CN100491364C - 蒲公英中的倍半萜内酯及其抗格兰氏阳性菌的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种从菊科蒲公英植物中得到的伪愈创木烷倍半萜内酯化合物-蒙古蒲公英内酯A及其可药用的盐，化学名为：1-酮-11(R)-羟基-3，5，1(10)-三烯-伪愈创木-8α，12-内酯。本发明提供的化合物及其可药用的盐与制剂允许的药物赋形剂或载体制备成药物制剂，所制备的药物还含有其他抗菌药物。制剂形式主要包括片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、滴丸、注射剂、透皮贴剂、气雾剂、控释或缓释剂、或纳米制剂。本发明提供的化合物及其可药用的盐具有明显的抑制金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌生长的功效，可在制备预防和治疗抗格兰氏阳性菌的药物中应用。

Description

蒲公英中的倍半萜内酯及其抗格兰氏阳性菌的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体而言，涉及从蒲公英中分离得到一个伪愈创木烷倍半萜内酯及其可药用盐、含有这些化合物的药物组合物及其在抗感染药物中的用途。

技术背景

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是格兰氏阳性球菌，抗甲基西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)是20世纪80年代开始出现的菌株，它是医院内和临床上微生物流行病的主要病源，引起人的主要感染有疖子、脓疱、毒性表皮腐解、肺炎、骨髓炎、急性心肌炎、乳腺炎、膀胱炎、前列腺炎、菌血症、中毒性休克综合症、淋巴结炎、咽炎、子宫颈炎、盆腔炎，以及肌肉、皮肤、尿殖道、中枢神经系统的脓肿。故是对人体健康影响极大的致病菌种。链球菌(Streptococcus species)是成链状排列、兼性厌氧的格兰氏阳性杆菌。医学上常见的致病性的链球菌大部分属于β溶血型。它们存在于人的皮肤、呼吸道、消化道以及尿殖道的黏膜上，能够引起皮肤、呼吸道以及软组织感染如肺炎、菌血症、心内膜炎、脑膜炎、泌尿道炎症以及关节炎等疾病。

中国传统医药是个资源丰富的宝库。其中许多药用植物都含有很好的抑制金黄色葡萄球菌(简称“金葡菌”)以及乙型溶血性链球菌的功效。蒲公英为菊科植物蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz，也称蒙古蒲公英)或同属数种植物的干燥全草，为清热解毒中药，有清热、解毒、利尿、散结的功能；主治乳痈、疔疮、目赤、咽痛、湿热黄疸和热淋涩痛等。临床上常用于治疗急性乳腺炎、淋巴腺炎、疔毒疮肿、急性结膜炎、感冒发热、急性扁桃体炎、急性支气管炎、肝炎、肿囊炎及尿路感染等疾病。蒲公英主要含有三萜类、植物甾醇类、倍半萜内酯类、香豆素类、黄酮类、酚酸类化合物、胡萝卜素类和脂肪酸类化合物。其药理作用有抗菌消炎、抗氧化、保肝利胆、免疫调节和抗肿瘤等。目前，利用蒲公英单味药制成的注射剂、片剂和颗粒剂等广泛应用于临床，治疗各种炎症性疾病取得了较好的疗效。

蒲公英具有较强的清热解毒功效，具有较高的研究和开发价值，但国内对蒲公英的研究主要停留在其粗提物上，尤其缺乏药效物质基础相关研究。国内的相关研究报道和专利一般都是以复方形式应用，少有从蒲公英中提取有效成分并针对其抑菌活性进行研究的报道。国外对药用蒲公英(Taraxacumofficinale)的化学成分研究比较全面，发现其主要含倍半萜、三萜和黄酮类成分，药理活性报道较少，而未见针对蒙古蒲公英(T.mongolicum)的化学成分研究报道。国内对蒲公英属植物的化学成分研究报道甚少，多引用药用蒲公英Taraxacum officinale的化学成分，目前经检索发现凌云课题组对蒙古蒲公英的化学成分进行了研究报道[凌云，鲍燕燕，朱莉莉，郑俊华，蔡少青，肖越，蒲公英化学成分的研究，中国药学杂志，1997，32，584-586；凌云，鲍燕燕，张永林，蔡少青，郑俊华，蒲公英化学成分的研究，海军总医院学报，1998，11，167-169]，共分得5个化合物：β-谷甾醇，槲皮素，咖啡酸，绿原酸和木犀草素-7-0-葡萄糖苷，而其它化学成分目前尚不清楚。为了解T.mongolicum各极性部位的化学组成，申请人对其进行了系统的植物化学研究。研究结果表明，黄酮类化合物和多酚类化合物为其主要化学成分，低极性部位以甾醇类化合物居多。

