CN100424091C - 保护化2’-脱氧胞苷类的精制法 - Google Patents

保护化2’-脱氧胞苷类的精制法 Download PDF

Info

Publication number
CN100424091C
CN100424091C CNB031379877A CN03137987A CN100424091C CN 100424091 C CN100424091 C CN 100424091C CN B031379877 A CNB031379877 A CN B031379877A CN 03137987 A CN03137987 A CN 03137987A CN 100424091 C CN100424091 C CN 100424091C
Authority
CN
China
Prior art keywords
group
benzoyl
deoxyribose cytidine
expression
general expression
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB031379877A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1467216A (zh
Inventor
石桥大树
长原清辉
福入靖
松叶泰子
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mitsui Chemicals Inc
Mitsui Chemical Industry Co Ltd
Original Assignee
Mitsui Chemical Industry Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mitsui Chemical Industry Co Ltd filed Critical Mitsui Chemical Industry Co Ltd
Publication of CN1467216A publication Critical patent/CN1467216A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100424091C publication Critical patent/CN100424091C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明的课题是：提供一种现有技术难以有效精制的保护化2’-脱氧胞苷类的有效精制方法。本发明的技术解决方案是：制作与水形成复合体的结晶，通过结晶化除去杂质，从而高纯度地精制保护化2’-脱氧胞苷类。至此，可以仅用柱色谱法容易地合成高纯度的保护化2’-脱氧胞苷类，使大规模生产成为可能。

