CN107981049A - 一种提高肉类品质的饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及饲料及其加工技术领域，特别涉及一种提高肉类品质的饲料添加剂及其制备方法，本申请的饲料添加剂中主要由磷酸氢钙、贝壳粉、天竺桂叶精油、食盐，赖氨酸，复合维生素，微量元素和混合菌液组成；添加剂中利用枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌混合菌液做为配方添加到饲料中，能提高畜禽机体免疫力，调节机体代谢，改善畜禽肉品质，配方通过添加天竺桂叶精油可有效抑制细菌生长，申请人对混合菌进行了驯化，使其能够在含有较高浓度的天竺桂叶精油中生长、富集，从而起到抑制其它病原菌,富集有益菌的作用。添加剂中的复合维生素、微量元素通过合理配合使用，能有效促进枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌在动物肠道内生长。

Description

一种提高肉类品质的饲料添加剂及其制备方法
【技术领域】
本发明涉及饲料添加剂及其加工技术领域，特别涉及一种提高肉类品质的饲料添加剂及其制备方法。
【背景技术】
在家禽、家畜饲养过程中，往往采用抗生素来预防、治疗家禽、家畜的疾病，进而达到促生长及减缓应激的效果。但是，抗生素具有残留特性，富集在畜禽肉中，进而危害人体健康；同时细菌对其具有耐药性，致使畜禽肠道菌群失衡。益生菌作为饲料添加剂在畜牧生产中使用，可直接饲喂畜禽，通过调节畜禽胃肠道微生物平衡达到预防疾病、提高生产性能及饲粮利用率的效果。畜禽肠道内微生态的平衡对畜禽的生长性能和代谢都有重要影响。近年来，抗生素的副作用已愈来愈被重视，而益生菌可避免因抗生素造成的细菌耐药性、对肉质安全及人类健康的威胁，同时刺激有益菌生长、限制有害菌繁衍、调节机体消化代谢、提高机体免疫力和提高抗应激能力等多重效用。因此，有必要研制一种畜禽的添加益生菌的饲料配方，生产绿色、无公害的肉产品，以满足人类对畜禽肉产品安全的需求。
由于禽畜体内环境复杂，益生菌往往得不到良好的生长环境，反而容易被致病菌抢占营养资源，造成益生菌不能有效富集，从而达不到有效生长的效果。在禽畜肥育期，为了催肥禽畜往往使用高蛋白的饲料，这些饲料容易造成禽畜肠道的pH值降低，从而进一步抑制有益菌的生长；高蛋白饲料喂食过多也会造成禽畜体脂含量偏高、不饱和脂肪酸含量降低，禽畜虽然体重暴增，但是肉质却不尽人意，具有肉质白、不鲜亮、口感绵、软，从而造成人类在食用的时候摄入过多脂肪，口感不好而得不到大众喜爱。为此，有必要研发出一种新型的饲料添加剂，其能利用有益菌维持动物肠道菌群平衡，提高机体免疫力，调节机体代谢，促进机体对营养物质的吸收，降低禽畜体脂含量，提高畜禽肉不饱和脂肪酸含量，使得禽畜肉质更鲜美、紧实、健康。
【发明内容】
鉴于上述内容，有必要研发出一种新型的饲料添加剂，其能利用有益菌维持动物肠道菌群平衡，提高机体免疫力，调节机体代谢，促进机体对营养物质的吸收，降低禽畜体脂含量，提高畜禽肉不饱和脂肪酸含量，使得禽畜肉质更鲜美、紧实、健康。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种提高肉类品质的饲料添加剂，所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：10份-15份的磷酸氢钙、17份-26份的贝壳粉、3份-8份的天竺桂叶精油、1份-3份的食盐，1份-2份的赖氨酸，1份-5份的复合维生素，1份-3份的微量元素和1份-3份的混合菌液；
所述复合维生素由如下重量份的成分组成：2份-8份的维生素A，1份-3份的维生素D3,2份-5份的维生素E，1份-3份的维生素K3，3份-8份的维生素B1，3份-7份的维生素B2，4份-8份的维生素B6，2份-6份的维生素B12，2份-8份的烟酸，3份-7份的泛酸和5份-9份的氯化胆碱；
所述微量元素由如下重量份的成分组成：1份的五水硫酸铜、1份-3份的一水硫酸亚铁、2份的氯化锌、1份-3份的一水硫酸锰、2份-8份的碘化钠和2份-8份的亚硫酸硒。
所述混合菌液由如下重量份的成分制得：19份-29份的枯草芽孢杆菌和21份-35份的乳酸杆菌。
进一步的，所述天竺桂叶精油最主要的活性成分及百分比如下：4.487％的4-萜烯醇；8.293％的α，α-4-三甲基-3-环己烯-1-甲醇；12.403％的丁香烯；2.669％的β-愈创烯；1.272％的Z-橙花叔醇；13.082％的丁香烯氧化物；10.691％的愈创醇；5.184％的1，4-二甲基-3-(2-甲基-1-丙烯-1-基-环庚烯；5.14％的桉叶油醇和5.041％的异愈创木醇。
进一步的，所述枯草芽孢杆菌的驯化方法为：取枯草芽孢杆菌菌株接入含天竺桂叶精油质量浓度为50mg/L的LB培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为60mg/L的LB培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为70mg/L的LB培养基中，27℃培养2天，以此，连续传代培养，每次使天竺桂叶精油质量浓度增加10mg/L，直至天竺桂叶精油终浓度达100mg/L为止，完成枯草芽孢杆菌驯化。