发明内容

本发明的目的是提供一种从菊科蒲公英植物中得到的伪愈创木烷倍半萜内酯化合物及其可药用的盐；本发明提供的伪愈创木烷倍半萜内酯化合物是从菊科植物蒲公英中提取制备得到，化学名为：1-酮-11(R)-羟基-3，5，1(10)-三烯-伪愈创木-8α，12-内酯，具有下列结构式：

蒙古蒲公英内酯A

伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物又称为蒙古蒲公英内酯A。

本发明的另一个目的是提供含有伪愈创木烷倍半萜内酯类化合物及其可药用的盐与制剂允许的药物赋形剂或载体制备成药物组合物，所制备的药物还含有其他抗菌药物。

所述的药物可按本制剂领域已知方法制成多种剂型，制剂形式主要包括片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、滴丸、注射剂、透皮贴剂、气雾剂、控释或缓释剂、或纳米制剂。

本发明的又一个目的是提供伪愈创木烷倍半萜内酯类化合物及其可药用的盐在制备预防和治疗抗格兰氏阳性菌的药物中应用。主要在制备预防和治疗由金黄色葡萄球菌和/或乙型溶血性链球菌感染引起的疾病的药物中应用。

蒙古蒲公英内酯A是从蒙古蒲公英(Taraxacum mongolicum)的乙酸乙酯提取部位分到的唯一一个伪愈创木烷类倍半萜(Pseudoguaianolide)。

伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物主要来源于菊科植物蒲公英的各个部位，优选从蒲公英(又称蒙古蒲公英)(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz)、碱地蒲公英(又称华蒲公英)(Taraxacum sinicumKitag)、热河蒲公英(又称白缘蒲公英)(Taraxacum platypecidum Diels)、东北蒲公英(Taraxacumohwianum Kitag)、反苞蒲公英(Taraxacum grypodon Dahlst)、兴安蒲公英(Taraxacum falcilobum Kitag)等中国药品市场上常见的蒲公英药材的根茎、叶、花，包括其干品和鲜品中制备而得。优选蒲公英(又称蒙古蒲公英)(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz)和/或碱地蒲公英(又称华蒲公英)(Taraxacum sinicum Kitag)的全草部分。

本发明的特点是：从菊科植物蒲公英根茎、叶、花部位中分离提纯其有效部位，并从中得到一个单体化合物，经化学测定结构为伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物，并发现其具有很强的抑制金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌作用，提供了可期待用于制备与格兰氏阳性菌尤其是金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌引起或有关的生理改变或疾病的治疗药物及预防保健品，包括但不限于疖子、脓疱、毒性表皮腐解、肺炎、骨髓炎、急性心肌炎、心内膜炎、脑膜炎、乳腺炎、膀胱炎、盆腔炎、泌尿道炎症、前列腺炎、菌血症、中毒性休克综合症、淋巴结炎、关节炎、咽炎、子宫颈炎，以及肌肉、皮肤、尿殖道、中枢神经系统的脓肿。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。必须说明下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

以往的植化研究发现蒲公英植物中含有三萜类、香豆素类、酚酸类(包括含酚羟基的黄酮类)、倍半萜类、植物甾醇类、胡萝卜素类和长链脂肪酸类化合物。本发明人对该植物提取物的大极性部位，通过多种正、反相层析手段得到该有效抑制金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌活性的两个活性化合物，并经红外、质谱、紫外和核磁共振波谱等综合解析推导出其化学结构为前人未报道过的一个伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物蒙古蒲公英内酯A(化合物1)。