Description

保护化2’-脱氧胞苷类的精制法
技术领域
本发明涉及保护化2’-脱氧胞苷类及其与水形成复合体的结晶。更详细地说，本发明涉及5’位保护化2’-脱氧胞苷类的制造方法、精制方法。
5’位保护化2’-脱氧胞苷类是近年来正在开发的作为反义DNA等的原料有用的化合物。
背景技术
近年，随着基因组创药的发展，反义DNA医药等被急速开发。随之，构成原料的DNA低聚物、以及构成低聚物原料的保护化脱氧核苷类的需要日趋增大。另一方面，在医药品的用途中，为了极力抑制由含有的杂质生成的副生成物，有必要使用非常高纯度的中间体制品。
至今，按照特开昭58-180500号公报、特开昭63-179889号公报和特表平6-507883号公报等示例表明那样，用柱色谱法精制5’位保护化脱氧核苷类。在该方法中，除去极性和构造差别大的杂质的精制是比较容易的，但除去有类似构造的杂质是困难的。例如，由二甲氧基三苯甲基那样的三苯甲基衍生物保护5’，3’位二者的羟基的杂质，和由二甲氧基三苯甲基那样的三苯甲基衍生物保护不是必要的5’位而是3’位的羟基的杂质等就特别难以除去，另外，这些杂质是医药品制造上对下步工序以后影响大的杂质，其混入带来非常大的问题。此外，柱色谱法在工业化中需要庞大的精制装置，而且从需要大量的溶剂出发，对于将来的大量生产、大量供给来说不能不说存在非常大的问题。
另外，至今也正在进行不用柱色谱法除去杂质的研究。具体地说，关于用再沉淀法的精制，在特开昭60-152495号公报和PCT申请WO200075154公报及WO0039138公报中已被公开。所谓再沉淀法，是预先将粗化合物先在可溶性溶剂中溶解后，添加不溶性溶剂或滴入不溶性溶剂，强制地再析出的方法。因此，基本的精制能力低，除去上述所示的杂质是困难的。另外，在工业上适当地调整可溶性溶剂和不溶性溶剂量的比是困难的，量比错误时容易油化，或者发生具有粘性的沉淀，精制容易失败。实际上，按照特开昭60-152495公报的方法，有时发生得到粘稠的软粘糖状的情况，在工业上存在问题。虽然至今已公开了用再沉淀的非结晶化方法，但却未知有通过结晶化得到结晶的方法。
发明内容
鉴于历来所存在问题，本发明提供一种有效且无需特别设备的非常高纯度的保护化2’-脱氧胞苷类的制造方法。
本发明人对上述课题进行了锐意研究，结果在由含保护化2’-脱氧胞苷类及水的溶液，实现与水形成复合体的保护化2’-脱氧胞苷类的结晶化方面获得成功。由此发现，可以用现有技术中认为是困难的结晶化或再结晶的精制法进行精制，从而完成了本发明。即：
本发明是：
[1]保护化2’-脱氧胞苷类的与水形成复合体的结晶，其特征在于，用一般式(1)表示。
Figure C0313798700071
(式中，m及n分别独立地表示任意的整数，R1表示4-甲氧基三苯甲基、4，4’-二甲氧基三苯甲基或三苯甲基，B1表示保护氨基的胞嘧啶基)
[2][1]中所述的与水形成复合体的结晶，其特征在于，一般式(1)表示的化合物用一般式(2)表示。
(式中，m及n与上述同义)
[3][2]中所述的与水形成复合体的结晶，其特征在于，N4-苯酰-3’-O(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的含量为0.1％以下。
[4]保护化2’-脱氧胞苷类的精制方法，其特征在于，由含有一般式(3)(式中，R1及B1与上述同义)表示的化合物和水的溶液，使一般式(3)表示的保护化2’-脱氧胞苷类作为与水形成复合体的结晶析出，并将其回收。
Figure C0313798700081
[5][4]中所述的保护化2’-脱氧胞苷类的精制方法，其特征在于，溶液中所含水的量相对于一般式(3)为0.5当量以上。
[6][4]或[5]中所述的保护化2’-脱氧胞苷类的精制方法，其特征在于，一般式(3)表示的化合物是式(4)。
Figure C0313798700082
[7][6]中所述的保护化2’-脱氧胞苷类的精制方法，其特征在于，所得的结晶中N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的含量为0.1％以下。
[8]一般式(3)或一般式(4)表示的保护化2’-脱氧胞苷类的精制方法，其特征在于，将一般式(1)或一般式(2)表示的保护化2’-脱氧胞苷类的与水形成复合体的结晶在大气压以下的压力下干燥，使其不与水形成复合体。
具体实施方式
以下详细地说明本发明。
在本发明的一般式(1)或一般式(3)的B1中，作为保护氨基的胞嘧啶基的保护基，可以举出烷基、烷基酰基或者可被取代的苯酰基。
此时，烷基不管是直链状还是分支都可以，也可以再结合其它的官能团(取代基)。作为该取代基例如可以举出甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、i-丁基等。
