CN110025652A - 一种防治肝损伤的鸡骨草提取物组合物、制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种防治肝损伤的鸡骨草提取物组合物、制备方法及其应用，所述提取物组合物由以下配比活性成分组成：鸡骨草总皂苷5‑25份、鸡骨草总黄酮0‑15份，本发明还包括鸡骨草中总黄酮、总皂苷的提取方法和该提取物组合物的应用。所述提取物组合物可用于制备治疗肝损伤疾病的药物中。其优点表现在：(1)通过优化鸡骨草总黄酮、总皂苷的提取工艺，产物得率高。(2)提取物组合物及其之间的配比经过试验筛选，在治疗肝损伤疾病中效果显著。(3)本发明提取物组合物用于制备药物时，可制备成多种剂型，便于患者使用，为患者提供了便利，可很好的应用于临床上，具有很好的应用前景。

Description

一种防治肝损伤的鸡骨草提取物组合物、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体地说，是一种防治肝损伤的鸡骨草提取物组合物、制备方法及其应用。
背景技术
南药鸡骨草为豆科相思子属植物广州相思子AbruscantoniensisHance(AC)的干燥全株。具有利湿退黄，清热解毒，疏肝止痛的功效；用于治疗湿热黄疸，胁肋不舒，胃脘胀痛，乳痈肿痛等疾病。最早记载于《岭南采药录》：“茎似铁线，叶如冬瓜仁，对生，凡黄食症，取其根约七、八钱，和猪骨约二两，煮四、五点钟服之，三、四便愈。”《南宁市药物志》记载道：“治传染性肝炎，跌打驳骨”。《岭南草药志》也记述道：“味微苦，性凉。清郁热，舒肝，和脾，续折伤”。并用于治急、慢性肝炎，肝硬化腹水，胃痛，风湿骨痛，毒蛇咬伤，可作夏季清凉饮料。
鸡骨草全草含相思子碱(Abrine，即N-甲基色氨酸)、胆碱(Choline)、腺苷类、甾醇类、三萜皂苷类、黄酮类、氨基酸、糖类。种子含相思子毒蛋白、相思子酸、尿酸。根中含大黄酚(chrysophanol)和大黄素甲醚(physcion)。从鸡骨草粗皂苷的水解物中得到多种三萜皂苷元，有相思子皂醇(abrisapogenol)A、B、C、D、E、F、G，大豆皂醇(soyasapogenol)A、B，葛根皂醇(kudzusapogenol)A，槐花二醇(sophoradiol)，广东相思子三醇(cantoniensistriol)，甘草次酸(glycyrrhetinicacid)，光果甘草内酯(glabrolide)。三萜皂苷以相思子皂苷(abrisaponin)系列和大豆皂苷(soyasaponin)系列为主。
现代研究表明鸡骨草具有抗氧化、抗肿瘤以及免疫调节等作用，并具有较好的防治急慢性肝损伤的作用。
药理实验表明鸡骨草有显著的护肝作用。鸡骨草和毛鸡骨草水煎液均可降低CCl4及卡介苗和脂多糖诱导免疫性肝损伤小鼠血清ALT活性，对免疫性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶的升高有明显的降低作用。
鸡骨草临床用于治疗肝炎，胆囊炎，肝硬化腹水，黄疸，胃痛，乳腺炎等。鸡骨草应用于护肝退黄和乳腺炎虽然历史较长，但其药理作用的物质基础即哪些化学部位和哪些药理作用相关联却并不十分清楚。国内也未见其有效部位的开发。
中国专利申请：CN104069154A公开了一种鸡骨草总皂苷的提取方法。方法步骤如下：1)将鸡骨草烘干，粉碎；2)称取一定量的鸡骨草粉末加水浸润，然后加入鸡骨草粉末重量0.5％-3％的生物酶试剂进行酶解处理；3)酶解完成后，加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；4)将提取液过滤，滤渣重复提取，合并提取液，减压浓缩，得到鸡骨草总皂苷浓缩液；5)浓缩液用有机溶剂萃取，收集所需层液减压浓缩，干燥，即得鸡骨草总皂苷。
中国专利申请：CN101468106A公开了鸡骨草胶囊在制备防治肝纤维化药物中的应用，涉及医药领域。该发明用中毒性肝纤维化模型—四氯化碳复合因素致大鼠肝纤维化观察鸡骨草胶囊对肝纤维化的防治作用；用猪血清致大鼠免疫性肝纤维化模型观察鸡骨草胶囊对免疫性肝损伤(肝纤维化)的防治作用。结果证实鸡骨草胶囊对四氯化碳复合因素引起的大鼠肝纤维化和猪血清引起的大鼠免疫性肝纤维化有明显的防治作用，对两种肝纤维化病理学有改善作用。但是关于本发明一种防治肝损伤的鸡骨草提取物组合物、制备方法及其应用目前还未见报道。
发明内容
本发明的第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种防治肝损伤的鸡骨草提取物组合物。
本发明的第二个目的是针对现有技术的不足，提供一种如上组合物的制备方法。
本发明的第三个目的是针对现有技术的不足，提供如上组合物的用途。
为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：
