CN102599345B - 畜禽用多元生物复合制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及畜禽用生物制剂技术领域，特别涉及一种多元生物复合制剂，由以下组分组成：活菌制剂94-98wt%，低聚果糖0.4-1.0wt%，蝇蛆抗菌肽蛋白粉1.0-4.0wt%和中草药0.6-1.0wt%；活菌制剂采用分级发酵法发酵；中草药为4份黄芪、2份白头翁、2份苦参、2份党参和1份甘草超微粉碎后混匀而成。本发明的复合制剂即能有效的保护活菌制剂中的活菌含量，又能保证各组分互相协调发挥免疫的作用，提高畜禽机体抗病力，促进生长发育；本发明制出的多元复合制剂可以常温保存，常温放置3个月后，动物实验依然可以证明其有效性。
Description
技术领域
本发明涉及畜禽用生物制剂技术领域，特别涉及一种多元生物复合制剂。
背景技术
上世纪中叶开始，抗生素的发展为我国的养殖业做出了很大的贡献，可同时也带了很多的问题，这些问题日益凸显而备受国内外关注，1988年以来，世界主要发达国家以及亚洲的日本，韩国等国家相继出台政策全面禁止抗生素的在动物生产中的使用。在此前提下，能够克服抗生素弊端的替代物的研究，开发和利用在最近几年被广泛关注。这其中最有前途的几种组分便是活菌制剂、中草药、低聚糖和抗菌肽。关于这些单一组分在畜禽养殖业中的应用也多有报道，但单一组分对畜禽的促进作用非常有限而不均衡，也有关于使用其中的两种或者以上组分组成的复合制剂，复合制剂的复合效果很难达到一个互相促进的作用。
由于不同菌种对发酵工艺要求不同，特别是温度的要求，导致发酵后的活菌产量及其代谢物都很低，也有活菌产量高的，但是贮存过程活菌含量也往往下降很快，综合效果仍然不是很理想，整体上对提高畜禽免疫能力和促进生长能力效果不明显。
发明内容
为了解决以上复合制剂综合效果不理想的问题，本发明提供了一种能够使其中的有效成分得到最大程度保护的、综合提高畜禽机体抗病力的畜禽用多元生物复合制剂。
本发明是通过以下步骤实现的：
一种畜禽用多元生物复合制剂，由以下组分组成：
活菌制剂94-98wt%，低聚果糖0.4-1.0 wt %，蝇蛆抗菌肽蛋白粉1.0-4.0 wt %和中草药0.6-1.0 wt %；
活菌制剂的发酵工艺如下：
将活菌含量分别为3.8x108 cfu/g, 3.5x108
cfu/g, 4.2x108cfu/g和 3.6x108
cfu/g的干酪乳杆菌、双岐杆菌、酵母菌和芽孢杆菌分别进行实验室分离、筛选、鉴定，其中每个菌种分别选用了3株，将4个菌种按照活菌量比1:1:1:1混合，采用分级发酵法发酵：第一步发酵温度35℃, 发酵时间26h，通气量70L/min, 搅拌速度120r/min, pH值5.5；第二步发酵温度38℃, 发酵时间25h，通气量66L/min, 搅拌速度120r/min, pH值6.0；
中草药为4份黄芪、2份白头翁、2份苦参、2份党参和1份甘草超微粉碎后混匀而成。
所述的畜禽用多元生物复合制剂，发酵时使用的营养基配方如下：87.67%营养琼脂，8.0%的土豆粉，2.0%的葡萄糖，0.6%的蛋白胨，0.25%的植物油，0.4%的K2HPO4，1%的CaCO3,
0.05%的MgSO4和0.03%的MnSO4。
所述的畜禽用多元生物复合制剂制成微胶囊，包被壁材选用40%的变性淀粉，玉米糖浆15%，麦芽糊精25%，阿拉伯胶18%和2%的氯化钙。
现有技术中虽然也有使用两种或者两种以上促进剂复配使用来提高畜禽机体抗病力、促进畜禽生长的记载，但促进剂的种类繁多，特别是活菌种类繁多，采用哪几种活菌配合使用，效果最好，是不能够通过现有技术中的记载而预见到的，并且，多种菌种复合使用时，采取什么样的发酵工艺，也是制约活菌制剂发挥作用的关键，本发明采用分级发酵工艺，使四个菌种的发酵繁殖达到最优组合，在整个多元生物复合制剂中能够发挥其最大的作用，就这点来讲，现有技术中并没有相关启示，是花费了创造性劳动的。再者，中草药的选择也是花费创造性劳动的，既需要能够提高畜禽机体抗病力，又不能有毒性，还需要考虑与活菌制剂混合之后，对菌株活性的影响，因此，选择哪些中草药与活菌制剂进行配合，是通过现有技术不能够预见和推测的。