烷基酰基不管是直链状还是分支都可以，也可以形成环，也可以再结合其它的官能团(取代基)。作为该取代基例如可以举出乙酰基、丙酰基、正丁酰基、i-丁酰基、特戊酰基、戊酰基、异戊酰基、环丙基、苯乙酰基、苯氧基乙酰基、(异丙基苯氧基)乙酰基等。
苯酰基不管是无取代还是取代都可以，另外，也可以在苯基的2位、3位、4位的任一位置上有取代基。另外，也可以在多个位置上有取代基。作为取代基例如可以举出甲基、乙基、2-丙基、正丁基、叔丁基等烷基，羟基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、2-丙氧基、正丁氧等烷氧基，硝基，氟基、氯基、溴基、碘基等卤素基，氨基，甲胺基、乙胺基、正丙胺基、二甲胺基、二乙胺基、二异丙胺基等烷胺基，乙酰基、丙酰基、苯酰基等酰基，苯基，吡啶基等。
具体地说，可以举出苯酰基、2-氯苯酰基、3-氯苯酰基、4-氯苯酰基、2-溴苯酰基、3-溴苯酰基、4-溴苯酰基、2-氟苯酰基、3-氟苯酰基、4-氟苯酰基、2-甲氧基苯酰基、3-甲氧基苯酰基、4-甲氧基苯酰基、2-硝基苯酰基、3-硝基苯酰基、4-硝基苯酰基、2-氨基苯酰基、3-氨基苯酰基、4-氨基苯酰基、2-甲基氨基苯酰基、3-甲基氨基苯酰基、4-甲基氨基苯酰基、2-二甲基氨基苯酰基、3-二甲基氨基苯酰基、4-二甲基氨基苯酰基、4-苯基苯酰基、4-乙酰基苯酰基等。
含有保护化2’-脱氧胞苷类和水的溶液，在含有该2种成分的范围内可以含有溶剂。此时的溶剂只要是能使保护化2’-脱氧胞苷类作为与水形成复合体的结晶析出的溶剂，就不作特别的限定，例如可以举出甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、戊醇、环己醇等醇类，二乙醚、四氢呋喃、二噁烷等醚类，丙酮、甲乙酮、甲基异丁基酮等酮类，戊烷、己烷、甲基戊烷、环己烷、庚烷、壬烷、癸烷等饱和烃类，苯、甲苯、异丙基苯、二甲苯、均三甲基苯、二异丙基苯、三异丙基苯等芳香族烃类，二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷等卤化烃类，吡啶、二甲基吡啶、喹啉等吡啶类，三乙胺、三丁胺等3级胺类、乙腈、二甲替甲酰胺、二甲基咪唑啉酮、二甲亚砜等极性溶剂等。这些溶剂可以单一或数种类混合使用。
所谓与水形成复合体的结晶，是指为形成结晶构造，水起辅助作用的状态，包括使水以进入晶格中的形态形成结晶，或者通过与水的弱的相互作用形成复合体等任一种情况。对于与水的复合体的形态和结晶构造不作特别的限制。
在保护化2’-脱氧胞苷类的与水形成复合体的结晶中，也可以在不阻碍结晶化的范围内含微量溶剂，该溶剂来自结晶化时使用的含保护化2’-脱氧胞苷类和水的溶液。
结晶化时的水量相对于保护化2’-脱氧胞苷类，可以有0.5当量以上，但优选为1当量以上。
作为与水形成复合体的方法不作特别的限定，例如可以向含有保护化2’-脱氧胞苷类的溶液中添加水，或者也可以将保护化2’-脱氧胞苷类加到含水的溶剂中。
结晶化时的保护化2’-脱氧胞苷类的浓度，只要是能够结晶化的浓度就不作特别的限定，但通常为1％至50％、优选为5％至40％的范围内进行。
结晶化时的温度不作特别的规定，但优选为-10℃至溶剂的沸点的范围内。另外，通常用1次结晶化就可以充分精制，但重复进行再结晶可以得到更高纯度。另外，再结晶时也可以使接种晶种。
这样得到的保护化2’-脱氧胞苷类的与水形成复合体的结晶，根据需要，通过在大气压以下的压力、优选0.1mmHg至100mmHg下进行干燥，可以得到水分含量降低的保护化2’-脱氧胞苷类的与水形成复合体的结晶、不与水形成复合体的保护化2’-脱氧胞苷类的粉末，或者保护化2’-脱氧胞苷类的粉末。
作为干燥时的温度，只要能除去水就不作特别的限定，但通常在室温至200℃的范围内进行。另外，干燥操作时，一边使氮气等不含水分的气体流过，一边进行干燥，或者也可以用硅胶、五氧化二磷等脱水剂脱水。
由本发明的精制法除去的杂质，可以举出N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷、N4-苯酰-3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷等，这些杂质中N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷在保护化2’-脱氧胞苷类中的含量和与水是否形成复合体无关，为0.1％以下，优选0.01％以下，N4-苯酰-3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷在保护化2’-脱氧胞苷类中的含量和与水是否形成复合体无关，为0.3％以下，优选0.1％以下(此时，％表示用液相色谱分离法测定试样时记录纸的面积比，表示Area％)。
按照以上本发明，能够有效地精制保护化2’-脱氧胞苷类。
【实施例】
