注射20ml空气造成的气囊中注入1％CMC溶液20ml，于3.5h及7.5h各吸取囊液0.1ml，置于0.01％亮甲酚蓝PBS溶液中染色，于镜下计数CMC囊液中白细胞数，结果见表10。
表10  风湿平对大鼠羧甲基纤维素囊白细胞数的响(x±S)
Figure C02828642D00311
与对照相比＊＊P<0.01
从表10可见，风湿平对大鼠CMC囊中白细胞聚集有显著的抑制作用，并呈明显量—效关系并随给药时间延长，作用增强，连续给药7天，于18g/kg即能非常显著地抑制白细胞游走，可的松囊内注射，也有很强的抑制效果。
实验例11 对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响
NIH小鼠60只，体重18～22g，雄雌各半，随机分为6组，分别灌服同体积不同剂量的药液或西黄芪胶液，每日1次，连续3日，末次药后1h，每鼠左耳用2％巴豆油合剂0.02ml均匀涂于耳廓两侧，4h后将小鼠拉断颈椎处死，切取左右耳片，按法称取致炎及对照耳片重量，以左右耳片重量之差的mg数为耳肿胀程度，结果见表11。
表11  风湿平对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响(x±S)
Figure C02828642D00321
由表11可见，风湿平对巴豆油所致小鼠耳肿有显著抑制作用，且具有量—效关系，但量—效关系曲线较平缓，13.5g/kg有显著抑制效果。实验例12对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
昆明种小鼠60只，体重18～22g，雄雌各半，随机分为6组，分别灌服不同剂量的药液或西黄芪胶液，药后1h，每鼠腹腔注射
0。7％HAC生理盐水溶液0.2ml，将小鼠置于玻璃缸中观察各鼠发生扭体反应的潜伏期及20分钟内小鼠扭体次数，结果见表12。
表12  风湿平对醋酸所致小鼠扭体次体的影响(x±S)
由表12可见，风湿平于较大剂量可使醋酸所致小鼠扭体反应发生时间延迟，并明显减少20分钟内小鼠扭体次数，提示风湿平有一定镇痛作用。
实验例13 对AA大鼠血液流变学的影响
SD大鼠体重180±20g，每只大鼠右后足跖皮内注射Freund’s完全佐剂0.05ml制成佐剂性关节炎模型。阴性对照组每只大鼠右后足跖皮内注射生理盐水0.05ml。造模三周后将鼠分为模型组、高、中、低剂量组、阴性对照组和阳性对照组，阳性对照组给予雷公藤多甙片。灌服给药，每日1次，连续5天，末次给药后1小时，于大鼠腹主动脉取血3ml，置于1％肝素抗凝试管中，用NXE-1型锥板式粘度计在230、115、46、23、11.5及5.75S-1切变率下测定全血粘度，用WTP-BII型可调恒压毛细管粘度计测定血浆粘度；用红细胞压积管离心法测红细胞压积、红细胞聚积指数，红细胞刚性指数系由上述结果计算而得，结果见表13。
表13  对佐剂性关节炎大鼠血液流变性的影响(x±S)
Figure C02828642D00331
与阴性对照组比较＊P<0.05，＊＊P<0.01；与模型组比较#P<0.05，##P<0.01
由表13可以看出，AA大鼠血流型性发生明显变化，全血、血浆粘度增高，红细胞压积下降，红细胞聚集指数和刚性指数增加，风湿平治疗可使上述血液流变学指标明显改善。
以上实验例证实了风湿平的药理作用，风湿平许多重要药理作用均有良好的剂量-效应关系，提示临床中可以通过调节剂量以达到最佳疗效。
在中国、日本、澳大利亚进行了风湿平的临床疗效研究。单独使用风湿平胶囊，按国际有关病种诊断、治疗及疗效标准进行观察，结果表明，风湿平对RA的有效率为94％左右，显效率为60％左右，能较快地改善晨僵、肿痛等症状及RA相关检测指标，见表14～21。
表14  治疗组和对照组治疗效果的比较
Figure C02828642D00341
表15  对IgG、IgA、IgM的影响(X±S)
与治疗前比较＊＊P<0.01
表16  对C3、C4的影响(X±S)
Figure C02828642D00343
与治疗前比较＊P<0.05，＊＊P<0.01
表17  对ESR、CRP的影响(X±S)
Figure C02828642D00344
与治疗前比较＊P<0.05，＊＊P<0.01
表18  握力治疗前后的比较(X±S)
Figure C02828642D00345
与治疗前比较＊P<0.05，＊＊P<0.01
表19  对关节肿痛、晨僵的影响(X±S)
Figure C02828642D00346
与治疗前比较＊P<0.05，＊＊P<0.01
表20  对RF阴转的影响
Figure C02828642D00351