化合物1是我们从蒲公英(Taraxacum mongolicum)的乙酸乙酯提取部位分到的唯一一个伪愈创木烷类倍半萜(Pseudoguaianolide)。从蒲公英属植物中分离得到的倍半萜类化合物一般为吉马烷型、桉烷型和愈创木烷型倍半萜，而从Taraxacum属植物中分离的伪愈创木烷类倍半萜至今只有一篇文献报道[VUAhmad等，Taraxacin，a new duaianol ide from Taraxacum wallichii，Journalof Natural Products，2000，63，1010-1011]，本文则报道了一个新的伪愈创木烷类倍半萜内酯的结构鉴定。

本发明中的药材可以是任意一种中国产的蒲公英属植物任一部位，即可以是蒲公英(又称蒙古蒲公英)(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz)、碱地蒲公英(又称华蒲公英)(Taraxacum sinicum Kitag)、热河蒲公英(又称白缘蒲公英)(Taraxacum platypecidum Diels)、东北蒲公英(Taraxacumohwianum Kitag)、、反苞蒲公英(Taraxacum grypodon Dahlst)、兴安蒲公英(Taraxacum falcilobum Kitag)等中国药品市场上常见的蒲公英药材，可以是干品或鲜品，可以是蒲公英药材植物的根、茎、叶、花、种子、皮、果实，也可以是它们的混合物。优选全草。更优选蒲公英(又称蒙古蒲公英)(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz)和/或碱地蒲公英(又称华蒲公英)(Taraxacum sinicum Kitag)的全草部分。本发明之说明书中均简称蒲公英。

实施例1 蒙古蒲公英内酯A的分离：

1.1 仪器与试剂

熔点用显微熔点仪(北京泰克公司生产)测定，温度未校正；旋光在日本产Polax-2L型自动旋光仪上测定；红外光谱IR由Bruker Vector-22红外光谱仪测定，经KBr压片；紫外光谱用Shimadzu UV-240紫外分光光度计测定；核磁共振氢谱¹H-NMR，核磁共振碳谱¹³C-NMR和2D NMR由INOVA型超导核磁共振波谱仪(VARIAN INOVA-400MHz)测定(四甲基硅醚TMS为内标)；电喷雾质谱ESI-MS由Bruker Esquire 3000+质谱仪测定，柱层析用硅胶(100-200，200-300和300-400目)以及薄层层析用硅胶GF254(10-40目)均由青岛海洋化工厂生产；所用试剂均为分析纯，其中石油醚沸程为60-90℃；薄层制备层析(PTLC)用Merck公司的铝箔硅胶板；柱色谱用聚酰胺(14-30目和100-200目)采用浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂产品；葡聚糖凝胶Sephadex LH-20采用瑞典Amersham Pharmacia Biotech AB公司产品；反相硅胶RP-18采用日本FujiSi lysia Chemical公司的Chromatorex产品；MCI为日本三菱化工公司产品，薄板(TLC)检测用254nm和365nm的紫外灯；显色剂用碘蒸气、10％硫酸-乙醇、2％三氯化铁-甲醇溶液、磷钼酸以及溴甲酚绿溶液。

液相：Waters系列高效液相色谱仪，包括2695分离系统(四元泵、柱温箱及自动进样器)，2996紫外二极管矩阵检测器，Empower色谱操作软件。

1.2 植物来源与鉴定

供提取用蒲公英药材于2001年8月购于安徽毫州，由浙江大学药学院中药与天然药物研究室鉴定为蒙古蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.)的全草。供比较含量用蒲公英(蒙古蒲公英)(Taraxacum mongolicumHand.-Mazz)、碱地蒲公英(华蒲公英)(Taraxacum sinicum Kitag)、热河蒲公英(白缘蒲公英)(Taraxacum platypecidum Diels)、东北蒲公英(Taraxacum ohwianum Kitag)、反苞蒲公英(Taraxacum grypodon Dahlst)、兴安蒲公英(Taraxacum falcilobum Kitag)干品各20克由中科院昆明植物所彭华教授2003年8月～2004年7月协助采集并鉴定。供干鲜品含量比较之蒲公英(蒙古蒲公英)(Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz)和碱地蒲公英(华蒲公英)(Taraxacum sinicum Kitag)鲜品各100克采集自浙江省天目山，由浙江大学药学院中药与天然药物研究室鉴定。