本发明的有益效果：
1、本发明的复合制剂即能有效的保护活菌制剂中的活菌含量，又能保证各组分互相协调发挥免疫的作用，提高畜禽机体抗病力，促进生长发育；
2、本发明制出的多元复合制剂可以常温保存，常温放置3个月后，动物实验依然可以证明其有效性。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。实施例中使用的原料来源如下：
干酪乳杆菌（Lactobacillus casei Zhang），双岐杆菌（Bifidobacterium animalis），酵母菌（Candida glycerolgenesis），芽孢杆菌（Bacillus
subtilis (Ehrenberg) Cohn）其中前两种购自内蒙古普泽生物制品有限责任公司，后两种购自山东华牧天元动物保健品有限公司。
蝇蛆抗菌肽蛋白粉购自浙江康德权科技有限公司。
实施例
1
：
一种畜禽用多元生物复合制剂，其特征是由以下组分组成：
活菌制剂94wt%，低聚果糖1.0 wt %，蝇蛆抗菌肽蛋白粉（购自浙江康德权科技有限公司）4.0 wt %和中草药1.0 wt %；
活菌制剂的发酵工艺如下：
将活菌含量分别为3.8x108 cfu/g, 3.5x108
cfu/g, 4.2x108cfu/g和 3.6x108
cfu/g的干酪乳杆菌、双岐杆菌、酵母菌和芽孢杆菌分别进行常规实验室分离、筛选、鉴定，其中每个菌种分别选用了3株，将选用的4个菌种按照活菌量比1:1:1:1混合，采用分级发酵法发酵：第一步发酵温度35℃, 发酵时间26h，通气量70L/min, 搅拌速度120r/min, pH值5.5；第二步发酵温度38℃, 发酵时间25h，通气量66L/min, 搅拌速度120r/min, pH值6.0；发酵后干酪乳杆菌、双岐杆菌、酵母菌和芽孢杆菌的总活菌含量10~30x1010cfu/g；
发酵时使用的营养基配方如下：87.67%营养琼脂，8.0%的土豆粉，2.0%的葡萄糖，0.6%的蛋白胨（购自上海汇合生物科技有限公司），0.25%的植物油，0.4%的K2HPO4，1%的CaCO3,
0.05%的MgSO4和0.03%的MnSO4。
植物油采用油菜籽油，大豆油，玉米油等均可。
中草药为4份黄芪、2份白头翁、2份苦参、2份党参和1份甘草超微粉碎后混匀而成。
为了更大程度的保证活菌的活性及其他各组分的有效性，将畜禽用多元生物复合制剂做成微胶囊，包被壁材选用40%的变性淀粉，玉米糖浆15%，麦芽糊精25%，阿拉伯胶18%和2%的氯化钙。制备工艺采用制备微胶囊的常用工艺。
实施例
2
：
一种畜禽用多元生物复合制剂，其特征是由以下组分组成：
活菌制剂98wt%，低聚果糖0.4wt %，蝇蛆抗菌肽蛋白粉1.0 wt %和中草药0.6 %；
活菌制剂的发酵工艺同实施例1。
中草药为4份黄芪、2份白头翁、2份苦参、2份党参和1份甘草超微粉碎后混匀而成。
为了更大程度的保证活菌的活性及其他各组分的有效性，将畜禽用多元生物复合制剂做成微胶囊，包被壁材选用40%的变性淀粉，玉米糖浆15%，麦芽糊精25%，阿拉伯胶18%和2%的氯化钙。制备工艺采用制备微胶囊的常用工艺。
动物实验效果：
试验一 本发明的多元生物复合制剂对断奶仔猪的影响
1. 材料与方法
1.1 供试动物分组
80头健康三元杂交（杜洛克x大白x长白）断奶仔猪随机分为两组Ⅰ组和Ⅱ组，每组均公母各半，其中Ⅰ组为对照组，共40头仔猪，Ⅱ组为实验组，共40头，试验期30天。
1.2
试验日粮
Ⅰ组只饲喂基础日粮（,亚太中慧乳猪浓缩料和山东华牧天元动物保健品有限公司乳猪预混料），Ⅱ组在喂养的基础日粮内添加0.2%的本发明多元生物复合制剂。基础日粮组成和营养成分两组相同（表1）。
表1. 基础日粮组成及营养成分
1.3 饲养管理
两组仔猪均采用常规饲养管理，每5头为一栏，自由采食，洁净饮水，定时清扫栏舍，每天观察和记录仔猪的采食、活动、排便和疾病等情况。试验开始和结束时空腹称重。每日分别记录各组的饲料用量。
2.