进一步的，所述乳酸杆菌的驯化方法为：取乳酸杆菌菌株接入含天竺桂叶精油质量浓度为50mg/L、水牛奶质量浓度为100mg/L的MC培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为60mg/L、水牛奶质量浓度为150mg/L的MC培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为70mg/L、水牛奶质量浓度为200mg/L的MC培养基中，27℃培养2天，以此，连续传代培养，每次使天竺桂叶精油质量浓度增加10mg/L、水牛奶质量浓度增加50mg/L，直至天竺桂叶精油终浓度达110mg/L、水牛奶终浓度达400mg/L为止，完成乳酸杆菌驯化。
本申请还提供了一种制备所述提高肉类品质饲料添加剂的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)按所述重量份称取各原料；
(2)将复合维生素各原料进行混合得到复合维生素混合物，将磷酸氢钙、贝壳粉、食盐、赖氨酸和复合维生素混合物进行混合，得到基料混合物；将各微量元素进行混合，然后再加入与微量元素混合物同等质量份的水，再向微量元素混合物中添加天竺桂叶精油，用搅拌机在转速为400r/min-500r/min，温度为40℃-50℃的条件下搅拌20min-30min得到微量元素与天竺桂叶精油的乳状液；将乳状液喷洒在基料混合物中，搅拌均匀，烘干到含水率为3％-5％得到基粉；
(3)将驯化后的枯草芽孢杆菌菌株接种于LB液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min-5000r/min离心10min-15min，收集菌体，将乳酸杆菌菌株接种于MC液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min-5000r/min离心10min-15min，收集菌体，将枯草芽孢杆菌菌体与乳酸杆菌菌体按所述重量份混合后，再经0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗涤3次，再用0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl调整菌液浓度，使其浓度为1010个/mL±0.5％，得到所述混合菌液，将混合菌液喷洒到基粉中，在40℃-45℃的热风中风干，直至含水率为3％-5％得到所述饲料添加剂。
进一步的，所述饲料添加剂应用于肥育期的猪、羊和鸡。
本发明具有如下有益效果：
1、本发明的饲料添加剂中主要由磷酸氢钙、贝壳粉、天竺桂叶精油、食盐、赖氨酸、复合维生素、微量元素和混合菌液组成，添加剂中利用有益菌混合菌液做为配方添加到饲料中后，能停留在动物肠道内，从而起到平衡动物肠道微生物菌群，调节机体代谢，改善畜禽肉品质的作用。益生菌混合液中枯草芽孢杆菌是一种内生抗逆孢子、好氧、不产生毒素，广泛分布于生态环境及动植物体表或体内的一种安全微生物,同时具有很强的抗菌、抗逆能力，可产生胞外淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶及蛋白酶。乳酸杆菌可利用碳水化合物产生乳酸,是非病原性的、革兰氏阳性细菌的统称，是一种公认的安全的、食品级微生物。动物饲喂乳酸杆菌后，其代谢产物含有丰富的有机酸(醋酸)，可以保护细胞膜的完整性和稳定性，从而减少禽畜肌肉表面水分的渗出，降低肌肉表面的反光度，改善禽畜肉质的适口性。同时，植物乳酸杆菌还能够产生细菌素，有着更强的抑菌效果，能更好的维护畜禽肠道内微生态的平衡，刺激动物机体自身产生免疫力。但是由于动物体内环境复杂，仅仅通过添加剂中添加益生菌是远远不够的，为此，申请人研究发现，通过添加天竺桂叶精油可有效抑制细菌生长。天竺桂叶精油中含有丰富的4-萜烯醇、α，α-4-三甲基-3-环己烯-1-甲醇、丁香烯、β-愈创烯、Z-橙花叔醇、丁香烯氧化物、愈创醇、1，4-二甲基-3-(2-甲基-1-丙烯-1-基-环庚烯、桉叶油醇和异愈创木醇等活性物质，能有效抑制细菌生长。然而，由于其具有抑菌性，也能抑制枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌生长，为此，申请人对枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌进行了驯化，使其能够在含有较高浓度的天竺桂叶精油中生长、富集，从而起到能抑制其它病原菌，富集枯草芽孢杆菌、乳杆菌的作用；而添加剂配方中的复合维生素、微量元素通过合理配合，能有效促进枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌在动物肠道内生长。
【具体实施方式】
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
实施例1：
一种提高肉类品质的饲料添加剂，所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：10份的磷酸氢钙、17份的贝壳粉、3份的天竺桂叶精油、1份的食盐，1份的赖氨酸，1份的复合维生素，1份的微量元素和1份的混合菌液；
所述复合维生素由如下重量份的成分组成：2份的维生素A，1份的维生素D3,2份的维生素E，1份的维生素K3，3份的维生素B1，3份的维生素B2，4份的维生素B6，2份的维生素B12，2份的烟酸，3份的泛酸和5份的氯化胆碱；
所述微量元素由如下重量份的成分组成：1份的五水硫酸铜、1份的一水硫酸亚铁、2份的氯化锌、1份的一水硫酸锰、2份的碘化钠和2份的亚硫酸硒。