1.3 提取与分离

样品晒干粉碎(干重5.0公斤)后用75％工业酒精沸水下热提两次，提取液冷却后合并，经减压浓缩得462克棕褐色粘稠状粗提物。将粗提物用甲醇溶解，D-101大孔树脂拌样，在旋转蒸发仪上减压除去甲醇，以变色硅胶为干燥剂，40℃真空干燥过夜，加样到水平衡好的D-101柱中，收集50％甲醇-水洗脱部位，将洗脱液浓缩至干，再用蒸馏水制成悬浮液后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分配萃取。各有机层减压蒸干后分别得3克，32克，127克浸膏，余为水部位。

1.4 乙酸乙酯的分离纯化

取乙酸乙酯部位浸膏82克用硅胶(200-300目)柱(900克)，以氯仿-甲醇(1:0→0:1)为洗脱剂梯度洗脱，根据薄层层析TLC情况共分6个部位(F1-F6)，其中F2(4克)过硅胶柱(100克)，用石油醚-乙酸乙酯(8:1→0:1)洗脱，经薄层层析TLC检查，石油醚-乙酸乙酯(4:1)洗脱者含有相同组分，经重结晶得到得到蒙古蒲公英内酯A(25.2毫克)。

1.5 结构鉴定

蒙古蒲公英内酯A的结构鉴定：化合物1为白色针状结晶，ESI-MS给出分子离子峰m/z为260，结合氢谱以及碳谱推出化合物1的分子式为C15H1604，分子中有8个不饱和度。UV谱中显示化合物具有三个吸收峰[246nm(15800)，259nm(15500)，312nm(8200)]结合IR谱中的吸收峰3276，1770，1690，1625，1605，990以及868cm-1说明化合物1中存在羟基，饱和内酯环，五元环的共轭酮羰基基团以及双键结构。考察化合物1的13C-NMR以及DEPT谱：δ 178.4的季碳信号和δ 74.9的叔碳信号提示分子中存在内酯结构；δ 194.6的季碳信号表明分子中存在不饱和酮结构；分子中还存在三个双键(δ 162.9，146.5，139.5，131.2，126.8，118.3)；1H-NMR谱中给出了三个甲基信号[δ 2.37(3H，单峰)，2.19(3H，单峰)，1.31(3H，单峰)]，根据以上信息推测化合物可能为伪愈创木烷类倍半萜。该化合物的氢谱和碳谱数据与化合物Taraxacin的数据很相像[VU Ahmad等，Taraxacin，a new duaianolide from Taraxacumwallichii，Journal of Natural Products，2000，63，1010-1011]。

然而化合物Taraxacin碳谱中C-7和C-11之间的双键信号(δ 154.7，124.3)在化合物1的碳谱中消失了，与之相应的在化合物1的碳谱中被一个连氧季碳(δ 74.8)和一个次甲基(δ 52.8)所代替。以上信息表明化合物1是Taraxacin的7，11位去双键以及11位羟基取代的伪愈创木烷衍生物。从生源关系来看，11位为β-构型；同时化合物1之1H-NMR谱中连氧信号[δ4.39(1H，三重双峰，J＝9.6，9.6，4.8Hz，H-8)]显示C-7，8反式稠合的内酯环，即8位氢为β-构型[YL Liu等，Sesquiterpene lactones from Artemisiafrigida，Journal of Natural Products，1981，44，722-728]，且如果8位氢为α-构型时刚性分子模型则张力过大而无法搭建；13位甲基的相对构型通过与已知化合物的化学位移对比得出为α-构型[W Zhang等，Menverins A-D，new highly oxygenated guaiane lactones from Hainan Gorgonian Menellaverrucosa(BRUNDIN)，Helvetica Chimica Acta，2004，87，2919-2925；JMAgui lar等，Sesquiterpene lactones from Artemisia lanata，Phytochemistry，1988，27，2229-2233；OA Konovalova等，Sesquiterpenelactones from Artemisia caucasica，Khimiya Prirodnykh Soedinenii，1971，7，741-744]。且在NOESY谱图中，13-CH3和H-8无相关效应而和H-7存在相关效应也可证明以上推断，故而确定化合物1为如图所示的蒙古蒲公英内酯A。