测䮚项目
仔猪的始重，末重，采食量，襲料转化率，成活熇和腹泻䏑生率。
3.
结果与分析
多元生物复合制剂对断奶仔挪生产性能的影响见表2。䜨全期饲养过程中虽然Ⅰ滄平均始重比Ⅱ组高0.8kg，但是Ⅱ组经过30天持续添加0.2%的多元生物复合制剂饲喂以后，比Ⅰ组的平均末重多了2.2kg。并且Ⅰ组的平均日采食量 816.04 g/日.头，明显高于Ⅱ组的808.67g/日.头，但Ⅱ组的平均日增重比Ⅰ组高出100g，料肉比显著低于Ⅰ组（1.56:1 vs 1.94:1）。另外，Ⅰ组仔猪的成活率为95%，有两头仔猪在此过程中因病死亡，而Ⅱ组仔猪的成活率为100%。未添加此多元生物复合制剂的Ⅰ组仔猪腹泻发生率达到17.5%，而添加本发明复合制剂的Ⅱ组仔猪全期饲养过程中没有发生腹泻情况。
综上所述，可以得出以下结论：
a． 该复合制剂可以显著提高断奶仔猪的生产性能，提高仔猪的成活率；
b．该复合制剂可以有效控制仔猪腹泻的发生；
c． 乳仔猪早期日粮中添加该产品可以避免抗生素的使用。
表2多元生物复合制剂对断奶仔猪生产性能的影响
| 项目 | Ⅰ组N=40 | Ⅱ组N=40 |
| 平均始重 （kg） | 11.0 | 10.2 |
| 平均末重 （kg） | 23.6 | 25.8 |
| 平均日增重 （g） | 420 | 520 |
| 平均日采食量 （g/日.头） | 816.04 | 808.67 |
| 料肉比 | 1.94:1 | 1.56:1 |
| 成活率 （%） | 95 | 100 |
| 腹泻发生率 （%） | 17.5 | 0 |
试验二 本发明的多元生物复合制剂对肉鸡生产性能的影响
1. 材料与方法
1.1 供试动物与分组
将900只健康1日龄肉鸡随机分为15组，每组3个重复，每个重复20只。Ⅰ组为对照组，只添加基础日粮，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ, Ⅵ, Ⅶ,Ⅷ,Ⅸ,Ⅹ,Ⅺ,Ⅻ组分别在基础日粮基础上添加0.2%的复合中草药，蝇蛆抗菌肽，低聚果糖，活菌制剂, 复合中草药+低聚糖，低聚糖+活菌制剂，低聚果糖+蝇蛆抗菌肽，复合中草药+蝇蛆抗菌肽+低聚果糖，蝇蛆抗菌肽+低聚果糖+活菌制剂，复合中草药+低聚果糖+活菌制剂，本发明的多元生物复合制剂，饮水使用。各组合中各组分的重量比均按照本发明多元生物复合制剂中对应的重量比混合。各组所用基础日粮均由亚太中慧集团提供，试验期42天，采用常规饲养管理。
1.2 生长性能测定
分别于14、21、28和35日龄以组为单位对健康鸡空腹12 h后称重，空腹期间自由饮水，准确称量和记录日供料量、剩余料量和损失料量，计算各阶段平均日增重、平均日采食量和料重比。
1.2
肠道菌群数量的测定
分别于14日龄、28日龄和42日龄从每个组中健康鸡随机抽取5只鸡，空气注入心脏的方法致死鸡只，无菌操作取盲肠末端内容物，于灭菌生理盐水中摇匀，平板培养计数法计数肠杆菌数量，以每克肠道内容物所含的菌落数(lgX
cfu/g）表示。
1.3
抗氧化指标的测定
主要测定血浆总抗氧化能力(T-AOC)。分别于14日龄、28日龄和42 日龄从每个组健康鸡中随机抽取5只鸡，翅静脉采血，肝素抗凝，3000 rpm/min离心10
min后分离血浆，使用南京建成生物工程研究所购买的T-AOC检测试剂盒测定血浆总抗氧化能力。
1.4
免疫功能的测定
主要测定免疫器官指数：免疫器官指数(mg/g）= 免疫器官重量/活体重。
分别于14日龄、28日龄和42日龄从每个组健康鸡中随机抽取5只鸡，空腹(自由饮水）12 h后分别称重，心脏打入空气法处死鸡只，解剖，摘取脾脏和法氏囊，剔除脂肪后称鲜重，计算脾脏和法氏囊指数。
2.
