CN113549121A - 一种核苷修饰物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种核苷修饰物的制备方法。所述方法包括步骤：(1)使2’‑氟‑2’‑脱氧尿苷与氯硅烷试剂混合，反应得到2’‑氟‑5’‑叔丁基二甲基甲硅烷基2’‑脱氧尿苷；(2)2’‑氟‑5’‑叔丁基二甲基甲硅烷基2’‑脱氧尿苷与二甲氧基三苯基氯甲烷混合，反应得到2’‑氟‑3’‑(双(4‑甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’‑叔丁基二甲基甲硅烷基2’‑脱氧尿苷；(3)使2’‑氟‑3’‑(双(4‑甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’‑叔丁基二甲基甲硅烷基2’‑脱氧尿苷脱硅烷保护得到2’‑氟‑3’‑(双(4‑甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’‑脱氧尿苷；和(4)使2’‑氟‑3’‑(双(4‑甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’‑脱氧尿苷与丁二酸酐经酰化反应得到的5’‑丁二酰基‑2’‑氟‑3’‑(双(4‑甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’‑脱氧尿苷和三乙胺混合，反应得到结构如式1所示的核苷修饰物。

Description

一种核苷修饰物的制备方法
技术领域
本发明涉及核苷酸化学合成领域，尤其涉及一种3’-O-DMTr-5’-O-Succinate-2’-氟-2’-脱氧尿苷三乙胺盐单体的合成。
背景技术
近年，随着基因组创新药的发展，反义寡核苷酸药物被急速开发，寡核苷酸固相自动合成是大规模合成寡核苷酸药物的最成功方法。优化(5→3)寡核苷酸合成法在反义寡核苷酸生物学中具有重要意义。通常，寡核苷酸自动合成中第一个核苷片段往往通过二羧酸连接到固体载体上。该修饰性核苷的纯度以及合成方法对后续的固相合成效率以及核酸链在载体表面稳定性的影响都至关重要。
目前3’-O-DMTr-5’-O-Succinate-核苷衍生物的合成方法存在反应条件苛刻、选用化学试剂昂贵、产物纯化困难、收率低等问题，使得工业化推广困难。如Wagner等用较为昂贵的二甲基-(2,3-二甲基-2-丁基)氯硅烷将保护基引入5-位的方法，也存在高沸点溶剂，对环境不友好等不足。Koga等人在硅烷保护反应后处理需要使用硅胶柱层析纯化，产生大量层析后的有机废液和废硅胶。
因此，本领域迫切需要开发一条方便简洁的3’-O-DMTr-5’-O-Succinate-核苷合成工艺，具有重要的意义。
发明内容
本发明旨在提供一种简便有效的制备3’-O-DMTr-5’-O-Succinate-脱氧核苷三乙胺盐的方法。
本发明提供一种结构如式1所示的核苷修饰物的制备方法，所述方法包括步骤：
(1)使2’-氟-2’-脱氧尿苷与氯硅烷试剂混合，反应得到2’-氟-5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷；
(2)2’-氟-5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷与二甲氧基三苯基氯甲烷混合，反应得到2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷；
(3)使2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷脱硅烷保护得到2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷；和
(4)使2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷与丁二酸酐经酰化反应得到的5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷和三乙胺混合，反应得到结构如式1所示的核苷修饰物。
在另一实施方式中，步骤(1)的反应温度为0-60℃。
在另一实施方式中，步骤(2)的反应温度为10-80℃。
在另一实施方式中，步骤(2)的反应在下述一种或两种以上介质中进行：乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环、四氢呋喃、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、乙腈和吡啶。