蒙古蒲公英内酯A(化合物1)：白色针晶；C₁₅H₁₆O₄；熔点m.p.：272-274℃；紫外UVλmax(甲醇)：246，259，312nm；红外IR v(cm^-1)：3276，1690，1625，1605，990，868；ESI-MSm/z：261[M+H]⁺；核磁共振氢谱¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ 6.16(1H，单峰，H-3)，6.04(1H，双峰，J＝2.4Hz，H-6)，4.39(1H，三重双峰，J＝9.6，9.6，4.8Hz，H-8)，3.20(1H，双峰，J＝11.2Hz，H-9a)，3.01(1H，双峰，J＝11.2Hz，H-9b)，2.99(1H，双双峰，J＝9.6，2.4Hz，H-7)，2.37(3H，单峰，H-14)，2.19(3H，单峰，H-15)，1.31(3H，单峰，H-13)；核磁共振碳谱¹³C-NMR(DMSO-d₆，100MHz)δ 194.6(s，C-2)，178.4(s，C-12)，162.9(s，C-5)，146.5(s，C-4)，139.5(s，C-10)，131.2(d，C-3)，126.8(s，C-1)，118.3(d，C-6)，74.9(d，C-8)，74.8(s，C-11)，52.8(d，C-7)，43.9(t，C-9)，21.1(q，C-14)，18.8(q，C-13)，14.1(q，C-15)。

实施例2：伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物抑制格兰氏阳性菌能力检测

2.1 原理：

采用“管碟法”研究试验药物的体外抗菌活性，是利用加在牛津杯中的试验药物扩散到接种有试验菌的培养基中，从而抑制细菌的生长，通过检测在牛津杯周围形成的抑菌圈的直径大小来确定试验药物的抗菌活性。

2.2 检测菌：

金黄色葡萄球菌26003-23，购自中国药品生物制品检定所。

乙型溶血性链球菌32210，购自中国药品生物制品检定所。

2.3 试验药物：

DMSO：DMSO溶剂对照；

诺氟沙星：1.25mg/ml；

蒙古蒲公英内酯A(化合物1)：5.0mg/ml；用DMSO溶解。

2.4 方法与步骤：

2.4.1、M-H琼脂、M-H肉汤及试验菌液的制备。

2.4.2、双碟的制备：

(1)、M-H琼脂底层：取灭菌M-H琼脂液体自然冷却凝固。

(2)、M-H琼脂菌层：取菌液150μl与30mlM-H琼脂混匀。取约5ml含菌液琼脂，均匀摊布在具有M-H琼脂底层的平皿内。

2.4.3、待培养基凝固后，在每个平皿中均匀放立加满试验药液牛津杯。

2.4.4、置37℃培养24小时。

2.4.5、用游标卡尺测量抑菌圈直径。

表2：蒙古蒲公英内酯A(化合物1)对标准致病菌的抑菌圈直径(mm)

2.5 实验结论：

通过采用“微量稀释法”研究化合物1对金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌的体外抗菌活性。结果表明：化合物1对金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌有较好的抗菌活性。说明其为潜在的抑制格兰氏阳性菌活性物质，具有进一步开发价值。