在取得显著疗效的同时，风湿平还可使患者血清SIL-2R、STNF、SIL-6R等指标下降，见表21。
表21  对SIL-2R、STNF、SIL-6R等主要指标的影响(X±S)
与治疗前比较＊＊P<0.01
经验证，本发明下述实施例均能实现上述发明效果。
实施例1：
淫羊藿2222g   昆明山海棠2222g
枸杞子1111g   菟丝子1111g
以上四味，昆明山海棠，切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；淫羊藿，切段，分别加15、10、10倍水提取三次，每次1小时；枸杞子粉碎成粗料，用20倍水80℃温浸1小时；菟丝子粉碎成粗粉，用31倍水80℃温浸1小时；四味药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；将四种提取物药粉加入药用淀粉至200g，混匀，装1000粒胶囊。用本发明方法制得的胶囊每粒内装药物提取物0.2g，且每粒胶囊中含淫羊藿甙C33H40O15不得少于2.0mg。常规用量为：口服，一日3次，每次3粒。
实施例2：
昆明山海棠2000g淫羊藿2000g
以上两味，昆明山海棠，切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；淫羊藿，切段，分别加15、10、10倍水提取三次，每次1小时；药材的水煎煮液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；将提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装1000粒胶囊。用本发明方法制得的胶囊每粒内装药物提取物0.2g，且每粒胶囊中含淫羊藿甙C33H40O15不得少于2.0mg。常规用量为：口服，一日3次，每次3粒。
实施例3：
昆明山海棠2000g    淫羊藿2000g
枸杞子1000g
昆明山海棠，切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；淫羊藿，切段，分别加15、10、10倍水提取三次，每次1小时；枸杞子粉碎成粗料，用20倍水80℃温浸1小时；药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装1000粒胶囊。用本发明方法制得的胶囊每粒内装药物提取物0.2g，且每粒胶囊中含淫羊藿甙C33H40O15不得少于2.0mg。常规用量为：口服，一日3次，每次3粒。
实施例4
昆明山海棠2000g    淫羊藿2000g
菟丝子1000g
昆明山海棠，切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；淫羊藿，切段，分别加15、10、10倍水提取三次，每次1小时；菟丝子粉碎成粗粉，用31倍水80℃温浸1小时；四味药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装1000粒胶囊。用本发明方法制得的胶囊每粒内装药物提取物0.2g，且每粒胶囊中含淫羊藿甙C33H40O15不得少于2.0mg。常规用量为：口服，一日3次，每次3粒。
实施例5
昆明山海棠2000g    菟丝子1000g
昆明山海棠，切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；菟丝子粉碎成粗粉，用31倍水80℃温浸1小时；四味药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装1000粒胶囊。用本发明方法制得的胶囊日服用量相当生药量30g/日。
实施例6：
昆明山海棠2000g    枸杞子1000g
昆明山海棠，切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；枸杞子粉碎成粗料，用20倍水80℃温浸1小时；药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装1000粒胶囊。用本发明方法制得的胶囊日服用量相当生药量30g/日。

Claims (18)

1、一种抗风湿药物，其特征在于该药物由下述原料药制成：
昆明山海棠1～4重量份  淫羊藿1～4重量份。
2、如权利要求1所述的抗风湿药物，其特征在于该药物由下述原料药制成：
昆明山海棠2重量份  淫羊藿2重量份。
3、如权利要求2所述的抗风湿药物的制备方法，其特征在于该方法为：
昆明山海棠2000g  淫羊藿2000g