一种防治肝损伤的鸡骨草提取物组合物，所述提取物组合物的活性成分由以下重量份的原料药组成：11.5-23.5份、鸡骨草总黄酮6.5-18.5份。
作为本发明的一个优选实施方案，所述提取物组合物的活性成分由以下重量份的原料药组成：14.5-20.5份、鸡骨草总黄酮9.5-15.5份。
作为本发明的一个优选实施方案，所述提取物组合物的活性成分由以下重量份的原料药组成：鸡骨草总皂苷17.5份、鸡骨草总黄酮12.5份。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
如上任一所述鸡骨草提取物组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取鸡骨草或毛鸡骨草药材原料药，洗净、粉碎，用石油醚浸泡脱脂，用乙醇于90℃加热回流提取，收集每次醇提液，抽滤，减压浓缩，加入水调节比重至1.05g/ml；
(2)将浓缩后的醇提液分别用A溶剂与A+B溶剂萃取，回收萃取液并减压旋蒸，分别得到A和B部位浸膏，分别将鸡骨草A和B部位浸膏用蒸馏水调节比重至1.03-1.05g/ml；
(3)将调节比重后的A和B部位浸膏的水层分别用大孔树脂或聚酰胺树脂装柱吸附，蒸馏水洗脱除杂，首先依次用浓度为C、D、E、F的乙醇对处理后的A浸膏洗脱，收集洗脱液，回收溶剂并减压浓缩干燥，得总黄酮提取物；然后依次用浓度为G、H、I的乙醇对处理后的B浸膏洗脱，收集洗脱液，回收溶剂并减压浓缩干燥，得总皂苷提取物；
(4)将总黄酮提取物与总皂苷提取物按照权利要求1所述重量份混合。
作为本发明的一个优选实施方案，所述步骤(1)中，用乙醇提取时，采用的乙醇的百分比浓度为70-95％，提取次数为2次，每次提取时间均为2h，每次用量均为生药量的11-20倍体积。
作为本发明的一个优选实施方案，所述步骤(2)中萃取所用A溶剂是乙酸乙酯，所用B溶剂是正丁醇，A部位浸膏是乙酸乙酯浸膏，B部位浸膏是正丁醇浸膏。
作为本发明的一个优选实施方案，所述步骤(3)中大孔树脂是指AB-8、D-101、ZTC-1、SP905型树脂，用量是体积为生药量的3-5倍，浓度为C-F的乙醇依次是指浓度为20％、30％、50％、70％的乙醇，所述浓度为G-I的乙醇依次是指浓度为30％、45％、55％的乙醇。
作为本发明的一个优选实施方案，所述步骤(3)中，树脂洗脱方式为，3-5倍树脂体积的水洗脱除杂，然后依次用浓度为C-F的乙醇洗脱，颜色变深后开始收集，收集浓度为30％-70％的洗脱液，回收溶剂，干燥，得总黄酮提取物，然后依次用浓度为G-I的乙醇洗脱，颜色变深后开始收集，收集浓度为45-55％乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，得总皂苷提取物。
为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：
如上任一所述的鸡骨草提取物组合物的药物用途，所述用途是鸡骨草提取物组合物用于制备治疗和预防急性肝损伤和预防湿热病的药物或食品中的应用。
作为本发明的一个优选实施方案，所述急性肝损伤包括：急性免疫性肝损伤、训练肝损伤，所述药物可根据中药常规制备方法制备成临床上可接受的药物制剂，所述药物制剂的剂型是片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、滴丸剂、丸剂、口嚼片、含片、膏剂、合剂、贴剂、或凝胶剂，所述食品是口香糖、凉茶。
本发明通过优化鸡骨草总黄酮、总皂苷的提取工艺，得到鸡骨草总黄酮、总皂苷，得到的组合物具有较好地防治化学性及免疫性肝损伤的作用，两者之间以适当比例配合，可以达到较好的协同作用。
本发明优点在于：
1、本发明通过优化鸡骨草中总皂苷与总黄酮的提取工艺，具有工艺步骤简单，得率高，环境友好的优点。
2、本发明通过提取鸡骨草中的总皂苷与总黄酮作为治疗免疫性肝损伤疾病的药物中的活性成分，具有效果显著的优点，且本发明提取物组合物及其之间的配比经过试验筛选，在治疗肝损伤疾病中效果显著。
3、本发明提取物组合物用于制备药物时，可制备成多种剂型，便于患者使用，为患者提供了便利，可很好的应用于临床上，具有很好的应用前景。
附图说明
附图1是鸡骨草各组分对CCl4肝损伤模型小鼠肝组织MDA水平的影响结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1鸡骨草提取物组合物ACT的制备
一、实验材料及器材
1、实验材料
鸡骨草干燥药材10kg、石油醚、浓度为20％、30％、45％、55％、50％、70％、90％、95％的乙醇、蒸馏水、乙酸乙酯、聚酰胺柱、三氯化铝、正丁醇
2、实验器材
聚酰胺柱、D101大孔树脂
二、实验方法
(一)总黄酮提取物的制备与检测