本发明得到的该伪愈创木烷类倍半萜内酯成分具有抑制金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌生长的功能；可以用于预防和治疗由金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌引起的疖子、脓疱、毒性表皮腐解、肺炎、骨髓炎、急性心肌炎、心内膜炎、脑膜炎、乳腺炎、膀胱炎、盆腔炎、泌尿道炎症、前列腺炎、菌血症、中毒性休克综合症、淋巴结炎、关节炎、咽炎、子宫颈炎，以及肌肉、皮肤、尿殖道、中枢神经系统的脓肿及与上述症状或疾病有关的医药或保健品用途。

本发明的蒲公英中发现的倍半萜内酯蒙古蒲公英内酯A可以与药学上常用的辅料或载体结合，制备得到具有预防和治疗由金黄色葡萄球菌和/或乙型溶血性链球菌引起的感染之药物及药物组合物或保健品。上述各类药物组合物或者保健品可以采用片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。

本发明的倍半萜蒙古蒲公英内酯A还可以与现已上市的金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌抑制剂和/或其他治疗类似格兰氏阳性菌感染相关病症的治疗药物及其原料药如头孢类、大环内酯类、以及磺胺类如沙星等药物品种联合使用，制备得到具有治疗格兰氏阳性菌感染相关病症功效活性的组合物或复方制剂，可预期成为治疗格兰氏阳性菌感染疾病药品或者保健品。上述各类药物组合物或者保健品可以采用片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂等剂型药物，包括采用现已公认的药剂学常识常规制备而得的各种缓释、控释剂型或纳米制剂。

本发明得到的该伪愈创木烷类倍半萜内酯成分具有抑制金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌生长的功能；可以用于预防和治疗由金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌引起的疖子、脓疱、毒性表皮腐解、肺炎、骨髓炎、急性心肌炎、心内膜炎、脑膜炎、乳腺炎、膀胱炎、盆腔炎、泌尿道炎症、前列腺炎、菌血症、中毒性休克综合症、淋巴结炎、关节炎、咽炎、子宫颈炎，以及肌肉、皮肤、尿殖道、中枢神经系统的脓肿及与上述症状或疾病有关的医药或保健品用途；从而可能开发出抗感染类药物组合物。

实施例3：五种蒲公英属植物根茎与地上部分茎叶中化合物1的比较

蒲公英(蒙古蒲公英)(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz)、碱地蒲公英(华蒲公英)(Taraxacum sinicum Kitag)、热河蒲公英(白缘蒲公英)(Taraxacum platypecidum Diels)、东北蒲公英(Taraxacum ohwianumKitag)、反苞蒲公英(Taraxacum grypodon Dahlst)、兴安蒲公英(Taraxacumfaicilobum Kitag)干品各20克由中科院昆明植物所彭华教授采集并鉴定。

用沃特斯高效液相色谱(Waters HPLC，2695分离系统包括四元泵、柱温箱自动进样器；2996紫外二极管矩阵检测器，Empower色谱操作软件和Waters

 RP-184.6mm×250mm，5μm层析柱)对化合物1进行了含量检测。

供试样品处理：阴干粉碎后的样品各称取0.5克(±0.1毫克)，置25毫升容量瓶，加20毫升甲醇，25～30℃下超声60分钟，加甲醇至刻度，用0.45μm滤膜滤过。

标准溶液的制备：准确称取化合物110.0毫克，分别加入8毫升甲醇超声溶解，再加入甲醇配成0.5毫克/毫升的标准储备液。用甲醇按照1:1，1:10，1:50，1:100配制成标准溶液，冷藏备用。同法各自制备出化合物1的标准溶液。试剂：甲醇为HPLC级(Merk生产)，水为二次蒸馏水。色谱条件：使用

RP-18色谱柱(4.6mm×250mm)，5μm，柱温30℃，检测波长：254nm，流速：0.8毫升/分钟，进样量：20μl。流动相组成如下表所示：

表3 测定蒙古蒲公英苷A和蒙古蒲公英苷B的高效液相色谱条件

 

时间(分钟)	甲醇(％)	0.1％醋酸(％)
			0	22	78
30	22	78
			31	35	65
55	35	65
			56	40	60
80	40	60