以上两味，昆明山海棠，切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；淫羊藿，切段，分别加15、10、10倍水提取三次，每次1小时；药材的水煎煮液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；将提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装1000粒胶囊；用本发明方法制得的胶囊每粒内装药物提取物0.2g，且每粒胶囊中含淫羊藿甙C33H40O15不得少于2.0mg。
4、一种抗风湿药物，其特征在于该药物由下述原料药制成：
昆明山海棠1～4重量份  淫羊藿1～4重量份  枸杞子1～4重量份。
5、如权利要求4所述的抗风湿药物，其特征在于该药物由下述原料药制成：
昆明山海棠2重量份  淫羊藿2重量份  枸杞子1重量份。
6、如权利要求5所述的抗风湿药物的制备方法，其特征在于该方法为：
昆明山海棠2000g  淫羊藿2000g  枸杞子1000g
昆明山海棠，切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；淫羊藿，切段，分别加15、10、10倍水提取三次，每次1小时；枸杞子粉碎成粗料，用20倍水80℃温浸1小时；药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装1000粒胶囊；用本发明方法制得的胶囊每粒内装药物提取物0.2g，且每粒胶囊中含淫羊藿甙C33H40O15不得少于2.0mg。
7、一种抗风湿药物，其特征在于该药物由下述原料药制成：
昆明山海棠1～4重量份  淫羊藿1～4重量份  菟丝子1～4重量份。
8、如权利要求7所述的抗风湿药物，其特征在于该药物由下述原料药制成：
昆明山海棠2重量份  淫羊藿2重量份  菟丝子1重量份。
9、如权利要求8所述的抗风湿药物的制备方法，其特征在于该方法为：
昆明山海棠2000g  淫羊藿2000g  菟丝子1000g
昆明山海棠，切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；淫羊藿，切段，分别加15、10、10倍水提取三次，每次1小时；菟丝子粉碎成粗粉，用31倍水80℃温浸1小时；四味药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装1000粒胶囊；用本发明方法制得的胶囊每粒内装药物提取物0.2g，且每粒胶囊中含淫羊藿甙C33H40O15不得少于2.0mg。
10、如权利要求1、2、4、5、7或8所述的抗风湿药物，其特征在于该药物将上述原料药按比例称取，用常规制剂工艺制成临床接受的丸剂、散剂、膏剂、片剂、胶囊剂。
11、如权利要求1、2、4、5、7或8所述的抗风湿药物，其特征在于由上述原料药当中的有效成分制备而成，其中淫羊藿由淫羊藿甙，淫羊藿次甙I，淫羊藿次甙II和淫羊藿糖甙A中的一种代替，昆明山海棠由昆明山海棠当中的双萜类，三萜类和生物碱类化合物代替，菟丝子和枸杞子由其中所含的黄酮代替。
12、一种抗风湿药物，其特征在于该药物由如下方法之一制成：
昆明山海棠1～4重量份  淫羊藿1～4重量
枸杞子1～4重量份      菟丝子1～4重量份
将昆明山海棠、淫羊藿切碎，分别加水煎煮2-4次，枸杞子、菟丝子分别用80℃～95℃水温浸1～3次，分别每味中药的各次煎煮液或温浸液合并后，各合并液分别上各自对应的大孔吸附树脂柱；吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清，然后用60％-80％乙醇洗脱，至流出液颜色变深时开始收集洗脱液，直至洗脱液颜色由深变极浅时，用水压出柱上乙醇液，并与洗脱液合并，总洗脱液约为药材重量的3～8倍；每味中药的洗脱液分别回收、浓缩至比重1.10，并分别喷雾干燥得各药材提取物；将四种提取物混匀，制成任何临床可接受的剂型；
或称取原料药，淫羊藿、昆明山海棠分别切碎；枸杞子、菟丝子原形或粉碎，以上四味，分别或合并用0～95％的乙醇于10～98℃提取，连续1～4次，提取液分别或合并回收乙醇后浓缩，干燥，粉碎，混匀，制为临床接受的剂型；
上述方法中不包括如下技术方案：
称取原料药：淫羊藿1～4重量份、昆明山海棠1～4重量份、枸杞子1～2重量份、菟丝子1～2重量份；
