CN102670746B - 一种用于治疗红斑狼疮的抗血小板活化中药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗红斑狼疮的抗血小板活化中药组合物，该中药组合物的配方主要由丹参、赤芍组成，其制备方法包括将各有效成分的中药材制作成粉末，并将其混合，可制作成颗粒剂或胶囊剂等便于患者服用和携带的形式。本发明主要应用于SLE治疗，不仅可单独应用于早期、轻度SLE治疗，且可与多种NSAIDS、免疫抑制剂或类固醇激素合用，提高现有SLE治疗药物的安全性和疗效。

Description

一种用于治疗红斑狼疮的抗血小板活化中药组合物

技术领域

本发明涉及中医药制剂领域，具体的说，是一种用于治疗红斑狼疮的抗血小板活化中药组合物。

背景技术

系统性红斑狼疮（systemic lupus eythematosus, SLE）为世界公认的重大难治性疾病，也是自身免疫性疾病中致死率最高、发病率较高并主要危害青年女性的严重疾病。由于SLE病因和发病机制不明，发病初期往往缺乏一定的判断标准，临床上常以广泛组织和多器官损伤、症状多样且多变，以及病情进行性加重等为主要特点，因而，迄今治疗乏术，且预后较差，有约10％的患者在发病5年内死亡，10-20％在发病10年内死亡。

目前，SLE的治疗原则为消除炎症的抗炎治疗和纠正病理过程，涉及的药物包括非甾体抗炎药（non-steroid antiinflammatory drugs，NSAIDS）、类固醇激素、免疫抑制剂、抗疟药、性激素干预、生物制剂等。经大量临床研究证实，以激素为代表的化学药物虽确能有效控制或延缓SLE造成的多脏器损害，降低致死率，但长期或大剂量使用都可造成较大的毒副作用，例如：NSAIDS可造成急性肾功能不全或药物性肝损害；类固醇激素长期使用可导致感染、糖尿病、骨质疏松、股骨头坏死等多种副作用；免疫抑制剂则可导致机体免疫功能低下，易感其他疾病。近年来，药物副作用及其所致免疫抑制状态诱发的感染甚至已跃居成为SLE的第一死因。

随着生物学的长足发展，SLE的细胞和分子机制正被逐渐揭示，针对免疫反应某些关键环节的生物制剂正显示越来越广阔的应用前景，但均尚处于临床前研究或临床试验阶段，且某些研究结果存在较大争议；不仅如此，生物制剂已被观察到某些毒副作用，如已有研究发现应用抗CD40L单克隆抗体可导致原因不明的血栓形成。因此，现有药物药效和安全性之间的矛盾也成为了目前SLE治疗的主要矛盾之一。

 最新的研究显示血小板活化在红斑狼疮的发作过程中有重要作用，激活的血小板可通过sCD154（免疫分子）增加干扰素分泌进而加重自身免疫反应，阻断该过程可能成为SLE治疗新途径。但目前常用的抗凝血剂因副作用较多、治疗窗窄而易发生出血事件等原因，很难直接用于上述目的。而本发明则采用中药来抑制血小板活化且无明显毒副作用，还可与现有药物合并应用，其前景可期。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于治疗红斑狼疮的抗血小板活化中药组合物，其药理机制为抑制血小板活化及雌激素拮抗，适用于各种类型的红斑狼疮，与现有治疗药物联合应用可明显减少后者使用量，降低其毒副作用。

本发明通过下述方案实现：一种用于治疗红斑狼疮的抗血小板活化中药组合物，该中药组合物配方主要由丹参、赤芍组成，其作用机制为抑制血小板活化及雌激素拮抗，适用于各种类型的红斑狼疮，质量可控度高、临床前研究显示药效良好。

该组合物配方按生药的重量百分比计由丹参20～80%和赤芍20～80%组成。

为了达到更好的治疗效果，该中药组合物配方中还包括黄芪或玄参中的至少一种。

该组合物配方按生药的重量百分比计由黄芪0～50%、玄参0～60%、丹参20～80%和赤芍20～80%组成。所述的黄芪采用黄芪生药、黄芪饮片或黄芪炮制品；所述的玄参采用玄参生药、玄参饮片或玄参炮制品；所述的丹参采用丹参生药、丹参饮片或丹参炮制品；所述的赤芍采用赤芍生药、赤芍饮片或赤芍炮制品。

该组合物配方按提取物的重量百分比计由黄芪0-20%、玄参0-50%、丹参20-80%和赤芍20～80%组成。所述的黄芪采用黄芪总多糖；所述的玄参采用玄参总苷；所述的丹参采用丹参总酚酸；所述的赤芍采用赤芍总苷。

