CN100496279C - 畜禽用三元活性微生态制剂 - Google Patents

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一种用作饲料添加剂的畜禽用三元活性微生态制剂,其重量份组成是:活菌制剂94%-98%、低聚寡糖0.1%-1%、卵黄免疫球蛋白1%-5%;所述活菌制剂由植物乳杆菌液、酵母菌液、芽孢杆菌液按1∶0.9-1.1∶0.9-1.1之重量比组成,且每克植物乳杆菌液中含植物乳杆菌≥8×108个,每克酵母菌液中含酵母菌≥7×108个,每克芽孢杆菌液中含芽孢杆菌≥4×108个。本发明充分发挥了抗体球蛋白的特异性免疫功能和活菌剂、低聚寡糖的非特异性免疫功能,提高了制剂的针对性;还使活菌处于休眠状态,提高了制剂的稳定性;并采用微胶囊包埋技术,延长了制剂的货架期。

Description

畜禽用三元活性微生态制剂
技术领域
本发明涉及畜禽用饲料添加剂,进一步是指用做所述添加剂的畜禽用三元活性微生态制剂。
背景技术
抗生素在畜禽养殖业的应用,为世界畜牧业的发展做出了巨大的贡献,然而也带来了极大的隐患:第一,引起内源性感染和二重感染;第二,使畜禽机体免疫力下降,细胞产生耐药性,并通过质粒发生传递,可转移到人体,威胁人类身体健康;第三,化学残留会污染肉、蛋、奶,降低畜禽产品的质量。因此,世界发达国家已于1989年开始全面禁止抗生素在饲料中的应用。
为了克服抗生素的各种弊端,世界各国先后开展了无毒副作用、无残留的绿色饲料添加剂的研究,而在其研究与开发过程中,首选研究的是微生态制剂。微生态制剂是一种含有大量有益菌及其代谢产物和生长促进因子,并且有维持肠道微生态平衡、提高机体健康水平的活菌制剂。免疫球蛋白是动物机体产生的抗感染物质,近年来,国外研究证明,在日粮中添加多克隆抗体,可以预防仔猪和牛犊的大肠杆菌腹泻症。美国食品和药品管理局于1996年将卵黄免疫球蛋白(Igy)列入“一般公认安全物质”范畴,德国于1995年批准将其用于饲料添加剂。
微生态制剂这种新型的生物产品,虽然正在以其独特的功能影响日益发展的畜牧业,但还存在许多有待进一步研究问题:第一,针对性不强,不如抗生素那样可针对某种肠道疾病而采用相应的产品,针对性很强地进行治疗;第二,微生态制剂菌株的稳定性不高,如活菌剂的抗热性、耐酸性等抵抗外界不良环境的能力低;第三,微生态制剂产品的货架期不长,随着贮存期的增加,活菌数量逐步降低。
从国外开发和使用效果看,复合菌制剂较单一菌剂作用效果更好,复合菌制剂一般都具有协同作用。为了提高微生态制剂的有效性,人们正着力于微生态制剂辅助剂的研制与开发。如对低聚寡糖与活菌制剂复合添加的试验,取得一定效果;同时也在开发和研究活菌剂与其他制剂间的联合作用。目前国外还在研究通过基因工程技术,把一些有用的外源基因导入活菌制剂的菌种中,扩大其生物学特殊功能,从而达到一种制剂多种功能的目的。
发明内容
本发明要解决的技术问题是,针对现有技术存在的不足,提出一种畜禽用三元活性微生态制剂,它将活菌制剂、低聚寡糖、抗体球蛋白有机地结合起来,以充分发挥抗体球蛋白的特异性免疫功能和活菌剂、低聚寡糖的非特异性免疫功能,以提高了微生态制剂的针对性;还可采用低温真空冷冻干燥技术,将活菌剂制成干粉,使活菌处于休眠状态,以提高微生态制剂的稳定性;还可采用微胶囊包埋技术,将三元活性制剂包埋起来,以延长微生态制剂的货架期。
本发明的技术解决方案是,所述畜禽用三元活性微生态制剂的重量份组成是:
活菌制剂       94%—98%;
低聚寡糖       0.1%—1%;
卵黄免疫球蛋白 1%—5%;
其中,所述活菌制剂由植物乳杆菌液、酵母菌液、芽孢杆菌液按1:0.9—1.1:0.9—1.1之重量比组成,且每克植物乳杆菌液中含植物乳杆菌≥8×108个,每克酵母菌液中含酵母菌≥7×108个,每克芽孢杆菌液中含芽孢杆菌≥4×108个。
以下对本发明做出进一步说明。
所述低聚寡糖可以是低聚木糖、低聚果糖、低聚甘露糖中的一种,也可以是其它低聚寡糖。
本发明可以上述三元活性微生态制剂的有效成份为芯材,以下述重量份成分的均匀混合物为壁材:
变性淀粉 35%—45%;
阿拉伯胶 10%—20%;
麦芽糊精 20%—30%;
玉米糖浆 15%—25%;
将上述芯材与壁材按1:0.9—1.1之重量比混合均质后,经常规低温喷雾工艺制成微胶囊状态产品。
本发明中,所述活菌制剂可采用如下重量份组分的培养基:
主体碳源     5%—9%;             葡萄糖 1%—3%;
蛋白胨       0.4—0.6%;           植物油 0.2—0.4%;
K2HPO4       0.1—0.3%;           CaCo3  1%—3%;