所述混合菌液由如下重量份的成分制得：19份的枯草芽孢杆菌和21份的乳酸杆菌。
本实施例中，天竺桂叶精油的活性成分及百分比如表1所示：
表1
在天竺桂叶精油中，起最主要活性成分的是：4-萜烯醇、α，α-4-三甲基-3-环己烯-1-甲醇、丁香烯、β-愈创烯、Z-橙花叔醇、丁香烯氧化物、愈创醇、1，4-二甲基-3-(2-甲基-1-丙烯-1-基-环庚烯、桉叶油醇和异愈创木醇。
本实施例中，枯草芽孢杆菌的驯化方法为：取枯草芽孢杆菌菌株接入含天竺桂叶精油质量浓度为50mg/L的LB培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为60mg/L的LB培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为70mg/L的LB培养基中，27℃培养2天，以此，连续传代培养，每次使天竺桂叶精油质量浓度增加10mg/L，直至天竺桂叶精油终浓度达100mg/L为止，完成枯草芽孢杆菌驯化。
其中，LB培养基的配方如下：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g、琼脂15g、pH7.0±0.2、蒸馏水配置至1L。
本实施例中，乳酸杆菌的驯化方法为：取乳酸杆菌菌株接入含天竺桂叶精油质量浓度为50mg/L、水牛奶质量浓度为100mg/L的MC培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为60mg/L、水牛奶质量浓度为150mg/L的MC培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为70mg/L、水牛奶质量浓度为200mg/L的MC培养基中，27℃培养2天，以此，连续传代培养，每次使天竺桂叶精油质量浓度增加10mg/L、水牛奶质量浓度增加50mg/L，直至天竺桂叶精油终浓度达110mg/L、水牛奶终浓度达400mg/L为止，完成乳酸杆菌驯化。
其中，MC培养基的配方如下：大豆蛋白胨5g、牛肉膏粉5g、酵母膏粉5g、葡萄糖20g、乳糖20g、碳酸钙10g、琼脂15g、中性红0.05g、最终pH6.0±0.2、蒸馏水配置至1L。
本实施例饲料添加剂的制备方法如下：
(1)按所述重量份称取各原料；
(2)将复合维生素各原料进行混合得到复合维生素混合物，将磷酸氢钙、贝壳粉、食盐、赖氨酸和复合维生素混合物进行混合，得到基料混合物；将各微量元素进行混合，然后再加入与微量元素混合物同等质量份的水，再向微量元素混合物中添加天竺桂叶精油，用搅拌机在转速为400r/min，温度为40℃的条件下搅拌20min得到微量元素与天竺桂叶精油的乳状液；将乳状液喷洒在基料混合物中，搅拌均匀，烘干到含水率为3％得到基粉；
(3)将驯化后的枯草芽孢杆菌菌株接种于LB液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min离心10min，收集菌体，将乳酸杆菌菌株接种于MC液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min离心10min，收集菌体，将枯草芽孢杆菌菌体与乳酸杆菌菌体按所述重量份混合后，再经0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗涤3次，再用0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl调整菌液浓度，使其浓度为1010个/mL±0.5％，得到所述混合菌液，将混合菌液喷洒到基粉中，在40℃的热风中风干，直至含水率为3％得到所述饲料添加剂。
其中，LB液体培养基的配方如下：胰蛋白胨20g、酵母提取物10g、NaCl10g、pH7.0±0.2、蒸馏水配置至1L。
MC液体培养基的配方如下：大豆蛋白胨15g、牛肉膏粉15g、酵母膏粉15g、葡萄糖20g、乳糖20g、碳酸钙10g、中性红0.05g、最终pH6.0±0.2，蒸馏水配置至1L。
实施例2：
一种提高肉类品质的饲料添加剂，所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：15份的磷酸氢钙、26份的贝壳粉、8份的天竺桂叶精油、3份的食盐，2份的赖氨酸，5份的复合维生素，3份的微量元素，3份的混合菌液；
所述复合维生素由如下重量份的成分组成：8份的维生素A，3份的维生素D3,5份的维生素E，3份的维生素K3，8份的维生素B1，7份的维生素B2，8份的维生素B6，6份的维生素B12，8份的烟酸，7份的泛酸，9份的氯化胆碱；
所述微量元素由如下重量份的成分组成：1份的五水硫酸铜、3份的一水硫酸亚铁、2份的氯化锌、3份的一水硫酸锰、8份的碘化钠、8份的亚硫酸硒。
所述混合菌液由如下重量份的成分制得：29份的枯草芽孢杆菌和35份的乳酸杆菌。
本实施例中，天竺桂叶精油的活性成分及百分比见实施例1的表1。
在天竺桂叶精油中，起最主要活性成分的是：4-萜烯醇、α，α-4-三甲基-3-环己烯-1-甲醇、丁香烯、β-愈创烯、Z-橙花叔醇、丁香烯氧化物、愈创醇、1，4-二甲基-3-(2-甲基-1-丙烯-1-基-环庚烯、桉叶油醇和异愈创木醇。
本实施例中，枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌的驯化方法；LB培养基配方和MC培养基配方与实施例1完全一致。
本实施例饲料添加剂的制备方法如下：