以下举出实施例具体说明本发明，但本发明不受其限定。
实施例和比较例的HPLC(高效液相色谱)条件-1(N4-苯酰-2’-脱氧胞苷、N4-苯酰-3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的分析条件)
柱：Develosil TMS-UG-5
150mm×直径4.6mm
流速：0.6mL/min
柱温度：35℃
检测波长：254nm
移动相：梯度条件
时间(min)     B液(％)
0             20
30            100
35            100
37            20
50            停止
[A液]
将NaH2PO4·2水合物(1.92g)、Na2HPO4(2.43g)溶解在水(2940ml)中后，加入MeOH(60ml)，进行混合、脱气。
[B液]
将NaH2PO4·2水合物(196mg)、Na2HPO4(248mg)溶解在水(300ml)中后，加入MeOH(2700ml)，进行混合、脱气。
实施例和比较例的HPLC(高效液相色谱)条件-2(N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的分析条件)
柱：YMC-Pack CN A-512
150mm×直径6.0mm
流速：1.0mL/min.
柱温度：35℃
检测波长：235nm
测定时间：80min.
注入量：10μL
移动相：梯度条件
时间(min.)       B液(％)
0                14
25               50
60               100
80               100
82               14
102              停止
[A液]
将NH4H2PO4(1.15g)、(NH4)2HPO4(0.92g)溶解在水(2000ml)中后，进行脱气。
[B液]
将乙腈(1200mL)和A液(400ml)混合后，进行脱气。
实施例和比较例的XRD(X射线衍射)测定条件
机器：RAD-1A((株)リガク)
X线靶：Cu 30kV 15mA
测定速度：2°/min.
实施例和比较例的DSC(差式扫描式量热法)分析条件
机器：DSC821e(METTLER TOLEDO)
容器材质：铝制
温度上升速度：5℃/min.
在氮气气流下测定
参考例1
N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的制造
将119.0g的N4-苯酰-2’-脱氧胞苷溶解在1.5L的吡啶中。在室温下用2小时添加113.5g的4，4’-二甲氧基三苯甲基氯化物后，在室温下搅拌4小时。加入33.8g的碳酸氢钠后，再搅拌2小时，然后浓缩反应液。在残留物中加入乙酸乙酯1.2L、水300mL并搅拌。加入少量的饱和盐水而分液，同样再次水洗有机层后，用无水硫酸镁干燥。过滤、馏出溶剂后，用乙酸乙酯溶剂以硅胶柱色谱法精制。一边激烈搅拌，一边将含有目的物的分馏部分滴到2.0L二异丙醚中，然后在室温下搅拌2小时。将过滤所得到的固体在50℃下减压干燥，得到N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的游离体153.3g。用XRD测定该游离体，为非晶态。另外，在该游离体中，作为原料的N4-苯酰-2’-脱氧胞苷、作为副产物的N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷及N4-苯酰-3’，5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷分别含1.0Area％、0.15Area％、2.2Area％。
实施例1
N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶的合成
将参考例1中合成的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的游离体(2.0g)，溶解于1，2-二氯乙烷(5mmL)中，加水(0.1g)，在-24℃下析晶1日。滤取所得的结晶后，在50℃下减压干燥，得到N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(0.8g)。用卡尔·费希尔分析，水分值是2.7％。另外，在XRD测定中该结晶有明确的结晶性峰，特别是在5.6°、7°10.3°有急速的吸收。另外，由DSC测定，在109℃下伴随结晶熔化有吸热峰。