鸡骨草干燥药材10kg粉碎，用10倍体积石油醚脱脂，晾干后加入11倍90％的乙醇于90℃热回流提取2h，共2次，趁热抽滤，滤液经过减压浓缩后，加入水调节比重至1.04g/ml，乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩得浸膏，以蒸馏水调节比重至1.04g/ml，加载于聚酰胺柱子上，分别用5倍柱体积的蒸馏水、20％、30％、50％、70％乙醇洗脱，收集30％～70％乙醇洗脱液减压浓缩干燥得到总黄酮。
按照《中国药典》2015版一部附录分光光度法测定总黄酮的含量。以槲皮素为对照品，以三氯化铝为显色剂，检测波长为431nm，测得总黄酮质量分数为38.5％。经LC/MS检测，主要含芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷、异夏佛塔苷、芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-木糖苷、荭草素、异荭草苷、木犀草素、8--羟基-4'-甲氧基-异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、4',7-二羟基-8-甲氧基异黄酮、4',7-二羟基-6-甲氧基-异黄酮、4',6-二羟基-7-甲氧基-异黄酮、6,7-二羟基-4'-甲氧基-异黄酮、7,8-二羟基-4'-甲氧基-异黄酮等成分。
(二)总皂苷提取物的制备与检测
鸡骨草干燥药材粉碎，加入适量石油醚浸泡至无色，将脱脂后的鸡骨草药材晾干，加入10倍95％的乙醇，90℃分别进行加热回流提取2h，共2次，趁热抽滤，滤液经过减压浓缩后加调节比重至1.03g/ml，再依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，正丁醇萃取液减压浓缩得浸膏，蒸馏水调节比重至1.03g/ml，加载至经预处理的D101大孔树脂上，依次用3倍柱体积的蒸馏水、30％、45％、55％乙醇洗脱，收集30～55％乙醇洗脱液减压浓缩干燥得到总皂苷。
采用HPLC分析，齐墩果酸为对照品，乙腈和水(86:14)为流动相，检测波长：205nm，总皂苷含量为46.8％。LC-MS分析结果主要含山豆根皂苷Ⅴ、相思子皂苷L、葛根皂苷A3、相思子皂苷D2、相思子皂苷SB、山豆根皂苷Ⅳ、大豆皂苷A3、山豆根皂苷Ⅰ、刺槐皂苷E等成分。
(三)鸡骨草组合物ACT的制备
鸡骨草皂苷17.5份、鸡骨草总黄酮12.5份合并得鸡骨草组合物ACT。
实施例2制备鸡骨草组合物ACT最优条件的验证
一、实验材料与器材
1、实验材料
鸡骨草干燥药材1200g、石油醚、浓度为20％、30％、45％、55％、50％、70％、90％、95％的乙醇、蒸馏水、乙酸乙酯、聚酰胺柱、三氯化铝、正丁醇、
2、实验器材
HZ-801大孔树脂吸附柱、聚酰胺柱、D101大孔树脂
二、实验方法
将鸡骨草干燥药材1200g分成两组，分别为实验组与对照组，每组600g。
实验组按照如下制备方法进行制备：
鸡骨草干燥药材300g粉碎，用10倍体积石油醚脱脂，晾干后加入11倍体积90％的乙醇于90℃热回流提取2h，共2次，趁热抽滤，滤液经过减压浓缩后，加入水调节比重至1.05g/ml，乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩得浸膏，以蒸馏水调节比重至1.04g/ml，加载于聚酰胺柱子上，分别用5倍柱体积的蒸馏水、20％、30％、50％、70％乙醇洗脱，收集30％～70％乙醇洗脱液减压浓缩干燥得到总黄酮，测重。
鸡骨草干燥药材300g粉碎，加入适量石油醚浸泡至无色，将脱脂后的鸡骨草药材晾干，加入11倍体积95％的乙醇，90℃分别进行加热回流提取2h，共2次，趁热抽滤，滤液经过减压浓缩后加调节比重至1.03g/ml，再依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，正丁醇萃取液减压浓缩得浸膏，蒸馏水调节比重至1.03g/ml，加载至经预处理的D101大孔树脂上，依次用3倍柱体积的蒸馏水、30％、45％、55％乙醇洗脱，收集30～55％乙醇洗脱液减压浓缩干燥得到总皂苷，测重。
对照组按照如下制备方法进行制备：
鸡骨草干燥药材300g粉碎，用10倍体积70％乙醇提取三次，每次提取时间为2、1.5、1小时，每次用量依次为2400ml、2100ml、1800ml。收集每次醇提液，过滤后合并；合并的醇提液回收乙醇，浓缩至300ml，用石油醚萃取脱脂，萃取三次，每次石油醚用量为300ml；水层用D101大孔吸附树脂300ml装柱吸附，水900ml洗脱除杂，用浓度为40％的乙醇洗脱，颜色变深后开始收集，收集洗脱液300ml，回收溶剂，干燥，得总黄酮，测重。