在另一实施方式中，步骤(2)的反应选自下述的催化剂存在下进行：吡啶、三乙胺或4-二甲氨基吡啶。
在另一实施方式中，步骤(3)使2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷与氟试剂反应以脱硅烷保护；所述氟试剂选自四丁基氟化胺、氟化氢吡啶盐或氟化氢三乙胺盐。
在另一实施方式中，步骤(3)使2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷与氟试剂反应后水洗以及固化除去氟试剂。
在另一实施方式中，步骤(4)中酰化反应在选自下述的碱存在下进行：吡啶、三乙胺或4-二甲氨基吡啶。
在另一实施方式中，步骤(4)中酰化反应在选自下述的一种或两种以上介质中进行：乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环、四氢呋喃、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二氯甲烷、乙腈、吡啶和丙酮。
在另一实施方式中，步骤(4)中所述5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷和1.0-4.0当量的三乙胺混合。
据此，本发明提供了一条方便简洁的3’-O-DMTr-5’-O-Succinate-核苷合成工艺。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究，开发了一种3’-O-DMTr-5’-O-Succinate-2’-脱氧核苷三乙胺盐的新型合成方法，经过简便的硅基化反应、DMTr-保护反应、脱硅基化反应、琥珀酸修饰以及三乙胺成盐，合成出稳定的3’-O-DMTr-5’-O-Succinate-脱氧核苷三乙胺盐。在此基础上，完成了本发明。
本发明涉及的主要化合物如下表所列：
Figure BDA0003173564020000031
本发明提供一种结构如式1所示的化合物的制备方法，步骤如下：
第一步，2’-氟-2’-脱氧尿苷的硅烷化反应，得到结构如式M1所示的化合物；
第二步，结构如式M1所示的化合物的3’羟基保护反应，得到结构如式M2所示的化合物；
第三步，结构如式M2所示的化合物的5’脱硅烷保护反应，得到结构如式M3所示的化合物；
第四步，结构如式M3所示的化合物的酰化反应及成盐反应。
上述第一步中可使用氯硅烷试剂，选自三甲基硅基、三乙基硅基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基氯硅烷、或叔丁基二苯基甲硅烷基。
上述第一步的硅烷化反应可以在乙二醇二甲醚(DME)、1,4-二氧六环(dioxane)、四氢呋喃(THF)、二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、吡啶、乙腈、或丙酮等反应介质中进行。
上述第一步中2’-氟-2’-脱氧尿苷与氯硅烷试剂混合进行的硅烷化反应温度为0-60℃，例如但不限于，5-25℃、20-45℃等；在本发明的一种实施方式中，2’-氟-2’-脱氧尿苷与氯硅烷试剂在吡啶中混合，在20-25℃下进行硅烷化反应，得到结构如式M1所示的化合物。
上述第一步的反应可使用乙醇、丙醇、异丙醇、和叔丁醇中的一种或两种以上进行淬灭；在本发明的一种实施方式中使用的淬灭试剂为异丙醇。
在本发明的一种实施方式中，上述第一步是将反应介质(溶剂)、2’-氟-2’-脱氧尿苷和氯硅烷试剂在室温下混合，在0-60℃反应8-24小时得到结构如式M1所示的化合物；然后加入淬灭试剂淬灭反应。
上述第二步中的3’-羟基保护反应在乙二醇二甲醚(DME)、1,4-二氧六环(dioxane)、四氢呋喃(THF)、二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙腈、吡啶、二氯甲烷和丙酮中的一种或两种以上的反应介质中进行。
上述第二步中的3’-羟基保护反应可使用的保护试剂选自二甲氧基三苯基氯甲烷(DMT-Cl)、三苯甲基氯、或4′-甲氧基三苯甲基氯；可使用的碱(催化剂)选自吡啶、三乙胺、、或4-二甲氨基吡啶(DMAP)。
上述第二步3’-羟基保护反应的反应温度为10℃～80℃，例如但不限于，20-75℃、30-60℃、50-70℃、15-55℃等。
在本发明的一种实施方式中，上述第二步中将结构如式M1所示的化合物、保护试剂和碱催化剂混合在反应介质中，在10-80℃反应8-24小时得到结构如式M2所示的化合物。