为了便于患者的携带和服用，所述临床口服剂型为片剂、胶囊剂或颗粒剂。

由于本发明所述的中药化合物的有效组分明确，因此制备方法也较简单，包括如下步骤：

（a）取黄芪、玄参、丹参、赤芍，制成粉末状， 

（b）按比例混合步骤（a）所制取的黄芪、玄参、丹参、赤芍粉末。

步骤（a）分为两种情况：一种方式为黄芪选用黄芪生药、黄芪饮片或黄芪炮制品；玄参选用玄参生药、玄参饮片或玄参炮制品；丹参选用丹参生药、丹参饮片或丹参炮制品；赤芍选用赤芍生药、赤芍饮片或赤芍炮制品；将上述药品直接制成粉末状；另一种方式黄芪选用黄芪总多糖；玄参选用玄参总苷；丹参选用丹参总酚酸；赤芍选用赤芍总苷；将上述提取物制成粉末状。

当黄芪、玄参、丹参、赤芍选用提取物时，所述的黄芪药材粉依次经过粗提、层析、蒸发、干燥后制得黄芪总多糖；所述的玄参药材依次经过粗提、洗脱、浓缩、干燥后制得玄参总苷；所述的丹参药材依次经过粗提、洗脱、浓缩、冻干后制得丹参总酚酸；所述的赤芍依次经过粗提、洗脱、浓缩、干燥后制得赤芍总苷。

本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

（1）本发明所述的中药组合物来源于临床验方，并经药理学方法进行组方合理性筛选和验证，适用于各阶段SLE的治疗。

（2）本发明所述的中药组合物的药效经大量药理学实验证实，单独应用可延缓SLE发病进程。

（3）本发明所述的中药组合物的药效经大量药理学实验证实，与现有SLE治疗有效药物联合应用可在提高或保持现有药物疗效的前提下，减少其使用量，进而降低其毒副作用。

（4）本发明所述的中药组合物的作用机理明确，主要为抑制血小板活化，减少sCD154分泌，进而抑制干扰素分泌导致的自身免疫反应加重。

（5）本发明所述的中药组合物具有良好的安全性，临床应用未出现任何不良反应，临床前的大鼠及小鼠急性毒性研究表明其在最大给药量情况下，未见任何不良反应。

（6）本发明所述的中药组合物有效组分明确，经提取后可制成各种口服剂型，质量可控，体积较小，携带方便。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：

该用于治疗红斑狼疮的中药组合物，来源于临床验方，其组成的有效组分经过多种红斑狼疮药理学模型证明有效后而提出，其配方主要由丹参、赤芍组成，主要作用机制可抑制血小板活化及雌激素拮抗，适用于各种类型的红斑狼疮，与现有治疗药物联合应用还可明显减少后者使用量，降低其毒副作用。为了达到更好的治疗效果，在该配方中还可以加入黄芪或玄参中的至少一种。临床试验证明，加入了黄芪、玄参的药物配方比未加入黄芪、玄参的药物治疗效果要好。进一步，黄芪选用黄芪（生药、饮片或其炮制品）或黄芪总多糖；玄参选用玄参（生药、饮片或其炮制品）或玄参总苷；丹参选用丹参（生药、饮片或其炮制品）或丹参总酚酸；赤芍选用赤芍（生药、饮片或其炮制品）或赤芍总苷。黄芪总多糖、玄参总苷、丹参总酚酸、赤芍总苷均属于提取物。

由于本发明所述的中药组合物的有效组分明确，因此它的制备方法也较简单，制备方法如下：第一步，选取黄芪、玄参、丹参、赤芍，并制成粉末状，第二步，将步骤一中所制得的黄芪、玄参、丹参、赤芍粉末按比例混合。由于上述的四种中药材的生药、饮片及其炮制品均可直接用于中药的配方，并且在选用生药或提取物时，其配比有所变换，因此当黄芪选用黄芪（生药、饮片或其炮制品）、玄参选用玄参（生药、饮片或其炮制品）、丹参选用丹参（生药、饮片或其炮制品）、赤芍选用赤芍（生药、饮片或其炮制品）时，按生药的重量百分比计其配比为：黄芪0%～50%、玄参0%～60%、丹参20%～80%、赤芍20%～80%；当黄芪选用黄芪总多糖、玄参选用玄参总苷、丹参选用丹参总酚酸、赤芍选用赤芍总苷时，按提取物的重量百分比计其配比为：黄芪0-20%、玄参0-50%、丹参20-80%和赤芍20～80%。而其混合后的组合物还可直接装胶囊制成胶囊剂或直接采用颗粒剂、片剂，更便于患者的携带和服用。