MgSO4        0.05—0.07%;         MnSO4  0.02—0.03%;
水           84%—90%;
其中,所述主体碳源为土豆粉、大豆粉、玉米粉中的一种,并植入相应菌种,每克菌液中的菌种含量是:植物乳杆菌≥8×108个、酵母菌≥7×108个、芽孢杆菌≥4×108个。
本发明中,猪用三元活性微生态制剂主体碳源可采用土豆粉,鸡用三元活性微生态制剂主体碳源可采用大豆粉,反刍动物三元活性微生态制剂主体碳源可采用玉米粉。
本发明对所述植物乳杆菌(PC0586-2)、枯草芽孢杆菌(BL0067)、产朊假丝酵母菌(2.120)进行了单一菌株培养温度、培养时间、培养初始PH值、需氧量、培养基组成等生产工艺参数进行了研究,并且对它们的复合培养进行工艺参数的修正。结果表明:三种菌达到产量最高值的时间是48-54小时,酵母菌的发酵最适温度为32℃,芽孢杆菌为38℃,乳酸菌为36℃,最适温度各不相同,因此,复合培养时,分两阶段进行,第一阶段温度32℃,第二阶段温度31℃,时间各半(28小时)。三种菌的最初培养PH值分别为乳酸菌5.6,酵母菌5.8,芽孢杆菌6.0。因此,复合发酵时PH值要控制在6.0左右。三种菌发酵过程的需氧量各不相同,乳酸菌是以厌氧呼吸为主的兼性菌,酵母菌和芽孢杆菌是好氧呼吸的菌种。因此,复合培养分两步进行,第一阶段(前28小时)培养时,通气1小时停2小时,第二阶段通气2小时停1小时。
本发明中,所述植物乳杆菌、酵母菌、芽孢杆菌可采用标准菌株,也可通过以下菌种分离筛选获得:
取畜禽肠道或土壤样品,稀释后通过富集驯化培养、选择培养、平板(划线)分离培养、菌落采集、纯化继代分离培养、生产试验培养、定性定量分析等步骤,从126份猪肠、鸡肠、牛瘤胃样品,近2万株菌株中,分离筛选出一株高产乳酸的植物乳杆菌(暂编号为PC0586)乳酸产量90.7g/L,比标准菌株(中国科学院微生物菌种保存中心提供,乳酸产量为78g/L)乳酸产量高16%。从27份土壤样品,近4000株菌株中,分离筛选出一株抑菌能力很强的枯草芽孢杆菌变异株,暂编号为BL0067。与标准菌株(中国科学院微生物菌种保存中提供)比较,抑菌能力提高31%。
本发明还可采用紫外对上述育出的植物乳杆菌PC0586进行诱变处理,处理剂量为成活率1%以下。紫外线波长为260nm左右,紫外灯功率为15W,距离固定在样品30nm高处。诱变时间0-72h。从2000余份材料中,选育出一株高产乳酸的植物乳杆菌,乳酸产量达到了130g/L,对糖的转化率为86%-90%,而且表现较好的遗传稳定性。该菌株暂定名为PC0586-1。
本发明还可用基因工程对所述菌种进行遗传改良。其中,转体:高产赖氨酸的棒杆菌(AS1.536)由中国科学院微生物研究所菌种保存中心提供,各种DNA的内切酶、赖氨酸合成途径中的关键酶基因:二氢吡啶二羧酸合成酶基因(dapA)由湖南农业科学院生物研究室提供;受体:可采用诱变育种选育出的植物乳杆菌PC0586-1。载体:大肠杆菌。利用重组DNA的基因工程技术将棒杆菌(AS1.563)赖氨酸合成途径中的关键酶基因—二氢吡啶二羧酸合成酶基因(dapA),采用随机整合法,以大肠杆菌作为载体,成功地导入了目标菌株植物乳杆菌PC0586-1,培养出一株基因工程菌株,暂编号为PC0586-2。结果表明,外源质粒转化率高,能在目标菌中长期保存,且高水平表达。使无蛋白质分解酶的植物乳杆菌能合成赖氨酸,并且产量达到了27g/L,应用到生产中,起到了既高产乳酸,又能产生赖氨酸的双重作用。
微生态制剂是近十年来研制开发的一种新型生物制剂,目前国内外大多还都是单元的活菌制剂,典型代表是日本流球大学研究开发的“EM原露”,已在日本欧美和我国广泛推广应用。在此,本发明与“EM原露”的各项技术指标比较如下:
1.同源性比较:
本发明产品中的菌种来源之一为来源于畜禽肠道,制成三元活性制剂添加于饲料中,取食后再返回畜禽肠道,由于有良好的同源性,提高了微生物在禽畜肠道内的定植能力。而以“EM原露”为代表的其他微生态制剂菌种大都来源于土壤,在畜禽肠道内的定植能力低于本发明产品。
2.针对性的比较:
表1:三元活性制剂(本发明)与EM原露针对性的比较
Figure C200510031925D00081
从上述比较结果可以看出,“EM原露”含有80个菌种,可用于动物饲料,也可作植物的生物肥料,其广普性好、针对性差;而三元活性制剂中含有针对大肠杆菌和沙门氏杆菌的抗体球蛋,具有特异的免疫功能,针对性强。
3.热稳定性比较
将本发明的三元活性制剂和EM原露采取了70℃高温处理10分钟,结果表明,三元活性制剂中的活菌成活率高达88.7%,比EM原露(41.5%)提高了一倍多。
表2:三元活性制剂(本发明)与EM原露的热称定性比较
4.酸稳定性比较