在本发明的一个实施例中，上述第二步的3’-羟基保护反应在吡啶(反应介质)中进行，反应温度为50-60℃、以0.1至0.5当量4-二甲氨基吡啶作碱催化剂。
在本发明的一个实施例中，上述第二步的3’-羟基保护反应在吡啶(反应介质)中进行，二甲氧基三苯基氯甲烷为保护试剂，4-二甲氨基吡啶作碱催化剂，反应温度为55℃时，反应过夜，薄层色谱(正庚烷:乙酸乙酯＝1:1)监控，原料还有大量剩余。
在本发明的一个实施例中，上述第二步的3’-羟基保护反应在吡啶(反应介质)中进行，二甲氧基三苯基氯甲烷为保护试剂，4-二甲氨基吡啶作碱催化剂，反应温度为75℃，搅拌2-6小时，反应转化彻底。
上述第三步是将结构如式M2所示的化合物通过与氟试剂反应进行5’脱硅烷保护，得到结构如式M3所示的化合物；所述氟试剂选自为四丁基氟化胺(TBAF)、氟化氢吡啶盐、或氟化氢三乙胺盐；反应溶剂(反应介质)可以是四氢呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙腈中的一种或两种以上。
在本发明的一种实施方式中，上述第三步中结构如式M2所示的化合物与氟试剂的反应温度为0-60℃，例如但不限于，5-50℃、45-55℃等。
上述第三步中不需要经过柱层析分离纯化得到的结构如式M3所示的化合物，通过本发明上述第三步获得的结构如式M3所示的化合物的粗品纯度可以达到85％-98％(通过本发明提供的UPLC法测定)。
在本发明的一种实施方式中，上述第三步中在结构如式M2所示的化合物与氟试剂反应结束后萃取，然后用水洗有机相至少2次，并进行固化，以充分除去氟试剂；可用于固化的试剂包括但不限于，正庚烷、、正己烷、环己烷。
在本发明的一个实施例中，结构如式M2所示的化合物与氟试剂的反应在吡啶(反应介质)中进行，反应温度为20-25℃。
在本发明的一种实施方式中，结构如式M2所示的化合物与氟化氢吡啶盐的反应在四氢呋喃中混合，0-60℃反应至完成，浓缩后加入水，乙酸乙酯萃取后有机相用水至少洗涤2次，有机相旋干得到粗品，粗品溶解在良溶剂(例如但不限于，二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈)中后缓慢加入用于固化的不良溶剂(例如但不限于，正庚烷、正己烷、环己烷)，析出粘稠状固体，得到结构如式M3所示的化合物，经UPLC法测定纯度为77.02％。
在本发明的一种实施方式中，结构如式M2所示的化合物与四丁基氟化胺的反应在四氢呋喃中混合，0-60℃反应至完成，浓缩后加入水，乙酸乙酯萃取后有机相用水至少洗涤2次，有机相旋干得到粗品，粗品溶解在良溶剂(例如但不限于，二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈)中后缓慢加入用于固化的不良溶剂(例如但不限于，正庚烷、正己烷、环己烷)，析出粘稠状固体，得到结构如式M3所示的化合物，经UPLC法测定纯度为95.87％。
上述第四步中的酰化反应时将结构如式M3所示的化合物与丁二酸酐混合，反应得到结构如式M4所示的化合物；反应温度为0-80℃，优选为20-25℃；反应时间在1-4小时。
上述第四步中的酰化反应在碱(催化剂)存在下进行，所用的碱选自吡啶、三乙胺、、或4-二甲氨基吡啶。在本发明的一种实施方式中，所述碱为三乙胺，其用量在0.5至6.0当量之间，优选在2.5至3.5当量。
上述第四步中的酰化反应的反应溶剂(反应介质)为乙二醇二甲醚(DME)、1,4-二氧六环(dioxane)、四氢呋喃(THF)、二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二氯甲烷、乙腈、吡啶、丙酮、乙醇、丙醇、异丙醇、和叔丁醇中的一种或两种以上。
上述第四步中的成盐反应是将结构如式M4所示的化合物与碱混合，在0-60℃反应；反应溶剂(反应介质)包括但不限于，二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈；所用的碱为吡啶、三甲胺、三乙胺、三丙胺。
在本发明的一个实施例中，上述第四步中将结构如式M4所示的化合物用二氯甲烷复溶后加入三乙胺成盐，得到结构如式1所示的化合物，反应温度为20-25℃；三乙胺的用量在1.0至4.0当量之间，优选在1.0至2.0当量。
如本发明所用，室温是指10-40℃，优选15-30℃，例如但不限于，20-45℃、25-35℃等。
通过本发明提供的制备方法得到的结构如式1所示的5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷三乙胺盐可以用于合成反义核苷酸，例如但不限于，将结构如式1所示的化合物固定到受控孔玻璃CPG表面，得到5’-3’固相合成的单核苷修饰CPG。与5’-修饰性核苷亚磷酰胺