鸡骨草干燥药材300g粉碎，用10倍体积70％乙醇提取三次，每次提取时间为2、1.5、1小时，每次用量依次为2400ml、2100ml、1800ml。收集每次醇提液，过滤后合并；合并的醇提液回收乙醇，浓缩至300ml，用石油醚萃取脱脂，萃取三次，每次石油醚用量为300ml；水层用D101大孔吸附树脂300ml装柱吸附，水900ml洗脱除杂，用浓度为70％的乙醇洗脱，颜色变深后开始收集，收集洗脱液300ml，回收溶剂，干燥，得总皂苷，测重。
三、实验结果
实验结果测得：实验组得总黄酮5.2g，总皂苷1.2g，对照组得总黄酮4.1g，总皂苷0.88g。
四、实验结论
通过本发明的制备方法提取总黄酮与总皂苷，其制备得率高。
实施例3提取物组合物颗粒剂的制备
取实施例1制备的提取物50g并加入辅料制粒，干燥，过300目筛。包装成10g/袋，成品颗粒。所述的辅料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸盐等。
实施例4提取物组合物片剂/胶囊剂的制备
取实施例1制备的提取物50g，淀粉40g，乳糖30g，微晶纤维素30g，7％淀粉浆适量，硬脂酸镁1％，按上述配比将提取物粉末、淀粉、乳糖、微晶纤维素分别过80目筛，混匀，再过40目筛3次，将上述混合粉用7％淀粉浆制软材，过24目筛粒，50℃干燥2小时，干燥颗粒过30目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片，得片剂1000片。
实施例5袋泡茶的制备
取实施例1制备的提取物50g，加1％白砂糖，以袋泡茶包装材料分装成1000包即可。或以茶叶2500克，加提取物50g，加1％白砂糖，以袋泡茶包装材料分装成1000包即可。
实施例6口服液/合剂的制备
取实施例1制备的提取物50g，加2倍量酒精，搅拌沉淀过夜。取上清液，浓缩至稠浸膏；加适当制药辅料，制成口服液、合剂。
实施例7鸡骨草组合物ACT对CCl4-小鼠急性肝损伤的影响
一、实验材料
动物：成年雄性昆明种小鼠90只，体重18～22g，第二军医大学动物实验中心提供。
药品和试剂：鸡骨草总皂苷、总黄酮、ACT根据实施例1方法制备，CCl4、无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二甲苯、盐酸、氨水、中性树脂，国药集团化学试剂有限公司。SOD、MDA、AST、ALT试剂盒，南京建成生物工程研究所有限公司。
二、实验方法
1、分组
将90只小鼠随机分为9组：空白组、模型组、阳性药组(水飞蓟素50mg/kg)、鸡骨草总皂苷高、低剂量组(50，100mg/kg)、鸡骨草总黄酮高、低剂量组(50，100mg/kg)、ACT高、低剂量组(50，100mg/kg)。空白组和模型组给相同剂量的空白溶剂。
2、造模
模型组和实验组小鼠1％CCl4橄榄油溶液腹腔注射造模(0.1ml/10g)。正常组则腹腔注射等剂量的橄榄油溶液。
3、治疗方法
空白组小鼠给予如下治疗方案：空白组给予50mg/kg生理盐水。24小时后，小鼠摘眼球取血，静置2小时后，在4℃下进行离心，取血清按照试剂盒说明书测定AST、ALT、SOD活性与MDA水平。另取相同部位肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，进行肝组织的HE染色切片观察。
模型组小鼠给予如下治疗方案：造模半小时后，给予50mg/kg生理盐水。24小时后，小鼠摘眼球取血，静置2小时后，在4℃下进行离心，取血清按照试剂盒说明书测定AST、ALT、SOD活性与MDA水平。另取相同部位肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，进行肝组织的HE染色切片观察。
阳性药组小鼠给予如下治疗方案：造模半小时后，按照剂量为50mg/kg进行灌胃给药，24小时后，小鼠摘眼球取血，静置2小时后，在4℃下进行离心，取血清按照试剂盒说明书测定AST、ALT、SOD活性与MDA水平。另取相同部位肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，进行肝组织的HE染色切片观察。
鸡骨草总皂苷高剂量组给予如下治疗方案：造模半小时后，按照剂量为100mg/kg进行灌胃给药，24小时后，小鼠摘眼球取血，静置2小时后，在4℃下进行离心，取血清按照试剂盒说明书测定AST、ALT、SOD活性与MDA水平。另取相同部位肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，进行肝组织的HE染色切片观察。
鸡骨草总皂苷低剂量组给予如下治疗方案：造模半小时后，按照剂量为50mg/kg进行灌胃给药，24小时后，小鼠摘眼球取血，静置2小时后，在4℃下进行离心，取血清按照试剂盒说明书测定AST、ALT、SOD活性与MDA水平。另取相同部位肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，进行肝组织的HE染色切片观察。