黄芪、玄参、丹参、赤芍采用提取物时，首先应制备提取物，黄芪药材粉依次经过粗提、层析、蒸发、干燥后制得黄芪总多糖；玄参药材依次经过粗提、洗脱、浓缩、干燥后制得玄参总苷；丹参药材依次经过粗提、洗脱、浓缩、冻干后制得丹参总酚酸；赤芍依次经过粗提、洗脱、浓缩、干燥后制得赤芍总苷。

以制得黄芪总多糖20%、玄参总苷20%、丹参总酚酸30%、赤芍总苷30%（按重量百分比计）为例，它们的制取方法如下：

（1）取黄芪药材粉500g，加水2.5L在90℃恒温浸提4小时。将浸提液过滤，静置后取上清液，减压浓缩至粘稠糊状后，加95%乙醇至含醇量达到75%，密闭冷藏沉淀12小时，取沉淀加水溶解，旋转蒸发仪蒸发至多糖粘附于皿壁后，置真空干燥箱中干燥，得黄芪总多糖粗提物。以Bio-Gel P4凝胶过滤柱进行层析，收集糖峰，旋转蒸发仪蒸发至多糖粘附于皿壁后，置真空干燥箱中干燥，得黄芪总多糖。

（2）取玄参药材500g，用10倍量的水煎煮两次，每次3小时。将煎煮液过滤浓缩；浓缩液加乙醇至含醇量达到75%，密闭冷藏沉淀12小时，上清液过滤浓缩；浓缩液按1g固体量/ml的上样量上大孔吸附树脂柱HPD100，洗脱速率为3ml/min，吸附平衡后，用水洗脱至流出液无还原糖反应后，再用5倍柱体积的50%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液浓缩，干燥，即得玄参总苷。

（3）丹参药材500g，粉碎成最粗粉，加0.1mol／L盐酸溶液至液面浸泡过夜后，将药材连同浸泡液一起装柱，以14倍量pH=2的酸水渗漉；合并渗漉液按25mg丹参酚酸B／1ml树脂的上样量上AB-8型大孔树脂柱，洗脱速率为3ml/min，吸附平衡后，先用水淋洗5倍柱体积，再用20％乙醇洗6倍柱体积，最后用40％的乙醇洗脱4倍柱体积，。合并这部分洗脱液，70℃减压脱醇浓缩至适当体积，冻干，即得丹参总酚酸。

（4）取赤芍药材500g，用8倍量的70%的乙醇8回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并提取液，浓缩至无醇味，加适量水溶解，离心，取上清液，调节其浓度为0.1g/ml（每1ml 药液中含生药赤芍量为0.1g），药液通过已处理好的D101 型大孔吸附树脂柱，上样量为芍药苷约48.67mg/g，吸附速率为3ml/min，吸附平衡后，以蒸馏水6个柱体积、30%乙醇5个柱体积依次洗脱，洗脱速率为3ml/min，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15 的药液（50℃热测），喷雾干燥，得赤芍总苷。

（5）取黄芪总多糖粉末20g、玄参总苷粉末20g、丹参总酚酸粉末30g、赤芍总苷粉末30g充分混合后可直接采用片剂、颗粒剂或装胶囊制成胶囊剂等临床常见剂型，便于患者的携带和服用。

实施例2：

本实施例与实施例1的区别仅在于中药组合物按提取物的重量百分比计由丹参总酚酸粉末50g、赤芍总苷粉末50g组成，同样可制成片剂、颗粒剂或胶囊剂等临床常见剂型。

实施例3：

本实施例与实施例2的区别仅在于中药组合物按提取物的重量百分比计由黄芪总多糖粉末5g、玄参总苷粉末20g、丹参总酚酸粉末30g、赤芍总苷粉末45g组成，同样可制成片剂、颗粒剂或胶囊剂等临床常见剂型。

实施例4：

本实施例与实施例3的区别仅在于中药组合物按提取物的重量百分比计由黄芪总多糖粉末10g、玄参总苷粉末30g、丹参总酚酸粉末40g、赤芍总苷粉末20g组成，同样可制成片剂、颗粒剂或胶囊剂等临床常见剂型。

实施例5：

本实施例与实施例4的区别仅在于中药组合物按生药的重量百分比计由玄参饮片粉末50g、丹参炮制品粉末20g、赤芍生药粉末30g组成，同样可制成片剂、颗粒剂或胶囊剂等临床常见剂型。