这种复合体中含有的N4-苯酰-2’-脱氧胞苷、N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷以及N4-苯酰-3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷分别含0.05Area％、检测界限(0.01％)以下、0.05Area％。NMR(CDCl3)δ8.7(s，1H)、8.3(d，1H)、7.9(d，2H)、7.2-7.6(m，13H)、6.8-6.9(m，4H)、6.3(m，1H)、4.5(m，1H)、4.2(m，1H)、3.8(s，6H)、3.4-3.5(m，2H)、2.7-2.9(m，2H)、2.3(m，1H)
实施例2
N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶的合成
将参考例1中合成的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的游离体(2.0g)溶解于乙酸丁酯(5mmL)中，滴下己烷(0.5ml)后，加入水(0.1g)和实施例1中所得到的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(10mg)，在冰冷化下析晶一日。滤取所得的结晶后，在50℃下减压干燥，得到N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(1.3g)。用卡尔·费希尔分析水分值是2.2％。另外，在XRD测定中该结晶有明确的结晶性峰，特别是在5.6°、7°、10.3°有急速的吸收。另外，由DSC测定，在112℃下伴随结晶熔化有吸热峰。
该复合体中含有的N4-苯酰-2’-脱氧胞苷、N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷以及N4-苯酰-3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷分别含0.12Area％、检测界限(0.01％)以下、0.07Area％。
实施例3
N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶的合成
将参考例1中合成的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的游离体(2.0g)溶解于乙腈(5mL)中，滴下水(7ml)后，加入实施例1中所得到的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(10mg)，在冰冷化下析晶5小时。滤取所得的结晶后，在50℃下减压干燥，得到N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(1.3g)。另外，该结晶由DSC测定，在112℃下伴随结晶熔化有吸热峰。
该复合体中含有的N4-苯酰-2’-脱氧胞苷、N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷以及N4-苯酰-3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷分别含0.1Area％、检测界限(0.01％)以下、0.04Area％。
实施例4
N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶的合成
将参考例1中合成的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的游离体(2.0g)溶解于丙酮(5mL)中，滴下水(8ml)后，加入实施例1中所得到的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(10mg)，在冰冷化下析晶5小时。滤取所得的结晶后，在50℃下减压干燥，得到N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(1.4g)。另外，该结晶由DSC测定，在114℃下伴随结晶熔化有吸热峰。
该复合体中含有的N4-苯酰-2’-脱氧胞苷、N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷以及N4-苯酰-3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷分别含0.07Area％、检测界限(0.01％)以下、0.1Area％。
实施例5
N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶的合成