结果与分析
2.1复合制剂对肉鸡生长性能的影响见表3。由表3不难看出，添加复合制剂中的各单一组分或两种以及三种的复合制剂都会提高每个测定日龄的料肉比，但是都不如含有四种元素的复合制剂效果好，饲喂本发明多元生物复合制剂的组在各测定日龄料肉比均为最低， 跟其他组差异较大，效果也很明显。虽然效果并不一定体现在平均采食量或平均日增重上，但是一定体现了添加复合制剂饲料转化率是最高的，当然这种效应并不是组成他的单一成分的组合效应。日粮中添加两种或者三种成分也会使总体的料肉比下降，提高了饲料转化率。由于试验期间发生了沙门氏菌引起的肉鸡下痢，对照组均有不同程度的发病，如Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ, Ⅵ, Ⅷ组发病率分别为40%，30%，35%，20%，20%和15%。而添加了本发明多元生物复合制剂的Ⅻ组无发病情况发生，因此可以推断，本发明多元生物复合制剂不仅可以显著提高料肉比，还能显著提高肉鸡抗病能力。
表3. 复合制剂对肉鸡生长性能的影响
2.2 复合制剂对盲肠菌群数量的影响见表4。由表4不难看出，随着复合成分的增加，在每个测定日盲肠大肠杆菌数量呈递减趋势 （P<0.05）。效果最好的是Ⅶ组的复合制剂。
表4 复合微生态制剂对肉鸡盲肠大肠杆菌数量的影响 (单位：lg cfu/g)
| 日龄 （d） | 14 | 28 | 42 |
| Ⅰ组 | 8.04±0.06a | 8.12±1.0a | 8.20±0.4a |
| Ⅱ组 | 7.72±0.04ab | 7.86±0.09ab | 8.06±0.05ab |
| Ⅲ组 | 7.69±0.03ab | 7.82±0.06ab | 7.98±0.02ab |
| Ⅳ组 | 7.70±0.03ab | 7.84±0.05ab | 8.01±0.07ab |
| Ⅴ组 | 7.56±0.05bc | 7.62±0.03bc | 7.71±0.06bc |
| Ⅵ组 | 7.73±0.03ab | 7.85±0.05ab | 8.03±0.08ab |
| Ⅶ组 | 7.60±0.09bc | 7.68±0.03bc | 7.78±0.07bc |
| Ⅷ组 | 7.74±0.05ab | 7.90±0.06ab | 8.08±0.06ab |
| Ⅸ组 | 7.72±0.06ab | 7.85±0.02ab | 7.94±0.04ab |
| Ⅹ组 | 7.21±0.04cd | 7.32±0.05cd | 7.45±0.06cd |
| Ⅺ组 | 7.28±0.09cd | 7.36±0.03cd | 7.41±0.03cd |
| Ⅻ组 | 5.94±0.05d | 6.12±0.03d | 6.28±0.07d |
a-d 同列数据上标不同表示差异显著，水平在P<0.05.
(有下痢现象的鸡只不参与数据统计)
2.3 复合制剂对肉鸡血浆总氧化能力的影响见表5。由表5不难看出除了Ⅲ组在42日龄的测定值比对照组低之外，添加任何单一组分或者两种以及三种的复合制剂均能显著提高（P<0.05）肉鸡血浆总抗氧化能力，效果最好的是Ⅻ组的本发明多元复合制剂。
表5. 复合制剂对肉鸡血浆总抗氧化能力的影响
| 日龄 （d） | 14 | 28 | 42 |
| Ⅰ组 | 19.37±1.12a | 17.08±2.04a | 19.54±1.83a |
| Ⅱ组 | 21.65±0.09b | 18.66±1.21b | 20.73±1.42b |
| Ⅲ组 | 19.52±1.05a | 18.42±1.06a | 19.46±1.71a |
| Ⅳ组 | 21.74±1.65b | 19.45±1.26b | 20.98±1.47b |
| Ⅴ组 | 19.63±1.24a | 18.20±0.96a | 19.68±1.54a |
| Ⅵ组 | 20.82±1.37b | 19.76±1.52b | 20.36±1.61b |
| Ⅶ组 | 21.03±1.54b | 19.86±1.09b | 21.03±1.82b |
| Ⅷ组 | 19.72±1.72a | 18.59±1.67a | 19.74±1.28a |
| Ⅸ组 | 21.58±2.13b | 20.26±1.65b | 20.88±1.47b |
| Ⅹ组 | 21.84±1.83b | 20.34±1.27b | 20.92±1.06b |
| Ⅺ组 | 21.62±1.74b | 19.68±1.51b | 20.39±1.55b |
| Ⅻ组 | 23.89±1.77c | 22.73±1.92c | 22.67±1.46c |
a-c 同列数据上标不同表示差异显著，水平在P<0.05.