以上四味，淫羊藿、昆明山海棠切碎，分别加水煎煮三次，枸杞子、菟丝子分别用80℃水温浸1～3次，每味中药的三次煎煮液或温浸液分别合并后，各合并液分别上各自对应的市售JD-1(WLD)吸附树脂柱；吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清，然后用70％乙醇洗脱，至流出液颜色变深时开始收集洗脱液，直至洗脱液颜色由深变浅时，用水压出柱上乙醇液，并与洗脱液合并，总洗脱液约为药材重量的3倍；每味中药的洗脱液分别回收、浓缩至比重1.10，并分别喷雾干燥得各药材提取物；将四种提取物混匀，制成任何临床可接受的剂型。
13、如权利要求12所述的一种抗风湿药物，其特征在于该药物由如下方法制成：
昆明山海棠2重量份   淫羊藿2重量份
枸杞子1重量份       菟丝子1重量份
昆明山海棠切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；淫羊藿切段，分别加15、10、10倍水提取三次，每次1小时；枸杞子粉碎成粗料，用20倍水80℃温浸1小时，连续3次；菟丝子粉碎成粗粉，用31倍水80℃温浸1小时，连续3次；四味药材的水煎煮液或水浸出液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱JD-1，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后分别得到提取物药粉；将四种提取物药粉混匀，制成任何临床可接受的剂型。
14、一种抗风湿药物的制备方法，其特征在于该方法为：
昆明山海棠1～4重量份      淫羊藿1～4重量
枸杞子1～4重量份          菟丝子1～4重量份
将昆明山海棠、淫羊藿切碎，分别加水煎煮2-4次，枸杞子、菟丝子分别用80℃～95℃水温浸1～3次，分别每味中药的各次煎煮液或温浸液合并后，各合并液分别上各自对应的大孔吸附树脂柱；吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清，然后用60％-80％乙醇洗脱，至流出液颜色变深时开始收集洗脱液，直至洗脱液颜色由深变极浅时，用水压出柱上乙醇液，并与洗脱液合并，总洗脱液约为药材重量的3～8倍；每味中药的洗脱液分别回收、浓缩至比重1.10，并分别喷雾干燥得各药材提取物；将四种提取物混匀，制成任何临床可接受的剂型；
或称取原料药，淫羊藿、昆明山海棠分别切碎；枸杞子、菟丝子原形或粉碎，以上四味，分别或合并用0～95％的乙醇于10～98℃提取，连续1～4次，提取液分别或合并回收乙醇后浓缩，干燥，粉碎，混匀，制为临床接受的剂型；
上述方法中不包括如下技术方案：
称取原料药：淫羊藿1～4重量份、昆明山海棠1～4重量份、枸杞子1～2重量份、菟丝子1～2重量份；
以上四味，淫羊藿、昆明山海棠切碎，分别加水煎煮三次，枸杞子、菟丝子分别用80℃水温浸1～3次，每味中药的三次煎煮液或温浸液分别合并后，各合并液分别上各自对应的市售JD-1(WLD)吸附树脂柱；吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清，然后用70％乙醇洗脱，至流出液颜色变深时开始收集洗脱液，直至洗脱液颜色由深变浅时，用水压出柱上乙醇液，并与洗脱液合并，总洗脱液约为药材重量的3倍；每味中药的洗脱液分别回收、浓缩至比重1.10，并分别喷雾干燥得各药材提取物；将四种提取物混匀，制成任何临床可接受的剂型。
15、如权利要求14所述的一种抗风湿药物的制备方法，其特征在于该方法为：
昆明山海棠2重量份     淫羊藿2重量份
枸杞子1重量份         菟丝子1重量份
昆明山海棠切成碎块，分别加13、10、10倍水提取三次，每次1小时；淫羊藿切段，分别加15、10、10倍水提取三次，每次1小时；枸杞子粉碎成粗料，用20倍水80℃温浸1小时，连续3次；菟丝子粉碎成粗粉，用31倍水80℃温浸1小时，连续3次；四味药材的水煎煮液或水浸出液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱JD-1，然后用70％乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后分别得到提取物药粉；将四种提取物药粉混匀，制成任何临床可接受的剂型。
16、如权利要求1、2、4、5、7、8、12或13所述药物在制备抗风湿性关节炎和类风湿性关节炎的药物中的应用。
17、如权利要求1、2、4、5、7、8、12或13所述药物在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的应用。
18、如权利要求1、2、4、5、7、8、12或13所述药物在制备治疗慢性肾炎、克隆氏病或麻风反应的药物中的应用。
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