当然，黄芪、玄参、丹参、赤芍也可以生药粉末与提取物粉末混合，由于生药相对于提取物来说含量较低，采用上述方式时，较少的提取物即相当于较多的生药，故配比也会相应的产生变化，但由于一般情况下不会采用这种方法，故申请人未对其配比进行试验。

实施例6：

为进一步说明本发明的安全性和药效，以制得黄芪总多糖20%、玄参总苷20%、丹参总酚酸30%、赤芍总苷30%（按重量百分比计）为例，通过以下的两组实验分别列举了其部分安全性和药效学的研究结果：

实验1：小鼠急性毒性试验

A、受试物的配置方法

临用时称取适当组合物粉末，以0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）配制成500mg/ml浓度的混悬液。

B、实验动物及条件

屏障系统KM小鼠，体重20±1g，雌雄各半。

试验环境：符合小鼠屏障系统使用设施标准，室温18 - 22℃，日温差不超过3℃，相对湿度60-70%，日光灯照明，12小时明暗相间，自动定时过滤通风换气，换气频度10-15次/小时。分性别饲养于小鼠笼中，每笼5只，全价颗粒饲料及自由饮水、采食，垫料每3天换一次。

C、试验方法

小鼠40只，按体重随机分为药物组、对照组，每组20只，雌雄各半。经预试验发现药物在最大浓度和最大剂量下无明显毒性反应，故进行最大给药量试验。禁食不禁水12小时，药物组以动物能够接受的最大容积40ml/kg，一次性灌胃给予500mg/ml混悬液。对照组按40ml/kg给予0.5%CMC。试验设计如表1。

表1  最大耐受量试验设计

 

给药结束后连续观察4小时，记录动物异常反应。此后每日观察、记录动物外观、行为、分泌物、排泄物 、死亡情况及中毒反应等，连续14日。动物药后1、2、3、7、14天分别称量体重，分别计算雌性、雄性小鼠体重周增长率（%）=（后1周体重－前1周体重）×100/前1周体重。计算数据均用（

±S）（均值±标准差）表示，用t检验比较组间差异的显著性。

观察结束后，全部动物处死，解剖，对心、肝、脾、肺、肾等进行肉眼观察，如有肉眼可见颜色、体积、纹理异常的脏器，进行记录并固定待检。

D、试验结果

小鼠药后4小时内活动、外观、精神状态、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔分泌物均未见异常。24小时后，小鼠大便、外观、行为活动、精神状态、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔分泌物等均未见异常。实验结束解剖动物，肉眼未见脏器异常。

试验期间，无小鼠死亡。药后小鼠体重呈正常增长状态，与对照组比较无统计学差异，见表2、3。

表2   灌胃给予对雄鼠体重的影响（

±S）

表3   灌胃给予对雌鼠体重的影响（

±S）

E、试验结论

小鼠按最大给药量20g/kg灌胃给予受试物混悬液，药后、活动、外观、精神状态、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔分泌物均未见异常。观察期结束后进行大体解剖，肉眼未见脏器异常。

实验2 ：与昆明山海棠片协同应用于红斑狼疮治疗

A、受试物的配置方法

临用时称取适当组合物粉末，以0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）配制成5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml浓度的混悬液。

B、实验动物及条件

SPF级8~10周龄雌性MRL/lpr狼疮小鼠90只，体重20~25 g，由上海斯莱克动物实验有限公司提供；屏障系统昆明小鼠10只，体重20±2g，雌性。

试验环境：符合小鼠屏障系统使用设施标准，室温18~22℃，日温差不超过3℃，相对湿度60-70%，日光灯照明，12小时明暗相间，自动定时过滤通风换气，换气频度10-15次/小时。分性别饲养于小鼠笼中，每笼5只，全价颗粒饲料及自由饮水、采食，垫料每3天换一次。

C、试验方法

狼疮小鼠90只按体重随机分为药物组（昆明山海棠片900mg/kg、昆明山海棠片300mg/kg、昆明山海棠片100mg/kg、受试物200mg/kg、昆明山海棠片100mg/kg +受试物200mg/kg、昆明山海棠100mg/kg +受试物100mg/kg、昆明山海棠100mg/kg +受试物50mg/kg）、阳性对照组（泼尼松片2.5mg/kg）、模型对照组，每组10只；昆明种小鼠10只作为正常对照。灌胃给予受试药物或0.5% CMC，每日1次，连续30日。第31日眼眶静脉丛取血，分离血浆，ELISA测定抗B淋巴细胞刺激因子（Blys）双链DNA抗体（dsDNA）水平。