鸡骨草总黄酮高剂量组给予如下治疗方案：造模半小时后，按照剂量为100mg/kg进行灌胃给药，24小时后，小鼠摘眼球取血，静置2小时后，在4℃下进行离心，取血清按照试剂盒说明书测定AST、ALT、SOD活性与MDA水平。另取相同部位肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，进行肝组织的HE染色切片观察。
鸡骨草总黄酮低剂量组给予如下治疗方案：造模半小时后，按照剂量为50mg/kg进行灌胃给药，24小时后，小鼠摘眼球取血，静置2小时后，在4℃下进行离心，取血清按照试剂盒说明书测定AST、ALT、SOD活性与MDA水平。另取相同部位肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，进行肝组织的HE染色切片观察。
ACT高剂量组给予如下治疗方案：造模半小时后，按照剂量为100mg/kg进行灌胃给药，24小时后，小鼠摘眼球取血，静置2小时后，在4℃下进行离心，取血清按照试剂盒说明书测定AST、ALT、SOD活性与MDA水平。另取相同部位肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，进行肝组织的HE染色切片观察。
ACT低剂量组给予如下治疗方案：造模半小时后，按照剂量为50mg/kg进行灌胃给药，24小时后，小鼠摘眼球取血，静置2小时后，在4℃下进行离心，取血清按照试剂盒说明书测定AST、ALT、SOD活性与MDA水平。另取相同部位肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，进行肝组织的HE染色切片观察。
三、实验结果
1、对小鼠血清AST与ALT水平的影响
与空白组相比，CCl4造模各组均出现ALT与AST水平上升；与模型组相比，鸡骨草各组分均可使CCl4导致升高的ALT与AST水平下降，其中ACT各组均具有明显作用。ACT低剂量组较阳性组、总皂苷高、低剂量组、总黄酮高、低剂量组的效果均有显著效果，ACT高剂量组较ACT低剂量组治疗效果显著。
2、小鼠肝组织中MDA与SOD活性的结果
CCl4造模后导致的肝损伤使肝组织中的MDA显著升高，而SOD值明显降低。与模型组相比，阳性药组、鸡骨草总黄酮高、低剂量组、鸡骨草总皂苷高、低剂量组、ACT高、低剂量组结果均降低MDA值，升高SOD值，其中以ACT组最为显著(P<0.01)，说明鸡骨草组合物对CCl4所致的急性肝损伤中具有一定的保护作用。并且组合物低剂量组治疗效果明显优于阳性组、总皂苷高、低剂量组、总黄酮高、低剂量组，ACT高剂量组较ACT低剂量组治疗效果显著。
3、通过病理切片在光镜下观察结果表明鸡骨草组合物组可减轻肝组织损失程度。空白组小鼠肝组织切片中肝小叶结构完整，肝细胞索排列整齐，以中央静脉为中心呈放射性排列；且肝细胞呈多边形，核大且圆，位于肝细胞中央；肝血窦中含少量血细胞。模型组小鼠肝组织切片中央静脉周围肝细胞出现大面积变形、坏死，肝细胞肿大，多呈玻璃样变化，胞质疏松，且在肝小叶内可见嗜酸性小体；肝小叶与汇管区可见较为严重的炎细胞浸润；肝血窦扩增严重，且含有较多的血细胞。鸡骨草总皂苷高、低剂量组、总黄酮高、低剂量组、阳性药组、ACT高、低剂量均能改善CCl4所致的小鼠急性肝损伤，其中ACT低剂量组较阳性药组、总皂苷高、低剂量组、总黄酮高、低剂量组治疗效果显著，ACT高剂量组较ACT低剂量组治疗效果显著。
四、实验结论
上述实验结果表明：本发明的鸡骨草提取物组合物在治疗肝损伤疾病中具有显著治疗效果。
实施例8鸡骨草组合物ACT对ConA-小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用
一、实验材料
实验动物：雄性ICR小鼠90只，SPF级，5-6周龄，20±2g，第二军医大学动物实验中心提供。实验前适应性喂养一周，自由进水与饮食，动物房恒温22±2℃，相对湿度约70％，12h光照，12h黑暗。
药物与试剂：鸡骨草总皂苷、总黄酮、ACT根据前述实施例1方法制备，药物用0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配制而成。刀豆蛋白A(ConcanavalinA，ConA)(512C0323，SIGMA)、AST、ALT、一氧化氮(NO)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒、丙二醛(MDA)测试盒为南京建成研究所有限公司。
二、实验方法
1、分组与造模
小鼠90只，随机分成9组，即正常组、模型组、阳性药组(水飞蓟素50mg/kg)、总皂苷高低剂量组(50，100mg/kg)、总黄酮高低剂量组(50，100mg/kg)、组合物高低剂量组(50，100mg/kg)。正常组给予尾静脉注射0.2ml生理盐水，其余各组小鼠给予尾静脉注射Con-A(15mg/kg)造成免疫性肝损伤模型。