Figure BDA0003173564020000071
进行单体偶联，随后氧化三价膦和DMTr脱保护得到中间体
Figure BDA0003173564020000072
再重复此偶联-氧化-脱保护步骤得到
Figure BDA0003173564020000073
最后
Figure BDA0003173564020000074
脱除碱基和膦上的保护基得到形式上的反义核苷酸。
为使本领域技术人员可了解本发明的特点及效果，以下谨就说明书及权利要求书中提及的术语及用语进行一般性的说明及定义。除非另有指明，否则文中使用的所有技术及科学上的字词，均为本领域技术人员对于本发明所了解的通常意义，当有冲突情形时，应以本说明书的定义为准。
本文描述和公开的理论或机制，无论是对或错，均不应以任何方式限制本发明的范围，即本发明内容可以在不为任何特定的理论或机制所限制的情况下实施。
在本文中，所有以数值范围或百分比范围形式界定的特征，如数值、数量、含量与浓度仅是为了简洁及方便。据此，数值范围或百分比范围的描述应视为已涵盖且具体公开所有可能的次级范围及范围内的个别数值(包括整数与分数)。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，只要这些特征的组合不存在矛盾，所有可能的组合都应当认为是本说明书记载的范围。说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本发明的主要优点在于：
1、使用2’-氟-2’-脱氧尿苷原料合成5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷三乙胺盐单体，原料易得，合成步骤简便，适用于规模生产。
2、柱层析分离各中间体会导致产品分解，产物纯度降低，本发明避免了柱层析分离过程，得到关键中间体2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷纯度高，提高了产品纯度，降低了生产成本。
3、使用UPLC的方法检测反应转化，检测方法简单快捷，便于反应过程的实时监控。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量(克)。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明下述实施例中的UPLC(高效液相色谱)条件：
目标产品检验UPLC条件：
方法概述
方法来源：采用UPLC法测定物料的纯度，按仪器操作规程操作
使用的试剂
试剂 级别
乙腈 HPLC
醋酸铵 HPLC
水 纯化水
色谱条件
Figure BDA0003173564020000091
实施例
5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷三乙胺盐(1)的制备
1.2’-氟-5’-叔丁基二甲基甲硅烷基尿苷(M1)的制备：
投料：2’-氟-2’-脱氧尿苷(100克，1.0当量)溶解于吡啶(1000毫升)中，加入4A分子筛(100克)，搅拌15分钟。过滤，降温到0℃，叔丁基二甲基氯硅烷(73.47克，1.2当量)分批加入到反应液中。0℃搅拌并缓慢升至室温。20-25℃反应过夜。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)检测反应完成。
后处理：异丙醇(40毫升)加入到反应中，淬灭反应，碳酸氢钠(40克，1.0当量)溶解于去离子水(200毫升)中，滴加到反应液中并搅拌30分钟。混合溶液于50℃旋干至固体的水相悬浊液200克，加入去离子水(200毫升)和乙酸乙酯(200毫升)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，有机相旋干得到产物2’-氟-5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷(M1)(150克)棕色油状物，UPLC：91.19％，MS：360.5。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):0.13(s,6H),0.93(s,9H),2.44(br s,1H),3.88(d,1H,J＝10.6Hz),4.06-4.12(m,2H),4.30-4.42(m,1H),4.96(dt,1H),5.70(d,1H),6.12(dd,1H),7.94(d,1H),8.86(br s,1H).