含量测试：将提取溶媒、标准品溶液、供试样品分别进样，记录色谱图。以峰面积对应标准溶液浓度绘制曲线，计算线性范围，相关系数≥0.998。从标准曲线计算出化合物1的含量。

发现含量如表4所示：

表4 常见蒲公英中蒙古蒲公英内酯A(化合物1)含量

 

	化合物1含量(％)
		蒙古蒲公英(蒲公英)根茎部分	0.036
蒙古蒲公英(蒲公英)地上部分茎叶	0.045
		碱地蒲公英(华蒲公英)全草	0.049
热河蒲公英(白缘蒲公英)全草	0.076
		东北蒲公英全草	0.061
反苞蒲公英全草	0.018
		兴安蒲公英全草	0.039

结果表明：蒙古蒲公英根茎和地上部分都含有本发明所述的化合物，并且碱地蒲公英、热河蒲公英、东北蒲公英、反苞蒲公英、兴安蒲公英中都含有不同含量的化合物1，说明蒙古蒲公英内酯A是菊科蒲公英属植物中的特征性成分，所以运用本属植物包括并不限于蒙古蒲公英、碱地蒲公英、热河蒲公英、东北蒲公英、反苞蒲公英、兴安蒲公英等都可以制备本发明所要求的含有蒙古蒲公英内酯A的抗格兰氏阳性菌药物。

实施例4：两种蒲公英属植物茎叶(鲜品和干品中)化合物1的比较

蒲公英(蒙古蒲公英)(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz)、碱地蒲公英(华蒲公英)(Taraxacum sinicum Kitag)鲜品各100克由浙江大学陈柳蓉教授鉴定。

用沃特斯高效液相色谱(Waters HPLC，2695分离系统包括四元泵、柱温箱自动进样器；2996紫外二极管矩阵检测器，Empower色谱操作软件和Waters RP-184.6mm×250mm，5μm层析柱)对化合物1进行了含量检测。

含量测试：将提取溶媒、标准品溶液、供试样品分别进样，记录色谱图。以峰面积对应标准溶液浓度绘制曲线，计算线性范围，相关系数≥0.998。从标准曲线分别计算出化合物1的含量。具体操作同实施例3。

表5 两种蒲公英干品与鲜品中蒙古蒲公英内酯A(化合物1)含量对比

 

	化合物1含量(％)
		蒙古蒲公英(蒲公英)鲜品	0.055
蒙古蒲公英(蒲公英)干品	0.045
		碱地蒲公英(华蒲公英)鲜品	0.051
碱地蒲公英(华蒲公英)干品	0.049

结果表明：蒙古蒲公英和碱地蒲公英的干品和鲜品中都含有不同含量的化合物1，含量并无大的差异。说明蒙古蒲公英内酯A在菊科蒲公英属植物中存在和含量较为稳定，所以运用本属植物的干品和鲜品都可以制备本发明所要求的含有蒙古蒲公英内酯A的抗格兰氏阳性菌药物。

Claims (5)

1.一种伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物及其可药用的盐，是从菊科植物蒲公英中提取制备得到，称为蒙古蒲公英内酯A，化学名为：1-酮-11(R)-羟基-3，5，1(10)-三烯-伪愈创木-8α，12-内酯，其特征是具有下列结构：

2.根据权利要求1所述的伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物及其可药用的盐在制备预防和治疗抗格兰氏阳性菌感染引起的疾病的药物中应用。

3.根据权利要求2所述的伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物及其可药用的盐的用途，其特征是：在制备预防和治疗由金黄色葡萄球菌和/或乙型溶血性链球菌感染引起的疾病的药物中应用。

4.根据权利要求2所述的伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物及其可药用的盐的应用，其特征是：所述药物由所述的伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物与制剂允许的药物赋形剂或载体制备而成。

5.根据权利要求2所述的伪愈创木烷类倍半萜内酯化合物及其可药用的盐的应用，其特征是：所述药物的制剂形式为片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、滴丸、注射剂、透皮贴剂、气雾剂、控释或缓释剂、或纳米制剂。