2、给药方法
正常组给予如下处理方法：给予等体积生理盐水灌胃，每天灌胃1次，连续7天。第7天结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
模型组给予如下处理方法：给予等体积生理盐水灌胃，每天灌胃1次，连续7天。第7天给药结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
阳性药组给予如下处理方法：按照剂量为50mg/kg给予水飞蓟素，每天灌胃1次，连续7天。第7天给药结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
总皂苷高剂量组给予如下处理方法：按照剂量为100mg/kg给予总皂苷，每天灌胃1次，连续7天。第7天给药结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
总皂苷低剂量组给予如下处理方法：按照剂量为50mg/kg给予总皂苷，每天灌胃1次，连续7天。第7天给药结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
总黄酮高剂量组给予如下处理方法：按照剂量为100mg/kg给予总黄酮，每天灌胃1次，连续7天。第7天给药结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
总黄酮低剂量组给予如下处理方法：按照剂量为50mg/kg给予总黄酮，每天灌胃1次，连续7天。第7天给药结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
ACT高剂量组给予如下处理方法：按照剂量为100mg/kg给予提取物组合物，每天灌胃1次，连续7天。第7天给药结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
ACT低剂量组给予如下处理方法：按照剂量为50mg/kg给予提取物组合物，每天灌胃1次，连续7天。第7天给药结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
三、实验结果
1、对小鼠血清AST与ALT水平的影响
小鼠在给予ConA尾静脉注射后，血清AST和ALT含量与正常组小鼠对比升高，各给药组AST和ALT水平都有不同程度地下降。其中ACT低剂量组较阳性药组、总皂苷高、低剂量组、总黄酮高、低剂量组能显著明显降低AST水平(P＜0.001)，ACT高剂量组较ACT低剂量组能显著明显降低AST水平。
2、小鼠肝组织中MDA与SOD活性的结果
小鼠在给予ConA尾静脉注射后，肝组织中SOD值降低，MDA值升高。与模型组对比，各给药组小鼠SOD不同程度的升高，MDA值均有所下降，其中，ACT低剂量组较阳性给药组、总皂苷高、低剂量组、总黄酮高、低剂量组效果均显著，ACT高剂量组较ACT低剂量组效果显著。
3、肝小叶组织经HE染色，在显微镜下观察可见，与模型组相比，各给药组小鼠肝脏细胞形态趋于完整，无明显的坏死区域，细胞无明显肿胀，炎性细胞数量减少。其中ACT低剂量组较阳性给药组、总皂苷高、低剂量组、总黄酮高、低剂量组效果均显著，ACT高剂量组较ACT低剂量组效果显著。
四、实验结论
上述实验结果表明：本发明的鸡骨草提取物组合物在治疗肝损伤疾病中具有显著治疗效果。
实施例9鸡骨草提取物不同配比的对照实验
一、实验材料
实验动物：雄性ICR小鼠90只，SPF级，5-6周龄，20±2g，第二军医大学动物实验中心提供。实验前适应性喂养一周，自由进水与饮食，动物房恒温22±2℃，相对湿度约70％，12h光照，12h黑暗。
药物与试剂：鸡骨草总皂苷、总黄酮、ACT-1根据前述实施例1方法制备，药物用0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配制而成。刀豆蛋白A(ConcanavalinA，ConA)(512C0323，SIGMA)、AST、ALT、一氧化氮(NO)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒、丙二醛(MDA)测试盒为南京建成研究所有限公司。
二、实验方法
1、分组与造模
小鼠90只，随机分成4组，即空白组、实验组、对照组、模型组，空白组给予尾静脉注射0.2ml生理盐水，其余各组小鼠给予尾静脉注射Con-A(15mg/kg)造成免疫性肝损伤模型。
2、给药方法
实验组给予如下治疗方法：取实施例1制备得到的提取物组合物(重量比为：总皂苷：总黄酮＝7:5)，每天按照剂量为50mg/kg对小鼠进行治疗，每天灌胃1次，连续7天。第7天结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