畜禽取食后,微生态制剂在动物的胃内被大量的胃酸、胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶杀灭或被消化,能够达到肠道的活菌数量会大量降低。本发明进行了三元活性制剂与EM原露的模拟胃液试验。
模拟胃液组成:胃酸10%、胃蛋白酶1%、胰蛋白酶0.1%、胰凝乳蛋白酶0.05%、PH值4.0-5.0、时间1-8h。
表3:三元活性制剂(本发明)与EM原露胃酸稳定性比较
Figure C200510031925D00092
从表3可以看出,三元活性制剂抗抵胃酸的能力,远远高于EM原露,经模拟胃液处理6小时后,三元活性制剂中的活菌率还有41.0%,比EM原露提高4倍,处理7小时后,EM原露中已不存在活菌了,而三元活性制剂还有37.6%的活菌存活率。
5.抑菌能力的比较
表4:三元活性制剂与EM原露抑菌能力的比较
Figure C200510031925D00101
从表4可以看出,三元活性制剂和EM原露都对肠道内的有害菌表现出抑制作用,而对有益菌不表现抑制作用。从抑菌能力上比较,三元活性制剂对大肠杆菌的抑制能力(抑菌圈直径27.3mm)是EM原露(抑菌圈直径10.6)的2.5倍。
6.货架期的比较
表5:三元活性制剂与EM原露货架期的比较
Figure C200510031925D00102
从表5的结果可以看出,三元活性制剂经过6个月的货架期后,活菌成活率仍然达到了89.8%,而EM原露经过6个月贮存后,活菌成活率只有61.1%。三元活性制剂货架贮存能力提高了45%。
由以上可知,本发明为畜禽用三元活性微生态制剂,它将活菌制剂、低聚寡糖、抗体球蛋白有机地结合起来,充分发挥了抗体球蛋白的特异性免疫功能和活菌剂、低聚寡糖的非特异性免疫功能,提高了微生态制剂的针对性;还采用了低温真空冷冻干燥技术,将活菌剂制成干粉,使活菌处于休眠状态,提高了微生态制剂的稳定性;还采用了微胶囊包埋技术,将三元活性制剂包埋起来,延长了微生态制剂的货架期。
具体实施方式
实施例1:三元活性微生态制剂的重量份组成是:主体碳源用土豆粉培养的活菌制剂98%、低聚木糖1%、卵黄免疫球蛋白(320滴读/g)1%;其中,所述活菌制剂由植物乳杆菌液、酵母菌液、芽孢杆菌液按1:1:1之重量比组成,且每克植物乳杆菌液中含植物乳杆菌≥8×108个,每克酵母菌液中含酵母菌≥7×108个,每克芽孢杆菌液中含芽孢杆菌≥4×108个;以上述三元活性微生态制剂的有效成份为芯材,以下述重量份成分的均匀混合物为壁材:变性淀粉45%、阿拉伯胶20%、麦芽糊精20%、玉米糖浆15%;
将上述芯材与壁材按1:1之重量比混合均质后,经常规低温(-5℃)喷雾工艺制成微胶囊状态产品。产品应用:
地点:湖南省桃源县畜禽良种场
对象:28日龄二元杂交(长×大)断奶仔猪
时间:28天(2005年5月1日-2005年5月28日)
日粮组成:岳阳九鼎SH112型乳猪浓缩料
分组和饲养:试验组12头,对照组15头,每日喂料2次。
应用结果:
表6:三元活性制剂的应用效果
Figure C200510031925D00111
从表6可以看出,试验组比对照组每日多增重196.78克,比对照提高了65%,料肉比降低了0.22,饲料转化率提高了12.02%,腹泻率比对照降低了3倍,成活率提高了20%,每增加一公斤体重,纯收入增加1.73元。
实施例2:三元活性微生态制剂的重量份组成是:主体碳源用大豆粉培养的活菌制剂的重量份组成是:活菌制剂94%、低聚果糖1%、卵黄免疫球蛋白(320滴读/g)5%;其中,所述活菌制剂由植物乳杆菌液、酵母菌液、芽孢杆菌液按1:0.9:1之重量比组成,且每克植物乳杆菌液中含植物乳杆菌≥8×108个,每克酵母菌液中含酵母菌≥7×108个,每克芽孢杆菌液中含芽孢杆菌≥4×108个。以上述三元活性微生态制剂的有效成份为芯材,以下述重量份成分的均匀混合物为壁材:变性淀粉35%、阿拉伯胶10%、麦芽糊精30%、玉米糖浆25%;将上述芯材与壁材按1:0.9之重量比混合均质后,经常规低温(0--10℃)喷雾工艺制成微胶囊状态产品。
实施例3:三元活性微生态制剂的重量份组成是:主体碳源用玉米粉培养的活菌制剂的重量份组成是:活菌制剂96%、低聚甘露糖0.1%、卵黄免疫球蛋白3.9%;其中,所述活菌制剂由植物乳杆菌液、酵母菌液、芽孢杆菌液按1:1:0.9之重量比组成,且每克植物乳杆菌液中含植物乳杆菌≥8×108个,每克酵母菌液中含酵母菌≥7×108个,每克芽孢杆菌液中含芽孢杆菌≥4×108个。以上述三元活性微生态制剂的有效成份为芯材,以下述重量份成分的均匀混合物为壁材:变性淀粉40%、阿拉伯胶15%、麦芽糊精25%、玉米糖浆20%;将上述芯材与壁材按1:1.1之重量比混合均质后,经常规低温(-20℃)喷雾工艺制成微胶囊状态产品。