将N4-苯酰-2’-脱氧胞苷(40.3g)悬浮在吡啶(302.4g)中，冷却至10℃。在相同温度下添加4，4’-二甲氧基三苯甲基氯化物(47.5g)后，在10℃下搅拌4小时。反应终了后，加入碳酸氢钠(12.9g)，然后在室温下搅拌2小时后，浓缩反应液。在残留物中加入乙酸乙酯(473g)，在室温下搅拌1小时后，过滤不溶物。在室温下将己烷(140g)滴入得到的有机层中，然后，加入水(3.3g)和实施例1中所得到的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(0.1g)，在室温下析晶一日后，再次滴入己烷(93g)，在室温下析晶5小时。
滤取所得的结晶后，在50℃下减压干燥，得到N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(63.7g)。另外，该结晶由DSC测定，在110℃下伴随结晶熔化有吸热峰。
另外，在该复合体中，作为原料的N4-苯酰-2’-脱氧胞苷、作为副产物的N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷及N4-苯酰-3’，5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷分别含0.05Area％、检测界限(0.01％)以下、0.15Area％。
实施例6
N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶的精制
将由实施例5所得的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(60g)、活性炭(3g)加入到乙腈(300g)中，在55℃下进行1小时处理。过滤不溶物后，滴下水(240g)，加入N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(0.1g)，在室温下析晶2小时后，再次滴下水(240g)，在室温下析晶2小时。滤取所得到的结晶后，在50℃下减压干燥，得到N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶(55.8g)。用卡尔·费希尔分析水分值是2.3％。
另外，该结晶由DSC测定，在114℃下伴随结晶熔化有吸热峰。
另外，在该复合体中，作为原料的N4-苯酰-2’-脱氧胞苷、作为副产物的N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷以及N4-苯酰-3’，5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷分别含检测界限(0.01％)以下、检测界限(0.01％)以下、0.05Area％。
实施例7
N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的合成
用塔板式干燥机，在65℃减压下(10mmHg)一边使氮气流过，一边使N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的与水形成复合体的结晶干燥40小时。干燥后得到目的物N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷(39.1g)的白色粉末。另外，在所得的粉末中所含的水分值是0.1％。在XRD测定中，没有观察到该粉末有明确的结晶性峰，确认已非晶化。在DSC测定中，伴随结晶熔化的吸热峰也消失。
比较例1
参考WO 00/75154。即，将2.00g的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的游离体[N4-苯酰-2’-脱氧胞苷、N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷以及N4-苯酰-3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷分别含1.0Area％、0.15Area％、2.2Area％。]溶解在2.3mL的乙腈中。一边激烈搅拌一边将该溶液滴入41mL的水中，然后搅拌1小时。滤取析出的白色固体，用水洗涤2次。在50℃下进行减压干燥，得到1.82g的N4-苯酰-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷。另外，该固体在XRD及DSC测定中，伴随结晶没有吸收峰或吸热峰，判明没有结晶化。另外，在该复合体中含有的N4-苯酰-2’-脱氧胞苷、N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷以及N4-苯酰-3’，5’-O-双(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷分别是0.9Area％、0.13Area％、1.8Area％，用本方法几乎不能确认精制效果。
根据本发明，可以采用大量制造的方法，能够比现有技术的方法更有效地制造高纯度的保护化2’-脱氧胞苷类。