(1)按所述重量份称取各原料；
(2)将复合维生素各原料进行混合得到复合维生素混合物，将磷酸氢钙、贝壳粉、食盐、赖氨酸和复合维生素混合物进行混合，得到基料混合物；将各微量元素进行混合，然后再加入与微量元素混合物同等质量份的水，再向微量元素混合物中添加天竺桂叶精油，用搅拌机在转速为500r/min，温度为50℃的条件下搅拌30min得到微量元素与天竺桂叶精油的乳状液；将乳状液喷洒在基料混合物中，搅拌均匀，烘干到含水率为5％得到基粉；
(3)将驯化后的枯草芽孢杆菌菌株接种于LB液体培养基中培养至对数生长期，5000r/min离心15min，收集菌体，将乳酸杆菌菌株接种于MC液体培养基中培养至对数生长期，5000r/min离心15min，收集菌体，将枯草芽孢杆菌菌体与乳酸杆菌菌体按所述重量份混合后，再经0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗涤3次，再用0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl调整菌液浓度，使其浓度为1010个/mL±0.5％，得到所述混合菌液，将混合菌液喷洒到基粉中，在45℃的热风中风干，直至含水率为5％得到所述饲料添加剂。
本实施例中LB液体培养基和MC液体培养基的配方与实施例1完全相同。
实施例3：
一种提高肉类品质的饲料添加剂，所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：12份的磷酸氢钙、22份的贝壳粉、5份的天竺桂叶精油、2份的食盐，2份的赖氨酸，3份的复合维生素，2份的微量元素，2份的混合菌液；
所述复合维生素由如下重量份的成分组成：5份的维生素A，2份的维生素D3,2份-5份的维生素E，2份的维生素K3，3份-8份的维生素B1，5份的维生素B2，6份的维生素B6，2份-6份的维生素B12，3份的烟酸，5份的泛酸，7份的氯化胆碱；
所述微量元素由如下重量份的成分组成：1份的五水硫酸铜、2份的一水硫酸亚铁、2份的氯化锌、2份的一水硫酸锰、5份的碘化钠、5份的亚硫酸硒。
所述混合菌液由如下重量份的成分制得：23份的枯草芽孢杆菌和32份的乳酸杆菌。
本实施例中，天竺桂叶精油的活性成分及百分比见实施例1的表1。
在天竺桂叶精油中，起最主要活性成分的是：4-萜烯醇、α，α-4-三甲基-3-环己烯-1-甲醇、丁香烯、β-愈创烯、Z-橙花叔醇、丁香烯氧化物、愈创醇、1，4-二甲基-3-(2-甲基-1-丙烯-1-基-环庚烯、桉叶油醇和异愈创木醇。
本实施例中，枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌的驯化方法；LB培养基配方和MC培养基配方与实施例1完全一致。
本实施例饲料添加剂的制备方法如下：
(1)按所述重量份称取各原料；
(2)将复合维生素各原料进行混合得到复合维生素混合物，将磷酸氢钙、贝壳粉、食盐、赖氨酸和复合维生素混合物进行混合，得到基料混合物；将各微量元素进行混合，然后再加入与微量元素混合物同等质量份的水，再向微量元素混合物中添加天竺桂叶精油，用搅拌机在转速为450r/min，温度为45℃的条件下搅拌25min得到微量元素与天竺桂叶精油的乳状液；将乳状液喷洒在基料混合物中，搅拌均匀，烘干到含水率为4％得到基粉；
(3)将驯化后的枯草芽孢杆菌菌株接种于LB液体培养基中培养至对数生长期，4500r/min离心12min，收集菌体，将乳酸杆菌菌株接种于MC液体培养基中培养至对数生长期，4500r/min离心12min，收集菌体，将枯草芽孢杆菌菌体与乳酸杆菌菌体按所述重量份混合后，再经0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗涤3次，再用0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl调整菌液浓度，使其浓度为1010个/mL±0.5％，得到所述混合菌液，将混合菌液喷洒到基粉中，在42℃的热风中风干，直至含水率为3％-5％得到所述饲料添加剂。
本实施例中LB液体培养基和MC液体培养基的配方与实施例1完全相同。
对照组1：
对照组中不使用天竺桂叶精油，其它参数、制备方法与实施例1完全一致，即饲料添加剂配方如下：
所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：10份的磷酸氢钙、17份的贝壳粉、1份的食盐，1份的赖氨酸，1份的复合维生素，1份的微量元素，1份的混合菌液；
所述复合维生素由如下重量份的成分组成：2份的维生素A，1份的维生素D3,2份的维生素E，1份的维生素K3，3份的维生素B1，3份的维生素B2，4份的维生素B6，2份的维生素B12，2份的烟酸，3份的泛酸，5份的氯化胆碱；
所述微量元素由如下重量份的成分组成：1份的五水硫酸铜、1份的一水硫酸亚铁、2份的氯化锌、1份的一水硫酸锰、2份的碘化钠、2份的亚硫酸硒。
所述混合菌液由如下重量份的成分组成：19份的枯草芽孢杆菌和21份的乳酸杆菌。
本对照组饲料添加剂的制备方法如下：
(1)按所述重量份称取各原料；
(2)将复合维生素各原料进行混合得到复合维生素混合物，将磷酸氢钙、贝壳粉、食盐、赖氨酸和复合维生素混合物进行混合，得到基料混合物；将各微量元素进行混合，然后再加入与微量元素混合物同等质量份的水，用搅拌机在转速为400r/min，温度为40℃的条件下搅拌20min得到微量元素溶液；将微量元素溶液喷洒在基料混合物中，搅拌均匀，烘干到含水率为3％得到基粉；