Claims (3)

1、一种畜禽用三元活性微生态制剂,其特征是,它的重量份组成是:
活菌制剂        94%—98%;
低聚寡糖        0.1%—1%;
卵黄免疫球蛋白  1%—5%;
其中,所述活菌制剂由植物乳杆菌液、产朊假丝酵母液、枯草芽孢杆菌液按1:0.9—1.1:0.9—1.1之重量比组成,且每克植物乳杆菌液中含植物乳杆菌≥8×108个,每克产朊假丝酵母液中含酵母菌≥7×108个,每克枯草芽孢杆菌液中含芽孢杆菌≥4×108个。
2、根据权利要求1所述的畜禽用三元活性微生态制剂,其特征是,以所述成份为芯材,以下述重量份成分的均匀混合物为壁材:
变性淀粉    35%—45%;
阿拉伯胶    10%—20%;
麦芽糊精    20%—30%;
玉米糖浆    15%—25%;
将上述芯材与壁材按1:0.9—1.1之重量比混合均质后,经常规低温喷雾工艺制成微胶囊状态产品。
3、根据权利要求1所述的畜禽用三元活性微生态制剂,其特征是,所述低聚寡糖为低聚木糖、低聚果糖、低聚甘露糖中的一种。
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GR01 Patent grant
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Owner name: GUO JUN

Free format text: FORMER OWNER: ZHONGYE SCIENCE + TECH. DEVELOPMENT CO., LTD., HU NAN PROV.

Effective date: 20110225

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COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 410125 INSTITUTE OF PLANT PROTECTION, CHINESE ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES, MAPOLING, FURONG DISTRICT, CHANGSHA CITY, HU NAN PROVINCE TO: 410011 ROOM 104, BUILDING 6, HONGYUAN RESIDENTIAL QUARTER, NO.49, CHENGNAN MIDDLE ROAD, CHANGSHA CITY, HU NAN PROVINCE

TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20110225

Address after: 410011, room 6, 104, hung Garden Estate, 49 Chengnan South Road, Changsha, Hunan

Patentee after: Guo Jun

Address before: 410125 Hunan province Changsha Furong District academy of Agricultural Sciences Institute of plant protection

Patentee before: Zhongye Science & Tech. Development Co., Ltd., Hu'nan Prov.

C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20090610

Termination date: 20130727