Claims (8)

1. 保护化2’-脱氧胞苷类的与水形成复合体的结晶，其特征在于，用一般式(1)表示，
式中，m及n分别独立地表示任意的整数，R1表示4-甲氧基三苯甲基、4，4’-二甲氧基三苯甲基或三苯甲基，B1表示保护氨基的胞嘧啶基，该氨基的保护基是选择性取代的直链或分支的烷基、选择性取代的直链或分支的烷基酰基或者选择性取代的苯酰基，烷基的取代基是甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基或者异丁基，烷基酰基的取代基是乙酰基、丙酰基、正丁酰基、异丁酰基、特戊酰基、戊酰基、异戊酰基、环丙基、苯乙酰基、苯氧基乙酰基或者异丙基苯氧基乙酰基，苯酰基的取代基是烷基、羟基、烷氧基、硝基、卤素基、氨基、烷胺基、酰基、苯基或者吡啶基。
2. 权利要求1所述的与水形成复合体的结晶，其特征在于，一般式(1)表示的化合物用一般式(2)表示，
Figure C031379870002C2
式中，m及n分别独立地表示任意的整数。
3. 权利要求2所述的与水形成复合体的结晶，其特征在于，N4-苯酰-3’-O-(4，4’二氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的含量小于等于0.1％。
4. 保护化2’-脱氧胞苷类的精制方法，其特征在于，由含有一般式(3)表示的化合物和水的溶液，使一般式(3)表示的保护化2’-脱氧胞苷类作为与水形成复合体的结晶析出，用一般式(1)表示，并将其回收，其中保护化2’-脱氧胞苷的浓度为1％～50％，
一般式(3)为：
Figure C031379870003C1
一般式(1)为：
Figure C031379870003C2
上述式中，m及n分别独立地表示任意的整数，R1表示4-甲氧基三苯甲基、4，4’-二甲氧基三苯甲基或三苯甲基，B1表示保护氨基的胞嘧啶基，该氨基的保护基是取代或未取代的直链或分支的烷基、取代或未取代的直链或分支的烷基酰基或者取代或未取代的苯酰基，烷基的取代基是甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基或者异丁基，烷基酰基的取代基是乙酰基、丙酰基、正丁酰基、异丁酰基、特戊酰基、戊酰基、异戊酰基、环丙基、苯乙酰基、苯氧基乙酰基或者异丙基苯氧基乙酰基，苯酰基的取代基是烷基、羟基、烷氧基、硝基、卤素基、氨基、烷胺基、酰基、苯基或者吡啶基。
5. 权利要求4所述的保护化2’-脱氧胞苷类的精制方法，其特征在于，溶液中所含水的量相对于一般式(3)为大于等于0.5当量。
6. 权利要求4或5所述的保护化2’-脱氧胞苷类的精制方法，其特征在于，一般式(3)表示的化合物是式(4)
Figure C031379870003C3
7. 根据权利要求6所述保护化2’-脱氧胞苷类的精制方法，其特征在于，所得的结晶中N4-苯酰-3’-O-(4，4’-二氧基三苯甲基)-2’-脱氧胞苷的含量为小于等于0.1％。
8. 一般式(3)或一般式(4)表示的保护化2’-脱氧胞苷类的精制方法，其特征在于，将一般式(1)或一般式(2)表示的保护的保护化2’-脱氧胞苷类的与水形成复合体的结晶在小于等于大气压的压力下干燥，使其不与水形成复合体，其中一般式(1)为：
Figure C031379870004C1
一般式(2)为：
Figure C031379870004C2
一般式(3)为：
Figure C031379870004C3
一般式(4)为：
Figure C031379870004C4
上述式中，m及n分别独立地表示任意的整数，R1表示4-甲氧基三苯甲基、4，4’-二甲氧基三苯甲基或三苯甲基，B1表示保护氨基的胞嘧啶基，该氨基的保护基是选择性取代的直链或分支的烷基、选择性取代的直链或分支的烷基酰基或者选择性取代的苯酰基，烷基的取代基是甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基或者异丁基，烷基酰基的取代基是乙酰基、丙酰基、正丁酰基、异丁酰基、特戊酰基、戊酰基、异戊酰基、环丙基、苯乙酰基、苯氧基乙酰基或者异丙基苯氧基乙酰基，苯酰基的取代基是烷基、羟基、烷氧基、硝基、卤素基、氨基、烷胺基、酰基、苯基或者吡啶基。
CNB031379877A 2002-06-05 2003-06-02 保护化2’-脱氧胞苷类的精制法 Expired - Fee Related CN100424091C (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2002163889 2002-06-05
JP2002-163889 2002-06-05
JP2002163889 2002-06-05