(3)将驯化后的枯草芽孢杆菌菌株接种于LB液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min离心10min，收集菌体，将乳酸杆菌菌株接种于MC液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min离心10min，收集菌体，将枯草芽孢杆菌菌体与乳酸杆菌菌体按所述重量份混合后，再经0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗涤3次，再用0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl调整菌液浓度，使其浓度为1010个/mL±0.5％，得到所述混合菌液，将混合菌液喷洒到基粉中，在40℃的热风中风干，直至含水率为3％得到所述饲料添加剂。
对照组2：
对照组中不使用复合维生素，其它参数、制备方法与实施例1完全一致，即饲料添加剂配方如下：
所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：10份的磷酸氢钙、17份的贝壳粉、3份的天竺桂叶精油、1份的食盐，1份的赖氨酸，1份的微量元素，1份的混合菌液；
所述微量元素由如下重量份的成分组成：1份的五水硫酸铜、1份的一水硫酸亚铁、2份的氯化锌、1份的一水硫酸锰、2份的碘化钠、2份的亚硫酸硒。
所述混合菌液由如下重量份的成分组成：19份的枯草芽孢杆菌和21份的乳酸杆菌。
本对照组饲料添加剂的制备方法如下：
(1)按所述重量份称取各原料；
(2)将磷酸氢钙、贝壳粉、食盐和赖氨酸进行混合，得到基料混合物；将各微量元素进行混合，然后再加入与微量元素混合物同等质量份的水，再向微量元素混合物中添加天竺桂叶精油，用搅拌机在转速为400r/min，温度为40℃的条件下搅拌20min得到微量元素与天竺桂叶精油的乳状液；将乳状液喷洒在基料混合物中，搅拌均匀，烘干到含水率为3％得到基粉；
(3)将驯化后的枯草芽孢杆菌菌株接种于LB液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min离心10min，收集菌体，将乳酸杆菌菌株接种于MC液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min离心10min，收集菌体，将枯草芽孢杆菌菌体与乳酸杆菌菌体按所述重量份混合后，再经0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗涤3次，再用0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl调整菌液浓度，使其浓度为1010个/mL±0.5％，得到所述混合菌液，将混合菌液喷洒到基粉中，在40℃的热风中风干，直至含水率为3％得到所述饲料添加剂。
对照组3：
对照组中不使用微量元素，其它参数、制备方法与实施例1完全一致，即饲料添加剂配方如下：
所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：10份的磷酸氢钙、17份的贝壳粉、3份的天竺桂叶精油、1份的食盐，1份的赖氨酸，1份的复合维生素，1份的混合菌液；
所述复合维生素由如下重量份的成分组成：2份的维生素A，1份的维生素D3,2份的维生素E，1份的维生素K3，3份的维生素B1，3份的维生素B2，4份的维生素B6，2份的维生素B12，2份的烟酸，3份的泛酸，5份的氯化胆碱；
所述混合菌液由如下重量份的成分组成：19份的枯草芽孢杆菌和21份的乳酸杆菌。
本对照组饲料添加剂的制备方法如下：
(1)按所述重量份称取各原料；
(2)将复合维生素各原料进行混合得到复合维生素混合物，将磷酸氢钙、贝壳粉、食盐、赖氨酸和复合维生素混合物进行混合，得到基料混合物；将天竺桂叶精油直接喷洒在基料混合物中，搅拌均匀，烘干到含水率为3％得到基粉；
(3)将驯化后的枯草芽孢杆菌菌株接种于LB液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min离心10min，收集菌体，将乳酸杆菌菌株接种于MC液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min离心10min，收集菌体，将枯草芽孢杆菌菌体与乳酸杆菌菌体按所述重量份混合后，再经0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗涤3次，再用0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl调整菌液浓度，使其浓度为1010个/mL±0.5％，得到所述混合菌液，将混合菌液喷洒到基粉中，在40℃的热风中风干，直至含水率为3％得到所述饲料添加剂。
对照组4：
对照组中不使用混合菌液，其它参数、制备方法与实施例1完全一致，即饲料添加剂配方如下：
所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：10份的磷酸氢钙、17份的贝壳粉、3份的天竺桂叶精油、1份的食盐，1份的赖氨酸，1份的复合维生素，1份的微量元素；
所述复合维生素由如下重量份的成分组成：2份的维生素A，1份的维生素D3,2份的维生素E，1份的维生素K3，3份的维生素B1，3份的维生素B2，4份的维生素B6，2份的维生素B12，2份的烟酸，3份的泛酸，5份的氯化胆碱；