对照组给予如下治疗方法：按照如下提取方法提取总黄酮：鸡骨草干燥药材粉碎，用70％乙醇提取三次，每次提取时间为2、1.5、1小时，每次用量依次为2400ml、2100ml、1800ml。收集每次醇提液，过滤后合并；合并的醇提液回收乙醇，浓缩至300ml，用石油醚萃取脱脂，萃取三次，每次石油醚用量为300ml；水层用D101大孔吸附树脂300ml装柱吸附，水900ml洗脱除杂，用浓度为40％的乙醇洗脱，颜色变深后开始收集，收集洗脱液300ml，回收溶剂，干燥，得总黄酮。按照如下提取方法提取总皂苷：鸡骨草干燥药材粉碎，用70％乙醇提取三次，每次提取时间为2、1.5、1小时，每次用量依次为2400ml、2100ml、1800ml。收集每次醇提液，过滤后合并；合并的醇提液回收乙醇，浓缩至300ml，用石油醚萃取脱脂，萃取三次，每次石油醚用量为300ml；水层用D101大孔吸附树脂300ml装柱吸附，水900ml洗脱除杂，用浓度为70％的乙醇洗脱，颜色变深后开始收集，收集洗脱液300ml，回收溶剂，干燥，得总皂苷。将得到的总黄酮与总皂苷按照常规混合方法进行混合制备得到组合物(组合物重量比为总黄酮：总皂苷＝5:1)，每天按照剂量为50mg/kg对小鼠进行治疗，每天灌胃1次，连续7天。第7天结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
空白组给予同剂量生理盐水，每天灌胃1次，连续7天。第7天结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
模型组给予同剂量生理盐水，每天灌胃1次，连续7天。第7天结束后，小鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血约，血样在冰箱4℃静置半小时后，再用4℃离心机于1500r/min离心10min，取血清冻存于-20℃冰箱备用。脱颈椎处死小鼠后解剖取肝脏，分离出的肝小叶放置入4％多聚甲酸溶液中固定，制备石蜡切片，进行H&E染色。再分别取1g肝组织制备10％匀浆，并于4℃离心机于1500r/min离心10min，取组织液上清冻存于-20℃冰箱备用。根据说明书方法测定小鼠血清AST和ALT水平，小鼠肝组织GSH、SOD、MDA水平。另取肝小叶组织块用4％多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、封片等处理，用显微镜进行小鼠肝组织病理组织学观察。
三、实验结果
1、对小鼠血清AST与ALT水平的影响
与空白组相比，实验组与对照组均出现ALT与AST水平上升；与模型组相比，实验组与对照组均可使ConA导致升高的ALT与AST水平下降，其中实验组较对照组具有明显作用。
2、小鼠肝组织中MDA与SOD活性的结果
ConA造模后导致的肝损伤使肝组织中的MDA显著升高，而SOD值明显降低。与模型组相比，实验组与对照组均降低MDA值，升高SOD值，其中实验组效果最为显著(P<0.01)。
3、通过病理切片在光镜下观察结果表明鸡骨草组合物组可减轻肝组织损失程度。空白组小鼠肝组织切片中肝小叶结构完整，肝细胞索排列整齐，以中央静脉为中心呈放射性排列；且肝细胞呈多边形，核大且圆，位于肝细胞中央；肝血窦中含少量血细胞。模型组小鼠肝组织切片中央静脉周围肝细胞出现大面积变形、坏死，肝细胞肿大，多呈玻璃样变化，胞质疏松，且在肝小叶内可见嗜酸性小体；肝小叶与汇管区可见较为严重的炎细胞浸润；肝血窦扩增严重，且含有较多的血细胞。实验组、对照组均能改善ConA所致的小鼠急性肝损伤，其中实验组较对照组治疗效果显著。
四、实验结论
上述实验结果表明：按照本发明的配比所制备的鸡骨草提取物组合物在治疗肝损伤疾病中具有显著治疗效果。
本发明通过优化鸡骨草中总皂苷与总黄酮的提取工艺，具有工艺步骤简单，得率高，环境友好的优点。本发明提取物组合物用于制备药物时，可制备成多种剂型，便于患者使用，为患者提供了便利，可很好的应用于临床上，具有很好的应用前景。本发明通过提取鸡骨草中的总皂苷与总黄酮作为治疗免疫性肝损伤疾病的药物中的活性成分，具有效果显著的优点，且本发明提取物组合物及其之间的配比经过试验筛选，在治疗肝损伤疾病中效果显著。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种防治肝损伤的鸡骨草提取物组合物，其特征在于，所述提取物组合物的活性成分由以下重量份的原料药组成：鸡骨草总皂苷11.5-23.5份、鸡骨草总黄酮6.5-18.5份。
2.根据权利要求1所述提取物组合物，其特征在于，所述提取物组合物的活性成分由以下重量份的原料药组成：鸡骨草总皂苷14.5-20.5份、鸡骨草总黄酮9.5-15.5份。