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1467216A CN1467216A (zh) 2004-01-14
CN100424091C true CN100424091C (zh) 2008-10-08

Family

ID=29545765

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB031379877A Expired - Fee Related CN100424091C (zh) 2002-06-05 2003-06-02 保护化2’-脱氧胞苷类的精制法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US6936709B2 (zh)
EP (1) EP1369424B1 (zh)
JP (1) JP4326841B2 (zh)
KR (1) KR100544847B1 (zh)
CN (1) CN100424091C (zh)
DE (1) DE60315545T2 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050192433A1 (en) * 2004-02-26 2005-09-01 Mitsui Chemicals, Inc. Metallic salt of N4-acylcytidine derivatives, and a method for producing N4-acylcytidine derivatives using the same
CN102212096A (zh) * 2011-04-08 2011-10-12 南通香地生物有限公司 利用复合溶剂及缚酸剂制作5′-胞苷酸的方法
CN103483408B (zh) * 2013-09-18 2015-07-15 南京工业大学 一种用微通道反应装置连续生产5′-核苷酸的方法
AU2020334060A1 (en) 2019-08-19 2022-03-24 Zogenix, Inc. Polymorphic forms of deoxycytidine, compositions comprising the same and uses

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000039138A1 (en) * 1998-12-23 2000-07-06 Alliedsignal Inc. Selective solvent extraction for the purification of protected nucleosides
WO2000075154A2 (en) * 1999-06-04 2000-12-14 Alliedsignal Inc. Protected nucleosides

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
EP0090789A1 (en) 1982-03-26 1983-10-05 Monsanto Company Chemical DNA synthesis
JPS60152495A (ja) 1984-01-18 1985-08-10 Nippon Zeon Co Ltd 保護化ヌクレオシドの製造法
FR2621591B1 (fr) * 1987-10-08 1990-01-12 Commissariat Energie Atomique Derives de nucleosides, notamment de desoxy-2' cytidine et leur utilisation pour la synthese d'oligonucleotides
US5672697A (en) 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000039138A1 (en) * 1998-12-23 2000-07-06 Alliedsignal Inc. Selective solvent extraction for the purification of protected nucleosides
WO2000075154A2 (en) * 1999-06-04 2000-12-14 Alliedsignal Inc. Protected nucleosides

Also Published As

Publication number Publication date
CN1467216A (zh) 2004-01-14
US20030229223A1 (en) 2003-12-11
EP1369424A1 (en) 2003-12-10
DE60315545T2 (de) 2008-05-21
JP2004059578A (ja) 2004-02-26
KR20030094103A (ko) 2003-12-11
EP1369424B1 (en) 2007-08-15
KR100544847B1 (ko) 2006-01-24
DE60315545D1 (de) 2007-09-27
JP4326841B2 (ja) 2009-09-09
US6936709B2 (en) 2005-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2013179412A1 (ja) 高分散性液相支持体を用いたオリゴヌクレオチド合成法
CN100545145C (zh) 用于制备1,2-二氨基化合物的不使用叠氮化物的方法
CN112533892B (zh) 烷氧基苯基衍生物、核苷保护体和核苷酸保护体、寡核苷酸制造方法以及取代基除去方法
CN100424091C (zh) 保护化2’-脱氧胞苷类的精制法
CN107531672A (zh) 制备嘧啶衍生物及其中间体的化学工艺
CN109232694A (zh) 制备坎格雷洛中间体的方法
SU496730A3 (ru) Способ получени производных изоиндолина или их солей
CA3150961A1 (en) Processes for the synthesis of valbenazine
KR20100108297A (ko) 신규 결정형의 아데포비어 디피복실 및 그의 제조방법
CN106632312B (zh) 一种阿哌沙班有关物质、中间体、制备方法及其应用
CN105348341A (zh) 一种制备索利霉素的方法
CN116082363A (zh) 一种雷帕霉素40-位羟基的烷基化合成方法
CN112661802B (zh) 一种3′-甲氧基鸟苷的合成方法
CN108424432B (zh) 一种3’-氧-甲氧乙基核苷的制备方法
CN109734641B (zh) 一类异硫氰酸酯衍生物的合成方法
ITMI20011727A1 (it) Solvati della lercanidipina cloridrato e nuove forme cristalline della lercanidipina cloridrato ottenute da essi
CN106478751B (zh) 2′,3′-二-o-乙酰-5′-脱氧-5-氟-n4-[(戊氧基)羰基]胞嘧啶核苷的制备方法
CN113264883B (zh) 一种快速合成菲啶类化合物的方法
CA2661316A1 (en) Process for the manufacture of hi-6 dimethanesulfonate
CN117105996A (zh) 一种脱氧核糖衍生物的制备的方法
JP4694018B2 (ja) メバロラクトンメタクリル酸エステルの精製方法
KR20240056726A (ko) 니로가세스타트의 합성
CN116804017A (zh) 汉防己甲素的合成方法
PL221806B1 (pl) Sposób wprowadzania acetalowych i acetaloestrowych grup ochronnych oraz związki do realizacji tego sposobu
CN113549121A (zh) 一种核苷修饰物的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20081008

Termination date: 20150602

EXPY Termination of patent right or utility model