所述微量元素由如下重量份的成分组成：1份的五水硫酸铜、1份的一水硫酸亚铁、2份的氯化锌、1份的一水硫酸锰、2份的碘化钠、2份的亚硫酸硒。
本对照组饲料添加剂的制备方法如下：
(1)按所述重量份称取各原料；
(2)将复合维生素各原料进行混合得到复合维生素混合物，将磷酸氢钙、贝壳粉、食盐、赖氨酸和复合维生素混合物进行混合，得到基料混合物；将各微量元素进行混合，然后再加入与微量元素混合物同等质量份的水，再向微量元素混合物中添加天竺桂叶精油，用搅拌机在转速为400r/min，温度为40℃的条件下搅拌20min得到微量元素与天竺桂叶精油的乳状液；将乳状液喷洒在基料混合物中，搅拌均匀，烘干到含水率为3％得到基粉。
对照组5：
对照组中的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌未经过驯化处理，而是直接用于制备饲料添加剂。
本对照组饲料添加剂的制备方法如下：
(1)按所述重量份称取各原料；
(2)将复合维生素各原料进行混合得到复合维生素混合物，将磷酸氢钙、贝壳粉、食盐、赖氨酸和复合维生素混合物进行混合，得到基料混合物；将各微量元素进行混合，然后再加入与微量元素混合物同等质量份的水，再向微量元素混合物中添加天竺桂叶精油，用搅拌机在转速为400r/min，温度为40℃的条件下搅拌20min得到微量元素与天竺桂叶精油的乳状液；将乳状液喷洒在基料混合物中，搅拌均匀，烘干到含水率为3％得到基粉；
(3)将未驯化的枯草芽孢杆菌菌株接种于LB液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min离心10min，收集菌体，将乳酸杆菌菌株接种于MC液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min离心10min，收集菌体，将枯草芽孢杆菌菌体与乳酸杆菌菌体按所述重量份混合后，再经0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗涤3次，再用0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl调整菌液浓度，使其浓度为1010个/mL±0.5％，得到所述混合菌液，将混合菌液喷洒到基粉中，在40℃的热风中风干，直至含水率为3％得到所述饲料添加剂。
测试试验：
饲养试验1：
肥育期猪试验(20kg-110kg)
仔猪从20kg生长到110kg称为肥育期。
在本所的试验场进行，试验选择年龄、体重一致的陆川猪分为7组，每组10头，试验阶段为20kg肥育结束后至110kg出栏。
试验组1饲料配方：实施例1的饲料添加剂9％、玉米64％，豆粕10％，米糠9％，麦麸8％；试验组2饲料配方：对照组1的饲料添加剂9％、玉米64％，豆粕10％，米糠9％，麦麸8％；试验组3饲料配方：对照组2的饲料添加剂9％、玉米64％，豆粕10％，米糠9％，麦麸8％；试验组4饲料配方：对照组3的饲料添加剂9％、玉米64％，豆粕10％，米糠9％，麦麸8％；试验组5饲料配方：对照组4的饲料添加剂9％、玉米64％，豆粕10％，米糠9％，麦麸8％；试验组6饲料配方：对照组5的饲料添加剂9％、玉米64％，豆粕10％，米糠9％，麦麸8％；对照组饲料配方：玉米66％，豆粕12％，米糠12％，麦麸10％。
按试验组1-6和对照组的饲料配方对肥育期的猪进行喂食，其它管理方法一致，出栏宰杀后测定猪背最长肌肉色、里肌肉色、大理石纹、硬度、黏着性、弹性、咀嚼度、胶着性、黏聚性、回复力、猪里肌肉的不饱和脂肪酸含量、脂肪含量、猪大肠中的菌落数量组成：乳酸菌、枯草芽孢杆菌、霉菌、沙门氏菌，结果如表2所示：
表2
由上表可知，试验组1的背最长肌肉色和里肌肉色略高于试验组2-6和对照组，说明，使用本申请的饲料添加剂后可改善猪肉外观，令猪肉色泽更鲜亮，同时，试验组1的硬度、黏着性、咀嚼度、胶着性等指标低于试验组2-6和对照组，说明使用本申请的饲料添加剂后可提高猪肉的适口性，使猪肉的肉质更鲜嫩；试验组1的不饱和脂肪酸含量高于试验组2-6和对照组，其中，试验组2、试验组5、试验组6、对照组的不饱和脂肪酸含量差别不大且低于试验组1和试验组3-4，说明添加剂中天竺桂叶精油和驯化后的混合菌液搭配使用能明显提高猪肉中的不饱和脂肪酸含量；试验组1的脂肪含量低于试验组2-6和对照组，其中，试验组2、试验组5、试验组6、对照组的脂肪含量差别不大且大于试验组1和试验组3-4，说明添加剂中天竺桂叶精油和驯化后的混合菌液的搭配使用能明显降低猪肉中的脂肪含量，如果与复合氨基酸、复合微量元素配合使用，效果更佳；通过对猪大肠内微生物菌群的测试可知，试验组1的乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌活菌数大于试验组2-6和对照组，且试验组2、试验组5、试验组6、对照组的乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌活菌数最少，且在试验组2及对照组大肠内还检出了沙门氏菌和霉菌，证明，本申请饲料添加剂中的天竺桂叶精油有抑制病原菌的作用，混合菌液经过驯化后，具有较强的天竺桂叶精油抗性，能有效富集，配合使用复合氨基酸、复合微量元素，更能促进乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌等有益菌的生长。
饲养试验2：
肥育期羊试验(5kg-30kg)