2.4 复合制剂对肉鸡脾脏指数和法氏囊指数的影响见表6。由表6不难看出各个实验组的脾脏指数和法氏囊指数均高于对照组，其中Ⅻ组为每个测定日龄的最高值， 并且与其他试验组的差异也很显著（P<0.05）。
表6肉鸡脾脏指数和法氏囊指数对比表
a-d 同列数据上标不同表示差异显著，水平在P<0.05.
试验三 本发明多元生物复合制剂常温放置3个月后对肉鸡生长性能的影响
将健康1日龄肉鸡40只在基础日粮基础上添加本发明常温放置3个月后的多元生物复合制剂0.2%，饮水使用。所用基础日粮由亚太中慧集团提供，试验期42天，采用常规饲养管理。
分别于14、21、28和35日龄对肉鸡空腹12 h后称重，空腹期间自由饮水，准确称量和记录日供料量、剩余料量和损失料量，计算各阶段平均日增重、平均日采食量和料重比。结果见表7。通过与试验二的数据对比发现，在各个测定日龄料肉比只是略低于实验二的结果。可见本发明的多元生物复合制剂在常温放置三个月后，对肉鸡生产性能仍然能够发挥很好的作用，具有很好的常温储存性能。
表7 各单一组分和复合制偂对肉鸡生长性能暄影响
| 日龄 (d) | 䱳均日采食量 (g) | 平均日傞重 (g) | 料重比 |
| 14 | 39.6 | 31.5 | 1.26 |
| 21 | 81.6 | 56.0 | 1.46 |
| 28 | 117.6 | 68.2 | 1.72 |
| 35 | 132.9 | 75.8 | 1.75 |
综合以上各项实验不难得出以下结论：以活菌制剂+低聚糖+抗菌肽+中草药制成的多元生物复合制剂可以显著降低肉鸡料肉比，提高饲料转化率；抑制大肠杆菌和沙门氏菌的生长繁殖， 降低其在肠道的含量，预防鸡大肠杆菌和沙门氏菌引起的下痢；大大提高肉鸡血浆总抗氧化能力和免疫器官指数，即提高其免疫功能。常温放置3个月以内的本产品，仍然能够发挥很好的效果，表明其良好的贮存性能。
Claims (2)
1.一种畜禽用多元生物复合制剂，其特征是由以下组分组成：
活菌制剂94-98wt%，低聚果糖0.4-1.0 wt %，蝇蛆抗菌肽蛋白粉1.0-4.0 wt %和中草药0.6-1.0 wt %；
活菌制剂的发酵工艺如下：
将活菌含量分别为3.8x108 cfu/g,
3.5x108 cfu/g, 4.2x108cfu/g和 3.6x108 cfu/g的干酪乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌和芽孢杆菌分别进行实验室分离、筛选、鉴定，其中每个菌种分别选用了3株，将4个菌种按照活菌量比1:1:1:1混合，采用分级发酵法发酵：第一步发酵温度35℃, 发酵时间26h，通气量70L/min, 搅拌速度120r/min, pH值5.5；第二步发酵温度38℃, 发酵时间25h，通气量66L/min, 搅拌速度120r/min, pH值6.0；
中草药为4份黄芪、2份白头翁、2份苦参、2份党参和1份甘草超微粉碎后混匀而成；
所述的畜禽用多元生物复合制剂制成微胶囊，包被壁材选用40%的变性淀粉，玉米糖浆15%，麦芽糊精25%，阿拉伯胶18%和2%的氯化钙。
2.根据权利要求1所述的畜禽用多元生物复合制剂，其特征在于发酵时使用的营养基配方如下：87.67%营养琼脂，8.0%的土豆粉，2.0%的葡萄糖，0.6%的蛋白胨，0.25%的植物油，0.4%的K2HPO4，1%的CaCO3, 0.05%的MgSO4和0.03%的MnSO4。
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