D、试验结果

研究结果如表4所示。自发性或实验性狼疮小鼠可出现自身免疫相关的细胞因子的变化，例如Blys、dsDNA异常升高，而给予恰当的药物治疗后，其血液中含量可向正常趋向恢复，因而可作为评价药物药效的指标。本研究显示，给予大剂量（900mg/kg）昆明山海棠或皮质激素（泼尼松）、免疫抑制剂（环磷酰胺），均可使自发性红斑狼疮小鼠血浆中Blys、dsDNA明显降低，较低剂量（300mg/kg）时则仅显示较弱作用。但给予该剂量（300mg/kg）同时应用组合物（100mg/kg、200mg/kg）可使Blys、dsDNA明显降低，提示该组合物的应用可显著提高昆明山海棠的药效。

此外，给予900mg/kg昆明山海棠30天，可引起部分动物死亡（10只动物死亡2只），而300mg/kg昆明山海棠与200mg/kg组合物合用，不仅可获得类似药效，且可降低毒性。

上述研究结果提示，采用组合物可显著提高红斑狼疮治疗药物的疗效，同时通过降低药物剂量提高其安全性。

表4  组合物合并昆明山海棠对红斑狼疮生物标志物的影响

其中，在表4中，▲▲表示与空白对照组比较，P＜0.01； **表示与模型对照组比较，P＜0.01；*表示与模型对照组比较，P＜0.05。

由此可知，本发明将由黄芪、玄参、丹参和赤芍组成的中药化合物用于SLE治疗，期间经过大量的研究与实验，不仅提高了现有SLE治疗药物的安全性和疗效，还可与多种NSAIDS、免疫抑制剂或类固醇激素合用，在保持这些药物药效的情况下，降低其用量，从而进一步提高其安全性。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质上对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种用于治疗红斑狼疮的抗血小板活化中药组合物，其特征在于：该中药组合物配方按重量百分比计由黄芪总多糖20%、玄参总苷20%、丹参总酚酸30%、赤芍总苷30%组成；其中，

黄芪总多糖的制备方法为：取黄芪药材粉500g，加水2.5L在90℃恒温浸提4小时；将浸提液过滤，静置后取上清液，减压浓缩至粘稠糊状后，加95%乙醇至含醇量达到75%，密闭冷藏沉淀12小时，取沉淀加水溶解，旋转蒸发仪蒸发至多糖粘附于皿壁后，置真空干燥箱中干燥，得黄芪总多糖粗提物；以Bio-Gel P4凝胶过滤柱进行层析，收集糖峰，旋转蒸发仪蒸发至多糖粘附于皿壁后，置真空干燥箱中干燥，得黄芪总多糖；

玄参总苷的制备方法为：取玄参药材500g，用10倍量的水煎煮两次，每次3小时；将煎煮液过滤浓缩；浓缩液加乙醇至含醇量达到75%，密闭冷藏沉淀12小时，上清液过滤浓缩；浓缩液按1g固体量/ml的上样量上大孔吸附树脂柱HPD100，洗脱速率为3ml/min，吸附平衡后，用水洗脱至流出液无还原糖反应后，再用5倍柱体积的50%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液浓缩，干燥，即得玄参总苷；

丹参总酚酸的制备方法为：丹参药材500g，粉碎成最粗粉，加0.1mol／L盐酸溶液至液面浸泡过夜后，将药材连同浸泡液一起装柱，以14倍量pH=2的酸水渗漉；合并渗漉液，按25mg丹参酚酸B／1ml树脂的上样量上AB-8型大孔树脂柱，洗脱速率为3ml/min，吸附平衡后，先用水淋洗5倍柱体积，再用20％乙醇洗6倍柱体积，最后用40％的乙醇洗脱4倍柱体积，合并这部分洗脱液，70℃减压脱醇浓缩至适当体积，冻干，即得丹参总酚酸；

赤芍总苷的制备方法为：取赤芍药材500g，用8倍量的70%的乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并提取液，浓缩至无醇味，加适量水溶解，离心，取上清液，调节其浓度为0.1g/ml，即每1ml 药液中含生药赤芍量为0.1g，药液通过已处理好的D101 型大孔吸附树脂柱，上样量为芍药苷48.67mg/g，吸附速率为3ml/min，吸附平衡后，以蒸馏水6个柱体积、30%乙醇5个柱体积依次洗脱，洗脱速率为3ml/min，回收乙醇，浓缩至50℃热测条件下相对密度为1.15 的药液，喷雾干燥，得赤芍总苷。

2.根据权利要求1所述的一种用于治疗红斑狼疮的抗血小板活化中药组合物，其特征在于：所述中药组合物的临床口服剂型为片剂、胶囊剂或颗粒剂。