山羊从5kg生长到30kg称为肥育期。
在本所的试验场进行，试验选择年龄、体重一致的马山黑山羊分为7组，每组10头，试验阶段为5kg肥育结束后至30kg出栏。
试验组1饲料配方：实施例1的饲料添加剂5％、发酵象草74％，稻杆10％，麦麸11％；
试验组2饲料配方：对照组1的饲料添加剂5％、发酵象草74％，稻杆10％，麦麸11％；
试验组3饲料配方：对照组2的饲料添加剂5％、发酵象草74％，稻杆10％，麦麸11％；
试验组4饲料配方：对照组3的饲料添加剂5％、发酵象草74％，稻杆10％，麦麸11％；
试验组5饲料配方：对照组4的饲料添加剂5％、发酵象草74％，稻杆10％，麦麸11％；
试验组6饲料配方：对照组5的饲料添加剂5％、发酵象草74％，稻杆10％，麦麸11％；
对照组饲料配方：发酵象草79％，稻杆10％，麦麸11％。
按试验组1-6和对照组的饲料配方对肥育期的黑山羊进行喂食，其它管理方法一致，出栏宰杀后测定羊里肌肉色、大理石纹、硬度、黏着性、弹性、咀嚼度、胶着性、黏聚性、回复力、羊肉的平均不饱和脂肪酸含量、平均脂肪含量、羊大肠中的菌落数量组成：乳酸菌、枯草芽孢杆菌、霉菌、沙门氏菌，结果如表3所示：
表3
由上表可知，试验组1的里肌肉色略高于试验组2-6和对照组，说明，使用本申请的饲料添加剂后可改善羊肉外观，令羊肉色泽更鲜亮，同时，试验组1的硬度、黏着性、咀嚼度、胶着性等指标低于试验组2-6和对照组，说明使用本申请的饲料添加剂后可提高羊肉的适口性，使羊肉的肉质更鲜嫩；试验组1的不饱和脂肪酸含量高于试验组2-6和对照组，其中，试验组2、试验组5、试验组6、对照组的不饱和脂肪酸含量差别不大且低于试验组1和试验组3-4，说明添加剂中天竺桂叶精油和驯化后的混合菌液搭配使用能明显提高羊肉中的不饱和脂肪酸含量；试验组1的脂肪含量低于试验组2-6和对照组，其中，试验组2、试验组5、试验组6、对照组的脂肪含量差别不大且大于试验组1和试验组3-4，说明添加剂中天竺桂叶精油和驯化后的混合菌液的搭配使用能明显将低羊肉中的脂肪含量，如果与复合氨基酸、复合微量元素配合使用，效果更佳；通过对羊大肠内微生物菌群的测试可知，试验组1的乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌活菌数大于试验组2-6和对照组，且试验组2、试验组5、试验组6、对照组的乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌活菌数最少，且在试验组2、试验组5、对照组大肠内还检出了沙门氏菌和霉菌，证明，本申请饲料添加剂中的天竺桂叶精油有抑制病原菌的作用，混合菌液经过驯化后，具有较强的天竺桂叶精油抗性，能有效富集，配合使用复合氨基酸、复合微量元素，更能促进乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌等有益菌的生长。
饲养试验3：
肥育期鸡试验(100g-1500g)
鸡仔从100g生长到1500g称为肥育期。
在本所的试验场进行，试验选择品种、年龄、体重一致的本地土鸡分为7组，每组10只，试验阶段为100g肥育结束后至1500g出栏。
试验组1饲料配方：实施例1的饲料添加剂5％、玉米粉72％，大米16％，白菜叶7％；
试验组2饲料配方：对照组1的饲料添加剂5％、玉米粉72％，大米16％，白菜叶7％；
试验组3饲料配方：对照组2的饲料添加剂5％、玉米粉72％，大米16％，白菜叶7％；
试验组4饲料配方：对照组3的饲料添加剂5％、玉米粉72％，大米16％，白菜叶7％；
试验组5饲料配方：对照组4的饲料添加剂5％、玉米粉72％，大米16％，白菜叶7％；
试验组6饲料配方：对照组5的饲料添加剂5％、玉米粉72％，大米16％，白菜叶7％；
对照组饲料配方：玉米粉77％，大米16％，白菜叶7％。
按试验组1-6和对照组的饲料配方对肥育期的鸡进行喂食，其它管理方法一致，出栏宰杀后测定鸡胸肉的肉色指标、鸡肉的不饱和脂肪酸含量、脂肪含量，鸡肠内乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、霉菌的活菌数，结果如表4所示：
表4
由上表可知，试验组1的鸡胸肉肉色略高于试验组2-6和对照组，说明，使用本申请的饲料添加剂后可改善鸡肉外观，令鸡肉色泽更鲜亮；试验组1的不饱和脂肪酸含量高于试验组2-6和对照组，其中，试验组2、试验组5、试验组6、对照组的不饱和脂肪酸含量差别不大且低于试验组1和试验组3-4，说明添加剂中天竺桂叶精油和驯化后的混合菌液搭配使用能明显提高鸡肉中的不饱和脂肪酸含量；试验组1的脂肪含量低于试验组2-6和对照组，其中，试验组2、试验组5、试验组6、对照组的脂肪含量差别不大且大于试验组1和试验组3-4，说明添加剂中天竺桂叶精油和驯化后的混合菌液的搭配使用能明显将低鸡肉中的脂肪含量，如果与复合氨基酸、复合微量元素配合使用，效果更佳；通过对鸡肠内微生物菌群的测试可知，试验组1的乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌活菌数大于试验组2-6和对照组，且试验组2、试验组5、试验组6、对照组的乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌活菌数最少，且在试验组2、试验组5、对照组大肠内还检出了沙门菌和霉菌，证明，本申请饲料添加剂中的天竺桂叶精油有抑制病原菌的作用，混合菌液经过驯化后，具有较强的天竺桂叶精油抗性，能有效富集，配合使用复合氨基酸、复合微量元素，更能促进乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌等有益菌的生长。