3.根据权利要求1所述提取物组合物，其特征在于，所述提取物组合物的活性成分由以下重量份的原料药组成：鸡骨草总皂苷17.5份、鸡骨草总黄酮12.5份。
4.权利要求1-3任一所述鸡骨草提取物组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取鸡骨草或毛鸡骨草药材原料药，洗净、粉碎，用石油醚浸泡脱脂，用乙醇于90℃加热回流提取，收集每次醇提液，抽滤，减压浓缩，加入水调节比重至1.05g/ml；
(2)将浓缩后的醇提液分别用A溶剂与A+B溶剂萃取，回收萃取液并减压旋蒸，分别得到A和B部位浸膏，分别将鸡骨草A和B部位浸膏用蒸馏水调节比重至1.03-1.05g/ml；
(3)将调节比重后的A和B部位浸膏的水层分别用大孔树脂或聚酰胺树脂装柱吸附，蒸馏水洗脱除杂，首先依次用浓度为C、D、E、F的乙醇对处理后的A浸膏洗脱，收集洗脱液，回收溶剂并减压浓缩干燥，得总黄酮提取物；然后依次用浓度为G、H、I的乙醇对处理后的B浸膏洗脱，收集洗脱液，回收溶剂并减压浓缩干燥，得总皂苷提取物；
(4)将总黄酮提取物与总皂苷提取物按照权利要求1所述重量份混合。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，用乙醇提取时，采用的乙醇的百分比浓度为70-95％，提取次数为2次，每次提取时间均为2h，每次用量均为生药量的11-20倍体积。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中萃取所用A溶剂是乙酸乙酯，所用B溶剂是正丁醇，A部位浸膏是乙酸乙酯浸膏，B部位浸膏是正丁醇浸膏。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中大孔树脂是指AB-8、D-101、ZTC-1、SP905型树脂，用量是体积为生药量的3-5倍，浓度为C-F的乙醇依次是指浓度为20％、30％、50％、70％的乙醇，所述浓度为G-I的乙醇依次是指浓度为30％、45％、55％的乙醇。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，树脂洗脱方式为，3-5倍树脂体积的水洗脱除杂，然后依次用浓度为C-F的乙醇洗脱，颜色变深后开始收集，收集浓度为30％-70％的洗脱液，回收溶剂，干燥，得到总黄酮提取物，然后依次用浓度为G-I的乙醇洗脱，颜色变深后开始收集，收集浓度为45-55％乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，得到总皂苷提取物。
9.权利要求1-3任一所述的鸡骨草提取物组合物的药物用途，其特征在于，所述用途是鸡骨草提取物组合物用于制备治疗和预防急性肝损伤和预防湿热病的药物或食品中的应用。
10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述急性肝损伤包括：急性免疫性肝损伤、训练肝损伤，所述药物可根据中药常规制备方法制备成临床上可接受的药物制剂，所述药物制剂的剂型是片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、滴丸剂、丸剂、口嚼片、含片、膏剂、合剂、贴剂、或凝胶剂，所述食品是口香糖、凉茶。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110283258A (zh) * 2019-07-22 2019-09-27 玉林师范学院 一种具有护肝功能鸡骨草多糖的制备方法
CN111150752A (zh) * 2020-03-06 2020-05-15 右江民族医学院 鸡骨草提取物在制备抗癌药物中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101342229A (zh) * 2008-08-14 2009-01-14 上海海天医药科技开发有限公司 一种鸡骨草提取物的组合物、其制备方法和药物用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101342229A (zh) * 2008-08-14 2009-01-14 上海海天医药科技开发有限公司 一种鸡骨草提取物的组合物、其制备方法和药物用途

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110283258A (zh) * 2019-07-22 2019-09-27 玉林师范学院 一种具有护肝功能鸡骨草多糖的制备方法
CN111150752A (zh) * 2020-03-06 2020-05-15 右江民族医学院 鸡骨草提取物在制备抗癌药物中的应用

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