2.2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷(M2)的制备：
投料：2’-氟-5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷(75克，1.0当量)溶解于二氯甲烷(500毫升)旋干带水，检测KF:220ppm。2’-氟-5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷(75克，1.0当量)，溶解于吡啶(800毫升),加入4-二甲氨基吡啶(5克，0.2当量)，二甲氧基三苯基氯甲烷(91.65克，1.3当量)。反应在55℃搅拌过夜。UPLC,薄层色谱(正庚烷:乙酸乙酯＝1:1)监控，原料还有大量剩余。补加二甲氧基三苯基氯甲烷(50克，0.7当量)，并加热到75℃，搅拌2-6小时。薄层色谱(正庚烷:乙酸乙酯＝1:1)监控原料完全转化，反应完成。
淬灭：正十二硫醇(42克，1.0当量)加入淬灭反应，并搅拌15分钟。
萃取：50℃旋干，加入二氯甲烷(800毫升),水(800毫升),萃取，有机相用饱和实验水(500毫升)萃取两次。有机相，干燥，过滤，旋干，得到粗品150克。150g粗品溶解在MeCN(800mL)中，加入正庚烷(800毫升)萃取，下层旋干，重复上述操作一次，旋干得到黄色油状产物2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷(M2)110g。MS：662.8；
3.2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷(M3)的制备：
投料：2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷(110克,1.0当量)溶解在四氢呋喃(800毫升)中，四丁基氟化胺(86.78克，2.0当量)加入到反应中，20-25℃搅拌2-5小时。UPLC监控反应完成。
后处理：反应浓缩至400毫升，加入水(600毫升),乙酸乙酯(600毫升)萃取，有机相用水(600毫升)再洗涤两次，有机相旋干得到粗品。粗品溶解在二氯甲烷(400毫升)中，缓慢滴加到正庚烷(1.2升)中，析出粘稠状固体。粗品溶解在二氯甲烷(1升)中，滴加到正庚烷(10升)中固化，得到灰白色粉末2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷(M3)18.8克，UPLC：95.87％。MS：548.6。
4.5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷(M4)以及5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷三乙胺盐(1)的制备：
投料：2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷(16克，1.0当量)，4-二甲氨基吡啶(712.66毫克，0.2当量)，丁二酸酐(4.38克，1.5当量)溶解在二氯甲烷(150毫升)中，加入三乙胺(8.85克，3.0当量)，20-25℃搅拌2-5小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝20:1)监控反应，原料转化完全。
后处理：反应液用5％乙酸水溶液100毫升洗涤3次，饱和食盐水100毫升洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至50毫升溶液,缓慢滴加到1000毫升甲基叔丁基醚中固化得到15克浅黄色固体5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷(M4)。MS：648.6。
5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷(M4)用二氯甲烷(100毫升)溶解，20-25℃时加入三乙胺(3.5克，1.5当量)成盐，20-25℃时搅拌1-2小时。过滤除去不溶物，旋干得到17g黄色粉末状产品5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷三乙胺盐(1)。MS：648.6。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.50(d,J＝8.1Hz,1H),7.43(d,J＝7.7Hz,2H),7.31(t,J＝8.2Hz,5H),7.27–7.22(m,1H),6.87(t,J＝8.9Hz,3H),5.76(d,J＝18.7Hz,1H),5.59(d,J＝8.1Hz,1H),4.28(dd,J＝7.8,4.3Hz,1H),4.24(dd,J＝7.8,4.4Hz,1H),4.19(d,J＝3.7Hz,1H),4.11(s,2H),4.06–4.01(m,2H),3.76–3.70(m,7H),2.52(dt,J＝8.6,4.3Hz,9H),2.34–2.29(m,2H),0.96(t,J＝7.2Hz,10H).
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims (10)

1.一种结构如式1所示的核苷修饰物的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(1)使2’-氟-2’-脱氧尿苷与氯硅烷试剂混合，反应得到2’-氟-5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷；
(2)2’-氟-5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷与二甲氧基三苯基氯甲烷混合，反应得到2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷；
(3)使2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷脱硅烷保护得到2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷；
(4)使2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷与丁二酸酐经酰化反应得到的5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷和三乙胺混合，反应得到结构如式1所示的核苷修饰物。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)的反应温度为0-60℃。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)的反应温度为10-80℃。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)的反应在下述一种或两种以上介质中进行：乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环、四氢呋喃、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、乙腈和吡啶。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)的反应选自下述的催化剂存在下进行：吡啶、三乙胺或4-二甲氨基吡啶。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)使2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷与氟试剂反应以脱硅烷保护；所述氟试剂选自四丁基氟化胺、氟化氢吡啶盐或氟化氢三乙胺盐。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)使2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)5’-叔丁基二甲基甲硅烷基2’-脱氧尿苷与氟试剂反应后水洗以及固化除去氟试剂。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中酰化反应在选自下述的碱存在下进行：吡啶、三乙胺或4-二甲氨基吡啶。
9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中酰化反应在选自下述的一种或两种以上介质中进行：乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环、四氢呋喃、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二氯甲烷、乙腈、吡啶和丙酮。
10.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述5’-丁二酰基-2’-氟-3’-(双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)2’-脱氧尿苷和1.0-4.0当量的三乙胺混合。
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