综上所述，使用本发明生产的饲料添加剂，能有效改善禽畜肉的肉色，改善肉类口感，降低肉类中脂肪含量，提高肉类的不饱和脂肪酸含量。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (6)

1.一种提高肉类品质的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：10份-15份的磷酸氢钙、17份-26份的贝壳粉、3份-8份的天竺桂叶精油、1份-3份的食盐，1份-2份的赖氨酸，1份-5份的复合维生素，1份-3份的微量元素和1份-3份的混合菌液；
所述复合维生素由如下重量份的成分组成：2份-8份的维生素A，1份-3份的维生素D3,2份-5份的维生素E，1份-3份的维生素K3，3份-8份的维生素B1，3份-7份的维生素B2，4份-8份的维生素B6，2份-6份的维生素B12，2份-8份的烟酸，3份-7份的泛酸和5份-9份的氯化胆碱；
所述微量元素由如下重量份的成分组成：1份的五水硫酸铜、1份-3份的一水硫酸亚铁、2份的氯化锌、1份-3份的一水硫酸锰、2份-8份的碘化钠和2份-8份的亚硫酸硒。
所述混合菌液由如下重量份的成分制得：19份-29份的枯草芽孢杆菌和21份-35份的乳酸杆菌。
2.根据权利要求1所述一种提高肉类品质的饲料添加剂，其特征在于，所述天竺桂叶精油最主要的活性成分及百分比如下：4.487％的4-萜烯醇；8.293％的α，α-4-三甲基-3-环己烯-1-甲醇；12.403％的丁香烯；2.669％的β-愈创烯；1.272％的Z-橙花叔醇；13.082％的丁香烯氧化物；10.691％的愈创醇；5.184％的1，4-二甲基-3-(2-甲基-1-丙烯-1-基-环庚烯；5.14％的桉叶油醇和5.041％的异愈创木醇。
3.根据权利要求1所述一种提高肉类品质的饲料添加剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的驯化方法为：取枯草芽孢杆菌菌株接入含天竺桂叶精油质量浓度为50mg/L的LB培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为60mg/L的LB培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为70mg/L的LB培养基中，27℃培养2天，以此，连续传代培养，每次使天竺桂叶精油质量浓度增加10mg/L，直至天竺桂叶精油终浓度达100mg/L为止，完成枯草芽孢杆菌驯化。
4.根据权利要求1所述一种提高肉类品质的饲料添加剂，其特征在于，所述乳酸杆菌的驯化方法为：取乳酸杆菌菌株接入含天竺桂叶精油质量浓度为50mg/L、水牛奶质量浓度为100mg/L的MC培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为60mg/L、水牛奶质量浓度为150mg/L的MC培养基中，27℃培养2天后，挑取菌落菌株再接入含天竺桂叶精油质量浓度为70mg/L、水牛奶质量浓度为200mg/L的MC培养基中，27℃培养2天，以此，连续传代培养，每次使天竺桂叶精油质量浓度增加10mg/L、水牛奶质量浓度增加50mg/L，直至天竺桂叶精油终浓度达110mg/L、水牛奶终浓度达400mg/L为止，完成乳酸杆菌驯化。
5.一种制备权利要求1-4任意一项所述提高肉类品质的饲料添加剂的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)按所述重量份称取各原料；
(2)将复合维生素各原料进行混合得到复合维生素混合物，将磷酸氢钙、贝壳粉、食盐、赖氨酸和复合维生素混合物进行混合，得到基料混合物；将各微量元素进行混合，然后再加入与微量元素混合物同等质量份的水，再向微量元素混合物中添加天竺桂叶精油，用搅拌机在转速为400r/min-500r/min，温度为40℃-50℃的条件下搅拌20min-30min得到微量元素与天竺桂叶精油的乳状液；将乳状液喷洒在基料混合物中，搅拌均匀，烘干到含水率为3％-5％得到基粉；
(3)将驯化后的枯草芽孢杆菌菌株接种于LB液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min-5000r/min离心10min-15min，收集菌体；将乳酸杆菌菌株接种于MC液体培养基中培养至对数生长期，4000r/min-5000r/min离心10min-15min，收集菌体；将枯草芽孢杆菌菌体与乳酸杆菌菌体按所述重量份混合后，再经0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl洗涤3次，再用0.05mol/L、pH7.0的Tris-HCl调整菌液浓度，使其浓度为1010个/mL±0.5％，得到所述混合菌液，将混合菌液喷洒到基粉中，在40℃-45℃的热风中风干，直至含水率为3％-5％得到所述饲料添加剂。
6.根据权利要求1-4任意一项所述的一种提高肉类品质的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂应用于肥育期的猪、羊和鸡。
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